CD44v6在口腔鳞癌中的表达
作者：姚丽艳 张白凌 施作霖
单位：姚丽艳 张白凌(福建医科大学口腔系，福州 350004)；施作霖(福建省立医院 病理科，福州 350001)
关键词：口腔肿瘤；癌；鳞状细胞；金属蛋白酶类；抗原,CD44；免疫组织化学
福建医科大学学报000215
摘要:目的 观察细胞粘附分子CD44v6在口腔鳞癌中的表达，了解其与口腔鳞癌组织学分级、肿瘤浸润和转移的关系。方法 运用免疫组织化学SP法测定32例口腔鳞癌和6例正常口腔粘膜组织中CD44v6的表达。结果 CD44v6在正常口腔粘膜组织呈强阳性表达；癌组织中CD44v6的表达明显弱于正常组织，但高表达CD44v6的口腔鳞癌分化较差,易发生颈部淋巴结转移。结论 CD44v6的表达与口腔鳞癌的浸润、转移有关，但能否作为口腔鳞癌诊断和评估预后的标志物有待进一步的研究。
, 百拇医药
中图分类号:R739.802;R730.261 文献标识码:A
文章编号:1000-2235(2000)02-0141-03
Expression of CD44v6 in Oral Squamous Cell Carcinomas
YAO Li-yan,ZHANG Bai-ling
(Departmen of Stomatology,Fujian Medical University,Fuzhou 350004,China)
SHI Zuo-lin
(Departmemt of Pathology,Fujian Provincal Hospital,Fuzhou 350001,China)
, 百拇医药
ABSTRACT:Objective To detect the expression of CD44v6 in oral squamous cell carcinomas(OSCC).The significance of CD44v6 in the differentiation,invasion and metastasis of OSCC was also evaluated.Methods Thirty-two samples of OSCC and six biopsies of normal oral mucosa were detected by immunohistochemical technique(SP method).Results CD44v6 was strongly expressed in the normal oral mucosa and adjacent non-cancerous tissue.Carcinomas expressing higher levels of CD44v6 exhibited not only poorly differentiation but also more frequent regional lymph node metastasis.Conclusion The expression of CD44v6 is closely linked to invasion and metastasis of OSCC.It is necessary to evaluate further the role of CD44v6 in diagnosis and prognosis of the oral squamous cell carcinomas.
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KEY WORDS:mouth neoplasms；carcinoma,squamous cell；metalloprotein enzymes;antigen,CD44；immunohistochemistry
口腔癌是头颈部较常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率占常见恶性肿瘤的第六位，在头颈部肿瘤中居第二位[1]；而口腔癌中鳞癌占首位且近年来其发病率有增加趋势[2]。口腔鳞癌(oral squamous cell carcinomas)恶性度较高，特别是舌癌多浸润生长、易转移，颈淋巴结转移率为60%～80%[3]。已有的病理学手段难以全面、准确地反映口腔鳞癌的恶性程度、浸润及转移倾向，不能满意地指导临床选择制订有效的综合治疗方案。笔者于1999年5～10月选取新近发现的可能与肿瘤浸润、转移和预后有关的免疫组织化学指标CD44v6进行研究，以期了解其与口腔鳞癌的组织学分级、肿瘤浸润以及转移等生物学特性之间的相互关系。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 材料来源 选取福建省立医院病理科存档的32例口腔鳞癌根治性手术切除标本，其中舌癌23例，口底癌2例，颊癌2例，唇癌3例，牙龈癌2例。男性21例，女性11例，年龄54.1±12.9岁(27～80岁)。发病至就诊时间为2～7个月。手术标本均经福尔马林液固定，石蜡包埋，制备4 μm切片，苏木精-伊红染色和免疫组织化学染色，光学显微镜观察。所有标本均经病理检查证实为口腔鳞癌。另取整形手术切除的正常口腔粘膜组织6例作为对照。
病理组织学和TNM分类 所有病例均重新提取苏木精-伊红染色切片，按WHO分级方案进行分级，并参照UICC 1987年发布的唇和口腔癌的TNM分类标准[4]进行分期。
1.2 方法 第一抗体鼠抗人CD44v6单克隆抗体，单克隆抗体和SP试剂盒均购自福州迈新公司。染色步骤按说明书进行。用正常动物血清代替第一抗体作阴性对照，用已知阳性的乳腺癌、结肠癌标本作阳性对照。
, 百拇医药
结果判断 采用半定量的记录方法，按同一倍数视野内阳性瘤细胞所占比例分为四级，标准为：<1%为(-)；1%～25%为(+)；26%～50%为(++)；>50%为(+++)。
1.3 统计学处理 运用SPSS软件包进行统计学处理。相关分析采用非参数Spearman等级相关分析。
2 结 果
2.1 病理组织学和TNM分期见附表。
2.2 正常口腔粘膜组织、癌旁组织中CD44v6的表达 光镜下，在6例正常口腔粘膜组织和癌旁组织的粘膜上皮的基底层和棘层细胞的细胞膜上，CD44v6均呈强阳性表达并可见清晰完整的细胞轮廓，角化层或表层细胞及间质成分中未见CD44v6的阳性表达(图1)。
2.3 癌组织中CD44v6的表达 CD44v6在不同分化程度的癌细胞中阳性表达为87.5%(28/32)，呈异质性，与正常组织相比，其表达有不同程度减弱；Ⅰ级鳞癌中CD44v6多表达于癌巢外周细胞膜上，呈纤细线状、串珠样，部分标本中可见线状表达断裂现象；癌巢中央及周围间质细胞基本呈阴性表达(图2)。Ⅱ、Ⅲ级鳞癌标本中CD44v6阳性细胞弥散分布，阳性反应产物呈细小颗粒状分布于癌细胞的胞膜及其临近胞内外区域，少数标本并可见细胞质呈弱表达。分化较好的Ⅰ级鳞癌中，高表达的仅占5.6%(1/18)，而在分化较差的Ⅲ级鳞癌中，高表达的占50%(4/8)。
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附表 口腔鳞癌中的CD44V6的表达与临床病理指标的关系(n) 临床病理指标
n
CD44v6
-
+
++
+++
性别
男
21
2
7
9
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3
女
11
2
4
1
4
部位
舌
23
2
8
8
5
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非舌
9
2
3
2
2
病理分级
Ⅰ
18
2
9
6
1
Ⅱ
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6
1
1
2
2
Ⅲ
8
1
1
2
4
肿瘤大小
T1
9
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2
3
2
2
T2
8
1
1
3
3
T3
10
1
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6
2
1
T4
5
0
1
3
1
颈淋巴结转移
无
20
3
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9
6
2
有
12
1
2
4
5
pTNM分期
Ⅰ
9
2
3
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2
2
Ⅱ
4
0
1
2
1
Ⅲ
14
1
7
4
2
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Ⅳ
5
1
0
2
2
组间比较*:P<0.05.
3 讨 论
CD44是一组重要的分布极广的细胞膜表面跨膜糖蛋白粘附分子，属于细胞粘附分子(cell adhesion molescules)中的透明质酸受体类，主要参与细胞与细胞、细胞与基质之间的特异性粘连[5]。人类CD44基因位于11号染色体短臂上，可分为标准型CD44s和变异型CD44v，通过对CD44基因的选择剪切可得众多的同工型基因(CD44v1～CD44v10)[6]。CD44v通过与细胞外基质之间的相互作用，进而促进骨架系统、信息传递系统改变肿瘤细胞生物学行为，造成肿瘤的浸润和转移[7]。许多研究表明，在乳腺肿瘤、胃肠道肿瘤和卵巢肿瘤中,CD44v表达与肿瘤大小、分化程度、分期、淋巴结及远处转移、术后复发以及预后显著相关[8]。但也有研究表明,CD44v与肿瘤浸润和转移等生物学特性无关[9]。
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CD44的变异型异构体--CD44v6在口腔鳞癌中的作用目前尚无定论,大多数研究认为，鳞状上皮性肿瘤中CD44v6的表达与腺上皮性肿瘤不同，CD44v6在口腔鳞癌的发生、发展和转移过程中以下行调节方式表达[10，11]，口腔鳞癌中CD44v6的表达与病理分化程度呈反变关系[12]；但近来亦有研究表明，CD44v6的表达仅与颈淋巴结转移有关而与病理分化无关[11]，CD44v6与口腔鳞癌发生、分化及浸润转移等过程均无关[13]。
笔者的结果发现，CD44v6的表达与口腔鳞癌病理分级呈正变关系，且CD44v6高表达的口腔鳞癌还易发生淋巴结转移。笔者认为，CD44v6的表达具有肿瘤类型、器官和个体上的特异性。在口腔鳞癌的发生过程中，某些癌基因激活后可诱导CD44v6表达；同时，CD44v6作为细胞膜表面跨膜糖蛋白粘附分子，可通过其特有的信息传递和调节细胞和细胞、细胞和基质粘附作用等功能参与癌细胞去分化过程,促进肿瘤细胞浸润和转移。因此认为，CD44v6可能参与口腔鳞癌的发生发展并在肿瘤浸润、转移过程中起重要作用，但是否作为口腔鳞癌诊断和评估预后的标志物有待进一步的研究。
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图1 CD44V6在正常口腔粘膜组织，癌旁组织粘膜上的表达，细胞膜呈强阳性染色，细胞轮子廓清晰400
图2 口腔鳞状细胞CD44V6呈细颗粒状，细线状，定位于细胞膜和细胞质内，弱阳性表达。400
作者简介:姚丽艳(1964～),女，讲师.
参考文献:
[1]Parkin DM,Laara E,Muir CS.Estimates of the worldwide frequency of sixteen major cancers in 1980[J].Int J Cancer,1988,41:184.
[2]李树玲.头颈肿瘤学[M].天津:科学技术出版社,1993.487.
, 百拇医药
[3]李树玲.头颈部肿瘤诊断治疗及预后[M].天津:科学技术出版社,1983.205.
[4]郑麟蕃,张震康.实用口腔科学[M].北京:人民卫生出版社,1993.320.
[5]Stoolman LM.Adhesion molecules controlling lymphocyte migration[J].Cell,1989,56:907.
[6]Faussen AE，Schmger JA，Klein DJ，et al.A cell surface chondroitin surface proteoglycan immunologically related to CD44 is involved in type I collagen-mediated melanoma cell motility and invasion[J].J Cell Biol,1992,116:521～527.
, 百拇医药
[7]Underhill C.CD44:The hyaluron receptor[J].J Cell Sci,1992,103:293.
[8]Takeuchi K,Yamaguchi A,Urano T,et al.Expression of CD44 variant exons 8～10 in colorectal cancer and its relationship to metastasis[J].Jpn J Cancer Res,1995,86:292～297.
[9]Charpin C,Garcia S,Bouvier C,et al.Automated and guantitative immunocytochemical assays of Cd44v6 in breast carcinomas[J].Hum Pathol,1997,28:289～296.
[10]程 斌,陈小华,侯景辉.粘附分子CD44v6在口腔鳞癌组织中的表达[J].中山医科大学学报,1998,19:281～284.
, 百拇医药
[11]Kunishi M,Kayada Y,Yoshiga K,et al.Down-regulated expression of CD44 variant 6 in oral squamous cell carcinomas and its relationship to regional lymph node metastasis[J].Int J Oral Maxillofac Surg,1997,26:280～283.
[12]朱 虹,曾庆华,白淑清,等.CD44v6在口腔鳞状细胞癌中表达的意义[J].华西口腔医学杂志,1998,16:198～199.
[13]Van Hal NL,Van Dongen GA,Stigter-Van Walsum M,et al.Characterization of CD44v6 isoforms in head-and-neck squamous-cell carcinoma[J].Int J Cancer,1999,82:837～845.
收稿日期:2000-01-20, 百拇医药
单位：姚丽艳 张白凌(福建医科大学口腔系，福州 350004)；施作霖(福建省立医院 病理科，福州 350001)
关键词：口腔肿瘤；癌；鳞状细胞；金属蛋白酶类；抗原,CD44；免疫组织化学
福建医科大学学报000215
摘要:目的 观察细胞粘附分子CD44v6在口腔鳞癌中的表达，了解其与口腔鳞癌组织学分级、肿瘤浸润和转移的关系。方法 运用免疫组织化学SP法测定32例口腔鳞癌和6例正常口腔粘膜组织中CD44v6的表达。结果 CD44v6在正常口腔粘膜组织呈强阳性表达；癌组织中CD44v6的表达明显弱于正常组织，但高表达CD44v6的口腔鳞癌分化较差,易发生颈部淋巴结转移。结论 CD44v6的表达与口腔鳞癌的浸润、转移有关，但能否作为口腔鳞癌诊断和评估预后的标志物有待进一步的研究。
, 百拇医药
中图分类号:R739.802;R730.261 文献标识码:A
文章编号:1000-2235(2000)02-0141-03
Expression of CD44v6 in Oral Squamous Cell Carcinomas
YAO Li-yan,ZHANG Bai-ling
(Departmen of Stomatology,Fujian Medical University,Fuzhou 350004,China)
SHI Zuo-lin
(Departmemt of Pathology,Fujian Provincal Hospital,Fuzhou 350001,China)
, 百拇医药
ABSTRACT:Objective To detect the expression of CD44v6 in oral squamous cell carcinomas(OSCC).The significance of CD44v6 in the differentiation,invasion and metastasis of OSCC was also evaluated.Methods Thirty-two samples of OSCC and six biopsies of normal oral mucosa were detected by immunohistochemical technique(SP method).Results CD44v6 was strongly expressed in the normal oral mucosa and adjacent non-cancerous tissue.Carcinomas expressing higher levels of CD44v6 exhibited not only poorly differentiation but also more frequent regional lymph node metastasis.Conclusion The expression of CD44v6 is closely linked to invasion and metastasis of OSCC.It is necessary to evaluate further the role of CD44v6 in diagnosis and prognosis of the oral squamous cell carcinomas.
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KEY WORDS:mouth neoplasms；carcinoma,squamous cell；metalloprotein enzymes;antigen,CD44；immunohistochemistry
口腔癌是头颈部较常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率占常见恶性肿瘤的第六位，在头颈部肿瘤中居第二位[1]；而口腔癌中鳞癌占首位且近年来其发病率有增加趋势[2]。口腔鳞癌(oral squamous cell carcinomas)恶性度较高，特别是舌癌多浸润生长、易转移，颈淋巴结转移率为60%～80%[3]。已有的病理学手段难以全面、准确地反映口腔鳞癌的恶性程度、浸润及转移倾向，不能满意地指导临床选择制订有效的综合治疗方案。笔者于1999年5～10月选取新近发现的可能与肿瘤浸润、转移和预后有关的免疫组织化学指标CD44v6进行研究，以期了解其与口腔鳞癌的组织学分级、肿瘤浸润以及转移等生物学特性之间的相互关系。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 材料来源 选取福建省立医院病理科存档的32例口腔鳞癌根治性手术切除标本，其中舌癌23例，口底癌2例，颊癌2例，唇癌3例，牙龈癌2例。男性21例，女性11例，年龄54.1±12.9岁(27～80岁)。发病至就诊时间为2～7个月。手术标本均经福尔马林液固定，石蜡包埋，制备4 μm切片，苏木精-伊红染色和免疫组织化学染色，光学显微镜观察。所有标本均经病理检查证实为口腔鳞癌。另取整形手术切除的正常口腔粘膜组织6例作为对照。
病理组织学和TNM分类 所有病例均重新提取苏木精-伊红染色切片，按WHO分级方案进行分级，并参照UICC 1987年发布的唇和口腔癌的TNM分类标准[4]进行分期。
1.2 方法 第一抗体鼠抗人CD44v6单克隆抗体，单克隆抗体和SP试剂盒均购自福州迈新公司。染色步骤按说明书进行。用正常动物血清代替第一抗体作阴性对照，用已知阳性的乳腺癌、结肠癌标本作阳性对照。
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结果判断 采用半定量的记录方法，按同一倍数视野内阳性瘤细胞所占比例分为四级，标准为：<1%为(-)；1%～25%为(+)；26%～50%为(++)；>50%为(+++)。
1.3 统计学处理 运用SPSS软件包进行统计学处理。相关分析采用非参数Spearman等级相关分析。
2 结 果
2.1 病理组织学和TNM分期见附表。
2.2 正常口腔粘膜组织、癌旁组织中CD44v6的表达 光镜下，在6例正常口腔粘膜组织和癌旁组织的粘膜上皮的基底层和棘层细胞的细胞膜上，CD44v6均呈强阳性表达并可见清晰完整的细胞轮廓，角化层或表层细胞及间质成分中未见CD44v6的阳性表达(图1)。
2.3 癌组织中CD44v6的表达 CD44v6在不同分化程度的癌细胞中阳性表达为87.5%(28/32)，呈异质性，与正常组织相比，其表达有不同程度减弱；Ⅰ级鳞癌中CD44v6多表达于癌巢外周细胞膜上，呈纤细线状、串珠样，部分标本中可见线状表达断裂现象；癌巢中央及周围间质细胞基本呈阴性表达(图2)。Ⅱ、Ⅲ级鳞癌标本中CD44v6阳性细胞弥散分布，阳性反应产物呈细小颗粒状分布于癌细胞的胞膜及其临近胞内外区域，少数标本并可见细胞质呈弱表达。分化较好的Ⅰ级鳞癌中，高表达的仅占5.6%(1/18)，而在分化较差的Ⅲ级鳞癌中，高表达的占50%(4/8)。
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附表 口腔鳞癌中的CD44V6的表达与临床病理指标的关系(n) 临床病理指标
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CD44v6
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性别
男
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病理分级
Ⅰ
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肿瘤大小
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颈淋巴结转移
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pTNM分期
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Ⅳ
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组间比较*:P<0.05.
3 讨 论
CD44是一组重要的分布极广的细胞膜表面跨膜糖蛋白粘附分子，属于细胞粘附分子(cell adhesion molescules)中的透明质酸受体类，主要参与细胞与细胞、细胞与基质之间的特异性粘连[5]。人类CD44基因位于11号染色体短臂上，可分为标准型CD44s和变异型CD44v，通过对CD44基因的选择剪切可得众多的同工型基因(CD44v1～CD44v10)[6]。CD44v通过与细胞外基质之间的相互作用，进而促进骨架系统、信息传递系统改变肿瘤细胞生物学行为，造成肿瘤的浸润和转移[7]。许多研究表明，在乳腺肿瘤、胃肠道肿瘤和卵巢肿瘤中,CD44v表达与肿瘤大小、分化程度、分期、淋巴结及远处转移、术后复发以及预后显著相关[8]。但也有研究表明,CD44v与肿瘤浸润和转移等生物学特性无关[9]。
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CD44的变异型异构体--CD44v6在口腔鳞癌中的作用目前尚无定论,大多数研究认为，鳞状上皮性肿瘤中CD44v6的表达与腺上皮性肿瘤不同，CD44v6在口腔鳞癌的发生、发展和转移过程中以下行调节方式表达[10，11]，口腔鳞癌中CD44v6的表达与病理分化程度呈反变关系[12]；但近来亦有研究表明，CD44v6的表达仅与颈淋巴结转移有关而与病理分化无关[11]，CD44v6与口腔鳞癌发生、分化及浸润转移等过程均无关[13]。
笔者的结果发现，CD44v6的表达与口腔鳞癌病理分级呈正变关系，且CD44v6高表达的口腔鳞癌还易发生淋巴结转移。笔者认为，CD44v6的表达具有肿瘤类型、器官和个体上的特异性。在口腔鳞癌的发生过程中，某些癌基因激活后可诱导CD44v6表达；同时，CD44v6作为细胞膜表面跨膜糖蛋白粘附分子，可通过其特有的信息传递和调节细胞和细胞、细胞和基质粘附作用等功能参与癌细胞去分化过程,促进肿瘤细胞浸润和转移。因此认为，CD44v6可能参与口腔鳞癌的发生发展并在肿瘤浸润、转移过程中起重要作用，但是否作为口腔鳞癌诊断和评估预后的标志物有待进一步的研究。
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图1 CD44V6在正常口腔粘膜组织，癌旁组织粘膜上的表达，细胞膜呈强阳性染色，细胞轮子廓清晰400
图2 口腔鳞状细胞CD44V6呈细颗粒状，细线状，定位于细胞膜和细胞质内，弱阳性表达。400
作者简介:姚丽艳(1964～),女，讲师.
参考文献:
[1]Parkin DM,Laara E,Muir CS.Estimates of the worldwide frequency of sixteen major cancers in 1980[J].Int J Cancer,1988,41:184.
[2]李树玲.头颈肿瘤学[M].天津:科学技术出版社,1993.487.
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[3]李树玲.头颈部肿瘤诊断治疗及预后[M].天津:科学技术出版社,1983.205.
[4]郑麟蕃,张震康.实用口腔科学[M].北京:人民卫生出版社,1993.320.
[5]Stoolman LM.Adhesion molecules controlling lymphocyte migration[J].Cell,1989,56:907.
[6]Faussen AE，Schmger JA，Klein DJ，et al.A cell surface chondroitin surface proteoglycan immunologically related to CD44 is involved in type I collagen-mediated melanoma cell motility and invasion[J].J Cell Biol,1992,116:521～527.
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[8]Takeuchi K,Yamaguchi A,Urano T,et al.Expression of CD44 variant exons 8～10 in colorectal cancer and its relationship to metastasis[J].Jpn J Cancer Res,1995,86:292～297.
[9]Charpin C,Garcia S,Bouvier C,et al.Automated and guantitative immunocytochemical assays of Cd44v6 in breast carcinomas[J].Hum Pathol,1997,28:289～296.
[10]程 斌,陈小华,侯景辉.粘附分子CD44v6在口腔鳞癌组织中的表达[J].中山医科大学学报,1998,19:281～284.
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[11]Kunishi M,Kayada Y,Yoshiga K,et al.Down-regulated expression of CD44 variant 6 in oral squamous cell carcinomas and its relationship to regional lymph node metastasis[J].Int J Oral Maxillofac Surg,1997,26:280～283.
[12]朱 虹,曾庆华,白淑清,等.CD44v6在口腔鳞状细胞癌中表达的意义[J].华西口腔医学杂志,1998,16:198～199.
[13]Van Hal NL,Van Dongen GA,Stigter-Van Walsum M,et al.Characterization of CD44v6 isoforms in head-and-neck squamous-cell carcinoma[J].Int J Cancer,1999,82:837～845.
收稿日期:2000-01-20, 百拇医药