CyclinD1、p53在胸腺瘤中表达及预后的意义
作者：许励 徐文娟 赵仲生
单位：许励(浙江省人民医院病理科 杭州 310014)；徐文娟(浙江省人民医院病理科 杭州 310014)；赵仲生(浙江省人民医院病理科 杭州 310014)
关键词：胸腺瘤；细胞周期素；p53蛋白；癌基因
CyclinD1 〔摘要〕 目的 检测CyclinD1、p53蛋白在胸腺瘤中表达及意义。方法 应用免疫组织化学方法(S-P)法，对54例胸腺瘤标本进行CyclinD1、p53蛋白的检则。结果 在三组胸腺瘤中CyclinD1、p53蛋白阳性表达分别为5/18(27.78%)、13/20(65.00%)、14/16(87.50%)(P<0.01)；6/18(33.33%)、15/20(75.00%)、13/16(81.25%)，(P<0.05)。CyclinD1、p53蛋白阳性表达与胸腺瘤的类型、临床分期、淋巴结转移、生存率等参数密切相关。结论 CyclinD1、p53参与胸腺瘤细胞的增殖并影响其分化，可作为评价胸腺瘤恶性程度及预后的有效指标。
, 百拇医药
〔中图分类号〕 R736.3 〔文献标识码〕A
细胞周期蛋白CyclinD1、突变型p53均为癌基因，且与肿瘤的发生、发展密切相关。二者在细胞周期G1期调控起着重要作用。目前，研究发现CyclinD1在喉癌中扩增2～12倍[1]，并参与肿瘤浸润，淋巴结转移。CyclinD1异常表达与癌细胞的组织学分级与预后有关[2]，本研究采用免疫组织化学S-P法进行分析，探讨CyclinD1、p53蛋白在54例胸腺瘤中表达与瘤细胞分化程度、临床分期、淋巴结转移及预后关系。
材料和方法
一、材料 选自我科1989～1998年经病理检查证实为胸腺瘤的标本54例，按Levine[3]的标准进行分类，良性胸腺瘤18例，浸润性胸腺瘤20例，胸腺癌16例，按Masaoka[4]标准分为Ⅰ期18例：肿瘤包膜完整，无包膜及包膜外浸润；Ⅱ期10例：浸润包膜或纵隔内脂肪组织浸润；Ⅲ期6例：肿瘤浸润胸腺周围脏器(包括大血管和肺)；Ⅳ期20例：胸膜或心包种植，淋巴、血道转移。54例病人全部随访。
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二、方法 应用免疫组织化学S-P法，鼠抗人单克隆抗体CyclinD1中山试剂公司提供。p53蛋白鼠抗人单克隆抗体由美国ZYMED公司产品；S-P试剂购置福州迈新公司。抗体稀释度分别为1∶100；1∶80。CyclinD1切片用(pH6.0)枸橼酸缓冲液经微波(高压锅抗原修复处理)，二者均用已知肺癌阳性切片做阳性对照，阴性对照一抗用PBS取代。常规S-P技术操作，DAB染色。
三、阳性结果判定CyclinD1、p53定位于细胞核，呈棕色细颗粒状，根据阳性肿瘤细胞所占全部细胞的比例，分为：阴性(-)无阳性细胞反应；(+)阳性细胞≤25%；(++)阳性细胞在26～75%之间；(+++)阳性细胞≥76%。
四、统计学处理采用χ2检验。
结果
一、CyclinD1的表达与胸腺瘤各参数的关系 CyclinD1定位于细胞核。在正常胸腺及6例增生的胸腺组织中CyclinD1为阴性。在三组胸腺瘤中阳性表达呈递增趋势见附表，差异有显著性P<0.01。浸润性胸腺瘤及胸腺癌中阳性细胞增多且阳性强度增加，呈深棕色细颗粒状见图1，侵入包膜内瘤细胞呈强阳性表达。CyclinD1在临床Ⅰ期呈低表达，在Ⅱ-Ⅳ期病例中阳性表达率逐渐增高且阳性强度也明显增加。有淋巴结转移病例中呈高表达，无淋巴结转移病例中为低表达P<0.05。随着临床分期的增加淋巴结转移率增高，CyclinD1阳性表达亦增加。
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附表 CyclinD1、p53蛋白与胸腺瘤各参数的关系
组别
例数
CyclinD1
p53
+
阳性率(%)
+
阳性率(%)
(P<0.01)
P<0.05)
良性胸腺瘤
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18
5
27.78
6
33.33
恶性胸腺瘤
20
13
65.00
15
75.00
胸腺癌
16
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14
87.50
13
81.25
临床分期
*与**(P<0.01)
Ⅰ期*
18
5
27.78
6
33.33
Ⅱ期**
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10
4
40.00
6
60.00
Ⅲ期**
6
5
83.33
5
83.33
Ⅳ期**
20
, 百拇医药
18
90.00
17
85.00
淋巴结转移
(P<0.05)
有转移
16
14
87.50
13
81.25
无转移
, 百拇医药
38
18
47.36
21
55.26
图1 胸腺鳞状细胞癌Cyclin D1强阳性×120
二、p53蛋白的表达与胸腺瘤各参数的关系 在正常胸腺及6例增生的胸腺组织中p53蛋白为阴性，在良性胸腺瘤中阳性表达率低，阳性细胞弥散，浸润性胸腺瘤中阳性表达增加但低于胸腺癌，阳性强度较前者明显增加。胸腺癌中阳性率显著增加，且呈强阳性反应见图2。三组之间差异有显著性P<0.05。随着肿瘤细胞的分化程度的降低p53蛋白阳性表达增加；p53蛋白在临床Ⅰ期中呈低表达，在Ⅱ-Ⅳ期阳性表达逐渐增加P<0.05，但在Ⅲ-Ⅳ期中差异不明显。p53蛋白在有淋巴结转移病例中高表达，无淋巴结转移病例中低表达(P<0.05)。p53蛋白阳性表达的病例淋巴结转移机率高于阴性病例。
, 百拇医药
图2 胸腺鳞状细胞癌p53蛋白强阳性×120
三、CyclinD1和p53在胸腺瘤中表达与预后的关系CyclinD1和p53在良性胸腺瘤中均为低表达，二者共同表达率为3/18(16.67%)，1年、5年生存率均为100%，失访3例。在恶性胸腺瘤中二者共同表达率为11/20(55.00%)，1年生存率为100%，5年生存率13/19(68.42%)，失访1例。胸腺癌中二者共同表达率为11/16(68.75%)，1年生存率13/16(81/25%)，5年生存率4/16(25%)。三组相比，差异有显著性(P<0.01)。随着CyclinD1、p53共同表达率增高生存率明显下降，在胸腺癌中尤为明显。CyclinD1与p53相比CyclinD1阳性率高预后差。
讨论
CyclinD1参与细胞周期调控，被视为一种癌基因，它可介导与CDK4结合，并通过调节其活性发挥作用，细胞周期素中最主要的限制点之一G1-S期的限制点，由G1期周期蛋白(C，D1-D3，E)复合物调控[2]，当G-S期限制点失控，常因CyclinD1过表达或负性调节因素的丧失，如CyclinD1-CDK抑制因子的缺失均会导致肿瘤的发生。本结果显示CyclinD1过表达与肿瘤的组织学分类、分化程度有关，这与文献报道一致。在恶性胸腺瘤和胸腺癌中CyclinD1阳性表达率高，且呈强阳性表达，强阳性细胞常分布于癌巢周边及浸润包膜内，表明了这种细胞具有较强的侵袭能力。在临床Ⅱ-Ⅳ病例中CyclinD1阳性表达明显高于临床Ⅰ期，提示CyclinD1的过表达与胸腺瘤的恶性程度和侵袭能力呈正相关。
, 百拇医药
野生型p53基因在维持细胞正常生长，抑制恶性增殖过程中起重要作用，被认为是目前人类肿瘤中最常变化的肿瘤基因，参与细胞周期的调控，作为细胞生长的“监护器”，在细胞受到某种刺激而发生DNA损伤时，能使细胞分裂终止在G1/S，使细胞有足够的时间修复，而恢复正常状态。突变型p53蛋白失去正常的抑癌功能，并可促进细胞的异常增殖和癌变。文献报道乳腺癌中p53蛋白过表达的肿瘤与病理分期密切相关，其肿瘤复发间期短，病人生存率低。本文结论也支持此观点，在三组胸腺瘤中随着分化程度的降低，p53蛋白的阳性表达增强。在临床Ⅱ-Ⅳ期中p53蛋白表达明显高于Ⅰ期，提示突变型p53蛋白参与瘤细胞的增殖，与恶性分化与临床分期呈正相关。
最近分离出的WAF1基因，编码为p21，是一列在G1/S起活性作用的细胞周期蛋白CyclinD1依赖激酶的抑制剂，可抑制CDK4的活性，因此，野生型p53是通过活化WAF1基因的转录，而抑制细胞周期过程，p53基因突变后不仅失去这一功能，而且诱导CyclinD1过表达。因而，CyclinD1和p53蛋白作为细胞周期调节因子，在细胞周期中均起着重要作用，细胞的分裂及增殖与癌基因的含量有关。本实验结果显示；CyclinD1和p53蛋白共同表达的细胞分化差，阳性强度高，且位于包膜内及淋巴结转移灶中，临床分期为Ⅱ-Ⅳ期，说明二者参与细胞的癌变，并在恶性程度高的瘤细胞中含量增高，二者具有协同作用。随访资料表明，良性胸腺瘤5年生存率100%。恶性胸腺瘤5年生存68.42%，胸腺癌5年生存率25%。在三组中CyclinD1和p53蛋白共同表达随着生存率的降低而增加。在淋巴结转移病例中CyclinD1和p53蛋白阳性表达增高且为强阳性。表明CyclinD1、p53蛋白的阳性表达与病人的预后密切相关，而病人生存率的高低取决于肿瘤细胞的恶性程度和浸润转移的范围。本组结果进一步表明，在胸腺瘤的发生、发展中伴有多种癌基因的变化，而各种基因的变化在不同分化程度的肿瘤中的表达各不相同。因此，多项基因同步表达的检测对胸腺瘤的恶性程度和预后判断是有意义的。
, 百拇医药
作者简介：许励(1957-)，女，武汉人，学士，副主任医师。从事肿瘤病理专业。
参考文献
1，Hortwell LH,Kastan MB.Call cycle contorl and Cancer.Science,1994;266(5192):1821-1828
2，胡云，辛晓燕，陈兵.Cyclin D1与肿瘤.国外医学遗传学分册，1999；22(1)：30-32
3，Levine GD,Rosai J.Thymic hyperplasia and neoplasia:a review of current concepts.Hum Pathol,1978;9:495-512
4，Masaoka A,Monden Y,Nakahara K,et al.Follow-up study of thymomas with special reference to their clinical stages.Cancer,1981;48:2485-2492
, 百拇医药
5，Levine AJ,Momand J,Fincay,CA.The p53 tumor suppressor gene.Nature,1991;351:453-456
6，Tateyama H,Eimoto T,Tada T,et al.p53 protein expression and p53 gene mutation in thymic epithelial tumors.An immunohistochemical and DNA sequencing study.Am J Clin Pathol,1995;104:375-381
7，Hirabayashi H,Fujii Y,Sakaguchi M,et al.p16INK4,pRB,p53 and Cyclin D1 expression and hypermethylation of CDKN2 gene in thymoma and thymic carcinoma.Int J Cancer,1997;73:639-644
8，Weirich G,Schneider P,Fellbaum C,et al.p53 alterations in thymic epithelial tumours.Virchows Arch,1997;431:17-23
9，林冬梅，吕宁，冯晓莉等.恶性胸腺瘤的临床病理特点.中华肿瘤杂志，1999；21(2)：136-138
收稿日期：1999-7-18, http://www.100md.com
单位：许励(浙江省人民医院病理科 杭州 310014)；徐文娟(浙江省人民医院病理科 杭州 310014)；赵仲生(浙江省人民医院病理科 杭州 310014)
关键词：胸腺瘤；细胞周期素；p53蛋白；癌基因
CyclinD1 〔摘要〕 目的 检测CyclinD1、p53蛋白在胸腺瘤中表达及意义。方法 应用免疫组织化学方法(S-P)法，对54例胸腺瘤标本进行CyclinD1、p53蛋白的检则。结果 在三组胸腺瘤中CyclinD1、p53蛋白阳性表达分别为5/18(27.78%)、13/20(65.00%)、14/16(87.50%)(P<0.01)；6/18(33.33%)、15/20(75.00%)、13/16(81.25%)，(P<0.05)。CyclinD1、p53蛋白阳性表达与胸腺瘤的类型、临床分期、淋巴结转移、生存率等参数密切相关。结论 CyclinD1、p53参与胸腺瘤细胞的增殖并影响其分化，可作为评价胸腺瘤恶性程度及预后的有效指标。
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〔中图分类号〕 R736.3 〔文献标识码〕A
细胞周期蛋白CyclinD1、突变型p53均为癌基因，且与肿瘤的发生、发展密切相关。二者在细胞周期G1期调控起着重要作用。目前，研究发现CyclinD1在喉癌中扩增2～12倍[1]，并参与肿瘤浸润，淋巴结转移。CyclinD1异常表达与癌细胞的组织学分级与预后有关[2]，本研究采用免疫组织化学S-P法进行分析，探讨CyclinD1、p53蛋白在54例胸腺瘤中表达与瘤细胞分化程度、临床分期、淋巴结转移及预后关系。
材料和方法
一、材料 选自我科1989～1998年经病理检查证实为胸腺瘤的标本54例，按Levine[3]的标准进行分类，良性胸腺瘤18例，浸润性胸腺瘤20例，胸腺癌16例，按Masaoka[4]标准分为Ⅰ期18例：肿瘤包膜完整，无包膜及包膜外浸润；Ⅱ期10例：浸润包膜或纵隔内脂肪组织浸润；Ⅲ期6例：肿瘤浸润胸腺周围脏器(包括大血管和肺)；Ⅳ期20例：胸膜或心包种植，淋巴、血道转移。54例病人全部随访。
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二、方法 应用免疫组织化学S-P法，鼠抗人单克隆抗体CyclinD1中山试剂公司提供。p53蛋白鼠抗人单克隆抗体由美国ZYMED公司产品；S-P试剂购置福州迈新公司。抗体稀释度分别为1∶100；1∶80。CyclinD1切片用(pH6.0)枸橼酸缓冲液经微波(高压锅抗原修复处理)，二者均用已知肺癌阳性切片做阳性对照，阴性对照一抗用PBS取代。常规S-P技术操作，DAB染色。
三、阳性结果判定CyclinD1、p53定位于细胞核，呈棕色细颗粒状，根据阳性肿瘤细胞所占全部细胞的比例，分为：阴性(-)无阳性细胞反应；(+)阳性细胞≤25%；(++)阳性细胞在26～75%之间；(+++)阳性细胞≥76%。
四、统计学处理采用χ2检验。
结果
一、CyclinD1的表达与胸腺瘤各参数的关系 CyclinD1定位于细胞核。在正常胸腺及6例增生的胸腺组织中CyclinD1为阴性。在三组胸腺瘤中阳性表达呈递增趋势见附表，差异有显著性P<0.01。浸润性胸腺瘤及胸腺癌中阳性细胞增多且阳性强度增加，呈深棕色细颗粒状见图1，侵入包膜内瘤细胞呈强阳性表达。CyclinD1在临床Ⅰ期呈低表达，在Ⅱ-Ⅳ期病例中阳性表达率逐渐增高且阳性强度也明显增加。有淋巴结转移病例中呈高表达，无淋巴结转移病例中为低表达P<0.05。随着临床分期的增加淋巴结转移率增高，CyclinD1阳性表达亦增加。
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附表 CyclinD1、p53蛋白与胸腺瘤各参数的关系
组别
例数
CyclinD1
p53
+
阳性率(%)
+
阳性率(%)
(P<0.01)
P<0.05)
良性胸腺瘤
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18
5
27.78
6
33.33
恶性胸腺瘤
20
13
65.00
15
75.00
胸腺癌
16
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14
87.50
13
81.25
临床分期
*与**(P<0.01)
Ⅰ期*
18
5
27.78
6
33.33
Ⅱ期**
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10
4
40.00
6
60.00
Ⅲ期**
6
5
83.33
5
83.33
Ⅳ期**
20
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18
90.00
17
85.00
淋巴结转移
(P<0.05)
有转移
16
14
87.50
13
81.25
无转移
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38
18
47.36
21
55.26
图1 胸腺鳞状细胞癌Cyclin D1强阳性×120
二、p53蛋白的表达与胸腺瘤各参数的关系 在正常胸腺及6例增生的胸腺组织中p53蛋白为阴性，在良性胸腺瘤中阳性表达率低，阳性细胞弥散，浸润性胸腺瘤中阳性表达增加但低于胸腺癌，阳性强度较前者明显增加。胸腺癌中阳性率显著增加，且呈强阳性反应见图2。三组之间差异有显著性P<0.05。随着肿瘤细胞的分化程度的降低p53蛋白阳性表达增加；p53蛋白在临床Ⅰ期中呈低表达，在Ⅱ-Ⅳ期阳性表达逐渐增加P<0.05，但在Ⅲ-Ⅳ期中差异不明显。p53蛋白在有淋巴结转移病例中高表达，无淋巴结转移病例中低表达(P<0.05)。p53蛋白阳性表达的病例淋巴结转移机率高于阴性病例。
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三、CyclinD1和p53在胸腺瘤中表达与预后的关系CyclinD1和p53在良性胸腺瘤中均为低表达，二者共同表达率为3/18(16.67%)，1年、5年生存率均为100%，失访3例。在恶性胸腺瘤中二者共同表达率为11/20(55.00%)，1年生存率为100%，5年生存率13/19(68.42%)，失访1例。胸腺癌中二者共同表达率为11/16(68.75%)，1年生存率13/16(81/25%)，5年生存率4/16(25%)。三组相比，差异有显著性(P<0.01)。随着CyclinD1、p53共同表达率增高生存率明显下降，在胸腺癌中尤为明显。CyclinD1与p53相比CyclinD1阳性率高预后差。
讨论
CyclinD1参与细胞周期调控，被视为一种癌基因，它可介导与CDK4结合，并通过调节其活性发挥作用，细胞周期素中最主要的限制点之一G1-S期的限制点，由G1期周期蛋白(C，D1-D3，E)复合物调控[2]，当G-S期限制点失控，常因CyclinD1过表达或负性调节因素的丧失，如CyclinD1-CDK抑制因子的缺失均会导致肿瘤的发生。本结果显示CyclinD1过表达与肿瘤的组织学分类、分化程度有关，这与文献报道一致。在恶性胸腺瘤和胸腺癌中CyclinD1阳性表达率高，且呈强阳性表达，强阳性细胞常分布于癌巢周边及浸润包膜内，表明了这种细胞具有较强的侵袭能力。在临床Ⅱ-Ⅳ病例中CyclinD1阳性表达明显高于临床Ⅰ期，提示CyclinD1的过表达与胸腺瘤的恶性程度和侵袭能力呈正相关。
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野生型p53基因在维持细胞正常生长，抑制恶性增殖过程中起重要作用，被认为是目前人类肿瘤中最常变化的肿瘤基因，参与细胞周期的调控，作为细胞生长的“监护器”，在细胞受到某种刺激而发生DNA损伤时，能使细胞分裂终止在G1/S，使细胞有足够的时间修复，而恢复正常状态。突变型p53蛋白失去正常的抑癌功能，并可促进细胞的异常增殖和癌变。文献报道乳腺癌中p53蛋白过表达的肿瘤与病理分期密切相关，其肿瘤复发间期短，病人生存率低。本文结论也支持此观点，在三组胸腺瘤中随着分化程度的降低，p53蛋白的阳性表达增强。在临床Ⅱ-Ⅳ期中p53蛋白表达明显高于Ⅰ期，提示突变型p53蛋白参与瘤细胞的增殖，与恶性分化与临床分期呈正相关。
最近分离出的WAF1基因，编码为p21，是一列在G1/S起活性作用的细胞周期蛋白CyclinD1依赖激酶的抑制剂，可抑制CDK4的活性，因此，野生型p53是通过活化WAF1基因的转录，而抑制细胞周期过程，p53基因突变后不仅失去这一功能，而且诱导CyclinD1过表达。因而，CyclinD1和p53蛋白作为细胞周期调节因子，在细胞周期中均起着重要作用，细胞的分裂及增殖与癌基因的含量有关。本实验结果显示；CyclinD1和p53蛋白共同表达的细胞分化差，阳性强度高，且位于包膜内及淋巴结转移灶中，临床分期为Ⅱ-Ⅳ期，说明二者参与细胞的癌变，并在恶性程度高的瘤细胞中含量增高，二者具有协同作用。随访资料表明，良性胸腺瘤5年生存率100%。恶性胸腺瘤5年生存68.42%，胸腺癌5年生存率25%。在三组中CyclinD1和p53蛋白共同表达随着生存率的降低而增加。在淋巴结转移病例中CyclinD1和p53蛋白阳性表达增高且为强阳性。表明CyclinD1、p53蛋白的阳性表达与病人的预后密切相关，而病人生存率的高低取决于肿瘤细胞的恶性程度和浸润转移的范围。本组结果进一步表明，在胸腺瘤的发生、发展中伴有多种癌基因的变化，而各种基因的变化在不同分化程度的肿瘤中的表达各不相同。因此，多项基因同步表达的检测对胸腺瘤的恶性程度和预后判断是有意义的。
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作者简介：许励(1957-)，女，武汉人，学士，副主任医师。从事肿瘤病理专业。
参考文献
1，Hortwell LH,Kastan MB.Call cycle contorl and Cancer.Science,1994;266(5192):1821-1828
2，胡云，辛晓燕，陈兵.Cyclin D1与肿瘤.国外医学遗传学分册，1999；22(1)：30-32
3，Levine GD,Rosai J.Thymic hyperplasia and neoplasia:a review of current concepts.Hum Pathol,1978;9:495-512
4，Masaoka A,Monden Y,Nakahara K,et al.Follow-up study of thymomas with special reference to their clinical stages.Cancer,1981;48:2485-2492
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5，Levine AJ,Momand J,Fincay,CA.The p53 tumor suppressor gene.Nature,1991;351:453-456
6，Tateyama H,Eimoto T,Tada T,et al.p53 protein expression and p53 gene mutation in thymic epithelial tumors.An immunohistochemical and DNA sequencing study.Am J Clin Pathol,1995;104:375-381
7，Hirabayashi H,Fujii Y,Sakaguchi M,et al.p16INK4,pRB,p53 and Cyclin D1 expression and hypermethylation of CDKN2 gene in thymoma and thymic carcinoma.Int J Cancer,1997;73:639-644
8，Weirich G,Schneider P,Fellbaum C,et al.p53 alterations in thymic epithelial tumours.Virchows Arch,1997;431:17-23
9，林冬梅，吕宁，冯晓莉等.恶性胸腺瘤的临床病理特点.中华肿瘤杂志，1999；21(2)：136-138
收稿日期：1999-7-18, http://www.100md.com