卵巢癌血清的免疫抑制作用与患者免疫功能的关系
作者：周龙书 黄立萍
单位：(广州军区广州总医院妇产科510010)
关键词：卵巢癌；血清；免疫抑制作用；T淋巴细胞亚群
广东医学000215 【摘要】 目的 了解卵巢癌患者血清对免疫细胞增殖及活性的作用，以及患者外周血T淋巴细胞亚群的改变，并探讨两者之间的关系。方法 检测卵巢癌患者血清对淋巴细胞增殖及NK细胞活性的作用，同时检测卵巢癌患者外周血T淋巴细胞亚群，采用妇科良性疾病患者作对照。并将上述结果进行相关分析。结果 ①卵巢癌患者血清组淋巴细胞增殖及NK细胞活性均显著低于妇科良性疾病组(P<0.01)，而良性患者血清与空白对照组之间差异无显著性(P>0.05)。②与妇科良性疾病患者比较，卵巢癌患者OKT4细胞显著减少(P<0.01)，OKT8细胞显著增多(P<0.01)，OKT4/OKT8比值显著减少(P<0.05)。③卵巢癌患者血清对淋巴细胞增殖及NK细胞活性的作用与患者外周血OKT4/OKT8比值分别呈正相关(r=0.775 3, P<0.01；r=0.873 7,P<0.01)。结论 卵巢癌患者血清具有免疫抑制作用，此作用于患者外周血T淋巴细胞亚群的改变关系密切，它可能是导致患者免疫功能低下的重要因素之一。
, 百拇医药
Relationship between immunosuppressive effects of serums with ovarian cancer and T lymphocyte subset in patients
Zhou Longshu, Huang Liping
(General Hospital of Guangzhou Command of PLA, Guangzhou 510010)
【Abstract】 Objective To study the effects of serum and activity of immune cells, peripheral T lymphocyte subset and their relationship. Methods Effects of the serums from 19 patients with ovarian cancer on lymphoproliferation, NK cells activity and peripheral T lymphocyte subset were measured. 20 patients with benign gynecologic diseases were chosen as control.Results ①NK cells lymphoproliferative and activity in the serum from ovarian cancer were lower than those of benign gynecologic diseases (P<0.01). There was no significant difference between benign gynecologic disease group and the blank control (P<0.05).②Comparing with the patients with benign gynecologic diseases, patients with ovarian cancer had less OKT4 (P<0.01), more OKT8 cells (P<0.01), and smaller OKT4/OKT8 ratio (P<0.05).③The suppressive effects of serums on lymphoproliferation and NK cells activity were both positively correlated with the OKT4/OKT8 ratio (r=0.775 3,P<0.01; r=0.873 7,P<0.01).Conclusion Serum from the patients with ovarian cancer have immunosuppressive effects, which may result from changes of peripheral T lymphocyte subset and is one of important reasons of immunosuppression in patients with ovarian cancer.
, 百拇医药
【Key words】 Ovarian cancer Serum Immunosuppression T lymphocyte subset
随着肿瘤免疫学的发展，人们对肿瘤患者的免疫功能愈来愈重视。许多文献报道卵巢癌患者的免疫功能较正常人低下[1]，影响其疗效和预后。但迄今为止，导致卵巢癌患者免疫功能低下的原因尚未阐明。我们通过检测卵巢癌患者血清对淋巴细胞增殖及NK细胞活性的作用，同时检测患者外周血T淋巴细胞亚群，均采用妇科良性疾病患者作对照，并将上述结果进行相关分析，旨在了解卵巢癌患者血清对免疫细胞的作用，以及与患者外周T淋巴细胞亚群的关系，探讨患者免疫功能低下的原因。
1 资料与方法
1.1 研究对象 共收集本院患者39例，其中卵巢癌患者19例，年龄19～72岁，平均年龄51.5岁。各种妇科良性疾病患者20例，年龄20～69岁，平均年龄41.5岁。均有病理诊断，两组患者均无化疗和放疗病史。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 标本收集 均于术前或化疗前采集患者外周血两份，分别获取血清和淋巴细胞。
1.2.2 正常淋巴细胞(含NK细胞)的制备 采集健康妇女外周血，肝素抗凝，经Hank's液释释并加入淋巴细胞分离液，离心后收集淋巴细胞，调至细胞含量为5×105/ml备用。
1.2.3 淋巴细胞增殖试验(PHA试验) 将PHA、小牛血清0.1 ml、3H-胸腺嘧啶(中科院上海核研究所提供)与已制备的淋巴细胞混合，分别加入良、恶患者血清作为实验孔。并设一空白对照孔(无血清孔)。置体积分数为5% CO2孵箱，37℃，48 h后，分别收集各孔淋巴细胞，经液闪计数器测定淋巴细胞增殖时摄入细胞内的?3?H-胸腺嘧啶的每分钟脉冲数(cpm)，以观察良、恶性患者血清对淋巴细胞增殖的作用。
, 百拇医药
1.2.4 NK细胞活性测定 将已制备的淋巴细胞(含NK细胞)与经?3?H-胸腺嘧啶标记的K562细胞(NK细胞特异性靶细胞)混合，分别加入良、恶性患者血清作为实验孔，另设空白对照孔(无血清孔)和自然释放孔(无淋巴细胞及血清孔)。分别加入小牛血清0.1 ml，置体积分数为5% CO2孵箱内37℃，48 h后分别收集各孔细胞，冲洗后经液闪计数器测定未被杀灭的K562细胞内?3?H-胸腺嘧啶的cpm，以此观察良、恶性患者血清对NK细胞活性的作用。观察结果按下列公式计算。
NK细胞活性%=[1-(实验孔或空白孔(cpm))/(自然释放孔(cpm))]×100%
1.2.5 T淋巴细胞亚群检测 采用抗人T细胞单克隆抗体试剂盒(武汉生物制品研究所提供)，以OKT系列定名。镜检结果标准：以3个以上绵羊红细胞吸附的T细胞为阳性细胞，以阳性细胞占200个细胞的百分数表示。
, 百拇医药
1.2.6 统计方法 采用方差分析、t检验及直线回归法处理。
2 结果
2.1 良、恶性患者血清对淋巴细胞增殖试验(PHA试验)及NK细胞活性的作用 结果见表1。
表1 良、恶性患者血清对PHA试验及NK细胞活性的作用
±s 组别
例数
PHA试验(cpm)
NK细胞活性(%)
空白对照组
39
, http://www.100md.com
3 678±465
38.92±2.9
良性血清组
20
3 711±361
39.91±3.1
卵巢癌血清组
19
3 110±268*
30.29±4.1*
* 与良性血清组比较 P<0.01
, 百拇医药
2.2 T淋巴细胞亚群的检测 结果见表2。表2 良、恶性患者外周血T淋巴细胞亚群检测结果 (±s)% 组别
例数
OKT3
OKT4
OKT8
OKT4/OKT8
良性疾病组
20
67.98±9.90
, 百拇医药
50.38±10.99
26.37±7.85
1.91±0.39
卵巢癌组
19
66.55±10.23
38.67±9.10*
39.11±10.12*
1.02±0.34*
* 与良性疾病组比较 P<0.05
2.3 相关分析结果 卵巢癌患者血清对淋巴细胞增殖(cpm)及NK细胞活性的作用与患者外周血OKT4/OKT8细胞比值分别呈正相关(r=0.775 3,P<0.01; r=0.873 7,P<0.01)。3 讨论
, http://www.100md.com
3.1 卵巢癌患者血清的免疫抑制作用 本研究结果表明，卵巢癌患者血清对免疫细胞具有免疫抑制作用，从而证明在卵巢癌患者血清中存在一种具有抑制免疫功能的物质免疫抑制因子。但此免疫抑制因子的来源尚不清楚。有学者认为此因子来源于腹膜细胞或多核白细胞[2]。有学者认为来源于腹水[3]。也有学者认为来源于肿瘤细胞[4]。此免疫抑制因子的作用机理可能为：①免疫抑制因子抑制免疫细胞的活性。②抑制淋巴细胞的增殖。③免疫抑制因子可作为“封闭性抗体”遮盖肿瘤细胞表抗原簇，使免疫细胞不能“识别”而将其清除[5]。
3.2 卵巢癌患者T淋巴细胞亚群的变化 在T细胞亚群内，OKT4细胞主要为具有辅助免疫作用的T细胞，OKT8细胞主要为抑制作用的T细胞，机体的免疫状况取决于T淋巴细胞各亚群的相对分布及比例[6]。只有在OKT4与OKT8细胞保持正常比例时，才能发挥正常的抗肿瘤作用，故检测患者外周血OKT4、OKT8及OKT4/OKT8是评价患者免疫功能状况的一种较准确的方法[7]。本研究结果表明，卵巢癌患者OTK4细胞减少，OKT8细胞增多，OKT4/OKT8比值减小，提示卵巢癌患者的免疫功能是低下的。
, 百拇医药
3.2 卵巢癌患者血清的免疫抑制作用与患者外周血T淋巴细胞亚群改变的关系 经直线回归拟合处理发现，卵巢癌患者血清对淋巴细胞增殖功能及NK细胞活性的作用与患者外周血OKT4/OKT8比值呈正相关，即淋巴细胞增殖功能及NK细胞活性越低(血清的抑制作用越大)，外周血OKT4/OKT8比值越小。提示卵巢癌患者血清的免疫抑制作用与患者免疫功能低下的关系密切，尽管其机理尚不清楚，但患者血清中的免疫抑制物质可能是导致患者免疫功能低下的重要因素之一。本研究为探讨检测血清中免疫抑制因子是否可作为临床诊断、疗效观察和监视复发的指标提供理论依据，并为寻找对抗和破坏血清中此因子的药物和方法打下基础。
参考文献
1，周龙书，杨日普.卵巢恶性肿瘤患者腹水中NK细胞活性及T淋巴细胞亚群的改变.第一军医大学学报，1999，19(4)：340
, http://www.100md.com
2，张为远，王 萍，赵艳辉.妇科肿瘤患者血免疫抑制酸性蛋白水平测定的临床意义.中华医学杂志，1999，(3)：194
3，周龙书.卵巢恶性肿瘤腹水的免疫抑制作用与免疫功有关系探讨.解放军医学杂志，1995，6(3)：209
4，周龙书，李孟达.卵巢癌患者血清及腹水对淋巴细胞增殖及NK细胞活性的影响.解放军医学杂志，1994，24(4)：296
5，范学宁.肿瘤免疫抑制因子的研究进展.癌症，1991，10(2)：160
6，徐标秀.人类T辅助细胞和抑制细胞的研究近况.免疫学杂志，1986，2(3)：208
7，梁连铸，顾美皎.卵巢恶性肿瘤患者细胞免疫状态的研究及临床价值.中华肿瘤杂志，1990，12(6)：410
(收稿日期：1999-07-05), 百拇医药
单位：(广州军区广州总医院妇产科510010)
关键词：卵巢癌；血清；免疫抑制作用；T淋巴细胞亚群
广东医学000215 【摘要】 目的 了解卵巢癌患者血清对免疫细胞增殖及活性的作用，以及患者外周血T淋巴细胞亚群的改变，并探讨两者之间的关系。方法 检测卵巢癌患者血清对淋巴细胞增殖及NK细胞活性的作用，同时检测卵巢癌患者外周血T淋巴细胞亚群，采用妇科良性疾病患者作对照。并将上述结果进行相关分析。结果 ①卵巢癌患者血清组淋巴细胞增殖及NK细胞活性均显著低于妇科良性疾病组(P<0.01)，而良性患者血清与空白对照组之间差异无显著性(P>0.05)。②与妇科良性疾病患者比较，卵巢癌患者OKT4细胞显著减少(P<0.01)，OKT8细胞显著增多(P<0.01)，OKT4/OKT8比值显著减少(P<0.05)。③卵巢癌患者血清对淋巴细胞增殖及NK细胞活性的作用与患者外周血OKT4/OKT8比值分别呈正相关(r=0.775 3, P<0.01；r=0.873 7,P<0.01)。结论 卵巢癌患者血清具有免疫抑制作用，此作用于患者外周血T淋巴细胞亚群的改变关系密切，它可能是导致患者免疫功能低下的重要因素之一。
, 百拇医药
Relationship between immunosuppressive effects of serums with ovarian cancer and T lymphocyte subset in patients
Zhou Longshu, Huang Liping
(General Hospital of Guangzhou Command of PLA, Guangzhou 510010)
【Abstract】 Objective To study the effects of serum and activity of immune cells, peripheral T lymphocyte subset and their relationship. Methods Effects of the serums from 19 patients with ovarian cancer on lymphoproliferation, NK cells activity and peripheral T lymphocyte subset were measured. 20 patients with benign gynecologic diseases were chosen as control.Results ①NK cells lymphoproliferative and activity in the serum from ovarian cancer were lower than those of benign gynecologic diseases (P<0.01). There was no significant difference between benign gynecologic disease group and the blank control (P<0.05).②Comparing with the patients with benign gynecologic diseases, patients with ovarian cancer had less OKT4 (P<0.01), more OKT8 cells (P<0.01), and smaller OKT4/OKT8 ratio (P<0.05).③The suppressive effects of serums on lymphoproliferation and NK cells activity were both positively correlated with the OKT4/OKT8 ratio (r=0.775 3,P<0.01; r=0.873 7,P<0.01).Conclusion Serum from the patients with ovarian cancer have immunosuppressive effects, which may result from changes of peripheral T lymphocyte subset and is one of important reasons of immunosuppression in patients with ovarian cancer.
, 百拇医药
【Key words】 Ovarian cancer Serum Immunosuppression T lymphocyte subset
随着肿瘤免疫学的发展，人们对肿瘤患者的免疫功能愈来愈重视。许多文献报道卵巢癌患者的免疫功能较正常人低下[1]，影响其疗效和预后。但迄今为止，导致卵巢癌患者免疫功能低下的原因尚未阐明。我们通过检测卵巢癌患者血清对淋巴细胞增殖及NK细胞活性的作用，同时检测患者外周血T淋巴细胞亚群，均采用妇科良性疾病患者作对照，并将上述结果进行相关分析，旨在了解卵巢癌患者血清对免疫细胞的作用，以及与患者外周T淋巴细胞亚群的关系，探讨患者免疫功能低下的原因。
1 资料与方法
1.1 研究对象 共收集本院患者39例，其中卵巢癌患者19例，年龄19～72岁，平均年龄51.5岁。各种妇科良性疾病患者20例，年龄20～69岁，平均年龄41.5岁。均有病理诊断，两组患者均无化疗和放疗病史。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 标本收集 均于术前或化疗前采集患者外周血两份，分别获取血清和淋巴细胞。
1.2.2 正常淋巴细胞(含NK细胞)的制备 采集健康妇女外周血，肝素抗凝，经Hank's液释释并加入淋巴细胞分离液，离心后收集淋巴细胞，调至细胞含量为5×105/ml备用。
1.2.3 淋巴细胞增殖试验(PHA试验) 将PHA、小牛血清0.1 ml、3H-胸腺嘧啶(中科院上海核研究所提供)与已制备的淋巴细胞混合，分别加入良、恶患者血清作为实验孔。并设一空白对照孔(无血清孔)。置体积分数为5% CO2孵箱，37℃，48 h后，分别收集各孔淋巴细胞，经液闪计数器测定淋巴细胞增殖时摄入细胞内的?3?H-胸腺嘧啶的每分钟脉冲数(cpm)，以观察良、恶性患者血清对淋巴细胞增殖的作用。
, 百拇医药
1.2.4 NK细胞活性测定 将已制备的淋巴细胞(含NK细胞)与经?3?H-胸腺嘧啶标记的K562细胞(NK细胞特异性靶细胞)混合，分别加入良、恶性患者血清作为实验孔，另设空白对照孔(无血清孔)和自然释放孔(无淋巴细胞及血清孔)。分别加入小牛血清0.1 ml，置体积分数为5% CO2孵箱内37℃，48 h后分别收集各孔细胞，冲洗后经液闪计数器测定未被杀灭的K562细胞内?3?H-胸腺嘧啶的cpm，以此观察良、恶性患者血清对NK细胞活性的作用。观察结果按下列公式计算。
NK细胞活性%=[1-(实验孔或空白孔(cpm))/(自然释放孔(cpm))]×100%
1.2.5 T淋巴细胞亚群检测 采用抗人T细胞单克隆抗体试剂盒(武汉生物制品研究所提供)，以OKT系列定名。镜检结果标准：以3个以上绵羊红细胞吸附的T细胞为阳性细胞，以阳性细胞占200个细胞的百分数表示。
, 百拇医药
1.2.6 统计方法 采用方差分析、t检验及直线回归法处理。
2 结果
2.1 良、恶性患者血清对淋巴细胞增殖试验(PHA试验)及NK细胞活性的作用 结果见表1。
表1 良、恶性患者血清对PHA试验及NK细胞活性的作用
±s 组别例数
PHA试验(cpm)
NK细胞活性(%)
空白对照组
39
, http://www.100md.com
3 678±465
38.92±2.9
良性血清组
20
3 711±361
39.91±3.1
卵巢癌血清组
19
3 110±268*
30.29±4.1*
* 与良性血清组比较 P<0.01
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2.2 T淋巴细胞亚群的检测 结果见表2。表2 良、恶性患者外周血T淋巴细胞亚群检测结果 (
±s)% 组别例数
OKT3
OKT4
OKT8
OKT4/OKT8
良性疾病组
20
67.98±9.90
, 百拇医药
50.38±10.99
26.37±7.85
1.91±0.39
卵巢癌组
19
66.55±10.23
38.67±9.10*
39.11±10.12*
1.02±0.34*
* 与良性疾病组比较 P<0.05
2.3 相关分析结果 卵巢癌患者血清对淋巴细胞增殖(cpm)及NK细胞活性的作用与患者外周血OKT4/OKT8细胞比值分别呈正相关(r=0.775 3,P<0.01; r=0.873 7,P<0.01)。3 讨论
, http://www.100md.com
3.1 卵巢癌患者血清的免疫抑制作用 本研究结果表明，卵巢癌患者血清对免疫细胞具有免疫抑制作用，从而证明在卵巢癌患者血清中存在一种具有抑制免疫功能的物质免疫抑制因子。但此免疫抑制因子的来源尚不清楚。有学者认为此因子来源于腹膜细胞或多核白细胞[2]。有学者认为来源于腹水[3]。也有学者认为来源于肿瘤细胞[4]。此免疫抑制因子的作用机理可能为：①免疫抑制因子抑制免疫细胞的活性。②抑制淋巴细胞的增殖。③免疫抑制因子可作为“封闭性抗体”遮盖肿瘤细胞表抗原簇，使免疫细胞不能“识别”而将其清除[5]。
3.2 卵巢癌患者T淋巴细胞亚群的变化 在T细胞亚群内，OKT4细胞主要为具有辅助免疫作用的T细胞，OKT8细胞主要为抑制作用的T细胞，机体的免疫状况取决于T淋巴细胞各亚群的相对分布及比例[6]。只有在OKT4与OKT8细胞保持正常比例时，才能发挥正常的抗肿瘤作用，故检测患者外周血OKT4、OKT8及OKT4/OKT8是评价患者免疫功能状况的一种较准确的方法[7]。本研究结果表明，卵巢癌患者OTK4细胞减少，OKT8细胞增多，OKT4/OKT8比值减小，提示卵巢癌患者的免疫功能是低下的。
, 百拇医药
3.2 卵巢癌患者血清的免疫抑制作用与患者外周血T淋巴细胞亚群改变的关系 经直线回归拟合处理发现，卵巢癌患者血清对淋巴细胞增殖功能及NK细胞活性的作用与患者外周血OKT4/OKT8比值呈正相关，即淋巴细胞增殖功能及NK细胞活性越低(血清的抑制作用越大)，外周血OKT4/OKT8比值越小。提示卵巢癌患者血清的免疫抑制作用与患者免疫功能低下的关系密切，尽管其机理尚不清楚，但患者血清中的免疫抑制物质可能是导致患者免疫功能低下的重要因素之一。本研究为探讨检测血清中免疫抑制因子是否可作为临床诊断、疗效观察和监视复发的指标提供理论依据，并为寻找对抗和破坏血清中此因子的药物和方法打下基础。
参考文献
1，周龙书，杨日普.卵巢恶性肿瘤患者腹水中NK细胞活性及T淋巴细胞亚群的改变.第一军医大学学报，1999，19(4)：340
, http://www.100md.com
2，张为远，王 萍，赵艳辉.妇科肿瘤患者血免疫抑制酸性蛋白水平测定的临床意义.中华医学杂志，1999，(3)：194
3，周龙书.卵巢恶性肿瘤腹水的免疫抑制作用与免疫功有关系探讨.解放军医学杂志，1995，6(3)：209
4，周龙书，李孟达.卵巢癌患者血清及腹水对淋巴细胞增殖及NK细胞活性的影响.解放军医学杂志，1994，24(4)：296
5，范学宁.肿瘤免疫抑制因子的研究进展.癌症，1991，10(2)：160
6，徐标秀.人类T辅助细胞和抑制细胞的研究近况.免疫学杂志，1986，2(3)：208
7，梁连铸，顾美皎.卵巢恶性肿瘤患者细胞免疫状态的研究及临床价值.中华肿瘤杂志，1990，12(6)：410
(收稿日期：1999-07-05), 百拇医药