甘草对老年大鼠CAT、GSH-Px、LPO影响的实验研究
作者：王超 包玉双 曲凤玉 白晶 白大芳 魏晓东
单位：王超(佳木斯大学)；包玉双(佳木斯大学)；曲凤玉(佳木斯大学)；白晶(佳木斯大学)白大芳(佳木斯大学)；魏晓东(佳木斯大学)
关键词：甘草；老年大鼠；抗衰老
黑龙江医药科学000203 提要 本实验以Wistar大鼠为研究对象，对大鼠红细胞CAT(过氧化氢酶)活性，全血GSH-Px(谷胱甘肽过氧化物酶)活性，血浆LPO(过氧化脂质)进行测定。观察上述指标的随龄变化，甘草对老年大鼠体内上述指标的影响。结果表明，大鼠体内的抗氧化酶CAT、GSH-Px活性在其成长阶段随龄上升(P<0.01)，在衰老阶段随龄下降(P<0.01)。自由基代谢产物LPO含量在血浆中随龄增加(P<0.01)甘草水煎剂能提高老年大鼠全血CAT、GSH-Px活性(P<0.01)，降低血浆LPO含量(P<0.01)。不同用药时间(15,30,45d)对上述指标的动态变化无明显影响(P>0.05)。提示甘草具有抗衰老作用。
, http://www.100md.com
Experimental studies of effect of liquorice on senile rat
Wang Chao, et al
Abstract In order to dertermine the effect of liquorice on senile rat ,the activitles of CAT, GSH-Px of brain tissue and LPO level in plasma were measured after adminstration of liquorice decoctum in different time (15, 30, 45days).The result showed that the activities of CAT, GSH-Px were increased during senile phase (P<0.01). As a product of met-abolism of free rodical. LPO level in plasma was increased with aging (P<0.01). The liquorice decoctum raised the activity of CAT, GSH-Px (P<0.01) and reduced LPO level in brain tissue (P<0.01). There was no significant defference among different time group giving liquorice.The result suggested that lower antioxidation and higher lipid peroxidation were important cause for senility. The liquorice had an affect on senile rat by raising the activity of antioxide (CAT, GSH-Px) and dropping LPO level, indicating that liquorice had effect on antisenium, its further study and development had a important value.
, 百拇医药
Key words liquorice; senile rat; antisenium
许多研究表明，自由基损伤与衰老有密切关系，自由基捕获琨剂或抗氧化剂具有抗衰老作用[1]。许多中草药是强有力的抗氧化剂，如人参、黄芪等，能直接清除自由基和提高SOD等抗氧化酶的活性，发挥抗衰老作用[2]。祖国医学认为，甘草性味甘、平、归心、肺、脾、胃经、补脾益气、清热解毒、祛咳止痰、缓急止痛、和解诸药。在活体情况下，甘草对CAT、GSH-Px、LPO影响尚未有人报道。
1 材料和方法
1.1 甘草水煎剂的制备
每100g甘草，加水适量，浸泡过夜后煎煮，煮沸30min，冷却后，四层纱布过滤，将滤液浓缩至每100ml相当生药1g。
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1.2 实验动物分组及处理
Wistar大鼠：56只，白求恩医科大学实验动物部提供。3～4月龄，165～210g，雄性，为青年组。9～10月龄，250～310，雄性，为中年组。18月龄，350～450g雄性，40只，随机分为5组：15d组，30d组，45d组，对照组，老年组，每组8只。青年组、中年组、老年组不加任何处理，饲养1周后，乙醚麻醉眶后采血，测定全血CAT、GSH-Px，活性及血浆LPO含量。15d组、30d组、45d组及对照组每日乙醚麻醉灌胃，能药组灌给甘草水煎剂，剂量为10g/kg，对照组灌等量生理盐水。15d组连续灌胃15d，30d组连续灌胃30d，45d组与对照组连续灌胃45d，15d组、30d组、45d组和对照组分别在灌胃的第16天，第31天，第46天，乙醚麻醉后采血测全血CAT、GSH-Px活性及血浆LPO含量。
1.3 主要仪器及试剂
RF-5000型荧光光度计，日本产。G-20A高速离心机，湖南离心机厂产。DTNB(5,5-对二硝基苯)，Fluka产品，AR。TBA：上海试剂二厂AR。甘草：市售
, 百拇医药
1.4 观察指标及测试方法
全血CAT活性：方允中法[3]。全血GSH-Px活性：荣征星法[4]。全血LPO法：大石诚子法[5]。
1.5 统计学处理
实验中各项数据均采用
±s表示，显著性检验采用方差分析。
2 结果
2.1 大鼠全血CAT活性的随龄变化及甘草水煎剂对老年大鼠全血CAT活性的影响。与青年组比，中年组CAT活性升高(P<0.01)，老年组活性降低，但无显著性差异(P>0.05)。与中年组比，老年组活性降低(P<0.01)，见表1。给药后，与对照组比，各实验组CAT活性无显著差异(P>0.05)；各实验组间比较，CAT活性也无显著性差异(P>0.05)，见表2。
, 百拇医药
表1 大鼠体内CAT,GSH-Px,LPO的随龄变化(±s, n=8)
CAT/(K/ghb)
GSH-Px(U/mp)
LPO(NMOL/MP)
青年组
4.62±0.71
25.63±3.28
8.14±1.31
中年组
6.83±0.50**
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42.95±2.94**
9.56±2.00**
老年组
3.78±0.66##
35.05±2.15**##
12.96±2.52**##
**P<0.01与青年组比,##P<0.01与中年组比
表2 甘草对老年大鼠体内CAT,GSH-Px,LPO的影响(±s, n=8)
, 百拇医药
CAT(K/ghb)
GSH-Px(U/mp)
LPO(NMOL/MP)
15d组
3.62±0.43
41.58±3.66**
8.73±1.57**
30d组
3.62±0.71
40.86±1.35**
7.23±1.11**
, 百拇医药 45d组
3.38±0.38
40.72±1.47**
6.69±1.10**#
对照组
3.50±0.53
36.03±2.67
12.36±1.96
**P<0.01与对照组比较，#P<0.05与15d组比较
2.2 大鼠全血GSH-Pc活性的随龄变化及甘草水煎剂对老年大鼠全血CAT活性的影响。与青年组比，中年组、老年组的全血GSH-Px活性均升高(P<0.01)；与中年组比较，，老年组的GSH-Px活性降低(P<0.01)，见表1。给药后，与对照组相比，各实验组全血GSH-Px活性均升高(P<0.01)，但各实验组之间无显著性差异(P>0.05)，见表2。
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2.3 大鼠血浆LPO含量的随龄变化及甘草水煎剂对老年大鼠血浆LPO的影响。与青年组比，中年组、老年组血浆LPO含量升高(P<0.01)，与中年组比，老年组血浆LPO含量升高(P<0.01)，见表1。给药后，与对照组比，各实验组的LPO含量降低(P<0.01)；与15d组比，45d组的LPO含量低(P<0.05)，见表2。
3 讨论
CAT可降低生物体内有毒害的H2O2水平，以减少自由基和过氧化脂质的生成，与SOD协同作用，使O彻底无毒化。SOD中的Cu2+可被歧化反应产物H2O2还原失去活力，CAT可清除H2O2对SOD起保护作用，同样，O也可使CAT失活，这两种酶组成相互保护的系统，起协同作用。姜招峰报道[6]老年大鼠血清CAT活性较青年活性显著降低。本实验结果表明，大鼠全血CAT活性，从中年到老年大鼠的衰老过程中活性降低。甘草水煎剂对老年大鼠的全血CAT活性没有显著影响，提示甘草不是通过提高CAT活性来发挥抗衰老作用的。
, 百拇医药
在生物体内，GSH-Px和SOD、CAT共同起作用，清除超氧阴离子O、羟自由基OH-和过氧化氢H2O2，并可防止'O2的产生，减轻和阻断脂质过氧化物的损害，延缓细胞的衰老。文献报道，GSH-Px活性随龄下降，该酶是动物衰老的生化指标之一[7]，一些外源性物质，例如硒[8]、Vc[9]、萎蕤[10]、山葡萄[11]能够提高机体GSH-Px活性，发挥抗衰老作用。本实验结果表明，GSH-Px活性大鼠的成长阶段随龄上升，在衰老阶段随龄下降；甘草水煎剂能明显提高老年大鼠全血的GSH-Px活性；但是不同给药时间(15、30、45d)对酶活性没有显著性影响。提示，甘草能通过提高GSH-Px活性来抗衰老。
衰老的自由基学说认为，O的启动自由基链锁反应，产生毒性更大的OH/H2O2，这些自由基攻击细胞膜、细胞浆的脂质，使之过氧化，产生过氧化脂质，再攻击蛋白质，脂肪酸和核酸等生物大分子，产生脂褐质等老年色素。一般说来，脂褐质含量是随龄增加的，导致细胞功能下降，结构损伤，机体衰老。外源性自由基清除剂可降低组织LPO含量，发挥抗衰老作用。近年来，一些中草药被证实能够降低组织LPO含量具有抗衰老作用。本实验结果表明，大鼠血浆LPO含量是随龄增加的，甘草水煎剂能降低老年大鼠血浆LPO含量；与给药15d比，给药45d对血浆LPO含量的降低效果最好。提示甘草具有抗衰老作用，一方面是甘草次酸与甘草黄酮类成份都具有清除自由基作用[12]；另一面甘草可提高GSH-Px活性，降低LPO含量。
, 百拇医药
参考文献
1.肖德贞.编译.老年生物学和医学.北京:科学出版社,74,1981
2.丁克祥.抗衰老药对超氧化物歧化酶的作用.老年学杂志,1990,10(2):112～114
3.方允中,张嘉麟,刘智峰,等.几种血液病人血液中GSH-BO,SOD,CAT的活力观察.中华血液杂志,1986,7(4):220
4.荣征星,刘慧中,鲍景奇,等.小鼠全血中谷胱甘肽过氧化物酶活力的微量测定法.生物化学与生物物理学进展,1994,21(4):362～366
5.大石诚子.过氧化脂质测定法.最新医学,1978,33(4):660～663
6.姜招峰.老年大鼠自由基代谢的研究.老年学杂志,1990,10(5),308～309
, 百拇医药
7.田清崃,殷莹,李云兰等.谷胱甘肽过氧化物酶和衰老关系的研究.老年学杂志,1992,12(1):50～52
8.夏敏,白大芳,白书阁.硒对老年大鼠机体谷胱甘肽过氧化物酶,过氧化脂及其比值的影响.老年学杂志,1991,11(1):50
9.冯彪,刘亚娟,甘振威等.Ve,Vc对大鼠超氧化物歧化酶和过氧化脂质的影响.老年学杂志,1993,13(1):175～176
10.张行海,董盈盈.萎蕤抗衰老作用的实验研究.老年学杂志,1993,13(3):173～174
11.刘中申,薛俊玲,张晓强.山葡萄抗衰老作用的初步研究.老年学杂志,1993,13(3):166～167
12.句海松,李小杰,赵保路,等.阿魏酸钠和18-甘草次酸对氧自由基的清除作用.中国药理学报,1990,(5):466～470
(1999-05-31收稿), 百拇医药
单位：王超(佳木斯大学)；包玉双(佳木斯大学)；曲凤玉(佳木斯大学)；白晶(佳木斯大学)白大芳(佳木斯大学)；魏晓东(佳木斯大学)
关键词：甘草；老年大鼠；抗衰老
黑龙江医药科学000203 提要 本实验以Wistar大鼠为研究对象，对大鼠红细胞CAT(过氧化氢酶)活性，全血GSH-Px(谷胱甘肽过氧化物酶)活性，血浆LPO(过氧化脂质)进行测定。观察上述指标的随龄变化，甘草对老年大鼠体内上述指标的影响。结果表明，大鼠体内的抗氧化酶CAT、GSH-Px活性在其成长阶段随龄上升(P<0.01)，在衰老阶段随龄下降(P<0.01)。自由基代谢产物LPO含量在血浆中随龄增加(P<0.01)甘草水煎剂能提高老年大鼠全血CAT、GSH-Px活性(P<0.01)，降低血浆LPO含量(P<0.01)。不同用药时间(15,30,45d)对上述指标的动态变化无明显影响(P>0.05)。提示甘草具有抗衰老作用。
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Experimental studies of effect of liquorice on senile rat
Wang Chao, et al
Abstract In order to dertermine the effect of liquorice on senile rat ,the activitles of CAT, GSH-Px of brain tissue and LPO level in plasma were measured after adminstration of liquorice decoctum in different time (15, 30, 45days).The result showed that the activities of CAT, GSH-Px were increased during senile phase (P<0.01). As a product of met-abolism of free rodical. LPO level in plasma was increased with aging (P<0.01). The liquorice decoctum raised the activity of CAT, GSH-Px (P<0.01) and reduced LPO level in brain tissue (P<0.01). There was no significant defference among different time group giving liquorice.The result suggested that lower antioxidation and higher lipid peroxidation were important cause for senility. The liquorice had an affect on senile rat by raising the activity of antioxide (CAT, GSH-Px) and dropping LPO level, indicating that liquorice had effect on antisenium, its further study and development had a important value.
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Key words liquorice; senile rat; antisenium
许多研究表明，自由基损伤与衰老有密切关系，自由基捕获琨剂或抗氧化剂具有抗衰老作用[1]。许多中草药是强有力的抗氧化剂，如人参、黄芪等，能直接清除自由基和提高SOD等抗氧化酶的活性，发挥抗衰老作用[2]。祖国医学认为，甘草性味甘、平、归心、肺、脾、胃经、补脾益气、清热解毒、祛咳止痰、缓急止痛、和解诸药。在活体情况下，甘草对CAT、GSH-Px、LPO影响尚未有人报道。
1 材料和方法
1.1 甘草水煎剂的制备
每100g甘草，加水适量，浸泡过夜后煎煮，煮沸30min，冷却后，四层纱布过滤，将滤液浓缩至每100ml相当生药1g。
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1.2 实验动物分组及处理
Wistar大鼠：56只，白求恩医科大学实验动物部提供。3～4月龄，165～210g，雄性，为青年组。9～10月龄，250～310，雄性，为中年组。18月龄，350～450g雄性，40只，随机分为5组：15d组，30d组，45d组，对照组，老年组，每组8只。青年组、中年组、老年组不加任何处理，饲养1周后，乙醚麻醉眶后采血，测定全血CAT、GSH-Px，活性及血浆LPO含量。15d组、30d组、45d组及对照组每日乙醚麻醉灌胃，能药组灌给甘草水煎剂，剂量为10g/kg，对照组灌等量生理盐水。15d组连续灌胃15d，30d组连续灌胃30d，45d组与对照组连续灌胃45d，15d组、30d组、45d组和对照组分别在灌胃的第16天，第31天，第46天，乙醚麻醉后采血测全血CAT、GSH-Px活性及血浆LPO含量。
1.3 主要仪器及试剂
RF-5000型荧光光度计，日本产。G-20A高速离心机，湖南离心机厂产。DTNB(5,5-对二硝基苯)，Fluka产品，AR。TBA：上海试剂二厂AR。甘草：市售
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1.4 观察指标及测试方法
全血CAT活性：方允中法[3]。全血GSH-Px活性：荣征星法[4]。全血LPO法：大石诚子法[5]。
1.5 统计学处理
实验中各项数据均采用
±s表示，显著性检验采用方差分析。2 结果
2.1 大鼠全血CAT活性的随龄变化及甘草水煎剂对老年大鼠全血CAT活性的影响。与青年组比，中年组CAT活性升高(P<0.01)，老年组活性降低，但无显著性差异(P>0.05)。与中年组比，老年组活性降低(P<0.01)，见表1。给药后，与对照组比，各实验组CAT活性无显著差异(P>0.05)；各实验组间比较，CAT活性也无显著性差异(P>0.05)，见表2。
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表1 大鼠体内CAT,GSH-Px,LPO的随龄变化(
±s, n=8)CAT/(K/ghb)
GSH-Px(U/mp)
LPO(NMOL/MP)
青年组
4.62±0.71
25.63±3.28
8.14±1.31
中年组
6.83±0.50**
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42.95±2.94**
9.56±2.00**
老年组
3.78±0.66##
35.05±2.15**##
12.96±2.52**##
**P<0.01与青年组比,##P<0.01与中年组比
表2 甘草对老年大鼠体内CAT,GSH-Px,LPO的影响(
±s, n=8), 百拇医药
CAT(K/ghb)
GSH-Px(U/mp)
LPO(NMOL/MP)
15d组
3.62±0.43
41.58±3.66**
8.73±1.57**
30d组
3.62±0.71
40.86±1.35**
7.23±1.11**
, 百拇医药 45d组
3.38±0.38
40.72±1.47**
6.69±1.10**#
对照组
3.50±0.53
36.03±2.67
12.36±1.96
**P<0.01与对照组比较，#P<0.05与15d组比较
2.2 大鼠全血GSH-Pc活性的随龄变化及甘草水煎剂对老年大鼠全血CAT活性的影响。与青年组比，中年组、老年组的全血GSH-Px活性均升高(P<0.01)；与中年组比较，，老年组的GSH-Px活性降低(P<0.01)，见表1。给药后，与对照组相比，各实验组全血GSH-Px活性均升高(P<0.01)，但各实验组之间无显著性差异(P>0.05)，见表2。
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2.3 大鼠血浆LPO含量的随龄变化及甘草水煎剂对老年大鼠血浆LPO的影响。与青年组比，中年组、老年组血浆LPO含量升高(P<0.01)，与中年组比，老年组血浆LPO含量升高(P<0.01)，见表1。给药后，与对照组比，各实验组的LPO含量降低(P<0.01)；与15d组比，45d组的LPO含量低(P<0.05)，见表2。
3 讨论
CAT可降低生物体内有毒害的H2O2水平，以减少自由基和过氧化脂质的生成，与SOD协同作用，使O彻底无毒化。SOD中的Cu2+可被歧化反应产物H2O2还原失去活力，CAT可清除H2O2对SOD起保护作用，同样，O也可使CAT失活，这两种酶组成相互保护的系统，起协同作用。姜招峰报道[6]老年大鼠血清CAT活性较青年活性显著降低。本实验结果表明，大鼠全血CAT活性，从中年到老年大鼠的衰老过程中活性降低。甘草水煎剂对老年大鼠的全血CAT活性没有显著影响，提示甘草不是通过提高CAT活性来发挥抗衰老作用的。
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在生物体内，GSH-Px和SOD、CAT共同起作用，清除超氧阴离子O、羟自由基OH-和过氧化氢H2O2，并可防止'O2的产生，减轻和阻断脂质过氧化物的损害，延缓细胞的衰老。文献报道，GSH-Px活性随龄下降，该酶是动物衰老的生化指标之一[7]，一些外源性物质，例如硒[8]、Vc[9]、萎蕤[10]、山葡萄[11]能够提高机体GSH-Px活性，发挥抗衰老作用。本实验结果表明，GSH-Px活性大鼠的成长阶段随龄上升，在衰老阶段随龄下降；甘草水煎剂能明显提高老年大鼠全血的GSH-Px活性；但是不同给药时间(15、30、45d)对酶活性没有显著性影响。提示，甘草能通过提高GSH-Px活性来抗衰老。
衰老的自由基学说认为，O的启动自由基链锁反应，产生毒性更大的OH/H2O2，这些自由基攻击细胞膜、细胞浆的脂质，使之过氧化，产生过氧化脂质，再攻击蛋白质，脂肪酸和核酸等生物大分子，产生脂褐质等老年色素。一般说来，脂褐质含量是随龄增加的，导致细胞功能下降，结构损伤，机体衰老。外源性自由基清除剂可降低组织LPO含量，发挥抗衰老作用。近年来，一些中草药被证实能够降低组织LPO含量具有抗衰老作用。本实验结果表明，大鼠血浆LPO含量是随龄增加的，甘草水煎剂能降低老年大鼠血浆LPO含量；与给药15d比，给药45d对血浆LPO含量的降低效果最好。提示甘草具有抗衰老作用，一方面是甘草次酸与甘草黄酮类成份都具有清除自由基作用[12]；另一面甘草可提高GSH-Px活性，降低LPO含量。
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参考文献
1.肖德贞.编译.老年生物学和医学.北京:科学出版社,74,1981
2.丁克祥.抗衰老药对超氧化物歧化酶的作用.老年学杂志,1990,10(2):112～114
3.方允中,张嘉麟,刘智峰,等.几种血液病人血液中GSH-BO,SOD,CAT的活力观察.中华血液杂志,1986,7(4):220
4.荣征星,刘慧中,鲍景奇,等.小鼠全血中谷胱甘肽过氧化物酶活力的微量测定法.生物化学与生物物理学进展,1994,21(4):362～366
5.大石诚子.过氧化脂质测定法.最新医学,1978,33(4):660～663
6.姜招峰.老年大鼠自由基代谢的研究.老年学杂志,1990,10(5),308～309
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7.田清崃,殷莹,李云兰等.谷胱甘肽过氧化物酶和衰老关系的研究.老年学杂志,1992,12(1):50～52
8.夏敏,白大芳,白书阁.硒对老年大鼠机体谷胱甘肽过氧化物酶,过氧化脂及其比值的影响.老年学杂志,1991,11(1):50
9.冯彪,刘亚娟,甘振威等.Ve,Vc对大鼠超氧化物歧化酶和过氧化脂质的影响.老年学杂志,1993,13(1):175～176
10.张行海,董盈盈.萎蕤抗衰老作用的实验研究.老年学杂志,1993,13(3):173～174
11.刘中申,薛俊玲,张晓强.山葡萄抗衰老作用的初步研究.老年学杂志,1993,13(3):166～167
12.句海松,李小杰,赵保路,等.阿魏酸钠和18-甘草次酸对氧自由基的清除作用.中国药理学报,1990,(5):466～470
(1999-05-31收稿), 百拇医药