聚合酶链反应在胸腔积液鉴别诊断中的应用
作者：郭继玲 冯粉琴 张国红
单位：郭继玲(太原市结核病医院二病区 太原 030053)；冯粉琴(太原市结核病医院二病区 太原 030053)；张国红(太原市结核病医院二病区 太原 030053)
关键词：聚合酶链反应；胸腔积液；诊断鉴别
山西医科大学学报000226 摘要： 目的 探讨聚合酶链反应 (PCR)在胸腔积液鉴别诊断 中的价值。方法 对52例结核性和13例非结核性胸腔积液进行结核 菌DNA聚合酶链反应检测 (PCR-TB-DNA)。结果 结核性胸腔积液PCR-TB-DNA阳性检出率 为61.5%，非结核性胸腔 积液PCR-TB-DNA阴性检出率为92.3%，检测准确度为67.7%。结论 PCR 法有较高的特异性，但灵敏度不高，易造成漏诊，对结核性胸腔积液的诊断有一定价值。
中图分类号： R447 文献标识码： A
, http://www.100md.com
文00000章编号：1007-6611(2000)02-0146-02
胸腔积液是常见临床表现，早期确诊其性质，对治疗和预后至关重要。 就我院1997-01～1997-12收治的89例胸腔积液病例进行筛选，52例结核性胸腔积液，12例 癌性胸腔积液，1例为脓胸，行PCR-TB-DNA检测，探讨其在鉴别诊断中的价值。
1 材料和方法
1.1 一般材料
1.1.1 52例结核性胸腔积液，男28例，女24例，年龄9～58岁，据其症状、体征、结核 菌素试验、胸水化验、胸片检查等确诊。
1.1.2 癌性胸腔积液12例，男5例，女7例，年龄40～69岁，经痰和/或胸水细胞学检查 或纤维支气管镜病理检查确诊。
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1.1.3 脓胸1例，男，38岁，根据病史、临床症状，血常规、胸水细菌学检查确诊。
1.2 仪器、试剂和检测方法
1.2.1 PCR扩增仪(FS-918)及试剂均由上海复生生物工程研究所生产。
1.2.2 方法 ①标本DNA提取：取胸水1 ml，15 000 r/min，10 min离心， 弃上清。沉淀中加入40 μl裂解液，搅匀后100 ℃沸水浴5 min，最后10 000 r/min 离心2 min，取3 μl弃上清待检。②加样及PCR：TB-PCR反应液20 μl，Taq酶1 μl(含1U)，阳性模板—待检标本2～3 μl，混匀后稍加离心，滴入2滴消毒液体石蜡油，置94 ℃预变 性2 min，再按94 ℃/40 s，64℃/60 s扩增35个循环。③电泳与结果判断：取15 μl 反 应液，经2%琼脂糖凝胶电泳(5V/cm)30 min后，在紫外灯下观察结果，若240 bp处出现橙黄 色条带，则为阳性。
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2 结果 见表1。
表1 胸腔积液PCR-TB-DNA检测结果(例)
病种
n
阳性
阴性
结核性胸液
52
32
20
癌性胸液
12
1
, 百拇医药
11
脓胸
1
0
1
3 讨论
本文65例胸腔积液中，52例为结核性胸腔积液，真阳性32例，假阴性20例，灵敏度 为61.5% ，假阴性20例中，合并肺结核16例，余4例经抗结核治疗、激素及胸腔穿刺抽液等综合治疗，胸水完全吸收。非结核性胸腔积液13例，真阴性12例，假阳性1例，特异度为92.3%，真阴性12例中，1例为脓胸，11例为癌性胸腔积液，其中腺癌9例 ，鳞癌2例；假阳性1例为肺腺 癌胸膜转移。本文结果灵敏度为61.5%，特异度为92.3%，准确度为67.7%。
一般认为PCR检测假阴性是由于某种抑制物存在不能扩增，或标本中菌量太少，分布不均， 所检部分不含菌或DNA变性之故[1]。假阳性率一般在3%～20%之间[2]， 出现假阳性的原因可能是扩增了潜伏感染的结核菌，甚至可能是原发的恶性肿瘤的免疫抑制 特性招致结核病复发而出现阳性，另外，由于操作中出现污染也可出现假阳性。这些原因使 PCR检测会出现一些偏差，尤其是其灵敏度偏低。
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在有胸腔积液的病例，胸水查结核菌阳性率甚低，胸水查癌细胞有时也不易检出，胸膜活检 又不易获得，结核菌素试验阳性的诊断价值有限，结核酶标抗体检测诊断特异性较差。因PC R检测属病原学诊断，特异性较高，尽管其灵敏度不高，仍可用于胸腔积液的鉴别诊断，并 对结核性胸腔积液有一定的确诊价值。
作者简介：郭继玲，女，1950年1月生，本科，副主任医师
参考文献：
[1] Shankar P,Manjunath N, Mohank K, et al Rapi d diagnosis of tuberculous meningitis by polymerase chain reaction[J].Lancet,1991,337:5～7.
[2] Noordhoek GT,Kolk AHJ,Blune G,et al. Sensitivity of PCR for detection of mycobacterium tuberculosis, a blind comparison study amo ng seven laboratories[J].J Clin Microbiol,1994,32:277～284.
收稿日期：1999-08-31, http://www.100md.com
单位：郭继玲(太原市结核病医院二病区 太原 030053)；冯粉琴(太原市结核病医院二病区 太原 030053)；张国红(太原市结核病医院二病区 太原 030053)
关键词：聚合酶链反应；胸腔积液；诊断鉴别
山西医科大学学报000226 摘要： 目的 探讨聚合酶链反应 (PCR)在胸腔积液鉴别诊断 中的价值。方法 对52例结核性和13例非结核性胸腔积液进行结核 菌DNA聚合酶链反应检测 (PCR-TB-DNA)。结果 结核性胸腔积液PCR-TB-DNA阳性检出率 为61.5%，非结核性胸腔 积液PCR-TB-DNA阴性检出率为92.3%，检测准确度为67.7%。结论 PCR 法有较高的特异性，但灵敏度不高，易造成漏诊，对结核性胸腔积液的诊断有一定价值。
中图分类号： R447 文献标识码： A
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文00000章编号：1007-6611(2000)02-0146-02
胸腔积液是常见临床表现，早期确诊其性质，对治疗和预后至关重要。 就我院1997-01～1997-12收治的89例胸腔积液病例进行筛选，52例结核性胸腔积液，12例 癌性胸腔积液，1例为脓胸，行PCR-TB-DNA检测，探讨其在鉴别诊断中的价值。
1 材料和方法
1.1 一般材料
1.1.1 52例结核性胸腔积液，男28例，女24例，年龄9～58岁，据其症状、体征、结核 菌素试验、胸水化验、胸片检查等确诊。
1.1.2 癌性胸腔积液12例，男5例，女7例，年龄40～69岁，经痰和/或胸水细胞学检查 或纤维支气管镜病理检查确诊。
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1.1.3 脓胸1例，男，38岁，根据病史、临床症状，血常规、胸水细菌学检查确诊。
1.2 仪器、试剂和检测方法
1.2.1 PCR扩增仪(FS-918)及试剂均由上海复生生物工程研究所生产。
1.2.2 方法 ①标本DNA提取：取胸水1 ml，15 000 r/min，10 min离心， 弃上清。沉淀中加入40 μl裂解液，搅匀后100 ℃沸水浴5 min，最后10 000 r/min 离心2 min，取3 μl弃上清待检。②加样及PCR：TB-PCR反应液20 μl，Taq酶1 μl(含1U)，阳性模板—待检标本2～3 μl，混匀后稍加离心，滴入2滴消毒液体石蜡油，置94 ℃预变 性2 min，再按94 ℃/40 s，64℃/60 s扩增35个循环。③电泳与结果判断：取15 μl 反 应液，经2%琼脂糖凝胶电泳(5V/cm)30 min后，在紫外灯下观察结果，若240 bp处出现橙黄 色条带，则为阳性。
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2 结果 见表1。
表1 胸腔积液PCR-TB-DNA检测结果(例)
病种
n
阳性
阴性
结核性胸液
52
32
20
癌性胸液
12
1
, 百拇医药
11
脓胸
1
0
1
3 讨论
本文65例胸腔积液中，52例为结核性胸腔积液，真阳性32例，假阴性20例，灵敏度 为61.5% ，假阴性20例中，合并肺结核16例，余4例经抗结核治疗、激素及胸腔穿刺抽液等综合治疗，胸水完全吸收。非结核性胸腔积液13例，真阴性12例，假阳性1例，特异度为92.3%，真阴性12例中，1例为脓胸，11例为癌性胸腔积液，其中腺癌9例 ，鳞癌2例；假阳性1例为肺腺 癌胸膜转移。本文结果灵敏度为61.5%，特异度为92.3%，准确度为67.7%。
一般认为PCR检测假阴性是由于某种抑制物存在不能扩增，或标本中菌量太少，分布不均， 所检部分不含菌或DNA变性之故[1]。假阳性率一般在3%～20%之间[2]， 出现假阳性的原因可能是扩增了潜伏感染的结核菌，甚至可能是原发的恶性肿瘤的免疫抑制 特性招致结核病复发而出现阳性，另外，由于操作中出现污染也可出现假阳性。这些原因使 PCR检测会出现一些偏差，尤其是其灵敏度偏低。
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在有胸腔积液的病例，胸水查结核菌阳性率甚低，胸水查癌细胞有时也不易检出，胸膜活检 又不易获得，结核菌素试验阳性的诊断价值有限，结核酶标抗体检测诊断特异性较差。因PC R检测属病原学诊断，特异性较高，尽管其灵敏度不高，仍可用于胸腔积液的鉴别诊断，并 对结核性胸腔积液有一定的确诊价值。
作者简介：郭继玲，女，1950年1月生，本科，副主任医师
参考文献：
[1] Shankar P,Manjunath N, Mohank K, et al Rapi d diagnosis of tuberculous meningitis by polymerase chain reaction[J].Lancet,1991,337:5～7.
[2] Noordhoek GT,Kolk AHJ,Blune G,et al. Sensitivity of PCR for detection of mycobacterium tuberculosis, a blind comparison study amo ng seven laboratories[J].J Clin Microbiol,1994,32:277～284.
收稿日期：1999-08-31, http://www.100md.com