高效毛细管电泳测定泛昔洛韦的杂质
作者：黄宗玉 金瓯
单位：黄宗玉 金瓯(浙江省药品检验所 杭州 310004)
关键词：高效毛细管电泳法；泛昔洛韦；相关杂质
药物分析杂志000214 摘要 目的：采用高效毛细管电泳法分离泛昔洛韦及其相关物质，测定其杂质的含量。方法：通过研究电泳体系各因素(缓冲液的浓度、pH、运行电压)对泛昔洛韦及其相关物质分离的影响。结果与结论：确定用50 mmol.L-1磷酸盐缓冲液(pH 3.3)，运行电压25 kV，检测波长210 nm，在25 min内将泛昔洛韦与其相关杂质分离，并具有良好的精密度和重现性。
Determination of Impurities in Famciclovir by High Performance Capillary Electrophoresis
, http://www.100md.com
Huang Zongyu and Jin Ou
(Zhejiang Institute for Drug Control,Hangzhou 310004)
Abstract Objective：A capillary electrophoresis method was set up to separate and determine famciclovir and related impurities is 7-reduced famciclovir,7 and 9 polymer,oxy-degradation.Method:Optimization of pH,concentration of the buffer and voltage were studied.Results and Conclusion:The results showed that with 50 mmol.L-1 KH2PO4 buffer(pH 3.3),25 kV,at detective wavelength 210 nm,famciclovir and impurities is could be base-line separated within 25 min with good reproducibility.The RSD were 1.3% and 3.8% for within-day and day-to-day tests respectively.
, 百拇医药
Key words high performance capillary electrophoresis,famciclovir,related impurities
泛昔洛韦(Famciclovir)是新型抗病毒药，临床上主要用于治疗病毒性带状疱疹，角膜炎等。其在合成和贮存过程中带入杂质主要是氧化降解产物、7位还原物、7位缩合物和9位缩合物。高效毛细管电泳是以高压电场为驱动力，在毛细管中按其淌度和分配系数不同进行高效、快速、低廉分离的一种新技术，本文作者首次用区带电泳建立了同时分离泛昔洛韦及其相关杂质的方法，旨在寻求高效毛细管电泳在药物质量控制方面的应用前景。
1 仪器、试药与样品
Beckman P/ACE 5500型全自动毛细管电泳仪(美国Beckman公司)配备二极管阵列检测器和Gold软件数据工作站；100 pH计(美国Beckman公司)。
, 百拇医药
磷酸二氢钾、磷酸、氢氧化钾均为分析纯，水为重蒸馏水，泛昔洛韦原料3批[批号为980303(粗品)，980501，980502]，泛昔洛韦对照品(含量为99.5%以上)、7位还原物、7位缩合物和9位缩合物均为浙江海门药厂提供。
2 实验及结果
2.1 供试溶液的配制 取泛昔洛韦对照品和7位还原物适量，分别用水配制成浓度为2 mg。mL-1的溶液；取7位缩合物和9位缩合物用甲醇-水(50∶50)配制成浓度为2 mg。mL-1的溶液；取泛昔洛韦对照品40 mg至具塞试管中，加过氧化氢水溶液(过氧化氢含量30%以上)4 mL，在80 ℃水浴中加热2 h，再用水稀释至浓度为2 mg。mL-1的溶液(氧化降解产物溶液)；混合溶液为取上述5种溶液各1 mL混匀即得。取泛昔洛韦样品3批，分别用水配制成浓度为2 mg。mL-1的溶液，所有供试溶液经0.2 μm膜过滤后，置样品瓶内。
, 百拇医药
2.2 电泳色谱条件 未涂层毛细管柱75 μm×57 cm(有效长度50 cm，Beckman公司)，柱温23 ℃，运行电压25 kV，检测波长210 nm，在阳极气压进样3 s，运行液为pH 3.3的50 mmol。L-1磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾6.8 g，加水至1 000 mL溶解，用6 mol。L-1磷酸调pH至3.3)，运行时间25 min。
2.3 结果 取上述配制的泛昔洛韦对照品、氧化降解产物、7位还原物、7位缩合物、9位缩合物和混合物的供试溶液，按本文电泳色谱条件，分别进样，检测信号由数据工作站记录，氧化降解产物溶液有4个主峰，迁移时间分别为4.07，6.06，6.33，6.60 min，在7 min后无峰，不干扰其它组分。泛昔洛韦对照品溶液在7.95 min有出峰，7位还原物溶液在10.32 min有出峰，7位缩合物溶液在19.08 min有出峰，9位缩合物溶液在21.03 min有出峰，互不干扰，分离度均大于2.0。在本文优选的电泳分离条件下，调节检测器灵敏度及对照品浓度，使S/N>3的最低检测浓度，泛昔洛韦为1 μg。mL-1，7位还原物、7位缩合物和9位缩合物为2 μg。mL-1，氧化物分别为0.5 μg。mL-1。混合溶液的电泳色谱图见图1，各组分在25 min内均得到良好分离。
, 百拇医药
图1 混合溶液电泳色谱图
a、b、c、d.氧化降解产物(4.07，6.06，6.33，6.60 min)
e.泛昔洛韦(7.95 min) f.7位还原物(10.32 min)
g.7位缩合物(19.08 min) h.9位缩合物(21.03 min)
2.4 方法的精密度和重现性
取泛昔洛韦对照品的水溶液按上述电泳色谱条件，连续进样5次，泛昔洛韦平均峰面积为454 632，RSD为1.7%。
取泛昔洛韦原料1批(批号980303)，称取5份，分别用水配制成2 mg。mL-1溶液，按上述色谱条件，面积归一化计杂质平均含量为1.47%，RSD为1.3%，n=5。
, 百拇医药
泛昔洛韦原料1批(批号980303)，每天称取1份，用水配制成2 mg。mL-1溶液，连续测5 d，面积归一化测定杂质平均含量为1.40%，RSD为3.8%，n=5。
2.5 样品中杂质的测定 取泛昔洛韦原料3批，按上述方法配制供试溶液，照本文电泳色谱条件操作，测定杂质含量，色谱图见图2，样品980303(粗品)，980501，980502的杂质含量分别为1.5%，0.40%，0.36%，n=3。
3 讨论
实验中选择运行缓冲液(磷酸盐缓冲液)pH分别为2.5，3.0，3.3，3.6，4.3，5.0。当pH小于3.3时，或大于3.3时，峰均展宽，当缓冲液pH为3.3时泛昔洛韦的峰形对称，柱效高。迁移时间随着pH的增加而增大。
, 百拇医药
图2 泛昔洛韦样品电泳图
实验选择了磷酸盐缓冲液的浓度分别为10，25，50，75 mmol。L-1，随着电解质浓度增加，迁移时间稍有增加，当浓度为50 mmol。L-1时峰形对称，柱效最高，基线平稳，故选择浓度为50 mmol。L-1。
实验选择了工作电压分别为15，20，25，30 kV，随着电压的增加，运行电流增加，迁移时间缩短，当工作电压为30 kV时，运行电流大于250 μA，因焦耳热增加，基线噪音大，故选择25 kV为工作电压。
实验结果表明，样品的杂质均在主峰前出峰，是泛昔洛韦的氧化降解产物，目前尚无对照品，且杂质峰面积响应与泛昔洛韦相近，故采用面积归一化法计杂质含量。
参考文献
1， 刘克松，方肇伦.高效毛细管电泳在药物分析中的应用.色谱，1996，14(5)：364
2，祝仕清，牛长群.高效毛细管电泳分离四环素类抗生素及测定四环素中杂质.药物分析杂志，1998，18(4)：250
(本文于1999年2月2日收到), 百拇医药
单位：黄宗玉 金瓯(浙江省药品检验所 杭州 310004)
关键词：高效毛细管电泳法；泛昔洛韦；相关杂质
药物分析杂志000214 摘要 目的：采用高效毛细管电泳法分离泛昔洛韦及其相关物质，测定其杂质的含量。方法：通过研究电泳体系各因素(缓冲液的浓度、pH、运行电压)对泛昔洛韦及其相关物质分离的影响。结果与结论：确定用50 mmol.L-1磷酸盐缓冲液(pH 3.3)，运行电压25 kV，检测波长210 nm，在25 min内将泛昔洛韦与其相关杂质分离，并具有良好的精密度和重现性。
Determination of Impurities in Famciclovir by High Performance Capillary Electrophoresis
, http://www.100md.com
Huang Zongyu and Jin Ou
(Zhejiang Institute for Drug Control,Hangzhou 310004)
Abstract Objective：A capillary electrophoresis method was set up to separate and determine famciclovir and related impurities is 7-reduced famciclovir,7 and 9 polymer,oxy-degradation.Method:Optimization of pH,concentration of the buffer and voltage were studied.Results and Conclusion:The results showed that with 50 mmol.L-1 KH2PO4 buffer(pH 3.3),25 kV,at detective wavelength 210 nm,famciclovir and impurities is could be base-line separated within 25 min with good reproducibility.The RSD were 1.3% and 3.8% for within-day and day-to-day tests respectively.
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Key words high performance capillary electrophoresis,famciclovir,related impurities
泛昔洛韦(Famciclovir)是新型抗病毒药，临床上主要用于治疗病毒性带状疱疹，角膜炎等。其在合成和贮存过程中带入杂质主要是氧化降解产物、7位还原物、7位缩合物和9位缩合物。高效毛细管电泳是以高压电场为驱动力，在毛细管中按其淌度和分配系数不同进行高效、快速、低廉分离的一种新技术，本文作者首次用区带电泳建立了同时分离泛昔洛韦及其相关杂质的方法，旨在寻求高效毛细管电泳在药物质量控制方面的应用前景。
1 仪器、试药与样品
Beckman P/ACE 5500型全自动毛细管电泳仪(美国Beckman公司)配备二极管阵列检测器和Gold软件数据工作站；100 pH计(美国Beckman公司)。
, 百拇医药
磷酸二氢钾、磷酸、氢氧化钾均为分析纯，水为重蒸馏水，泛昔洛韦原料3批[批号为980303(粗品)，980501，980502]，泛昔洛韦对照品(含量为99.5%以上)、7位还原物、7位缩合物和9位缩合物均为浙江海门药厂提供。
2 实验及结果
2.1 供试溶液的配制 取泛昔洛韦对照品和7位还原物适量，分别用水配制成浓度为2 mg。mL-1的溶液；取7位缩合物和9位缩合物用甲醇-水(50∶50)配制成浓度为2 mg。mL-1的溶液；取泛昔洛韦对照品40 mg至具塞试管中，加过氧化氢水溶液(过氧化氢含量30%以上)4 mL，在80 ℃水浴中加热2 h，再用水稀释至浓度为2 mg。mL-1的溶液(氧化降解产物溶液)；混合溶液为取上述5种溶液各1 mL混匀即得。取泛昔洛韦样品3批，分别用水配制成浓度为2 mg。mL-1的溶液，所有供试溶液经0.2 μm膜过滤后，置样品瓶内。
, 百拇医药
2.2 电泳色谱条件 未涂层毛细管柱75 μm×57 cm(有效长度50 cm，Beckman公司)，柱温23 ℃，运行电压25 kV，检测波长210 nm，在阳极气压进样3 s，运行液为pH 3.3的50 mmol。L-1磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾6.8 g，加水至1 000 mL溶解，用6 mol。L-1磷酸调pH至3.3)，运行时间25 min。
2.3 结果 取上述配制的泛昔洛韦对照品、氧化降解产物、7位还原物、7位缩合物、9位缩合物和混合物的供试溶液，按本文电泳色谱条件，分别进样，检测信号由数据工作站记录，氧化降解产物溶液有4个主峰，迁移时间分别为4.07，6.06，6.33，6.60 min，在7 min后无峰，不干扰其它组分。泛昔洛韦对照品溶液在7.95 min有出峰，7位还原物溶液在10.32 min有出峰，7位缩合物溶液在19.08 min有出峰，9位缩合物溶液在21.03 min有出峰，互不干扰，分离度均大于2.0。在本文优选的电泳分离条件下，调节检测器灵敏度及对照品浓度，使S/N>3的最低检测浓度，泛昔洛韦为1 μg。mL-1，7位还原物、7位缩合物和9位缩合物为2 μg。mL-1，氧化物分别为0.5 μg。mL-1。混合溶液的电泳色谱图见图1，各组分在25 min内均得到良好分离。
, 百拇医药
图1 混合溶液电泳色谱图
a、b、c、d.氧化降解产物(4.07，6.06，6.33，6.60 min)
e.泛昔洛韦(7.95 min) f.7位还原物(10.32 min)
g.7位缩合物(19.08 min) h.9位缩合物(21.03 min)
2.4 方法的精密度和重现性
取泛昔洛韦对照品的水溶液按上述电泳色谱条件，连续进样5次，泛昔洛韦平均峰面积为454 632，RSD为1.7%。
取泛昔洛韦原料1批(批号980303)，称取5份，分别用水配制成2 mg。mL-1溶液，按上述色谱条件，面积归一化计杂质平均含量为1.47%，RSD为1.3%，n=5。
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泛昔洛韦原料1批(批号980303)，每天称取1份，用水配制成2 mg。mL-1溶液，连续测5 d，面积归一化测定杂质平均含量为1.40%，RSD为3.8%，n=5。
2.5 样品中杂质的测定 取泛昔洛韦原料3批，按上述方法配制供试溶液，照本文电泳色谱条件操作，测定杂质含量，色谱图见图2，样品980303(粗品)，980501，980502的杂质含量分别为1.5%，0.40%，0.36%，n=3。
3 讨论
实验中选择运行缓冲液(磷酸盐缓冲液)pH分别为2.5，3.0，3.3，3.6，4.3，5.0。当pH小于3.3时，或大于3.3时，峰均展宽，当缓冲液pH为3.3时泛昔洛韦的峰形对称，柱效高。迁移时间随着pH的增加而增大。
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图2 泛昔洛韦样品电泳图
实验选择了磷酸盐缓冲液的浓度分别为10，25，50，75 mmol。L-1，随着电解质浓度增加，迁移时间稍有增加，当浓度为50 mmol。L-1时峰形对称，柱效最高，基线平稳，故选择浓度为50 mmol。L-1。
实验选择了工作电压分别为15，20，25，30 kV，随着电压的增加，运行电流增加，迁移时间缩短，当工作电压为30 kV时，运行电流大于250 μA，因焦耳热增加，基线噪音大，故选择25 kV为工作电压。
实验结果表明，样品的杂质均在主峰前出峰，是泛昔洛韦的氧化降解产物，目前尚无对照品，且杂质峰面积响应与泛昔洛韦相近，故采用面积归一化法计杂质含量。
参考文献
1， 刘克松，方肇伦.高效毛细管电泳在药物分析中的应用.色谱，1996，14(5)：364
2，祝仕清，牛长群.高效毛细管电泳分离四环素类抗生素及测定四环素中杂质.药物分析杂志，1998，18(4)：250
(本文于1999年2月2日收到), 百拇医药