去卵巢大鼠骨计量学参数和血脂的变化及意义
作者：尹斯利 金勋杰 胡彬 黄连芳 李青南
单位：尹斯利(524023 广东医学院附属医院检验科)； 金勋杰(广东医学院骨生物学研究室)； 胡彬(广东医学院骨生物学研究室)； 黄连芳(广东医学院骨生物学研究室)； 李青南(广东医学院骨生物学研究室)
关键词：骨质疏松；骨组织形态计量学；总胆固醇；甘油三脂
中国骨质疏松杂志000213 摘要 目的 观察大鼠去卵巢30 d时骨量、骨结构及血脂的变化。方法 17只SD雌性大鼠随机分为2组：假手术组、去卵巢组。实验30 d，处死大鼠取胫骨及血清，用骨计量学方法观察骨量和骨结构变化，并检测血清碱性磷酸酶(AKP)、钙(Ca)、磷(P)、总胆固醇(CH)、甘油三脂(TG)。结果 去卵巢组与假手术组比，骨小梁面积和数量减少(P<0.01)，骨小梁间隙增加(P<0.05)；血液检验显示AKP增加(P<0.01)，CH增加(P<0.05)，TG降低(P<0.01)。结论 本文结果显示30 d去卵巢大鼠已出现典型的骨质疏松表现，伴有血脂的紊乱。
, 百拇医药
Changes of bone histomorphometry parameters and serum lipid in rats
after ovariectomized 30 days
Yin Sili, JIN Xunjie, Hu Bin,Huang Lianfang,Li Qingnan
Abstract Objective To study the changes of rats bone volume and serum lipid on ovariectomized rats.Methods 17 female SD inbred rats were divided into 2 groups:sham-ovx group and ovx group,30 days experiment period,the proximal tibial metaphysis(PTM)were processed undecalcified for quantitative bone histomorphometry and serum were collected to measure alkaline phosphatase(AKP),calcium(Ca),phosphorus(P),cholesterol(CH)and triglyceride(TG).Results Trabecular area percent(Tb.Ar%)and Trabecular number(Tb.N)of ovx rats decreased (P<0.01),trabecular separation(Tb.Sp)increased(P<0.05)compared with sham-ovx group.Compared with sham-ovx group,the AKP level of ovx group increased (P<0.01),Ca P has no change,CH increased (P<0.05),TG decreased(<0.01).Conclusion The data suggests that 30 days after ovariectomy,rats'bone volume decreased,while serum CH level increased and TG level decreased.
, 百拇医药
To study the changes of rats bone volume and serum lipid on ovariectomized rats.Methods 17 female SD inbred rats were divided into 2 groups:sham-ovx group and ovx group,30 days experiment period,the proximal tibial metaphysis(PTM)were processed undecalcified for quantitative bone histomorphometry and serum were collected to measure alkaline phosphatase(AKP),calcium(Ca),phosphorus(P),cholesterol(CH)and triglyceride(TG).Results Trabecular area percent(Tb.Ar%)and Trabecular number(Tb.N)of ovx rats decreased (P<0.01),trabecular separation(Tb.Sp)increased(P<0.05)compared with sham-ovx group.Compared with sham-ovx group,the AKP level of ovx group increased (P<0.01),Ca P has no change,CH increased (P<0.05),TG decreased(<0.01).Conclusion The data suggests that 30 days after ovariectomy,rats'bone volume decreased,while serum CH level increased and TG level decreased.
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Key words Osteoporosis Histomorphometry Cholesterol Triglyceride
目前对骨质疏松发病机理和防治已有很多报道[1-3]，但对骨质疏松和血脂的关系研究较少，本文设计用4月龄大鼠，去卵巢30 d以观察骨量和血脂的变化，以探讨骨量和血脂的变化的关系。
1 材料和方法
1.1 仪器与试剂：半自动图像数字化分析仪，此系统包括光镜和荧光显微镜(Nikon,日本)、数字化板、电脑和形态学程序“Stereology”体现学(美国)。LEICA 2155硬组织切片机(德国)。日本岛京CL-7200型全自动生化分析仪，用于检测碱性磷酸酶(AKP)、磷(P)、总胆固醇(CH)、甘油三脂(TG)。
1.2 方法：4月龄SD雌性大鼠(广东省实验动物中心)17只，体重(233.4±12.7)g。随机分为：假手术组(年龄对照组)，9只；去卵巢组(模型组)，8只，行双侧卵巢切除法[1]，每周称体重一次。所有动物在24℃～28℃，通风良好，湿度60%～80%的条件下饲养，自由摄食、摄水。大鼠实验30 d，处死，心脏取血，取胫骨。胫骨用低速据(Buehler LTD.USA)将其分为三段，其上段行额状面去掉胫骨粗隆后置70%酒精中固定24 h，经酒精脱水后，用甲基丙烯酸甲酯行不脱钙骨包埋，并切成10μm厚片，使用图像分析系统测量以下参数：骨小梁面积百分数(Tb.Ar %)，骨小梁宽度(Tb.Wi)，骨小梁数量(Tb.N)，骨小梁分离度(Tb.Sp)。血标本离心得血清后做以下检测：①AKP测定：以对-硝基苯磷酸盐为底物，在AKP作用下生成对-硝基酚和磷酸，在分光光度计405 nm处测定吸光度增加速率，计算样品中碱性磷酸酶活性。②磷：直接紫外法检测。③CH、TG上机用酶法测定。AKP、磷、CH、TG检测所用试剂盒由上海长征医学科学有限公司生产。④Ca2+检测用邻-甲酚酞络合酮法(比色法)。
, 百拇医药
1.3 统计学处理：用SPSS v7.5软件进行数据分析，参数值用均数和标准差(
±s)表示。两组间比较采用t检验。
2 结果
去卵巢组与假手术组相比，骨计量学结果显示，骨小梁面积百分数(Tb.Ar%)和骨小梁数量(Tb.N)减少，骨小梁分离度(Tb.Sp)增加，即骨量减少、骨结构变差(表1)。血液生化检测显示，AKP增加(P<0.01)，CH增加(P<0.05)，TG降低(P<0.01)。钙、磷在各组间差异无显著性(表2)。
表1 去卵巢后骨计量学参数的变化 组别
Tb.Ar%
(%)
, 百拇医药 Tb.Wi
(μm)
Tb.N
(#/mm)
Tb.Sp
(μm)
假手术组
17.1±3.5
57.2±7.5
3.01±0.59
286.4±62.5
去卵巢组
8.2±4.7**
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58.4±16.4
1.34±0.48**
820.2±447.4*
注：两组相比，*P<0.05,**P<0.01表2 去卵巢后血液生化指标的变化 组别
AKP
(U/L)
Ca
(mmol/L)
P
(mg/dL)
Ch
, 百拇医药
(mmol/L)
TG
(mmol/L)
假手术组
133±22
2.31±0.14
2.6±0.5
1.11±0.26
1.6±0.5
去卵巢组
180±28**
2.27±0.20
, 百拇医药
3.0±0.9
1.37±0.15*
0.9±0.4**
注：两组相比，*P<0.05,**P<0.013 讨论
大鼠去卵巢是模拟妇女绝经后骨质疏松较好的模型，已有文献报道去卵巢最早2周即引起有统计学意义的骨丢失和骨结构的变化伴有骨高转化的改变[4]。骨计量学通过一些参数(Tb.Ar%反映骨小梁量的多少，Tb.Wi、Tb.N、Tb.Sp反映骨结构)的检测，使形态学的指标定量化；AKP是最常用的评价骨形成和骨转换的生化指标。本文的实验结果可见去卵巢30 d出现典型的骨质疏松的表现伴有骨转换增加，如骨量丢失和AKP增加。从骨量的变化可知骨吸收超过骨形成，故骨量减少[1]。
, http://www.100md.com
绝经后妇女随体内雌激素浓度降低血清CH、TG浓度会升高，与年龄、绝经年限呈正相关[5-7]，成为造成心血管疾病的危险因素。由本实验结果可见，大鼠去卵巢后随雌激素水平下降，CH增加，此点与人相同；但与人不同的是，去卵巢30 dTG下降。这可能是由于人与大鼠之间存在种属差异。另我们只检测了大鼠去卵巢30 d的血脂变化，对大鼠去卵巢更长时间的TG变化仍需做进一步的研究。
在大鼠骨质疏松的情况下，本实验未观察到血钙、血磷的变化，可能是由于机体对血钙、血磷有很强自稳作用，此结果不能说明去卵巢对钙、磷代谢无影响。
综上所述，在大鼠去卵巢30 d出现骨质疏松的情况下，大鼠的血脂变化为CH增加，TG降低，此变化与人类绝经后妇女随体内雌激素浓度降低血清CH、TG均升高的结果不同。
本课题为广东省卫生厅“五个一科教兴医工程”基金项目
, 百拇医药
参考文献
[1]Li Qingnan,Liang Nianci,Huang Lianfang,et al.Skeletal effects of constant and terminated use of sodium risedronate in ovariectomized rats.中国药理学报，1998，19：160-163.
[2]徐栋梁，李佛保，廖威明.阿仑磷酸盐治疗原发性骨质疏松症的临床研究.中国骨质疏松杂志，1999，5：19-21.
[3]李朝阳，吴铁，李青南.蛇床子素对去卵巢大鼠近侧胫骨代谢影响的定量研究.药学学报，1996，31：327-332.
[4]李青南，胡彬，倪少凯.酒精对去卵巢大鼠的影响.中国药理学通报，1998，14：560-561.
[5]吴赛珠，吴焱贤，梁万宁，等.妇女血脂水平与性激素变化的关系.中国老年学杂志，1999，19：138-139.
[6]栾强，李联忠，栾美英，等.年龄绝经年限雌激素水平与妇女血脂关系的探讨.中国实用妇科与产科杂志，1999，15：33-34.
[7]梁万宁，吴赛珠，刘伊丽，等.雌激素对绝经后妇女冠心病治疗作用的观察.中华内科杂志，1998，37：525-528, http://www.100md.com
单位：尹斯利(524023 广东医学院附属医院检验科)； 金勋杰(广东医学院骨生物学研究室)； 胡彬(广东医学院骨生物学研究室)； 黄连芳(广东医学院骨生物学研究室)； 李青南(广东医学院骨生物学研究室)
关键词：骨质疏松；骨组织形态计量学；总胆固醇；甘油三脂
中国骨质疏松杂志000213 摘要 目的 观察大鼠去卵巢30 d时骨量、骨结构及血脂的变化。方法 17只SD雌性大鼠随机分为2组：假手术组、去卵巢组。实验30 d，处死大鼠取胫骨及血清，用骨计量学方法观察骨量和骨结构变化，并检测血清碱性磷酸酶(AKP)、钙(Ca)、磷(P)、总胆固醇(CH)、甘油三脂(TG)。结果 去卵巢组与假手术组比，骨小梁面积和数量减少(P<0.01)，骨小梁间隙增加(P<0.05)；血液检验显示AKP增加(P<0.01)，CH增加(P<0.05)，TG降低(P<0.01)。结论 本文结果显示30 d去卵巢大鼠已出现典型的骨质疏松表现，伴有血脂的紊乱。
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Changes of bone histomorphometry parameters and serum lipid in rats
after ovariectomized 30 days
Yin Sili, JIN Xunjie, Hu Bin,Huang Lianfang,Li Qingnan
Abstract Objective To study the changes of rats bone volume and serum lipid on ovariectomized rats.Methods 17 female SD inbred rats were divided into 2 groups:sham-ovx group and ovx group,30 days experiment period,the proximal tibial metaphysis(PTM)were processed undecalcified for quantitative bone histomorphometry and serum were collected to measure alkaline phosphatase(AKP),calcium(Ca),phosphorus(P),cholesterol(CH)and triglyceride(TG).Results Trabecular area percent(Tb.Ar%)and Trabecular number(Tb.N)of ovx rats decreased (P<0.01),trabecular separation(Tb.Sp)increased(P<0.05)compared with sham-ovx group.Compared with sham-ovx group,the AKP level of ovx group increased (P<0.01),Ca P has no change,CH increased (P<0.05),TG decreased(<0.01).Conclusion The data suggests that 30 days after ovariectomy,rats'bone volume decreased,while serum CH level increased and TG level decreased.
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To study the changes of rats bone volume and serum lipid on ovariectomized rats.Methods 17 female SD inbred rats were divided into 2 groups:sham-ovx group and ovx group,30 days experiment period,the proximal tibial metaphysis(PTM)were processed undecalcified for quantitative bone histomorphometry and serum were collected to measure alkaline phosphatase(AKP),calcium(Ca),phosphorus(P),cholesterol(CH)and triglyceride(TG).Results Trabecular area percent(Tb.Ar%)and Trabecular number(Tb.N)of ovx rats decreased (P<0.01),trabecular separation(Tb.Sp)increased(P<0.05)compared with sham-ovx group.Compared with sham-ovx group,the AKP level of ovx group increased (P<0.01),Ca P has no change,CH increased (P<0.05),TG decreased(<0.01).Conclusion The data suggests that 30 days after ovariectomy,rats'bone volume decreased,while serum CH level increased and TG level decreased.
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Key words Osteoporosis Histomorphometry Cholesterol Triglyceride
目前对骨质疏松发病机理和防治已有很多报道[1-3]，但对骨质疏松和血脂的关系研究较少，本文设计用4月龄大鼠，去卵巢30 d以观察骨量和血脂的变化，以探讨骨量和血脂的变化的关系。
1 材料和方法
1.1 仪器与试剂：半自动图像数字化分析仪，此系统包括光镜和荧光显微镜(Nikon,日本)、数字化板、电脑和形态学程序“Stereology”体现学(美国)。LEICA 2155硬组织切片机(德国)。日本岛京CL-7200型全自动生化分析仪，用于检测碱性磷酸酶(AKP)、磷(P)、总胆固醇(CH)、甘油三脂(TG)。
1.2 方法：4月龄SD雌性大鼠(广东省实验动物中心)17只，体重(233.4±12.7)g。随机分为：假手术组(年龄对照组)，9只；去卵巢组(模型组)，8只，行双侧卵巢切除法[1]，每周称体重一次。所有动物在24℃～28℃，通风良好，湿度60%～80%的条件下饲养，自由摄食、摄水。大鼠实验30 d，处死，心脏取血，取胫骨。胫骨用低速据(Buehler LTD.USA)将其分为三段，其上段行额状面去掉胫骨粗隆后置70%酒精中固定24 h，经酒精脱水后，用甲基丙烯酸甲酯行不脱钙骨包埋，并切成10μm厚片，使用图像分析系统测量以下参数：骨小梁面积百分数(Tb.Ar %)，骨小梁宽度(Tb.Wi)，骨小梁数量(Tb.N)，骨小梁分离度(Tb.Sp)。血标本离心得血清后做以下检测：①AKP测定：以对-硝基苯磷酸盐为底物，在AKP作用下生成对-硝基酚和磷酸，在分光光度计405 nm处测定吸光度增加速率，计算样品中碱性磷酸酶活性。②磷：直接紫外法检测。③CH、TG上机用酶法测定。AKP、磷、CH、TG检测所用试剂盒由上海长征医学科学有限公司生产。④Ca2+检测用邻-甲酚酞络合酮法(比色法)。
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1.3 统计学处理：用SPSS v7.5软件进行数据分析，参数值用均数和标准差(
±s)表示。两组间比较采用t检验。2 结果
去卵巢组与假手术组相比，骨计量学结果显示，骨小梁面积百分数(Tb.Ar%)和骨小梁数量(Tb.N)减少，骨小梁分离度(Tb.Sp)增加，即骨量减少、骨结构变差(表1)。血液生化检测显示，AKP增加(P<0.01)，CH增加(P<0.05)，TG降低(P<0.01)。钙、磷在各组间差异无显著性(表2)。
表1 去卵巢后骨计量学参数的变化 组别
Tb.Ar%
(%)
, 百拇医药 Tb.Wi
(μm)
Tb.N
(#/mm)
Tb.Sp
(μm)
假手术组
17.1±3.5
57.2±7.5
3.01±0.59
286.4±62.5
去卵巢组
8.2±4.7**
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58.4±16.4
1.34±0.48**
820.2±447.4*
注：两组相比，*P<0.05,**P<0.01表2 去卵巢后血液生化指标的变化 组别
AKP
(U/L)
Ca
(mmol/L)
P
(mg/dL)
Ch
, 百拇医药
(mmol/L)
TG
(mmol/L)
假手术组
133±22
2.31±0.14
2.6±0.5
1.11±0.26
1.6±0.5
去卵巢组
180±28**
2.27±0.20
, 百拇医药
3.0±0.9
1.37±0.15*
0.9±0.4**
注：两组相比，*P<0.05,**P<0.013 讨论
大鼠去卵巢是模拟妇女绝经后骨质疏松较好的模型，已有文献报道去卵巢最早2周即引起有统计学意义的骨丢失和骨结构的变化伴有骨高转化的改变[4]。骨计量学通过一些参数(Tb.Ar%反映骨小梁量的多少，Tb.Wi、Tb.N、Tb.Sp反映骨结构)的检测，使形态学的指标定量化；AKP是最常用的评价骨形成和骨转换的生化指标。本文的实验结果可见去卵巢30 d出现典型的骨质疏松的表现伴有骨转换增加，如骨量丢失和AKP增加。从骨量的变化可知骨吸收超过骨形成，故骨量减少[1]。
, http://www.100md.com
绝经后妇女随体内雌激素浓度降低血清CH、TG浓度会升高，与年龄、绝经年限呈正相关[5-7]，成为造成心血管疾病的危险因素。由本实验结果可见，大鼠去卵巢后随雌激素水平下降，CH增加，此点与人相同；但与人不同的是，去卵巢30 dTG下降。这可能是由于人与大鼠之间存在种属差异。另我们只检测了大鼠去卵巢30 d的血脂变化，对大鼠去卵巢更长时间的TG变化仍需做进一步的研究。
在大鼠骨质疏松的情况下，本实验未观察到血钙、血磷的变化，可能是由于机体对血钙、血磷有很强自稳作用，此结果不能说明去卵巢对钙、磷代谢无影响。
综上所述，在大鼠去卵巢30 d出现骨质疏松的情况下，大鼠的血脂变化为CH增加，TG降低，此变化与人类绝经后妇女随体内雌激素浓度降低血清CH、TG均升高的结果不同。
本课题为广东省卫生厅“五个一科教兴医工程”基金项目
, 百拇医药
参考文献
[1]Li Qingnan,Liang Nianci,Huang Lianfang,et al.Skeletal effects of constant and terminated use of sodium risedronate in ovariectomized rats.中国药理学报，1998，19：160-163.
[2]徐栋梁，李佛保，廖威明.阿仑磷酸盐治疗原发性骨质疏松症的临床研究.中国骨质疏松杂志，1999，5：19-21.
[3]李朝阳，吴铁，李青南.蛇床子素对去卵巢大鼠近侧胫骨代谢影响的定量研究.药学学报，1996，31：327-332.
[4]李青南，胡彬，倪少凯.酒精对去卵巢大鼠的影响.中国药理学通报，1998，14：560-561.
[5]吴赛珠，吴焱贤，梁万宁，等.妇女血脂水平与性激素变化的关系.中国老年学杂志，1999，19：138-139.
[6]栾强，李联忠，栾美英，等.年龄绝经年限雌激素水平与妇女血脂关系的探讨.中国实用妇科与产科杂志，1999，15：33-34.
[7]梁万宁，吴赛珠，刘伊丽，等.雌激素对绝经后妇女冠心病治疗作用的观察.中华内科杂志，1998，37：525-528, http://www.100md.com