四环素类眼膏剂中金黄葡萄球菌检查探讨
作者：陆蓓
单位：陆蓓(浙江省金华市药品检验所 金华 32100)
关键词：四环素眼膏剂；金黄色葡萄球菌；硫酸镁
西北药学杂志000217 摘要 在普通肉汤培养基中，加入硫酸镁溶液作为中和剂，灭活四环素类 眼膏剂中的抗生素，有利于阳性对照菌的生长，提高了检出率。
中国药典(1995版)规定眼膏剂要进行微生物限度检查。在工作中笔者 发现四环素类眼膏剂中的绿脓杆菌，常规法即可检出；而金黄葡萄球菌按常规法无法检出。 对疏水性软膏，用薄膜过滤法也难实施。笔者就这一问题进行了多次实验，结果采用在普通 肉汤中加硫酸镁和扩大培养基法同时进行，取得了较满意的效果。
1 材料
1.1 菌株 金黄葡萄球菌标准菌株[CMCC(B)26003]， 系中国药品生物制品检定所提供。
, http://www.100md.com
1.2 样品 四环素可的松眼膏(广州何济公制药厂，四环 素2500u/g)；金霉素眼膏(浙江温州制药厂，5000u/g)。
1.3 培养基 普通肉汤培养基、甘露醇高盐琼脂培养基( 中国药品生物制品检定所)。
2 方法与结果
将上述培养基及试药(吐温-80，液体石蜡，24.7%硫酸镁溶液)，均经高压蒸汽灭菌。另将 阳性对照菌金黄葡萄球菌稀释成每ml含50～100个菌。2种眼膏剂试品各称取5g，分置灭菌研 钵中，按照《药品卫生检验方法》中液体石蜡吐温法，使乳化完全，成为1∶20的供试液； 用灭菌吸管分别吸取1.0，2.5，3.5，5.0，10ml各3份，分别加入到300ml普通肉汤中。 1份用于检查药品本身有无染菌。另外2份作为阳性对照，其中1份阳性对照中加入无菌24.7 %的硫酸镁溶液6.0ml，混匀；置35℃～37℃培养48h，划线于甘露醇高盐琼脂平板，置35℃ ～37℃培养24h。结果见表1。
, 百拇医药
3 讨论
①从表1可看出，硫酸镁的作用是明显的，它可将加样量提高而不影响检出率：四环素可的 松眼膏供试液可提高到正常加样量10ml，金霉素眼膏供试液也可提高到5.0ml。1∶20供试 液中四环素浓度为125u/ml，金霉素浓度为250u/ml，故两者检出浓度相同(4.16u/ml)。
表1 硫酸镁溶液用量对阳性对照菌生长情况的影响
加入量(ml)
四环素
可的松眼膏
金霉素眼膏
300ml普通肉汤
1.0
, http://www.100md.com
-
-
2.5
-
-
3.5
-
-
5.0
-
-
10.0
-
-
, 百拇医药
300ml普通肉汤*
1.0
+
+
2.5
-
-
3.5
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-
5.0
-
-
, http://www.100md.com
10.0
-
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300ml普通肉汤
1.0
+
+
+24.7%MgSO4*
2.5
+
+
3.5
+
, http://www.100md.com
+
5.0
+
+
10.0
+
-
*表示加有阳性对照菌 +表示阳性对照菌正常生长
-表示无菌生长
②四环素类抗生素的抗菌谱都较宽，能抑制多数革兰阳性及阴性菌，金黄葡萄球菌就是其中 之一。常规法无法做出阳性对照，用薄膜过滤法又有难度。因为四环素类疏水性软膏的常用 中和剂是硫酸镁〔1〕，其原理是与镁形成螯合物，消除其抑菌作用，使阳性对照菌 能正常生长。至于硫酸镁的具体使用剂量，系根据资料报道用于血液增菌用的葡萄糖肉膏汤 培养基，每50ml肉膏汤中加入24.7%的硫酸镁溶液1ml，即可破坏抗生素的抑菌作用〔 2〕。按照此比例，在300ml普通肉汤中，加入6ml 24.7%硫酸镁溶液，能达到灭活的作 用，取得了满意的效果。
参考文献
〔1〕郑均镛，王光宝.药品微生物学及检验技术.北京 ：人民卫生出版社，1989：263
〔2〕杜平华，吕文和.新编细菌检验用培养基手册.青 岛：海洋大学出版社，1994：22
(收稿：1999-09-18), 百拇医药
单位：陆蓓(浙江省金华市药品检验所 金华 32100)
关键词：四环素眼膏剂；金黄色葡萄球菌；硫酸镁
西北药学杂志000217 摘要 在普通肉汤培养基中，加入硫酸镁溶液作为中和剂，灭活四环素类 眼膏剂中的抗生素，有利于阳性对照菌的生长，提高了检出率。
中国药典(1995版)规定眼膏剂要进行微生物限度检查。在工作中笔者 发现四环素类眼膏剂中的绿脓杆菌，常规法即可检出；而金黄葡萄球菌按常规法无法检出。 对疏水性软膏，用薄膜过滤法也难实施。笔者就这一问题进行了多次实验，结果采用在普通 肉汤中加硫酸镁和扩大培养基法同时进行，取得了较满意的效果。
1 材料
1.1 菌株 金黄葡萄球菌标准菌株[CMCC(B)26003]， 系中国药品生物制品检定所提供。
, http://www.100md.com
1.2 样品 四环素可的松眼膏(广州何济公制药厂，四环 素2500u/g)；金霉素眼膏(浙江温州制药厂，5000u/g)。
1.3 培养基 普通肉汤培养基、甘露醇高盐琼脂培养基( 中国药品生物制品检定所)。
2 方法与结果
将上述培养基及试药(吐温-80，液体石蜡，24.7%硫酸镁溶液)，均经高压蒸汽灭菌。另将 阳性对照菌金黄葡萄球菌稀释成每ml含50～100个菌。2种眼膏剂试品各称取5g，分置灭菌研 钵中，按照《药品卫生检验方法》中液体石蜡吐温法，使乳化完全，成为1∶20的供试液； 用灭菌吸管分别吸取1.0，2.5，3.5，5.0，10ml各3份，分别加入到300ml普通肉汤中。 1份用于检查药品本身有无染菌。另外2份作为阳性对照，其中1份阳性对照中加入无菌24.7 %的硫酸镁溶液6.0ml，混匀；置35℃～37℃培养48h，划线于甘露醇高盐琼脂平板，置35℃ ～37℃培养24h。结果见表1。
, 百拇医药
3 讨论
①从表1可看出，硫酸镁的作用是明显的，它可将加样量提高而不影响检出率：四环素可的 松眼膏供试液可提高到正常加样量10ml，金霉素眼膏供试液也可提高到5.0ml。1∶20供试 液中四环素浓度为125u/ml，金霉素浓度为250u/ml，故两者检出浓度相同(4.16u/ml)。
表1 硫酸镁溶液用量对阳性对照菌生长情况的影响
加入量(ml)
四环素
可的松眼膏
金霉素眼膏
300ml普通肉汤
1.0
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2.5
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3.5
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5.0
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300ml普通肉汤*
1.0
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2.5
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300ml普通肉汤
1.0
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+24.7%MgSO4*
2.5
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5.0
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*表示加有阳性对照菌 +表示阳性对照菌正常生长
-表示无菌生长
②四环素类抗生素的抗菌谱都较宽，能抑制多数革兰阳性及阴性菌，金黄葡萄球菌就是其中 之一。常规法无法做出阳性对照，用薄膜过滤法又有难度。因为四环素类疏水性软膏的常用 中和剂是硫酸镁〔1〕，其原理是与镁形成螯合物，消除其抑菌作用，使阳性对照菌 能正常生长。至于硫酸镁的具体使用剂量，系根据资料报道用于血液增菌用的葡萄糖肉膏汤 培养基，每50ml肉膏汤中加入24.7%的硫酸镁溶液1ml，即可破坏抗生素的抑菌作用〔 2〕。按照此比例，在300ml普通肉汤中，加入6ml 24.7%硫酸镁溶液，能达到灭活的作 用，取得了满意的效果。
参考文献
〔1〕郑均镛，王光宝.药品微生物学及检验技术.北京 ：人民卫生出版社，1989：263
〔2〕杜平华，吕文和.新编细菌检验用培养基手册.青 岛：海洋大学出版社，1994：22
(收稿：1999-09-18), 百拇医药