金黄色葡萄球菌耐药表型检测
作者：周娅 赵忠 赵舒斌 王宁萍
单位：周娅(宁夏医学院微生物教研室，宁夏 银川 750004)；赵忠(宁夏银川市第一人民医院检验科，宁夏 银川 750001)；赵舒斌(宁夏银川市第一人民医院检验科，宁夏 银川 750001)；王宁萍(宁夏医学院微生物教研室，宁夏 银川 750004)
关键词：金黄色葡萄球菌；药物耐药性；药敏试验
宁夏医学杂志000206 【摘要】目的 检测金黄色葡萄球菌(金葡菌)的耐药表型，指导临床合理用药。方法 对临床分离的金葡菌用琼脂筛选法区分耐甲氧西林金葡菌(MRSA)和甲氧西林敏感金葡菌(MSSA)；用碘试管法和酸试管法测定β-内酰胺酶，用K-B法进行药敏试验。结果 66株金葡菌中，MRSA占45.5%，产两种β-内酰胺酶的百分率分别是84.8%(青霉素酶)和57.6%(头孢菌素酶)，MRSA和MSSA产酶率无明显差异。除万古霉素外，MRSA对11种抗生素的耐药率介于33.3%～100%，而多数MSSA对青霉素和红霉素耐药，对其它9种抗生素的耐药率明显低于MRSA。结论 实验室应重视鉴别MRSA和MSSA，加强金葡菌的耐药性监测。
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【中图分类号】R378.1+1 【文献标识码】A
文章编号：1001-5949(2000)02-0075-02
Analysis of resistant phenotypes to antibiotios in staphylococcus aureus
ZHOU Ya，ZHAO Zhong，ZHAO Shu-bin，et al.
(Dept.of Microbiology，Ningxia Med.Coll.，Yinchuan 750004，China)
【Abstract】Objectives To study the present resistant phenotypes of Staphylococcus aureus (S.aureus) and to instruct clinical rational application of antibiotics.Methods All isolated S.aureus were distinguished into methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and methicillin sensitive staphylococcus aureus (MSSA) with salt agar screening method.β-lactamase determination were performed by Iodometric method and Acidimetric method.Sensitivity to 12 kinds of antibiotics were tested with K-B diffusion method.Results In the 66 isolates of S.aureus，MRSA accounted for 45.5% and the percentage of two β-lactamase positive strains were 84.8%(penicillinase) and 57.6%(Cephalosporinase) respectively.Determination of β-lactamase production showed no significant difference between MRSA and MSSA.Except vancomycin，MRSA showed multiresistance to 11 antibiotics with rates ranging from 33.3% to 100%.Most of MSSA were resistant to penicillin and Erythromycin，but the resistant rate to the other 9 antibiotics was lower than MRSA.Conclusions It is necessary to distinguish MRSA and MSSA strictly and to monitor their resistance to antibiotics seriously in every bacterial laboratory.
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【Key words】Staphylococcus aureus；Drug tolerance；Antibiotics sensitivity test
当前金黄色葡萄球菌(金葡菌)仍然是临床常见的化脓性球菌，随着抗生素的广泛应用，其耐药菌株日益增多，特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)具有多重耐药性，易在医院内传播，已经成为临床治疗的一大难题。因而监测MRSA的流行情况，及时准确地向临床医生报告金葡菌的耐药性，有效地控制MRSA感染极其重要。本文对1999年以来从临床标本分离获得的66株金葡菌的耐药表型进行分析，以期为临床工作提供部分有用的信息。
1 材料与方法
1.1 菌株：临床随机收集金葡菌66株，主要取自脓性分泌物、胸腹腔引流液、尿液、前列腺液、痰、血等标本。
1.2 试剂：Mueller-Hinton琼脂(M-H琼脂)，上海医学化验所生产；抗生素药敏纸片等由北京天坛药物生物技术开发公司生产。
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1.3 耐甲氧西林金葡菌(MRSA)测定：用琼脂筛选法[1]，M-H琼脂内加入NaCl 40g/L、苯唑青霉素6μg/ml。接种待测金葡菌后，置35℃，24小时观察结果，只要有菌生长，即为MRSA。
1.4 β-内酰胺酶测定：青霉素酶用碘试管法，以青霉素为底物；头孢菌素酶用酸试管法，以头孢唑啉为底物；方法见参考文献[2]。
1.5 药敏试验：用K-B法，以1997年美国NCCLS标准判断结果。金葡菌ATCC 25923做质控，在标准范围内。
2 结果
2.1 MRSA的测定结果：66株金葡菌中，MRSA30株，占45.5%；MSSA(甲氧西林敏感金葡菌)36株，占54.5%。
2.2 β-内酰胺酶测定：30株MRSA产青霉素酶26株(占86.7%)、产头孢菌素酶19株(63.3%)；36株MSSA产青霉素酶30株(83.3%)，产头孢菌素酶20株(55.6%)。总产酶率分别是84.8%(青霉素酶)和57.6%(头孢菌素酶)。
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2.3 K-B法药敏试验结果(见附表)
附表 12种抗生素对金葡菌的药敏试验结果(K-B法) 抗生素
MRSA(30株)%
R I S
MSSA(36株)%
R I S
青霉素
100.0
0
0
91.7
0
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8.3
苯唑青霉素
100.0
0
0
0
0
100.0
红霉素
100.0
0
0
58.3
, http://www.100md.com 16.7
25.0
克林霉素
46.7
20.0
33.3
13.9
25.0
61.1
丁胺卡那霉素
46.7
13.3
40.0
, http://www.100md.com
8.3
8.3
83.3
庆大霉素
86.7
10.0
3.3
16.7
8.3
75.0
环丙沙星
43.3
20.0
, http://www.100md.com
36.7
8.3
13.9
77.8
复方磺胺
33.3
23.3
43.3
13.9
11.1
75.0
万古霉素
0
, 百拇医药
0
100.0
0
0
100.0
头孢唑啉
46.7
16.7
36.7
5.6
8.3
86.1
头孢哌酮
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43.3
43.3
13.3
8.3
13.9
77.8
头孢三嗪
40.0
53.3
6.7
5.6
16.7
77.8
, 百拇医药
注：R耐药，I中介，S敏感。
3 讨论
金葡菌是革兰氏阳性菌中最易产生耐药性的菌种之一，它产生耐药性的机理主要有两点。其一是MRSA产生青霉素结合蛋白PBP2a，PBP2a与β-内酰胺类抗生素的亲和力减低，因此该类菌株对所有β-内酰胺类抗生素耐药，PBP2a由染色体上的mecA基因编码，性质稳定[3]。其二是许多金葡菌株可产生各种β-内酰胺酶，使青霉素、头孢菌素类等β-内酰胺类抗生素水解失活，表现耐药[4]。金葡菌中与耐药有关的β-内酰胺酶由质粒介导，质粒丢失其耐药性即消失。由此可知，所有β-内酰胺类抗生素对MRSA无效。由于目前治疗MRSA感染可选择的药物很少，只有万古霉素是可靠的敏感药物，且感染易在院内传播，病死率较高，有人将MRSA所致感染与乙型肝炎、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)同视为当前世界上三大感染性疾患[5]。因此发现此类菌株感染的病人，应该采取严格的消毒隔离措施，防止院内流行。自60年代初发现MRSA后，已有大量文献报道其临床检出率呈逐年上升趋势[5]。本研究从1999年以来银川市收集到的66株临床分离金葡菌株中检出MRSA30株，占金葡菌株的45.5%；MSSA36株，占54.5%。检出的MRSA菌株对实验用12种常用抗生素最多的可耐药11种，最少的耐3种；MSSA菌株最多的也耐7种，最少的对此12种抗生素无耐药现象。结果表明MRSA的多重耐药现象明显高于MSSA，我市MRSA的感染情况已不容忽视。MRSA感染后果严重，因此在实验室内区分MRSA和MSSA，及时向临床报告十分重要。鉴别MRSA常用实验方法中以琼脂筛选法敏感性最高[1]，方法亦简单，但是临床实验室不可能常备琼脂筛选平板用于此项检测，因此可选用苯唑青霉素纸片扩散法，只要经常保存几块高盐M-H琼脂，控制好温度、pH值等实验条件即可。我们在收集临床标本过程中发现，目前一些临床细菌室因为对MRSA的危害认识不够，以及该菌实验条件要另行设立等原因，仍未开展此项工作对此应引起高度重视。
, 百拇医药
本研究中MRSA和MSSA产β-内酰胺酶的百分率无明显差异，绝大多数金葡菌都已是产酶株。结果表明金葡菌产β-内酰胺酶与金葡菌对苯唑青霉素耐药无关，因而临床分离的产β-内酰胺酶的MSSA菌株对耐酶青霉素类仍然敏感，可供选择的抗生素范围较之MRSA大的多。值得注意的是，MRSA在体外药敏试验时可表现对某些头孢菌素类抗生素敏感，本研究亦有此类结果，但临床经验表明用此类药物治疗MRSA无效。目前常规药敏方法尚无法测出此耐药表型，因而常出现假敏感现象，实验人员应该向临床医生解释清楚，不能选用此类药物治疗MRSA感染[1]。
责编：杨自革
作者简介：周娅(1953年～)，女，浙江籍，副教授，学士学位，从事中药抗感染及免疫药理专业。
参考文献
[1]李影林.中华医学检验全书(上卷)[M].北京：人民卫生出版社，1996.1251
, 百拇医药
[2]陆永绥，陈秀枢，邢旺兴，等.六种β-内酰胺酶定性试验方法评价及其临床应用[J].中华医学检验杂志1993，16(6)：328～331
[3]Hackbarth CJ，Chambers HF.Methicillin-resistant staphylococci：genetics and mechanisms of resistance[J].Antimicrob Agents chemother，1989，33(7)：991～994
[4]戴自英.实用抗菌药物学[M].上海：上海科学技术出版社，1992.19～21
[5]马纪平，苏建荣，靳景图.耐甲氧苯青霉素葡萄球菌[J].中华医学检验杂志，1996，19(3)：186～188
(收稿：1999-09-07), 百拇医药
单位：周娅(宁夏医学院微生物教研室，宁夏 银川 750004)；赵忠(宁夏银川市第一人民医院检验科，宁夏 银川 750001)；赵舒斌(宁夏银川市第一人民医院检验科，宁夏 银川 750001)；王宁萍(宁夏医学院微生物教研室，宁夏 银川 750004)
关键词：金黄色葡萄球菌；药物耐药性；药敏试验
宁夏医学杂志000206 【摘要】目的 检测金黄色葡萄球菌(金葡菌)的耐药表型，指导临床合理用药。方法 对临床分离的金葡菌用琼脂筛选法区分耐甲氧西林金葡菌(MRSA)和甲氧西林敏感金葡菌(MSSA)；用碘试管法和酸试管法测定β-内酰胺酶，用K-B法进行药敏试验。结果 66株金葡菌中，MRSA占45.5%，产两种β-内酰胺酶的百分率分别是84.8%(青霉素酶)和57.6%(头孢菌素酶)，MRSA和MSSA产酶率无明显差异。除万古霉素外，MRSA对11种抗生素的耐药率介于33.3%～100%，而多数MSSA对青霉素和红霉素耐药，对其它9种抗生素的耐药率明显低于MRSA。结论 实验室应重视鉴别MRSA和MSSA，加强金葡菌的耐药性监测。
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【中图分类号】R378.1+1 【文献标识码】A
文章编号：1001-5949(2000)02-0075-02
Analysis of resistant phenotypes to antibiotios in staphylococcus aureus
ZHOU Ya，ZHAO Zhong，ZHAO Shu-bin，et al.
(Dept.of Microbiology，Ningxia Med.Coll.，Yinchuan 750004，China)
【Abstract】Objectives To study the present resistant phenotypes of Staphylococcus aureus (S.aureus) and to instruct clinical rational application of antibiotics.Methods All isolated S.aureus were distinguished into methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and methicillin sensitive staphylococcus aureus (MSSA) with salt agar screening method.β-lactamase determination were performed by Iodometric method and Acidimetric method.Sensitivity to 12 kinds of antibiotics were tested with K-B diffusion method.Results In the 66 isolates of S.aureus，MRSA accounted for 45.5% and the percentage of two β-lactamase positive strains were 84.8%(penicillinase) and 57.6%(Cephalosporinase) respectively.Determination of β-lactamase production showed no significant difference between MRSA and MSSA.Except vancomycin，MRSA showed multiresistance to 11 antibiotics with rates ranging from 33.3% to 100%.Most of MSSA were resistant to penicillin and Erythromycin，but the resistant rate to the other 9 antibiotics was lower than MRSA.Conclusions It is necessary to distinguish MRSA and MSSA strictly and to monitor their resistance to antibiotics seriously in every bacterial laboratory.
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【Key words】Staphylococcus aureus；Drug tolerance；Antibiotics sensitivity test
当前金黄色葡萄球菌(金葡菌)仍然是临床常见的化脓性球菌，随着抗生素的广泛应用，其耐药菌株日益增多，特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)具有多重耐药性，易在医院内传播，已经成为临床治疗的一大难题。因而监测MRSA的流行情况，及时准确地向临床医生报告金葡菌的耐药性，有效地控制MRSA感染极其重要。本文对1999年以来从临床标本分离获得的66株金葡菌的耐药表型进行分析，以期为临床工作提供部分有用的信息。
1 材料与方法
1.1 菌株：临床随机收集金葡菌66株，主要取自脓性分泌物、胸腹腔引流液、尿液、前列腺液、痰、血等标本。
1.2 试剂：Mueller-Hinton琼脂(M-H琼脂)，上海医学化验所生产；抗生素药敏纸片等由北京天坛药物生物技术开发公司生产。
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1.3 耐甲氧西林金葡菌(MRSA)测定：用琼脂筛选法[1]，M-H琼脂内加入NaCl 40g/L、苯唑青霉素6μg/ml。接种待测金葡菌后，置35℃，24小时观察结果，只要有菌生长，即为MRSA。
1.4 β-内酰胺酶测定：青霉素酶用碘试管法，以青霉素为底物；头孢菌素酶用酸试管法，以头孢唑啉为底物；方法见参考文献[2]。
1.5 药敏试验：用K-B法，以1997年美国NCCLS标准判断结果。金葡菌ATCC 25923做质控，在标准范围内。
2 结果
2.1 MRSA的测定结果：66株金葡菌中，MRSA30株，占45.5%；MSSA(甲氧西林敏感金葡菌)36株，占54.5%。
2.2 β-内酰胺酶测定：30株MRSA产青霉素酶26株(占86.7%)、产头孢菌素酶19株(63.3%)；36株MSSA产青霉素酶30株(83.3%)，产头孢菌素酶20株(55.6%)。总产酶率分别是84.8%(青霉素酶)和57.6%(头孢菌素酶)。
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2.3 K-B法药敏试验结果(见附表)
附表 12种抗生素对金葡菌的药敏试验结果(K-B法) 抗生素
MRSA(30株)%
R I S
MSSA(36株)%
R I S
青霉素
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苯唑青霉素
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红霉素
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克林霉素
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丁胺卡那霉素
46.7
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庆大霉素
86.7
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环丙沙星
43.3
20.0
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36.7
8.3
13.9
77.8
复方磺胺
33.3
23.3
43.3
13.9
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75.0
万古霉素
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100.0
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头孢唑啉
46.7
16.7
36.7
5.6
8.3
86.1
头孢哌酮
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43.3
43.3
13.3
8.3
13.9
77.8
头孢三嗪
40.0
53.3
6.7
5.6
16.7
77.8
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注：R耐药，I中介，S敏感。
3 讨论
金葡菌是革兰氏阳性菌中最易产生耐药性的菌种之一，它产生耐药性的机理主要有两点。其一是MRSA产生青霉素结合蛋白PBP2a，PBP2a与β-内酰胺类抗生素的亲和力减低，因此该类菌株对所有β-内酰胺类抗生素耐药，PBP2a由染色体上的mecA基因编码，性质稳定[3]。其二是许多金葡菌株可产生各种β-内酰胺酶，使青霉素、头孢菌素类等β-内酰胺类抗生素水解失活，表现耐药[4]。金葡菌中与耐药有关的β-内酰胺酶由质粒介导，质粒丢失其耐药性即消失。由此可知，所有β-内酰胺类抗生素对MRSA无效。由于目前治疗MRSA感染可选择的药物很少，只有万古霉素是可靠的敏感药物，且感染易在院内传播，病死率较高，有人将MRSA所致感染与乙型肝炎、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)同视为当前世界上三大感染性疾患[5]。因此发现此类菌株感染的病人，应该采取严格的消毒隔离措施，防止院内流行。自60年代初发现MRSA后，已有大量文献报道其临床检出率呈逐年上升趋势[5]。本研究从1999年以来银川市收集到的66株临床分离金葡菌株中检出MRSA30株，占金葡菌株的45.5%；MSSA36株，占54.5%。检出的MRSA菌株对实验用12种常用抗生素最多的可耐药11种，最少的耐3种；MSSA菌株最多的也耐7种，最少的对此12种抗生素无耐药现象。结果表明MRSA的多重耐药现象明显高于MSSA，我市MRSA的感染情况已不容忽视。MRSA感染后果严重，因此在实验室内区分MRSA和MSSA，及时向临床报告十分重要。鉴别MRSA常用实验方法中以琼脂筛选法敏感性最高[1]，方法亦简单，但是临床实验室不可能常备琼脂筛选平板用于此项检测，因此可选用苯唑青霉素纸片扩散法，只要经常保存几块高盐M-H琼脂，控制好温度、pH值等实验条件即可。我们在收集临床标本过程中发现，目前一些临床细菌室因为对MRSA的危害认识不够，以及该菌实验条件要另行设立等原因，仍未开展此项工作对此应引起高度重视。
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本研究中MRSA和MSSA产β-内酰胺酶的百分率无明显差异，绝大多数金葡菌都已是产酶株。结果表明金葡菌产β-内酰胺酶与金葡菌对苯唑青霉素耐药无关，因而临床分离的产β-内酰胺酶的MSSA菌株对耐酶青霉素类仍然敏感，可供选择的抗生素范围较之MRSA大的多。值得注意的是，MRSA在体外药敏试验时可表现对某些头孢菌素类抗生素敏感，本研究亦有此类结果，但临床经验表明用此类药物治疗MRSA无效。目前常规药敏方法尚无法测出此耐药表型，因而常出现假敏感现象，实验人员应该向临床医生解释清楚，不能选用此类药物治疗MRSA感染[1]。
责编：杨自革
作者简介：周娅(1953年～)，女，浙江籍，副教授，学士学位，从事中药抗感染及免疫药理专业。
参考文献
[1]李影林.中华医学检验全书(上卷)[M].北京：人民卫生出版社，1996.1251
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[2]陆永绥，陈秀枢，邢旺兴，等.六种β-内酰胺酶定性试验方法评价及其临床应用[J].中华医学检验杂志1993，16(6)：328～331
[3]Hackbarth CJ，Chambers HF.Methicillin-resistant staphylococci：genetics and mechanisms of resistance[J].Antimicrob Agents chemother，1989，33(7)：991～994
[4]戴自英.实用抗菌药物学[M].上海：上海科学技术出版社，1992.19～21
[5]马纪平，苏建荣，靳景图.耐甲氧苯青霉素葡萄球菌[J].中华医学检验杂志，1996，19(3)：186～188
(收稿：1999-09-07), 百拇医药