高效液相色谱法测定头孢氨苄胶囊的含量
作者：明金兰 朱会琴
单位：明金兰 朱会琴(宁夏药品检验所 银川 750004)
关键词：
药物分析杂志000222 头孢氨苄(cefalexin)为半合成抗生素，口服吸收良好，体内稳定，毒副作用较小，蛋白结合率低，对葡萄球菌产生的青霉素酶稳定；对革兰氏阳性菌产生的β-内酰胺酶有一定耐受性[1]，在临床上广为使用。其含量测定中国药典(1995年版)采用碘量法[2]。但此法操作繁琐，费工费时，影响因素多；还有采用高效液相色谱法的报道[3]，但内标物保留时间过长。本文采用高效液相色谱法，以乙酰苯胺为内标测定其含量，方法简便、准确，重复性好，灵敏度高。获得了较为满意的结果。
1 仪器与试药
, 百拇医药 日立L-6200A高效液相色谱仪，L-4200H检测器，D-2500数据处理器。头孢氨苄对照品(含量91.7%)、乙酰苯胺(内标物)、α-苯甘氨酸、7-氨基去乙酰胺基头孢烷酸(7-ADCA)，由中国药品生物制品检定所提供。
2 色谱条件
色谱柱：YWG C18(250 mm×4.6 mm,10 μm)，流动相：0.015 mol。L-1醋酸盐缓冲液(称取无水醋酸钠1.23 g，加水至1 000 mL，用醋酸调pH为4.0)-乙腈-甲醇(60∶6∶34)，检测波长：254 nm，流速：1.0 mL。min-1。
3 线性范围
精密称取头孢氨苄对照品约60 mg，置25 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取10 mL置50 mL量瓶中，稀释成约为450 μg。mL-1的溶液作为对照品溶液。另精密称取乙酰苯胺适量，置25 mL量瓶中，加水溶解并稀释成约为550 μg。mL-1的溶液，作为内标溶液。精密量取对照品溶液0.1，0.5，0.75，1.0，1.5，3.0 mL，分别加入内标溶液2 mL，以流动相稀释至25 mL使内标最终浓度为44 μg。mL-1[3]，摇匀，取20 μL进样，色谱图见图1-A。试验表明头孢氨苄浓度在18～535 μg。mL-1范围内与对照品峰面积和内标物峰面积比呈良好的线性关系，回归方程为：
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A=0.015 81+0.009 83C r=0.999 9
图1 对照品(A)与样品(B)高效液相色谱图
1.头孢氨苄(3.98 min) 2.乙酰苯胺(8.56 min)
4 重复性和稳定性试验
用样品进行6次试验测得平均含量为99.8%，RSD为1.7%。样品溶液在24 h内头孢氨苄主峰与内标峰面积比值基本不变。
5 校正因子
精密量取对照品溶液0.75 mL与内标溶液2 mL置25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，取20 μL注入液相色谱仪，按头孢氨苄峰面积计算校正因子为2.149 89，RSD为0.3%，n=4。
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6 回收率试验
精密称取按处方量配制的头孢氨苄胶囊粉末适量(约含头孢氨苄0.125 g)置50 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液2 mL加入内标溶液2 mL，置25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。取20 μL注入液相色谱仪，计算，求得平均回收率为100.1%，RSD为0.95%，n=6。
7 干扰试验
精密称取7-ADCA、α-苯甘氨酸适量(约为10 mg)置50 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，精密量取2 mL加到“回收率试验”所用溶液中，取20 μL注入液相色谱仪，结果见图2。
图2 杂质与样品的高效液相色谱图
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1. 7-ADCA(2.58 min) 2. α-苯甘氨酸(2.93 min)
3. 头孢氨苄(3.98 min) 4. 乙酰苯胺(8.56 min)
8 样品测定
精密称取装量差异项下混合均匀的胶囊粉末适量(约相当于头孢氨苄0.125 g)，置50 mL量瓶中，照“回收率试验”项操作，结果见表1，色谱图见图1-B。
表1 2种含量测定方法的比较(标示量%，n=3) 生产厂
批号
碘量法[2]
本法
A
, http://www.100md.com
980701
96.9
98.2
B
971207
94.7
94.0
C
980112
90.8
89.2
D
980603
, http://www.100md.com
90.8
91.2
E
971106
90.4
90.3
9 小结
用本法测定头孢氨苄胶囊的含量，快速，影响因素少，结果准确。与碘量法比较，经方差分析无显著差异(P>0.05)。重复性试验RSD为1.7%，回收率试验RSD为0.95%。头孢氨苄与内标物质乙酰苯胺能实现良好的分离。通过干扰性试验可知，乙酰苯胺、头孢氨苄、α-苯甘氨酸、7-ADCA的保留时间分别为8.56，3.98，2.93，2.58 min，因此，样品中可能存在的α-苯甘氨酸、7-ADCA杂质，不影响头孢氨苄含量的测定。
参考文献
1，中国药典1990年版二部药典注释.170
2，中国药典.1995.二部：177
3，周明昊.高效液相色谱法测定头孢氨苄的含量.药物分析杂志，1997，17(6)：407
(本文于1999年3月26日收到), 百拇医药
单位：明金兰 朱会琴(宁夏药品检验所 银川 750004)
关键词：
药物分析杂志000222 头孢氨苄(cefalexin)为半合成抗生素，口服吸收良好，体内稳定，毒副作用较小，蛋白结合率低，对葡萄球菌产生的青霉素酶稳定；对革兰氏阳性菌产生的β-内酰胺酶有一定耐受性[1]，在临床上广为使用。其含量测定中国药典(1995年版)采用碘量法[2]。但此法操作繁琐，费工费时，影响因素多；还有采用高效液相色谱法的报道[3]，但内标物保留时间过长。本文采用高效液相色谱法，以乙酰苯胺为内标测定其含量，方法简便、准确，重复性好，灵敏度高。获得了较为满意的结果。
1 仪器与试药
, 百拇医药 日立L-6200A高效液相色谱仪，L-4200H检测器，D-2500数据处理器。头孢氨苄对照品(含量91.7%)、乙酰苯胺(内标物)、α-苯甘氨酸、7-氨基去乙酰胺基头孢烷酸(7-ADCA)，由中国药品生物制品检定所提供。
2 色谱条件
色谱柱：YWG C18(250 mm×4.6 mm,10 μm)，流动相：0.015 mol。L-1醋酸盐缓冲液(称取无水醋酸钠1.23 g，加水至1 000 mL，用醋酸调pH为4.0)-乙腈-甲醇(60∶6∶34)，检测波长：254 nm，流速：1.0 mL。min-1。
3 线性范围
精密称取头孢氨苄对照品约60 mg，置25 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取10 mL置50 mL量瓶中，稀释成约为450 μg。mL-1的溶液作为对照品溶液。另精密称取乙酰苯胺适量，置25 mL量瓶中，加水溶解并稀释成约为550 μg。mL-1的溶液，作为内标溶液。精密量取对照品溶液0.1，0.5，0.75，1.0，1.5，3.0 mL，分别加入内标溶液2 mL，以流动相稀释至25 mL使内标最终浓度为44 μg。mL-1[3]，摇匀，取20 μL进样，色谱图见图1-A。试验表明头孢氨苄浓度在18～535 μg。mL-1范围内与对照品峰面积和内标物峰面积比呈良好的线性关系，回归方程为：
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A=0.015 81+0.009 83C r=0.999 9
图1 对照品(A)与样品(B)高效液相色谱图
1.头孢氨苄(3.98 min) 2.乙酰苯胺(8.56 min)
4 重复性和稳定性试验
用样品进行6次试验测得平均含量为99.8%，RSD为1.7%。样品溶液在24 h内头孢氨苄主峰与内标峰面积比值基本不变。
5 校正因子
精密量取对照品溶液0.75 mL与内标溶液2 mL置25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，取20 μL注入液相色谱仪，按头孢氨苄峰面积计算校正因子为2.149 89，RSD为0.3%，n=4。
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6 回收率试验
精密称取按处方量配制的头孢氨苄胶囊粉末适量(约含头孢氨苄0.125 g)置50 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液2 mL加入内标溶液2 mL，置25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。取20 μL注入液相色谱仪，计算，求得平均回收率为100.1%，RSD为0.95%，n=6。
7 干扰试验
精密称取7-ADCA、α-苯甘氨酸适量(约为10 mg)置50 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，精密量取2 mL加到“回收率试验”所用溶液中，取20 μL注入液相色谱仪，结果见图2。
图2 杂质与样品的高效液相色谱图
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1. 7-ADCA(2.58 min) 2. α-苯甘氨酸(2.93 min)
3. 头孢氨苄(3.98 min) 4. 乙酰苯胺(8.56 min)
8 样品测定
精密称取装量差异项下混合均匀的胶囊粉末适量(约相当于头孢氨苄0.125 g)，置50 mL量瓶中，照“回收率试验”项操作，结果见表1，色谱图见图1-B。
表1 2种含量测定方法的比较(标示量%，n=3) 生产厂
批号
碘量法[2]
本法
A
, http://www.100md.com
980701
96.9
98.2
B
971207
94.7
94.0
C
980112
90.8
89.2
D
980603
, http://www.100md.com
90.8
91.2
E
971106
90.4
90.3
9 小结
用本法测定头孢氨苄胶囊的含量，快速，影响因素少，结果准确。与碘量法比较，经方差分析无显著差异(P>0.05)。重复性试验RSD为1.7%，回收率试验RSD为0.95%。头孢氨苄与内标物质乙酰苯胺能实现良好的分离。通过干扰性试验可知，乙酰苯胺、头孢氨苄、α-苯甘氨酸、7-ADCA的保留时间分别为8.56，3.98，2.93，2.58 min，因此，样品中可能存在的α-苯甘氨酸、7-ADCA杂质，不影响头孢氨苄含量的测定。
参考文献
1，中国药典1990年版二部药典注释.170
2，中国药典.1995.二部：177
3，周明昊.高效液相色谱法测定头孢氨苄的含量.药物分析杂志，1997，17(6)：407
(本文于1999年3月26日收到), 百拇医药