当前位置: 首页 > 期刊 > 《中国循环杂志》 > 2000年第2期
编号:10239270
凝血因子Ⅶ及其基因MspI多态性与心肌梗塞危险性的研究
http://www.100md.com 《中国循环杂志》 2000年第2期
     作者:蔡强军 陈纪林 马会利 宋杰 许敏伏 袁家颖

    单位:蔡强军 陈纪林 马会利 宋杰(100037 北京市,中国医学科学院 中国协和医科大学 心血管病研究所 阜外心血 管病医院 冠心病研究室);许敏伏(高血压研究室); 袁家颖(北京医科大学第一医院)

    关键词:凝血因子Ⅶ;基因;心肌梗塞

    中国循环杂志000205 摘要

    目的:探讨凝血因子Ⅶ活性及其基因MspI多态性与中国汉族人心肌梗塞的关系。

    方法:测定125例健康人(正常对照组)和137例心肌梗塞患者(心肌梗塞组)血浆凝血因子Ⅶ活性;采用聚合酶链反应(PCR)和MspI酶切法确定其基因型。

    结果:①心肌梗塞组血浆凝血因子Ⅶ活性(P<0.01)和血清总胆固醇(P<0.05)均显著高于正常对照组;仅前者与心肌梗塞的危险性独立相关(OR=1.04,P<0.01)。②凝血因子Ⅶ基因型和等位基因的频率分布在两组间无显著差异。③M1M1纯合子血浆凝血因子Ⅶ活性显著高于M1M2杂合子(P<0.05)。
, 百拇医药
    结论:支持血浆凝血因子Ⅶ活性升高是中国汉族人心肌梗塞的危险因素;凝血因子Ⅶ活性受其基因MspI多态性的影响,但该多态性并不是中国汉族人心肌梗塞的独立危险因子。

    中图分类号:R542.2+2 文献标识码:A

    文章编号:1000-614(2000)02-075-3

    Study on the Association of Coagulation Factor Ⅶ and its Gene MspI

    Polymorphism with the Risk of Myocardial Infarction


    Cai Qiangjun,Chen Jilin,Yuan Jiaying,et al.
, 百拇医药
    Division of Coronary Heart Disease,Cardiovascular Institute and Fu Wai Hospital,CAMS and PUMC,Beijing(100037)

    Abstract

    Objective:To elucidate the association of plasma factor Ⅶ coagulant activity (Ⅶc) and its gene MspI polymorphism with the risk of myocardial infarction (MI) in Han Chinese.

    Methods:Plasma Ⅶc was measured in 137 patients with angiographically confirmed MI and 125 healthy individuals.Factor Ⅶ genotype was determined by MspI digestion of polymerase chain reaction-amplified genomic deoxyribonucleic acid(DNA).
, 百拇医药
    Results:There was no significant difference in factor Ⅶ genotype(χ2=1.08,p=0.32) or allele frequency (χ2=1.06,p=0.34) between patients and controls.Patients with MI had significantly higher plasma Ⅶc [(119.5±22.7)% vs.(99.9±21.8)%,p<0.01]and total serum cholesterol levels (p<0.05) than controls,but only Ⅶc was independently correlated with the risk of MI(OR=1.04,p<0.01).Subjects with the M2 allele were associated with significantly lower plasma Ⅶc levels than M1M1 homozygotes[(99.7±19.3)% vs.(111.4±24.6)%,p<0.05].
, http://www.100md.com
    Conclusion:Our results support the role of plasma Ⅶc as a risk factor of MI.Plasma Ⅶc is influenced by its gene MspI polymorphism.

    Key words Coagulation factor Ⅶ;Gene;Myocardial infarction

    (Chinese Circulation Journal,2000,15:75.)

    心肌梗塞多数是由于粥样斑块破裂、急性血栓形成所致,由组织因子和凝血因子Ⅶ启动的外源性凝血途径在这一过程中起关键作用。Meade等[1]研究首次发现血浆凝血因子Ⅶ活性是心肌梗塞的独立危险因素。Green等[2]于90年代初发现凝血因子Ⅶ基因第8外显子MspI多态性位点,即第353位精氨酸密码子发生碱基替换(G→A),其编码的氨基酸也相应为谷氨酰胺替代。其后在一些种族中的研究提示,该多态性显著影响血浆凝血因子Ⅶ活性,并且与心肌梗塞的危险性密切相关。本研究旨在探讨中国汉族人血浆凝血因子Ⅶ活性及其基因MspI多态性与心肌梗塞的关系。
, 百拇医药
    1 对象和方法

    研究对象 心肌梗塞组选自1998年8月至1999年5月在我院住院的137例稳定期(病程>2月)首发心肌梗塞患者,其中男性119例,女性18例,平均年龄49.8±9.0(28~76)岁。诊断依据为1979年世界卫生组织关于缺血性心脏病的诊断标准,并全部经选择性冠状动脉造影证实。正常对照组选自1999年1月至5月在我院体检的健康者,共125例,其中男性103例,女性22例,平均年龄51.2±10.2(29~74)岁,有心血管疾病家族史者除外。全部研究对象均为汉族人,有糖尿病、高血压、血液系统疾病或正服用抗凝剂者除外。

    研究方法 ①凝血因子Ⅶ基因体外扩增:以酚/氯仿法从外周血白细胞中提取基因组脱氧核糖核酸(DNA),采用聚合酶链反应(PCR)特异扩增凝血因子Ⅶ基因含MspI多态性位点片段,引物序列及PCR体系参照文献[2]。先94℃变性7分,循环周期依次为95℃ 1分,62℃ 1分,72℃ 1分,35圈循环周期后72℃再延伸7分。扩增片段大小为312bp。②PCR产物的限制性内切酶片段长度多态性分析(RFLP):取18 μl PCR产物,加入1 U MspI及2 μl 10×缓冲液,37℃消化12小时,以1.8%琼脂糖凝胶电泳判断酶切结果。M1等位基因具有2个MspI酶切位点,故M1M1基因型酶切后产生205bp、67bp和40bp 3种片段;M2等位基因由于发生G→A替换失去一个酶切位点,故M1M2基因型酶切后产生272 bp、205 bp、67 bp和40 bp 4种片段;M2M2基因型则仅产生272 bp和40 bp 2种片段。③血浆凝血因子Ⅶ活性测定:于晨7~8时取空腹静脉血3 ml(3.8%柠檬酸钠抗凝),立即分离血浆。采用一期血凝法,结果以正常血浆纠正缺乏凝血因子Ⅶ血浆延长的凝血酶原时间能力的百分比表示。④血清脂质测定:总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的测定采用标准酶法,载脂蛋白(Apo) AI和B的测定采用免疫比浊法。
, http://www.100md.com
    统计学处理 以SPSS软件分析数据,分别采用t检验、χ2检验及Logistic回归分析,P<0.05为显著性差异。TG为非正态分布,取其自然对数lnTG转换为正态分布。

    2 结果

    血浆凝血因子Ⅶ基因PCR扩增及RFLP分析(附图):只发现2种常见的基因型,即M1M1和M1M2

    血浆凝血因子Ⅶ基因型及等位基因频率分布(表1):心肌梗塞组与正常对照组均以M1M1基因型多见,两种基因型和两种等位基因的频率分布在两组之间均无显著性差异。

    基础资料、血浆凝血因子Ⅶ活性及血脂指标测定:两组之间在年龄、性别、吸烟及体重指数等方面均无显著性差异(P>0.05)。如表2所示,心肌梗塞组血浆凝血因子Ⅶ活性(P<0.01)和TC(P<0.05)均显著高于对照组。以年龄、性别、吸烟、体重指数、血浆凝血因子Ⅶ活性和各项血脂指标为自变量的Logistic回归分析显示,仅血浆凝血因子Ⅶ活性与心肌梗塞的危险性独立相关(OR=1.04,P<0.01)。
, http://www.100md.com
    附图 血浆凝血因子Ⅶ基因聚合酶链反应及限制片段长度多态性分析结果(1.8%琼脂糖凝胶电泳)。A:φX174HaeⅢ Marker B、E:聚合酶链反应 C、F:M1M2基因型 D、G:M1M1基因型

    表1 正常对照组与心肌梗塞组基因型和等位基因频率分布 组别

    基因型(例)

    等位基因频率

    M1M1

    M1M2

    M1

, http://www.100md.com     M2

    正常对照组

    109(87.2)

    16(12.8)

    0.936

    0.064

    心肌梗塞组

    125(91.2)

    12(8.8)

    0.956

    0.044

    注:括号内为百分数
, 百拇医药
    血浆凝血因子Ⅶ活性与其基因MspI多态性的关系:M1M1纯合子血浆凝血因子Ⅶ活性[(111.4±24.6)%]显著高于M1M2杂合子[(99.7±19.3)%](P<0.05),而血清TC和TG的水平不受基因型的影响。如表3所示,无论M1M1纯合子还是M1M2杂合子,心肌梗塞患者血浆凝血因子Ⅶ活性均明显高于对照者(P<0.05)。

    表2 正常对照组与心肌梗塞组基础资料、血浆凝血因子Ⅶ活性和血脂指标比较(±s) 组别

    例数

    年龄

    (岁)
, http://www.100md.com
    性别(例)

    体重指数

    (kg/m2)

    吸烟比例

    (%)

    Ⅶc

    (%)

    TC

    (mmol/L)

    lnTG

    (mmol/L)

    Apo AI/

, http://www.100md.com     Apo B

    HDL-C

    (mmol/L)

    男

    女

    正常对照组

    125

    51.2±10.2

    103

    22

    24.6±3.1

    62.5

    99.9±21.8
, 百拇医药
    5.53±1.08

    0.51±0.41

    1.23±0.34

    1.05±0.46

    心肌梗塞组

    137

    49.8±9.0

    119

    18

    25.3±3.1

    68.3

    119.5±22.7**
, http://www.100md.com
    5.80±1.06*

    0.60±0.48

    1.18±0.30

    0.99±0.40

    注:与正常对照组比较*P<0.05 **P<0.01。Ⅶc:凝血因子Ⅶ活性 TC:总胆固醇 lnTG:甘油三酯的自然对数 Apo:载脂蛋白 HDL-C:高密度脂蛋白胆固醇表3 正常对照组与心肌梗塞组两种基因型血浆凝血因子Ⅶ活性比较(±s) 组别

    例数

    血浆凝血因子Ⅶ活性(%)
, 百拇医药
    基因型M1M1

    基因型M1M2

    正常对照组

    125

    101.8±20.5

    93.0±17.4

    心肌梗塞组

    137

    120.6±22.9*

    108.5±18.8*

    注:与正常对照组比较*P<0.05
, 百拇医药
    3 讨论

    当冠状动脉粥样斑块破裂时,暴露的组织因子迅速激活血浆中的凝血因子Ⅶ成为活化的凝血因子Ⅶ(Ⅶa),从而启动凝血级联反应;血栓形成又促进了斑块病变的进展。Ⅶa的血浆水平是决定血栓形成速度、大小和稳定性的重要因素[3],本研究测定的凝血因子Ⅶ活性即主要反映循环中Ⅶa的量。

    Meade等[1]和Junker等[4]的前瞻性研究均证实因子Ⅶ活性是心肌梗塞的危险因素[4],但由于其测定方法不统一,这一观点尚存在争议。本研究发现,稳定期心肌梗塞患者血浆凝血因子Ⅶ活性明显高于健康人,支持由凝血因子Ⅶ活性显著升高导致的高凝状态可能是中国汉族人心肌梗塞发病的危险因素之一,提示对于血浆凝血因子Ⅶ活性显著升高的冠心病患者通过口服抗凝剂(如华法林)治疗可以减少心肌梗塞与再梗塞的发生。新近发表的欧洲血栓预防试验(TPT)的结果对这一观点提供了有力的支持[5]
, 百拇医药
    中国汉族健康人M2等位基因频率(6.4%)略高于日本人(3.4%),而显著低于欧洲白人(10%~25%)和印度人(29%)[6]。M1M2杂合子血浆凝血因子Ⅶ活性显著低于M1M1纯合子,这与多数欧洲研究结果一致。但无论是M1M1还是M1M2基因型,心肌梗塞患者血浆凝血因子Ⅶ活性均明显高于健康者,说明凝血因子Ⅶ基因型不是决定其血浆活性的唯一因素,还有哪些因素影响凝血因子Ⅶ活性水平值得进一步研究。

    Iacoviello等[7]发现,高加索白人M1M1纯合子发生心肌梗塞的危险性显著高于M2等位基因携带者,因此认为M2等位基因对于血栓形成和心肌梗塞具有保护作用。本研究尽管发现正常对照组M1M2基因型和M2等位基因的频率分布高于心肌梗塞组,但无统计学差异,说明尽管凝血因子Ⅶ基因MspI多态性通过影响血浆凝血因子Ⅶ活性水平而在心肌梗塞的发病中起一定的作用,但该多态性并不是中国汉族人心肌梗塞的独立危险因子。
, http://www.100md.com
    作者简介:蔡强军(1972-)男,博士研究生主要从事冠心病方面研究

    参考文献

    1,Meade TW,Mellows S,Brozovic M,et al.Haemostatic function and ischemia heart disease:principal results of the Northwick Park Heart Study.Lancet,1986,2:533—537.

    2,Green F,Kelleher C,Wilkes H,et al.A common genetic polymorphism associated with lower coagulation factor Ⅶ levels in healthy individuals.Arterioscler and Thromb,1991,11:540—546.
, 百拇医药
    3,Pankow JS,Folsom AR,Shahar E,et al.Weight-lose induced changes in plasma factor Ⅶ coagulant activity and relation to the factor Ⅶ Arg/Gln 353 polymorphism in moderately obese adults.Thromb Haemost,1998,79:784—789.

    4,Junker R,Heinrich J,Schulte H,et al.Coagulation factor Ⅶ and the risk of coronary heart disease in healthy men.Arterioscler Thromb Vasc Biol,1997,17:1539—1544.

    5,The Medical Research Councils General Practice Research framwork.Thrombosis Prevention Trial:randomized trial of low-density oral anticoagulant with warfarin and low-dose aspirin in the primary prevention of ischaemic heart disease in men at increased risk.Lancet,1998,351:233—241.
, http://www.100md.com
    6,Saha N,Liu Y,Heng CK,et al.Association of factor Ⅶ genotype with plasma factor Ⅶ activity and antigen levels in healthy indian adults and interaction with triglycerides.Arterioscler and Thromb,1994,14:1923—1927.

    7,Iacoviello L,Castelnuovo AD,Kniff P,et al.Polymorphisms in the coagulation factor Ⅶ gene and the risk of myocardial infarction.N Engl J Med,1998,338:79—85.

    收稿:1999-10-13

    修回:1999-12-27, 百拇医药