CD44V6蛋白和转化因子β在人喉癌中的表达与转移及预后的关系
作者：侯富林 林秋雄 林汉良 宋新汉
单位：(广东省人民医院耳鼻咽喉科 510080)
关键词：喉鳞状细胞癌；CD44基因；转化生长因子β；转移
广东医学000224 【摘要】 目的 探讨CD44V6蛋白和TGFβ在喉癌中的表达与转移及预后的关系。方法 用CD44V6蛋白和TGFβ单克隆抗体，通过免疫组化S-P法，对69例喉鳞状细胞癌蜡块标本和20例正常喉粘膜标本进行研究，结合临床及随访资料进行分析。结果 69例喉鳞状细胞癌的CD44V6蛋白和TGFβ阳性表达率分别为52%(36/69)，77%(53/69)。20例正常喉粘膜CD44V6蛋白和TGFβ阳性表达率为0(0/20)。CD44V6蛋白和TGFβ阳性表达与肿瘤原发部位、组织分级和临床分期无相关性(P>0.05)；颈部淋巴结转移的病例原发瘤的CD44V6蛋白和TGFβ阳性表达分别为60%(24/40)，65%(26/40)，无淋巴结转移的病例CD44V6蛋白和TGFβ阳性表达率分别为28%(8/29)，34%(10/29)，差别有显著意义。用log-rank检验分析CD44V6蛋白和TGFβ表达，阴性组5 a生存率高于阳性表达组(P<0.05)。结论 喉鳞癌CD44V6蛋白和TGFβ的阳性表达与颈部淋巴结转移和5 a生存率显著相关，CD44V6蛋白和TGFβ可作为预测喉癌转移和预后的重要指标。
, 百拇医药
CD44蛋白具有调节细胞与细胞间相互粘附、生长刺激以及相关转化等功能，对肿瘤转移起重要作用。转化生长因子β(TGFβ)具有抑制癌细胞生长及与恶性肿瘤转移有关。在许多人类肿瘤中CD44基因和TGFβ表达水平与肿瘤转移潜能相关，有关CD44基因和TGFβ在喉癌中的表达与转移、预后的关系的研究报道不多。本文采用CD44V6蛋白和TGFβ单克隆抗体，通过免疫组化S-P法，对69例喉鳞状细胞癌蜡块标本和20例正常的喉粘膜标本进行检测，探讨其表达与转移及预后的关系。
1 材料与方法
1.1 材料 收集我院耳鼻喉科1990～1997年手术切除的69例喉鳞癌石蜡标本，另取癌旁正常喉粘膜标本20例作为对照组。69例中，男64例，女5例。年龄43～75岁，平均60.1岁。按照UICC 1992年TNM分期标准，解剖分区：声门上型22例、声门型46例、声门下型1例；临床分期：Ⅰ期10例、Ⅱ期26例、Ⅲ期21例、Ⅳ期12例。组织学分级：Ⅰ级(高分化)11例，Ⅱ级(中分化)38例，Ⅲ级(低分化)20例。69例病理确诊有40例伴颈部淋巴结转移。对全部病例仅进行5 a随访。
, 百拇医药
1.2 方法 CD44V6单克隆抗体，工作浓度1∶80；TGFβ单克隆抗体(即用型)和S-P试剂盒均为Maxim公司产品，操作按产品说明书进行。每批切片染色均设阳性和阴性对照。阳性标准：CD44V6蛋白及TGFβ阳性反应均位于细胞浆，表现为细胞浆内棕黄色颗粒或团块，每张切片随机观察10个高位视野(×400)按阳性细胞占肿瘤细胞百分率分成3个等级：(+)(1%～30%)，(+ +)(30%～70%)，(+ + +)(>70%)；(-)及(+)为阴性组，(+ +)及(+ + +)为阳性组[1]。
1.3 统计学分析 计数资料采用χ2检验。
2 结果
CD44V6蛋白及TGFβ阳性表达产物主要位于细胞浆中，20例正常喉粘膜CD44V6蛋白、TGFβ表达均为阴性。69例喉鳞癌CD44V6蛋白、TGFβ阳性率分别为52%(36/69)，77%(53/69)。40例伴有颈部淋巴结转移的CD44V6蛋白阳性率为60%(24/40)，TGFβ阳性率为65%(26/40)，29例无淋巴结转移CD44V6蛋白阳性表达阴性率为28%(8/29)，TGFβ为34%(10/29)。P值分别为：<0.01及<0.05。20例正常喉粘膜CD44V6蛋白和TGFβ均为阴性(0/20)。
, 百拇医药
喉鳞癌不同临床分期CD44V6蛋白和TGFβ的表达情况：Ⅰ～Ⅱ期阳性表达率为80%(29/36)，Ⅲ～Ⅳ期为88%(29/33)，各期均有表达，差异无显著意义(P>0.05)。不同分化程度肿瘤的阳性表达率：Ⅰ级为73%(8/11)，Ⅱ级为84%(32/38)，Ⅲ级为90%(18/20)，各级之间的差异无显著性(P>0.05)。随访11例CD44V6蛋白和TGFβ阴性表达的病例5 a生存率为85%，58例CD44V6蛋白或TGFβ阳性表达的病例5 a生存率为64%，差异有显著意义(P<0.05)。
3 讨论
CD44V6蛋白和TGFβ均参与肿瘤细胞与基底层粘附、细胞与细胞之间的特异性粘附，在肿瘤细胞的生长、浸润和转移中起重要作用。CD44V6蛋白与TGFβ在许多肿瘤，如食管癌、胃癌、头颈部等恶性肿瘤中均有异常表达[2～5]，CD44与喉癌的关系研究不多[6]，TGFβ尚少见文献报告。已发现在结肠癌、乳腺癌、肺癌及宫颈癌等手术切除的标本中，有淋巴结转移者CD44V6蛋白和TGFβ阳性表达率高于无转移者，CD44V6和TGFβ表达阳性者常伴有术后复发和远处转移，其生存期较短。Seiter等[7]用抗CD44V蛋白抗体与CD44V产物相结合，可以终止肿瘤细胞的转移潜能。目前认为，CD44及TGFβ可能成为某些肿瘤早期诊断，预测病情进展、转移潜能和预后的重要标志物，并可能用于基因治疗[8]。
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我们的资料表明，正常喉粘膜CD44V6蛋白和TGFβ表达均为阴性，喉鳞状细胞癌CD44V6蛋白表达率为52%，TGFβ表达率为77%。CD44V6蛋白和TGFβ阳性表达与喉癌发生部位、组织学分级和临床分期无关，颈淋巴结转移的40例CD44V6蛋白和TGFβ阳性表达分别为60%和65%，无淋巴结转移的29例阳性率分别为28%及34%，且差异有显著意义。CD44V6蛋白和TGFβ阴性表达组5 a生存率85%，阳性表达组5 a生存率64%(P<0.05)。上述结果提示CD44蛋白和TGFβ的阳性表达与喉鳞癌颈淋巴结转移和生存率显著相关，可作为预测喉癌转移和预后的一个重要指标。
参考文献
1，刘 节，杨淑杰.P16抑癌基因在食管鳞癌的表达.临床与实验病理学杂志，1998，14(专辑)：8
, 百拇医药
2，Roye GD, Myers RB, Brown D, et al. CD44 expression in dysplastic epithelim and squamous cell carcinoma of the esophaqus. International J Cancer, 1996, 69:254
3，Harn HJ, Ho LI, Shyu RY, et al. Soluble CD44 isoforms in serum as potential markers of metastasis gastric in carcinoma. J Clinical Gastroenterology, 1996, 22:107
4，Briskin KB, Fady C, Mickel RA, et al. Inhibition of head and neck squamous cell carcinoma cell lines by transforming growth factor-beta. Otolaryngol Head Neck Surg, 1995, 112:728
, http://www.100md.com
5，Comerci JT, Runowic CD, Flanders KC, et al. Altered expression of transforming growth factor-betal in carcinogenesis of the uterine cervix. Cancer, 1996, 77:1107
6，Spafford MF, Koeppe J, Pan Z, et al. Correlation of tumor markers P53， bcl-2, CD34, CD44H，CD44V6， and Ki-67 with survival and metastasis in laryngeal squamou cell carcinoma. Otolaryngoly Head Neck Surg, 1996, 122:627
7，Seiter S, Arch R, Reber S, et al. Prevention of tumors metastasis formation by anti-variant CD44. J EXP Med, 1993, 177:443
8，Poulopoulos AK, Kayavis IG, Papanayotou P. Immunohistochemical evaluation of TGT- beta adn extracellular matrix proteins expresssion in rat squamous cell caricinomas Otral Dis , 1996,2:18
收稿日期：1999-11-08, http://www.100md.com
单位：(广东省人民医院耳鼻咽喉科 510080)
关键词：喉鳞状细胞癌；CD44基因；转化生长因子β；转移
广东医学000224 【摘要】 目的 探讨CD44V6蛋白和TGFβ在喉癌中的表达与转移及预后的关系。方法 用CD44V6蛋白和TGFβ单克隆抗体，通过免疫组化S-P法，对69例喉鳞状细胞癌蜡块标本和20例正常喉粘膜标本进行研究，结合临床及随访资料进行分析。结果 69例喉鳞状细胞癌的CD44V6蛋白和TGFβ阳性表达率分别为52%(36/69)，77%(53/69)。20例正常喉粘膜CD44V6蛋白和TGFβ阳性表达率为0(0/20)。CD44V6蛋白和TGFβ阳性表达与肿瘤原发部位、组织分级和临床分期无相关性(P>0.05)；颈部淋巴结转移的病例原发瘤的CD44V6蛋白和TGFβ阳性表达分别为60%(24/40)，65%(26/40)，无淋巴结转移的病例CD44V6蛋白和TGFβ阳性表达率分别为28%(8/29)，34%(10/29)，差别有显著意义。用log-rank检验分析CD44V6蛋白和TGFβ表达，阴性组5 a生存率高于阳性表达组(P<0.05)。结论 喉鳞癌CD44V6蛋白和TGFβ的阳性表达与颈部淋巴结转移和5 a生存率显著相关，CD44V6蛋白和TGFβ可作为预测喉癌转移和预后的重要指标。
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CD44蛋白具有调节细胞与细胞间相互粘附、生长刺激以及相关转化等功能，对肿瘤转移起重要作用。转化生长因子β(TGFβ)具有抑制癌细胞生长及与恶性肿瘤转移有关。在许多人类肿瘤中CD44基因和TGFβ表达水平与肿瘤转移潜能相关，有关CD44基因和TGFβ在喉癌中的表达与转移、预后的关系的研究报道不多。本文采用CD44V6蛋白和TGFβ单克隆抗体，通过免疫组化S-P法，对69例喉鳞状细胞癌蜡块标本和20例正常的喉粘膜标本进行检测，探讨其表达与转移及预后的关系。
1 材料与方法
1.1 材料 收集我院耳鼻喉科1990～1997年手术切除的69例喉鳞癌石蜡标本，另取癌旁正常喉粘膜标本20例作为对照组。69例中，男64例，女5例。年龄43～75岁，平均60.1岁。按照UICC 1992年TNM分期标准，解剖分区：声门上型22例、声门型46例、声门下型1例；临床分期：Ⅰ期10例、Ⅱ期26例、Ⅲ期21例、Ⅳ期12例。组织学分级：Ⅰ级(高分化)11例，Ⅱ级(中分化)38例，Ⅲ级(低分化)20例。69例病理确诊有40例伴颈部淋巴结转移。对全部病例仅进行5 a随访。
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1.2 方法 CD44V6单克隆抗体，工作浓度1∶80；TGFβ单克隆抗体(即用型)和S-P试剂盒均为Maxim公司产品，操作按产品说明书进行。每批切片染色均设阳性和阴性对照。阳性标准：CD44V6蛋白及TGFβ阳性反应均位于细胞浆，表现为细胞浆内棕黄色颗粒或团块，每张切片随机观察10个高位视野(×400)按阳性细胞占肿瘤细胞百分率分成3个等级：(+)(1%～30%)，(+ +)(30%～70%)，(+ + +)(>70%)；(-)及(+)为阴性组，(+ +)及(+ + +)为阳性组[1]。
1.3 统计学分析 计数资料采用χ2检验。
2 结果
CD44V6蛋白及TGFβ阳性表达产物主要位于细胞浆中，20例正常喉粘膜CD44V6蛋白、TGFβ表达均为阴性。69例喉鳞癌CD44V6蛋白、TGFβ阳性率分别为52%(36/69)，77%(53/69)。40例伴有颈部淋巴结转移的CD44V6蛋白阳性率为60%(24/40)，TGFβ阳性率为65%(26/40)，29例无淋巴结转移CD44V6蛋白阳性表达阴性率为28%(8/29)，TGFβ为34%(10/29)。P值分别为：<0.01及<0.05。20例正常喉粘膜CD44V6蛋白和TGFβ均为阴性(0/20)。
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喉鳞癌不同临床分期CD44V6蛋白和TGFβ的表达情况：Ⅰ～Ⅱ期阳性表达率为80%(29/36)，Ⅲ～Ⅳ期为88%(29/33)，各期均有表达，差异无显著意义(P>0.05)。不同分化程度肿瘤的阳性表达率：Ⅰ级为73%(8/11)，Ⅱ级为84%(32/38)，Ⅲ级为90%(18/20)，各级之间的差异无显著性(P>0.05)。随访11例CD44V6蛋白和TGFβ阴性表达的病例5 a生存率为85%，58例CD44V6蛋白或TGFβ阳性表达的病例5 a生存率为64%，差异有显著意义(P<0.05)。
3 讨论
CD44V6蛋白和TGFβ均参与肿瘤细胞与基底层粘附、细胞与细胞之间的特异性粘附，在肿瘤细胞的生长、浸润和转移中起重要作用。CD44V6蛋白与TGFβ在许多肿瘤，如食管癌、胃癌、头颈部等恶性肿瘤中均有异常表达[2～5]，CD44与喉癌的关系研究不多[6]，TGFβ尚少见文献报告。已发现在结肠癌、乳腺癌、肺癌及宫颈癌等手术切除的标本中，有淋巴结转移者CD44V6蛋白和TGFβ阳性表达率高于无转移者，CD44V6和TGFβ表达阳性者常伴有术后复发和远处转移，其生存期较短。Seiter等[7]用抗CD44V蛋白抗体与CD44V产物相结合，可以终止肿瘤细胞的转移潜能。目前认为，CD44及TGFβ可能成为某些肿瘤早期诊断，预测病情进展、转移潜能和预后的重要标志物，并可能用于基因治疗[8]。
, http://www.100md.com
我们的资料表明，正常喉粘膜CD44V6蛋白和TGFβ表达均为阴性，喉鳞状细胞癌CD44V6蛋白表达率为52%，TGFβ表达率为77%。CD44V6蛋白和TGFβ阳性表达与喉癌发生部位、组织学分级和临床分期无关，颈淋巴结转移的40例CD44V6蛋白和TGFβ阳性表达分别为60%和65%，无淋巴结转移的29例阳性率分别为28%及34%，且差异有显著意义。CD44V6蛋白和TGFβ阴性表达组5 a生存率85%，阳性表达组5 a生存率64%(P<0.05)。上述结果提示CD44蛋白和TGFβ的阳性表达与喉鳞癌颈淋巴结转移和生存率显著相关，可作为预测喉癌转移和预后的一个重要指标。
参考文献
1，刘 节，杨淑杰.P16抑癌基因在食管鳞癌的表达.临床与实验病理学杂志，1998，14(专辑)：8
, 百拇医药
2，Roye GD, Myers RB, Brown D, et al. CD44 expression in dysplastic epithelim and squamous cell carcinoma of the esophaqus. International J Cancer, 1996, 69:254
3，Harn HJ, Ho LI, Shyu RY, et al. Soluble CD44 isoforms in serum as potential markers of metastasis gastric in carcinoma. J Clinical Gastroenterology, 1996, 22:107
4，Briskin KB, Fady C, Mickel RA, et al. Inhibition of head and neck squamous cell carcinoma cell lines by transforming growth factor-beta. Otolaryngol Head Neck Surg, 1995, 112:728
, http://www.100md.com
5，Comerci JT, Runowic CD, Flanders KC, et al. Altered expression of transforming growth factor-betal in carcinogenesis of the uterine cervix. Cancer, 1996, 77:1107
6，Spafford MF, Koeppe J, Pan Z, et al. Correlation of tumor markers P53， bcl-2, CD34, CD44H，CD44V6， and Ki-67 with survival and metastasis in laryngeal squamou cell carcinoma. Otolaryngoly Head Neck Surg, 1996, 122:627
7，Seiter S, Arch R, Reber S, et al. Prevention of tumors metastasis formation by anti-variant CD44. J EXP Med, 1993, 177:443
8，Poulopoulos AK, Kayavis IG, Papanayotou P. Immunohistochemical evaluation of TGT- beta adn extracellular matrix proteins expresssion in rat squamous cell caricinomas Otral Dis , 1996,2:18
收稿日期：1999-11-08, http://www.100md.com