高效液相色谱法测定氟吗西尼及其注射液的含量
作者：李宝明 何丽一
单位：李宝明 何丽一(中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050)
关键词：高效液相色谱法；氟吗西尼；注射液
药物分析杂志000220 摘要 目的：建立氟吗西尼及其注射液的含量测定方法。方法：反相高效液相色谱法。色谱柱为TURNER的Kromasil-ODS柱，200 mm×4.6 mm；流动相：甲醇-水(50∶50)；流速：1.0 mL*min-1，检测波长为243 nm；内标：香草醛。结果：氟吗西尼在80～400 ng范围内呈良好的线性关系，r=0.999 9。制剂的回收率为98.6%，RSD=1.5%(n=5)。结论：本文建立的高效液相色谱法为测定氟吗西尼及其制剂的含量提供了可靠的分析方法。
Determination of Flumazenil and Injection by RP-HPLC
, 百拇医药
Li Baoming and He Liyi
(Institute of Materia Medica,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College,Beijing 100050)
Abstract Objective：A HPLC method was established for the determination of flumazenil and injection.Method:The ODS reversed-phase column was used,mobile phase:methanol-water (50∶50),flow rate of 1.0 mL*min-1 and vanillin as internal standard.The detection was carried out with an UV detector (λ=243 nm).Results:The calibration curves were linear between 80～400 ng (r=0.999 9),the average recovery was 98.6%.Conclusion:This RP-HPLC method is simple,rapid,accurate and is suitable for the determination of flumazenil and injection.
, 百拇医药
Key words HPLC,flumazenil,injection
氟吗西尼(8-氟-5，6-二氢-5-甲基-6-氧代-4H-咪唑并[1，5-α][1，4]苯并二氮NFDA1-3-甲酸乙酯，Flumazenil)是苯二氮NFDA1类药物的拮抗剂，它能抑制苯二氮NFDA1类药物与受体结合，而阻断其中枢作用。临床上用于逆转全身麻醉手术使用苯二氮NFDA1类药物所致的中枢镇静和催眠。本文用香草醛为内标，采用反相高效液相色谱法测定氟吗西尼及其制剂的含量，试验结果表明，本法操作简便，重现性好，结果准确可靠。
1 仪器与试药
岛津LC-6A高效液相色谱仪；SPD-6A可调波长检测器；HP 3394积分仪。
氟吗西尼对照品(含量为99.5%)、原料、氟吗西尼注射液，中国医学科学院药物研究所；香草醛为分析纯；甲醇为优级纯；水为重蒸水。
, 百拇医药
2 色谱条件
色谱柱：TURNER的Kromasil-ODS柱，200 mm×4.6 mm；流动相：甲醇-水(50∶50)，流速：1.0 mL.min-1；检测波长：243 nm。
3 线性关系
精密称取氟吗西尼对照品适量，加甲醇制成0.8 mg.mL-1的对照品溶液；精密称取内标香草醛适量，加甲醇制成0.4 mg.mL-1的内标溶液。精密量取对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL分别置于50 mL量瓶中，各精密加入内标溶液5.0 mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，进样5 μL。结果表明，氟吗西尼浓度在16～80 μg.mL-1范围内与对照品和内标峰面积比呈良好的线性关系，其回归方程为：
, 百拇医药
Y=1.0×10-3+6.08×10-3X r=0.999 9
4 精密度
精密吸取对照品溶液3.0 mL置50 mL量瓶中，加入内标溶液5 mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，连续进样7次，每次5 μL，求得峰面积RSD为1.2%。
5 可行性试验
取氟吗西尼合成过程中的中间体1(mp.156～158 ℃)、2(mp.230～232 ℃)、3(mp.268～270 ℃)少许，加甲醇溶解，分别注入液相色谱仪，按色谱条件分离，它们的保留时间与分离度见表1。
表1 氟吗西尼及其中间体的保留时间及分离度 样品
保留时间/min
, 百拇医药
分离度
中间体3
8.17
中间体2
10.08
1.75
中间体1
14.75
2.70
氟吗西尼
15.70
1.0
6 样品测定
, 百拇医药
6.1 原料的含量测定 精密称取氟吗西尼50 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。精密量取2 mL置50 mL量瓶中，精密加入内标溶液5 mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，进样5 μL，用内标法计算含量。7批原料含量测定结果见表2。色谱图见图1-A。
表2 原料含量测定结果(n=4) 样品批号
含量/%
RSD/%
919401
99.55
0.95
919402
99.68
, http://www.100md.com
0.36
919403
99.24
0.47
960501
99.63
0.45
960502
99.75
0.20
960503
99.45
0.62
, 百拇医药
960504
100.1
0.78
6.2 注射剂的含量测定
回收率的测定：按氟吗西尼注射液处方比例称取氟吗西尼对照品及辅料配制溶液，进行回收率试验，5次测定结果的平均值为98.6%，RSD为1.5%。
图1 氟吗西尼及内标物的HPLC色谱图
A.氟吗西尼原料 B.氟吗西尼注射液 C.赋型剂
1.内标(香草醛) 2.氟吗西尼
注射剂的测定：取0.5 mg∶5 mL及1.0 mg∶10 mL 2种规格的注射液各5支，分别测定装量后混匀，精密吸取20 mL置50 mL量瓶中，加内标溶液5 mL，加甲醇至刻度，摇匀，进样5 μL测定。2种规格的6批样品测定结果见表3。色谱图见图1-B。
, http://www.100md.com
表3 注射剂含量测定结果(n=4) 样品规格
样品批号
标示量 %
RSD/%
1.0 mg∶10 mL
950101
99.05
0.36
950102
98.35
0.58
950103
, http://www.100md.com
99.68
0.73
0.5 mg∶5 mL
950201
99.25
0.20
950202
99.32
0.52
950203
99.10
0.31
7 讨论
对制剂的回收率的考察结果表明，赋型剂对测定无干扰(图1-C)。
中间体1为N-(4-氟苯基)-α-羟亚胺基乙酰胺，中间体2为5-氟靛红，中间体3为7-氟-3，4-二氢-4-甲基-2H-1，4-苯并二氮NFDA1-2，5(1H)-二酮，其确定另文发表。
(本文于1999年9月16日收到), http://www.100md.com
单位：李宝明 何丽一(中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050)
关键词：高效液相色谱法；氟吗西尼；注射液
药物分析杂志000220 摘要 目的：建立氟吗西尼及其注射液的含量测定方法。方法：反相高效液相色谱法。色谱柱为TURNER的Kromasil-ODS柱，200 mm×4.6 mm；流动相：甲醇-水(50∶50)；流速：1.0 mL*min-1，检测波长为243 nm；内标：香草醛。结果：氟吗西尼在80～400 ng范围内呈良好的线性关系，r=0.999 9。制剂的回收率为98.6%，RSD=1.5%(n=5)。结论：本文建立的高效液相色谱法为测定氟吗西尼及其制剂的含量提供了可靠的分析方法。
Determination of Flumazenil and Injection by RP-HPLC
, 百拇医药
Li Baoming and He Liyi
(Institute of Materia Medica,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College,Beijing 100050)
Abstract Objective：A HPLC method was established for the determination of flumazenil and injection.Method:The ODS reversed-phase column was used,mobile phase:methanol-water (50∶50),flow rate of 1.0 mL*min-1 and vanillin as internal standard.The detection was carried out with an UV detector (λ=243 nm).Results:The calibration curves were linear between 80～400 ng (r=0.999 9),the average recovery was 98.6%.Conclusion:This RP-HPLC method is simple,rapid,accurate and is suitable for the determination of flumazenil and injection.
, 百拇医药
Key words HPLC,flumazenil,injection
氟吗西尼(8-氟-5，6-二氢-5-甲基-6-氧代-4H-咪唑并[1，5-α][1，4]苯并二氮NFDA1-3-甲酸乙酯，Flumazenil)是苯二氮NFDA1类药物的拮抗剂，它能抑制苯二氮NFDA1类药物与受体结合，而阻断其中枢作用。临床上用于逆转全身麻醉手术使用苯二氮NFDA1类药物所致的中枢镇静和催眠。本文用香草醛为内标，采用反相高效液相色谱法测定氟吗西尼及其制剂的含量，试验结果表明，本法操作简便，重现性好，结果准确可靠。
1 仪器与试药
岛津LC-6A高效液相色谱仪；SPD-6A可调波长检测器；HP 3394积分仪。
氟吗西尼对照品(含量为99.5%)、原料、氟吗西尼注射液，中国医学科学院药物研究所；香草醛为分析纯；甲醇为优级纯；水为重蒸水。
, 百拇医药
2 色谱条件
色谱柱：TURNER的Kromasil-ODS柱，200 mm×4.6 mm；流动相：甲醇-水(50∶50)，流速：1.0 mL.min-1；检测波长：243 nm。
3 线性关系
精密称取氟吗西尼对照品适量，加甲醇制成0.8 mg.mL-1的对照品溶液；精密称取内标香草醛适量，加甲醇制成0.4 mg.mL-1的内标溶液。精密量取对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL分别置于50 mL量瓶中，各精密加入内标溶液5.0 mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，进样5 μL。结果表明，氟吗西尼浓度在16～80 μg.mL-1范围内与对照品和内标峰面积比呈良好的线性关系，其回归方程为：
, 百拇医药
Y=1.0×10-3+6.08×10-3X r=0.999 9
4 精密度
精密吸取对照品溶液3.0 mL置50 mL量瓶中，加入内标溶液5 mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，连续进样7次，每次5 μL，求得峰面积RSD为1.2%。
5 可行性试验
取氟吗西尼合成过程中的中间体1(mp.156～158 ℃)、2(mp.230～232 ℃)、3(mp.268～270 ℃)少许，加甲醇溶解，分别注入液相色谱仪，按色谱条件分离，它们的保留时间与分离度见表1。
表1 氟吗西尼及其中间体的保留时间及分离度 样品
保留时间/min
, 百拇医药
分离度
中间体3
8.17
中间体2
10.08
1.75
中间体1
14.75
2.70
氟吗西尼
15.70
1.0
6 样品测定
, 百拇医药
6.1 原料的含量测定 精密称取氟吗西尼50 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。精密量取2 mL置50 mL量瓶中，精密加入内标溶液5 mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，进样5 μL，用内标法计算含量。7批原料含量测定结果见表2。色谱图见图1-A。
表2 原料含量测定结果(n=4) 样品批号
含量/%
RSD/%
919401
99.55
0.95
919402
99.68
, http://www.100md.com
0.36
919403
99.24
0.47
960501
99.63
0.45
960502
99.75
0.20
960503
99.45
0.62
, 百拇医药
960504
100.1
0.78
6.2 注射剂的含量测定
回收率的测定：按氟吗西尼注射液处方比例称取氟吗西尼对照品及辅料配制溶液，进行回收率试验，5次测定结果的平均值为98.6%，RSD为1.5%。
图1 氟吗西尼及内标物的HPLC色谱图
A.氟吗西尼原料 B.氟吗西尼注射液 C.赋型剂
1.内标(香草醛) 2.氟吗西尼
注射剂的测定：取0.5 mg∶5 mL及1.0 mg∶10 mL 2种规格的注射液各5支，分别测定装量后混匀，精密吸取20 mL置50 mL量瓶中，加内标溶液5 mL，加甲醇至刻度，摇匀，进样5 μL测定。2种规格的6批样品测定结果见表3。色谱图见图1-B。
, http://www.100md.com
表3 注射剂含量测定结果(n=4) 样品规格
样品批号
标示量 %
RSD/%
1.0 mg∶10 mL
950101
99.05
0.36
950102
98.35
0.58
950103
, http://www.100md.com
99.68
0.73
0.5 mg∶5 mL
950201
99.25
0.20
950202
99.32
0.52
950203
99.10
0.31
7 讨论
对制剂的回收率的考察结果表明，赋型剂对测定无干扰(图1-C)。
中间体1为N-(4-氟苯基)-α-羟亚胺基乙酰胺，中间体2为5-氟靛红，中间体3为7-氟-3，4-二氢-4-甲基-2H-1，4-苯并二氮NFDA1-2，5(1H)-二酮，其确定另文发表。
(本文于1999年9月16日收到), http://www.100md.com