HIV-1包膜基因变异的体外研究
作者：樊卫平 李敬云 鲍作义 吕富双 王宏霞
单位：樊卫平(山西医科大学微生物免疫教研室，太原 300050)；李敬云 鲍作义 吕富双 王宏霞(军事医学科学院微生物流行病研究所，北京 100071)
关键词：HIV-1；传代；包膜基因；变异
中国病毒学000206 摘要：采用亚型测定、核苷酸和氨基酸序列测定和同源性分析等方法，观察了HIV-1 ⅢB毒株在实验室长期传代过程中包膜基因变异的情况。研究的毒株包括：经过实验室8年多连续使用而获得的毒株、在MT4细胞长期连续传代而获得的每间隔10代的毒株样品及多次更换宿主细胞传代而获得的毒株。主要结果有：(1)各种毒株包膜基因变异均不显著，核苷酸序列同源性均大于92%，变异距离均小于7.5%，且随着传代数增加核苷酸趋于稳定，代间同源性由92%上升至99%，而变异距离由7.5%下降为0.6%。(2)在传代过程中HIV-1亚型保持稳定，各种毒株均为HIV-1 B3亚型。结果显示HIV在体外长期传代培养的过程中变异不大，遗传性状稳定，可能是体外生长的环境十分稳定，缺乏机体免疫学压力。结果也提示体外长期传代HIV毒株仍然适用于各种HIV的应用研究，用长期传代的方法发展HIV-减毒活疫苗的可能性不大。
, 百拇医药
中图分类号：R512.91 文献标识码：A
文章编号：1003-5125(2000)02-0127-09
Study on the Variation of the env Gene of HIV-1 in vitro
FANG Wei-ping
(Institute of Microbiology and Epidemiology,Academy of Military Medical Science,Beijing 100071,China)
LI Jing-yun,BAO Zuo-yi,LU Fu-shuang,WANG Hong-xia
(Department of Microbiology and Immunology,Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China)
, 百拇医药
Abstract:In order to understand the characteristics and rules of HIV diversity when passaged in vitro,the systematic study on the variation of env gene of HIV strain introduced from American in 1988 was carried out.Taking all the following strains as the objects:the 96-strain derived from the primary strain by continuous freeze-thaw-usage in laboratory for more than eight years; the 42h strain derived from primary strain by serial passaging with continuous changing of host cell in MT4 and HelaCD4+ and the strains sampled from serial passaged primary strain in MT4 cell every ten generations,The pre-DNA fragments of these HIV env gene were amplified by nested PCR.The fragment of 1200 bp originated from the V1-V5 region was analyzed.The subtypes of these HIV strains were identified by Heteroduplexes Mobility Assay (HMA).The main results were:(1) the env gene diversity of all the strains were indistinctive,all the nucleotide homogeneous were greater than 92% and all the gene diversity distance were less than 7.5%,moreover,the gene was seem to becoming fixed as the passage going on,the homogeneous between generation risen from 92% to 99%,where gene distance decreased from 7.5% to 0.59%.(2) All strains's subtypes were HIV-1 B3,the genetic type maintained stable during the passage.It meant that the variation of env gene of HIV in vitro was similar to that of infecting terminal period in vivo.The reasons may lie in that the more adaptive and higher virulence HIV strain,with the simple culturing circumstances and without the selective pressure of anti-HIV humoral and cellular immune existing in body.It is concluded that the characteristics of heredity maintained stable when HIVs were serial passaged in vitro,so passaged HIVs in vitro fit for use of HIV applied studies.But it is futile to want to get attenuated HIV vaccine by long term passages.
, 百拇医药
Key words:HIV; Serial passage; env gene; Diversity
人免疫缺陷病毒(HIV)的显著特征之一是其高度的变异性，这是HIV逃脱机体免疫监视的主要原因，也是HIV疫苗和治疗研究的主要障碍。观察HIV在体外培养条件下的变异情况对于评估机体内环境在HIV变异中的作用以及评价体外长期传代HIV毒种的实用性具有一定的意义。为此，我们对体外长期传代HIV毒株env基因的变异情况进行了系统的观察，对本室保存的长期传代HIV毒株以及为本实验目的而连续传代的毒株样品进行了HIV亚型测定，同时进行核苷酸和氨基酸序列测定和同源性分析。
1 材料和方法
1.1 细胞
MT4细胞，1997年引自日本，本室保存。Hela CD4细胞，1997年引自美国，本室保存。
, 百拇医药
1.2 HIV毒株
1.2.1 880508株：系本室1988年从美国引进的HIV-1ⅢB毒株。
1.2.2 960905株：系880508株经过本实验室8年的传代使用，于1996年冻存的毒株。
1.2.3 880508-11、-21、-31、-43株：系880508株在MT4细胞上连续传代收获的第11代、21代、31代、43代毒株样品。
1.2.4 42h株：系880508株在MT4和HelaCD4细胞间反复更换宿主细胞，传至第42代收获的毒株样品。
1.3 HIV亚型测定
使用HMA法(Heteroduplexes Mobility Assay)[1]，用套式PCR方法(引物序列分别是：外引物ED3 TTAGGCATCTCCTATGGCAGGAAGAAGCGG。ED14 TCTTGCCTGGAGCTGTTTGATGCCCCAGAC内引物ED5 ATGGGATCAAAGCCTAAAGCCATGTG。ED12 AGTGCTTCCTGCTGCTCCCAAGAACCCAAG)扩增HIV env基因1200bp的片段(图1)，扩增产物与含标准HIV亚型基因的质粒的扩增片段杂交，然后进行5%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，PCR扩增引物和HIV标准亚型质粒由卫生部艾滋病预防与控制中心提供。
, 百拇医药
1.4 核苷酸序列测定
将亚型测定时PCR扩增的HIV env基因V1-V5区1200bp的片段连接于pGEM-T载体质粒，转化入感受态细胞XL-1，经过扩大培养、筛选和特异性鉴定以后，阳性克隆用于核苷酸序列测定，880508株毒种测定了二个克隆，分别为880508A和880508B。由大连宝生物有限公司用ABIPRISMTM337DNA全自动测序仪测定。
1.5 序列测定结果分析
1.5.1 用Goldkey和Clustawl软件进行核苷酸和氨基酸同源性分析。
1.5.2 用Phylip3.57软件进行核苷酸和氨基础酸最大相似距离分析。
2 结果
2.1 扩增不同HIV-1毒株的env基因片段
, 百拇医药
以DE3、DE14为外引物，DE5、DE12为内引物，用套式PCR方法扩增HIV-1的env基因，经1.5%的琼脂糖凝胶电泳后，在紫外灯下观察到1200bp扩增片段(图1)。
图1 不同毒株样品PCR扩增产物电泳图
Fig.1 PCR production derived from different HIV strains
1 and 11,DNA Marker; 2 and 10,Negative control; 3-9,PCR fragments of 880508-1.
-11.-21.-31.-43.960905 and 42 h respectively.
, 百拇医药
2.2 HIV亚型测定和分析
所有HIV毒株均为HIV-1 B3亚型(图2)，代表美国SF162毒株。由同一毒种传代而得的毒株遗传距离非常接近，与sd、dph、jfq、xgh等其他来源的毒株的距离较远(图3)。
2.3 核苷酸和氨基酸同源性分析
序列分析结果显示长期传代HIV毒株的env基因核苷酸和氨基酸变异均不显著，不论高变区还是恒定区均不存在变异明显的区域(图4)。除了多处出现终止密码子的880508-11克隆以外，随着传代数的增加，代间核苷酸和氨基酸的同源性有上升的趋势(表1)，同时代间核苷酸和氨基酸的变异距离有下降的趋势(表2)。
图2 HMA法测定HIV-1亚型的聚丙烯酰胺凝胶电泳图
, 百拇医药
Fig.2 Subtype analysis of HIV strains using HMA method
图3 不同HIV毒株的亚型测定结果及其相互间的关系
Fig.3 Subtype analysis and the relationship among different strains
所有HIV毒株的核苷酸序列的同源性均大于92%，变异距离小于7.5%，随着传代数的增加核苷酸序列更趋于一致，代间同源性由92%上升至99%，而变异距离由7.5%下降为0.6%。氨基酸同源性也由92%上升为99%，变异距离由7.94%下降为0.25%。
3 讨论
, 百拇医药 HIV高度变异性的分子基础是复制过程中反转录酶的忠实性较差[2]，即缺乏3′-5′外切核酸的校读功能，导致RNA转录为DNA时经常出现错误。真核细胞DNA多聚酶的错误率大约是10-10～10-9，而HIV-1反转录酶平均每一个位点的错误率是10-4～10-3，这意味着每一个HIV基因组(104碱基)的反转录酶都有1～10个错误。HIV变异的频率是真核细胞DNA基因组的100万倍[2]。
在HIV感染者体内，HIV变异株出现的频率是HIV复制周期的函数。在HIV感染的所有阶段，都有持续高水平的HIV复制，有时相对较低水平的血浆HIV RNA是通过高水平的HIV复制和破坏所保持的， 更高水平的HIV复制发生在外周组织中， 特别是淋巴器官[3，4]。感染过程中每天发生的大量复制周期提供了产生大量变异毒株的机会。
, http://www.100md.com
图4 HIV毒株env基因1200bp片段核酸序列
“----”代表与上列核苷酸相同； “：”代表核苷酸缺失。
Fig.4 Nucleotide sequences of 1200bp fragments derived from HIV env gene
“----”Same with the upper line； “：”Nucleotide deletion.
表1 不同毒株之间核苷酸和氨基酸序列的同源性(%)
Table 1 Homogeneous of nucleotide and amino acid (%)
880508
, 百拇医药
A
Nucleotide
Amino acid
880508
B
880508
-21
880508
-31
880508
-43
42h
960905
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880508
-11
880508A
100
100
880508B
97
100
95
100
880508-21
96
97
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100
92
94
100
880508-31
97
98
98
100
94
96
96
100
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880508-43
97
98
98
99
100
94
96
96
98
100
42h
97
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98
98
98
100
94
96
96
98
98
100
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97
98
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98
99
99
99
100
94
96
96
98
98
99
100
880508-11
, http://www.100md.com 93
93
92
92
92
92
92
100
表2 不同毒株之间的核苷酸及氨基酸距离(%)
Table 2 Distance of nucleotide and amino acid (%)
960905
Nucleotide
, 百拇医药
Amino acid
42h
880508
-43
880508
-31
880508
-21
880508
A
880508
B
880508
, 百拇医药
-11
960905
0.00
0.00
42h
0.59
0.00
0.25
0.00
880508-43
0.59
0.85
0.00
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0.76
1.02
0.00
880508-31
0.68
1.11
0.60
0.00
1.29
1.56
1.03
0.00
880508-21
, 百拇医药
1.68
1.86
1.45
1.37
0.00
3.33
3.07
3.11
3.15
0.00
880508A
1.76
2.20
, 百拇医药
1.53
1.81
2.63
0.00
3.07
3.33
2.84
3.41
5.47
0.00
880508B
2.54
2.98
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2.49
2.60
3.59
2.46
0.00
5.46
5.74
5.26
5.87
7.94
4.39
0.00
880508-11
, 百拇医药
7.40
7.50
7.32
7.38
7.04
6.95
6.69
0.00
我们的研究表明，HIV体外长期传代过程中变异的情况与在感染者体内有较大的区别，尽管变异的现象依然存在，如880508株病毒的两个克隆之间仍有一定程序的遗传差异，但是总的来说在经历了长达数年的传代以后，HIV变异不明显，这说明机体内环境在HIV变异的过程中起着重要的作用。HIV感染以后可以诱发机体强烈的免疫反应，这种反应可以在感染的早期抑制病毒复制的高峰[5，6]。HIV体外传代的环境与体内相比十分单纯，在缺乏免疫压力的情况下，HIV变异不明显，这说明免疫学压力是HIV变异的主要驱动力。
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一些研究显示在无免疫压力下体外传代HIV的状况类似体内免疫系统全面崩溃的感染末期的状况：HIV变异株相对少，株间变异小，但毒力强、复制快、病毒产量高，可形成多核巨细胞等等；HIV在适应了体外培养的环境和宿主细胞、失去了选择压力后，少数变异株在传代过程中经逐步稀释后逃脱优势株的抑制逐渐被固定下来而成为新的优势株[7]。
长期传代HIV毒株的遗传稳定性显示它具有较好的实用性。长期传代HIV毒种仍然适用于HIV灭活效果评价、HIV全抗原制备等多种应用研究。同时也提示试图用长期传代的方法发展HIV减毒活疫苗的做法可能是徒劳的。
樊卫平(1967年-),女,山西省人,讲师、硕士学位.主要从事微生物免疫学研究.
参考文献
[1]Delwart EL,Busch MP,Kalish ML,et al.Genetic Subtyping of human immunodeficiency virus using a heteroduplex mobility asssy[J].PCR Methods and Applications,1995,4:S202～S216
, 百拇医药
[2]Vladimir V,Luka Shov,Jaap Goudsmit.HIV heterogeneity and disease progression in AIDS:a model of continuous virus adaptation[J].AIDS,1998,12(Suppl A):S43～S52
[3]Perelson AS,Neumann AU,Markowitz M,et al.HIV-1 dynamic in vivo:Virion clearance rate,infected cell life-span,and viral generation time[J].Science,1996,27:1582～1586
[4]Pantaleo G,Graziosic,Demarest JF,et al.HIV infection is active and progressive in lymphoid tissue during the clinically latent stage of disease[J].Nature,1993,362:355～360
, http://www.100md.com
[5]Moss PAH,Rowland-Jones S,Frodsham PM,et al.Persistent high frequency of human immunodeficiency virus-specific cytolytic T cell in peripheral blood of infected donors[J].Proc Natl Acad Sci USA,1995,92:5773～5777
[6]Yang OO,Kalams S,Trocha A,et al.Suppression of human immunodeficiency virus type 1 replication by CD8+ cells:Evidence for HLA class 1-restricted trigging of cytolytic and noncytolytic mechanism[J].J Virol,1997,71:3120～3128
[7]Delwart E L,Sheppard H W,Walker B D,et al.Human immunodeficiency virus type 1 evolution in vivo tracted by DNA heteroduplex mobility assay[J].J Virol,1994,68:6672～6683
1999-03-08
1999-08-31, 百拇医药
单位：樊卫平(山西医科大学微生物免疫教研室，太原 300050)；李敬云 鲍作义 吕富双 王宏霞(军事医学科学院微生物流行病研究所，北京 100071)
关键词：HIV-1；传代；包膜基因；变异
中国病毒学000206 摘要：采用亚型测定、核苷酸和氨基酸序列测定和同源性分析等方法，观察了HIV-1 ⅢB毒株在实验室长期传代过程中包膜基因变异的情况。研究的毒株包括：经过实验室8年多连续使用而获得的毒株、在MT4细胞长期连续传代而获得的每间隔10代的毒株样品及多次更换宿主细胞传代而获得的毒株。主要结果有：(1)各种毒株包膜基因变异均不显著，核苷酸序列同源性均大于92%，变异距离均小于7.5%，且随着传代数增加核苷酸趋于稳定，代间同源性由92%上升至99%，而变异距离由7.5%下降为0.6%。(2)在传代过程中HIV-1亚型保持稳定，各种毒株均为HIV-1 B3亚型。结果显示HIV在体外长期传代培养的过程中变异不大，遗传性状稳定，可能是体外生长的环境十分稳定，缺乏机体免疫学压力。结果也提示体外长期传代HIV毒株仍然适用于各种HIV的应用研究，用长期传代的方法发展HIV-减毒活疫苗的可能性不大。
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中图分类号：R512.91 文献标识码：A
文章编号：1003-5125(2000)02-0127-09
Study on the Variation of the env Gene of HIV-1 in vitro
FANG Wei-ping
(Institute of Microbiology and Epidemiology,Academy of Military Medical Science,Beijing 100071,China)
LI Jing-yun,BAO Zuo-yi,LU Fu-shuang,WANG Hong-xia
(Department of Microbiology and Immunology,Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China)
, 百拇医药
Abstract:In order to understand the characteristics and rules of HIV diversity when passaged in vitro,the systematic study on the variation of env gene of HIV strain introduced from American in 1988 was carried out.Taking all the following strains as the objects:the 96-strain derived from the primary strain by continuous freeze-thaw-usage in laboratory for more than eight years; the 42h strain derived from primary strain by serial passaging with continuous changing of host cell in MT4 and HelaCD4+ and the strains sampled from serial passaged primary strain in MT4 cell every ten generations,The pre-DNA fragments of these HIV env gene were amplified by nested PCR.The fragment of 1200 bp originated from the V1-V5 region was analyzed.The subtypes of these HIV strains were identified by Heteroduplexes Mobility Assay (HMA).The main results were:(1) the env gene diversity of all the strains were indistinctive,all the nucleotide homogeneous were greater than 92% and all the gene diversity distance were less than 7.5%,moreover,the gene was seem to becoming fixed as the passage going on,the homogeneous between generation risen from 92% to 99%,where gene distance decreased from 7.5% to 0.59%.(2) All strains's subtypes were HIV-1 B3,the genetic type maintained stable during the passage.It meant that the variation of env gene of HIV in vitro was similar to that of infecting terminal period in vivo.The reasons may lie in that the more adaptive and higher virulence HIV strain,with the simple culturing circumstances and without the selective pressure of anti-HIV humoral and cellular immune existing in body.It is concluded that the characteristics of heredity maintained stable when HIVs were serial passaged in vitro,so passaged HIVs in vitro fit for use of HIV applied studies.But it is futile to want to get attenuated HIV vaccine by long term passages.
, 百拇医药
Key words:HIV; Serial passage; env gene; Diversity
人免疫缺陷病毒(HIV)的显著特征之一是其高度的变异性，这是HIV逃脱机体免疫监视的主要原因，也是HIV疫苗和治疗研究的主要障碍。观察HIV在体外培养条件下的变异情况对于评估机体内环境在HIV变异中的作用以及评价体外长期传代HIV毒种的实用性具有一定的意义。为此，我们对体外长期传代HIV毒株env基因的变异情况进行了系统的观察，对本室保存的长期传代HIV毒株以及为本实验目的而连续传代的毒株样品进行了HIV亚型测定，同时进行核苷酸和氨基酸序列测定和同源性分析。
1 材料和方法
1.1 细胞
MT4细胞，1997年引自日本，本室保存。Hela CD4细胞，1997年引自美国，本室保存。
, 百拇医药
1.2 HIV毒株
1.2.1 880508株：系本室1988年从美国引进的HIV-1ⅢB毒株。
1.2.2 960905株：系880508株经过本实验室8年的传代使用，于1996年冻存的毒株。
1.2.3 880508-11、-21、-31、-43株：系880508株在MT4细胞上连续传代收获的第11代、21代、31代、43代毒株样品。
1.2.4 42h株：系880508株在MT4和HelaCD4细胞间反复更换宿主细胞，传至第42代收获的毒株样品。
1.3 HIV亚型测定
使用HMA法(Heteroduplexes Mobility Assay)[1]，用套式PCR方法(引物序列分别是：外引物ED3 TTAGGCATCTCCTATGGCAGGAAGAAGCGG。ED14 TCTTGCCTGGAGCTGTTTGATGCCCCAGAC内引物ED5 ATGGGATCAAAGCCTAAAGCCATGTG。ED12 AGTGCTTCCTGCTGCTCCCAAGAACCCAAG)扩增HIV env基因1200bp的片段(图1)，扩增产物与含标准HIV亚型基因的质粒的扩增片段杂交，然后进行5%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，PCR扩增引物和HIV标准亚型质粒由卫生部艾滋病预防与控制中心提供。
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1.4 核苷酸序列测定
将亚型测定时PCR扩增的HIV env基因V1-V5区1200bp的片段连接于pGEM-T载体质粒，转化入感受态细胞XL-1，经过扩大培养、筛选和特异性鉴定以后，阳性克隆用于核苷酸序列测定，880508株毒种测定了二个克隆，分别为880508A和880508B。由大连宝生物有限公司用ABIPRISMTM337DNA全自动测序仪测定。
1.5 序列测定结果分析
1.5.1 用Goldkey和Clustawl软件进行核苷酸和氨基酸同源性分析。
1.5.2 用Phylip3.57软件进行核苷酸和氨基础酸最大相似距离分析。
2 结果
2.1 扩增不同HIV-1毒株的env基因片段
, 百拇医药
以DE3、DE14为外引物，DE5、DE12为内引物，用套式PCR方法扩增HIV-1的env基因，经1.5%的琼脂糖凝胶电泳后，在紫外灯下观察到1200bp扩增片段(图1)。
图1 不同毒株样品PCR扩增产物电泳图
Fig.1 PCR production derived from different HIV strains
1 and 11,DNA Marker; 2 and 10,Negative control; 3-9,PCR fragments of 880508-1.
-11.-21.-31.-43.960905 and 42 h respectively.
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2.2 HIV亚型测定和分析
所有HIV毒株均为HIV-1 B3亚型(图2)，代表美国SF162毒株。由同一毒种传代而得的毒株遗传距离非常接近，与sd、dph、jfq、xgh等其他来源的毒株的距离较远(图3)。
2.3 核苷酸和氨基酸同源性分析
序列分析结果显示长期传代HIV毒株的env基因核苷酸和氨基酸变异均不显著，不论高变区还是恒定区均不存在变异明显的区域(图4)。除了多处出现终止密码子的880508-11克隆以外，随着传代数的增加，代间核苷酸和氨基酸的同源性有上升的趋势(表1)，同时代间核苷酸和氨基酸的变异距离有下降的趋势(表2)。
图2 HMA法测定HIV-1亚型的聚丙烯酰胺凝胶电泳图
, 百拇医药
Fig.2 Subtype analysis of HIV strains using HMA method
图3 不同HIV毒株的亚型测定结果及其相互间的关系
Fig.3 Subtype analysis and the relationship among different strains
所有HIV毒株的核苷酸序列的同源性均大于92%，变异距离小于7.5%，随着传代数的增加核苷酸序列更趋于一致，代间同源性由92%上升至99%，而变异距离由7.5%下降为0.6%。氨基酸同源性也由92%上升为99%，变异距离由7.94%下降为0.25%。
3 讨论
, 百拇医药 HIV高度变异性的分子基础是复制过程中反转录酶的忠实性较差[2]，即缺乏3′-5′外切核酸的校读功能，导致RNA转录为DNA时经常出现错误。真核细胞DNA多聚酶的错误率大约是10-10～10-9，而HIV-1反转录酶平均每一个位点的错误率是10-4～10-3，这意味着每一个HIV基因组(104碱基)的反转录酶都有1～10个错误。HIV变异的频率是真核细胞DNA基因组的100万倍[2]。
在HIV感染者体内，HIV变异株出现的频率是HIV复制周期的函数。在HIV感染的所有阶段，都有持续高水平的HIV复制，有时相对较低水平的血浆HIV RNA是通过高水平的HIV复制和破坏所保持的， 更高水平的HIV复制发生在外周组织中， 特别是淋巴器官[3，4]。感染过程中每天发生的大量复制周期提供了产生大量变异毒株的机会。
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图4 HIV毒株env基因1200bp片段核酸序列
“----”代表与上列核苷酸相同； “：”代表核苷酸缺失。
Fig.4 Nucleotide sequences of 1200bp fragments derived from HIV env gene
“----”Same with the upper line； “：”Nucleotide deletion.
表1 不同毒株之间核苷酸和氨基酸序列的同源性(%)
Table 1 Homogeneous of nucleotide and amino acid (%)
880508
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A
Nucleotide
Amino acid
880508
B
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98
100
94
96
96
98
98
100
960905
97
98
, 百拇医药
98
99
99
99
100
94
96
96
98
98
99
100
880508-11
, http://www.100md.com 93
93
92
92
92
92
92
100
表2 不同毒株之间的核苷酸及氨基酸距离(%)
Table 2 Distance of nucleotide and amino acid (%)
960905
Nucleotide
, 百拇医药
Amino acid
42h
880508
-43
880508
-31
880508
-21
880508
A
880508
B
880508
, 百拇医药
-11
960905
0.00
0.00
42h
0.59
0.00
0.25
0.00
880508-43
0.59
0.85
0.00
, http://www.100md.com
0.76
1.02
0.00
880508-31
0.68
1.11
0.60
0.00
1.29
1.56
1.03
0.00
880508-21
, 百拇医药
1.68
1.86
1.45
1.37
0.00
3.33
3.07
3.11
3.15
0.00
880508A
1.76
2.20
, 百拇医药
1.53
1.81
2.63
0.00
3.07
3.33
2.84
3.41
5.47
0.00
880508B
2.54
2.98
, http://www.100md.com
2.49
2.60
3.59
2.46
0.00
5.46
5.74
5.26
5.87
7.94
4.39
0.00
880508-11
, 百拇医药
7.40
7.50
7.32
7.38
7.04
6.95
6.69
0.00
我们的研究表明，HIV体外长期传代过程中变异的情况与在感染者体内有较大的区别，尽管变异的现象依然存在，如880508株病毒的两个克隆之间仍有一定程序的遗传差异，但是总的来说在经历了长达数年的传代以后，HIV变异不明显，这说明机体内环境在HIV变异的过程中起着重要的作用。HIV感染以后可以诱发机体强烈的免疫反应，这种反应可以在感染的早期抑制病毒复制的高峰[5，6]。HIV体外传代的环境与体内相比十分单纯，在缺乏免疫压力的情况下，HIV变异不明显，这说明免疫学压力是HIV变异的主要驱动力。
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一些研究显示在无免疫压力下体外传代HIV的状况类似体内免疫系统全面崩溃的感染末期的状况：HIV变异株相对少，株间变异小，但毒力强、复制快、病毒产量高，可形成多核巨细胞等等；HIV在适应了体外培养的环境和宿主细胞、失去了选择压力后，少数变异株在传代过程中经逐步稀释后逃脱优势株的抑制逐渐被固定下来而成为新的优势株[7]。
长期传代HIV毒株的遗传稳定性显示它具有较好的实用性。长期传代HIV毒种仍然适用于HIV灭活效果评价、HIV全抗原制备等多种应用研究。同时也提示试图用长期传代的方法发展HIV减毒活疫苗的做法可能是徒劳的。
樊卫平(1967年-),女,山西省人,讲师、硕士学位.主要从事微生物免疫学研究.
参考文献
[1]Delwart EL,Busch MP,Kalish ML,et al.Genetic Subtyping of human immunodeficiency virus using a heteroduplex mobility asssy[J].PCR Methods and Applications,1995,4:S202～S216
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[2]Vladimir V,Luka Shov,Jaap Goudsmit.HIV heterogeneity and disease progression in AIDS:a model of continuous virus adaptation[J].AIDS,1998,12(Suppl A):S43～S52
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[5]Moss PAH,Rowland-Jones S,Frodsham PM,et al.Persistent high frequency of human immunodeficiency virus-specific cytolytic T cell in peripheral blood of infected donors[J].Proc Natl Acad Sci USA,1995,92:5773～5777
[6]Yang OO,Kalams S,Trocha A,et al.Suppression of human immunodeficiency virus type 1 replication by CD8+ cells:Evidence for HLA class 1-restricted trigging of cytolytic and noncytolytic mechanism[J].J Virol,1997,71:3120～3128
[7]Delwart E L,Sheppard H W,Walker B D,et al.Human immunodeficiency virus type 1 evolution in vivo tracted by DNA heteroduplex mobility assay[J].J Virol,1994,68:6672～6683
1999-03-08
1999-08-31, 百拇医药