胃癌组织若干癌相关基因的表达与淋巴转移的关系
作者：王耕 杨道华 孙勤 代全武 惠震 陈立新 易建华 朱礼国
单位：王耕(郧阳医学院附属太和医院普外科、病理科 湖北 十堰 442000)；杨道华(郧阳医学院附属太和医院普外科、病理科 湖北 十堰 442000)；孙勤(郧阳医学院附属太和医院普外科、病理科 湖北 十堰 442000)；代全武(郧阳医学院附属太和医院普外科、病理科 湖北 十堰 442000)；惠震(郧阳医学院附属太和医院普外科、病理科 湖北 十堰 442000)
关键词：胃癌；淋巴转移；基因表达
胃癌组织若干癌相关基因的表达与淋巴转移的关系 〔摘要〕 目的 以癌组织中CD44v6、nm23/NDPK、p53蛋白、ras/p21及PCNA的表达水平与胃癌淋巴转移的相关性，探讨预测胃癌淋巴转移的分子生物学新方法。方法 采用免疫组织化学S-P法，检测41例胃癌手术标本的癌组织、癌旁组织及转移淋巴结CD44v6、nm23/NDPK、p53蛋白、ras/p21及PCNA的表达情况，分析其与胃癌淋巴转移的相关性。结果 CD44v6、p53、ras/p21及PCNA与胃癌淋巴转移呈正相关，nm23/NDPK与胃癌淋巴转移呈负相关。当如上述任三种结果同时出现时，对预测胃癌淋巴转移的灵敏性为96.77%，特异性为70%。结论 癌组织中CD44v6、nm23/NDPK、p53蛋白、ras/p21及PCNA的表达水平与淋巴转移密切相关，联合检测如上指标有望成为预测胃癌淋巴转移的又一有价值的分子生物学手段。
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〔中图分类号〕 R735.2；R73-37 〔文献标识码〕B
The corelation between lymph node metastasis and the expression of cancer associated genes in tissues of stomach cancer.
WANG geng， YANG Dao-hua, Sun Qin, et al.
(Department of surgery,Taihe hospital,yunYang Medical College,Shiyan 442000)
〔Abstract〕 Objective To explore a novel molecular method to predict metastasis through the relationship between lymph node metastasis and expression of some cancer associated genes in gastric carcinoma.Methods 41 paraffin-embedded specimens of gastric carcinoma were studied,10 out of 41 cases had lymph node metastasis(LNM) in surgery.The expressions of CD44v6,nm23/NDPK,p53,ras/p21,and PCNA were examined with S-P immunohistochemical technique and correlated to the incidence of LNM.Results The LNM of gastric cancer was positively correlated with the level of expressions of CD44v6,p53,ras/p21,and PCNA,but negatively correlated with that of nm23 expression.The sensitivity and the specificity for predicting LNM with this method was 96.77%,and 70% respectively when any three co-indexes of them were observed.Conclusions The expressing level of CD44v6,nm23/NDPK,p53,ras/p21,and PCNA correlated with LNM of gastric cancer in different manner.The result of coexamination of them might be useful to predict LNM of the gastric cancer.
, 百拇医药
〔Key words〕 gastric/neoplasm;lymphatic metastasis;gene expression;immunohisto-chemistry
淋巴转移(LNM)是胃癌治疗失败的主要原因之一。手术中外科医师对LNM的判断仅靠“临床经验”，使胃癌的“根治性切除”具有一定的盲目性和不确定性。因此，如何在术前正确预测胃癌淋巴转移的范围，制定合理手术方式及切除范围，已成为胃癌研究的重要课题之一。本研究对41例胃癌手术标本进行CD44v6、nm23/NDPK、p53蛋白、ras/p21及PCNA的联合检测，探讨其与胃癌淋巴转移间的关系，寻求术前预测胃癌淋巴转移的方法，进一步指导临床实践。
材料与方法
41例胃癌手术标本选自本院外科1994～1996年的手术患者。男性31例，女性10例，年龄30～70岁，中位年龄50.39±12.25岁。病理类型：乳头状腺癌3例，管状腺癌23例，粘液腺癌6例，粘液细胞癌9例；其中高分化者6例，中分化者12例，低分化者23例。根据1989年国际UICC的TNM分期标准，Ⅰ、Ⅱ期13例，Ⅲ、Ⅳ期28例。
, 百拇医药
染色方法：标本经10%福尔马林固定、石蜡包埋，行层厚为4μm的连续切片后，采用S-P法免疫组织化学染色，按试剂盒说明书提供方法操作。抗原修复采用微波修复法。PBS缓冲液代替第一抗体做阴性对照。所有试剂均购自福州迈新公司。
判断标准 参照文献[1，2，3]，染色阳性细胞均呈棕黄色颗粒，连续观察6～8个高倍镜视野。CD44v6主要集中在细胞膜上，阳性率大于20%定为CD44v6染色阳性。nm23产物NDPK定位在胞浆，阳性率>20%定为nm23/NDPK染色阳性。p53蛋白定位于细胞核，阳性率>10%为p53阳性染色。ras产物p21主要定位在胞浆，部分可见于胞核，阳性率>10%为ras/p21染色阳性。PCNA定位于细胞核，阳性率>10%为PCNA染色阳性。
统计学处理 率的比较及相关性分析采用
检验，检测水准0.05。
, 百拇医药
结果
本研究所选五种指标(CD44v6、nm23/NDPK、p53、ras/p21及PCNA)预测胃癌淋巴转移情况时，单指标的灵敏性均较低，特异性均较差。但其中任三种指标联合出现时，对预测胃癌LNM的灵敏性及特异性可分别达96.77%和70%。详见表1、2、3。
表1 31例胃癌、LNM灶及癌旁组织中CD44v6、nm23/NDPK、p53蛋白、ras/p21及PCNA的表达(%)
项目
CD44v6
nm23/NDPK
p53蛋白
ras/p21
, http://www.100md.com
PCNA
癌
64*
29*
80*
64*
80*
癌旁
3
64
0
16
, http://www.100md.com
19
LNM
54*
16*
67*
61*
61*
*P<0.01 表2 癌组织CD44v6、nm23/NDPK、p53、ras/p21
及PCNA的表达与临床病理学的关系(%)
项目
, 百拇医药
n
CD44v6
nm23/NDPK
p53蛋白
ras/p21
PCNA
LNM+
31*
65*
29*
80*
70*
, http://www.100md.com
80*
LNM-
10
20
70
40
30
30
有浆膜累及
29*
66*
33*
, http://www.100md.com
82*
65
68
无浆膜累及
12
25
41
42
50
67
Ⅰ，Ⅱ期
13
62
, 百拇医药
46
69
61
62
Ⅲ，Ⅳ期
28
50
36
71
61
71
*P<0.01 表3 相关指标预测胃癌淋巴转移的灵敏性与特异性
项目
, 百拇医药
LNM+
(N=31)
LNM-
(N=10)
灵敏性(%)
特异性(%)
CD44v6
20
2
65
80
nm23/NDPK
22
, 百拇医药
3
71
70
p53蛋白+
25
4
81
60
ras/p21+
22
3
71
70
, http://www.100md.com PCNA+
25
3
81
70
任二者
30
8
97
20
任三者
30
3
97
, 百拇医药
70
任四者
18
2
58
80
全部同时
1
0
10
100
讨论
人CD44分子基因位于第11号染色体短臂上，其基因编码产物是一种跨膜糖蛋白，是细胞粘附分子之一。可分两大类：一类主要在间质和造血细胞中表达，为透明质酸盐的主要受体，称标准型CD44(CD44s)；另一类主要在上皮性细胞和肿瘤细胞上表达，称变异型CD44(CD44v)。大量实验研究表明，CD44不仅在淋巴细胞功能及细胞间质的相互作用中，而且在肿瘤生长与转移过程中起重要作用[4]。这可能与作为透明质酸受体的CD44分子作用于细胞外基质，调节了肿瘤细胞的运动与形态有关。CD44v6是含外显子6的变异体。本研究显示，CD44v6在胃癌组织及LNM中表达均高于癌旁组织(P<0.005)，且有淋巴转移者明显高于无淋巴转移者(P<0.025)。提示CD44v6与胃癌的淋巴转移密切相关。
, 百拇医药
nm23是位于人第17号染色体的肿瘤抑制基因，其表达产物能促使微管聚合，改变细胞的粘附能力和迁移能力。一般认为，nm23低表达与多种恶性肿瘤的侵袭与转移密切相关[5]。本研究发现，与癌旁组织相比nm23在癌与转移淋巴结中均呈低表达(P<0.005)；淋巴转移组的nm23表达明显低于无淋巴转移组(P<0.025)。表明胃癌组织nm23/NDPK的积聚与淋巴转移呈负相关。
抑癌基因p53是细胞周期的重要调节基因，当DNA受损时，可导致其大量表达，促使增生或NDA受损细胞发生程序性死亡(Apoptosis)，并激活WAF-1基因，使增生的细胞终止于G1-S期，当p53发生突变，细胞周期失控，某些癌基因激活，导致细胞生长失控，肿瘤侵袭增强，淋巴转移危险性增高。本研究发现胃癌组织及淋巴转移灶p53蛋白的积聚分别高达80.65%(25/31)和67.74%(21/31)，明显高于癌旁组织(P<0.025)，淋巴转移组明显高于无淋巴转移组(P<0.025)，伴浆膜累及者也明显高于无浆膜累及者(P<0.005)。此结果与已有理论基本一致。说明p53基因的高表达与胃癌侵袭及淋巴转移关系密切。
, 百拇医药
C-ras基因定位于人染色体11p上，包括H-ras、N-ras和K-ras基因，三者编码产物在结构和免疫学上相类似，分子量均为21kDa。p21位于细胞膜内侧，具有GTP酶活性，能将GTP迅速水解成GDP。突变后的p21不能迅速水解GTP，但可使靶细胞持续增殖。对细胞转染试验和肿瘤转移模型的研究发现，ras基因的激活在癌细胞转移潜能中起主要作用。Kim的资料表明p21的表达与胃癌淋巴转移或远处转移呈正相关[6]。本研究的结论与Kim的结论相似。
PCNA是一种分子量为36KD的核蛋白，又称周期素，能与DNA多聚酶σ结合，与DNA复制、增殖细胞的增殖周期有关。Yonemura[7]发现PCNA指数与胃癌癌肿大小呈正相关，在有浆膜累及淋巴转移的患者中表达率明显增高。Meda[8]认为PCNA指数与肿瘤分期、淋巴转移和远处转移有关。本研究也发现其在胃癌组织及淋巴转移灶中呈高表达，淋巴转移组p21积聚明显高于无淋巴转移组(P<0.025)。说明PCNA可能也是与胃癌淋巴转移有关的指标之一。但本研究未发现CD44v6、nm23/NDPK、p53、ras/p21及PCNA的表达与胃癌分期间的关系。
, 百拇医药
以上结果表明，CD44v6、nm23/NDPK、p53、ras/p21及PCNA均是与胃癌淋巴转移有密切关系的指标，可能有助于预测胃癌淋巴转移的状态。单一指标的检测结果(CD44v6阳性、nm23/NDPK阴性、p53蛋白阳性、ras/p21阳性、PCNA阳性)用于淋巴转移预测的灵敏性与特异性均不尽人意(见表3)，但任意三种指标检测结果同时出现对淋巴转移预测的灵敏性达96.77%，特异性为70%。具有较高的应用价值。说明该五种指标的联合检测对胃癌淋巴转移的预测具有重要的意义。
作者简介：王耕(1966-)，男，湖北十堰人，硕士，主治医师。从事普通外科专业。
陈立新(郧阳医学院附属太和医院普外科、病理科 湖北 十堰 442000)
易建华(郧阳医学院附属太和医院普外科、病理科 湖北 十堰 442000)
朱礼国(郧阳医学院附属太和医院普外科、病理科 湖北 十堰 442000)
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参考文献
1，Toshiki H,Tatsuo F,Hironobu N,et al.Expression of CD44 variant exon 6 in stage non-small cell lung carcinoma as a prognostic factor.Cancer Res,1998,58:1108
2，李学莉，邹建湘，陈玉龙，等.在原发性胃癌中的联合表达研究.中国肿瘤临床，1997，24：654
3，龚志军，朱慰祺，施达仁，等.增殖性细胞核抗原在胃癌临床中的意义.肿瘤，1998，18：45
4，Tarin D,Mastsumura Y.Recent advance in the study of tumor invasion and metastasis.J Clin Pathol,1994,47:385
, 百拇医药
5，Liazula N,Oka M,Noma T,et al.Nm23-H1 and H2 messenger RNA abundance in human heptocellular.Cancer Res,1995,55:651
6，Kim YJ,Chu HD,Kim DY,et al.Expression of cellular oncogenes in human gastric carcinoma:c-myc,c-erbB2 and c-ras.J Surg Oncl,1993,54:167
7，Yonemira Y,Kimura H,Fushida S,et al.Analysis of proliferative activity using anti-proliferating cell nuclear antibody in gastric cancer tissue specimens obtained by endoscopic biopsy.Cancer,1993,71:2448
8，Meda K,Chung YS,Onoda N,et al.Proliferating cell nuclear antigen labelling index of preoperative biopsy specimens in gastric carcinoma with special reference to prognosis.Cancer,1994,73:528
收稿日期：1999-6-20, 百拇医药
单位：王耕(郧阳医学院附属太和医院普外科、病理科 湖北 十堰 442000)；杨道华(郧阳医学院附属太和医院普外科、病理科 湖北 十堰 442000)；孙勤(郧阳医学院附属太和医院普外科、病理科 湖北 十堰 442000)；代全武(郧阳医学院附属太和医院普外科、病理科 湖北 十堰 442000)；惠震(郧阳医学院附属太和医院普外科、病理科 湖北 十堰 442000)
关键词：胃癌；淋巴转移；基因表达
胃癌组织若干癌相关基因的表达与淋巴转移的关系 〔摘要〕 目的 以癌组织中CD44v6、nm23/NDPK、p53蛋白、ras/p21及PCNA的表达水平与胃癌淋巴转移的相关性，探讨预测胃癌淋巴转移的分子生物学新方法。方法 采用免疫组织化学S-P法，检测41例胃癌手术标本的癌组织、癌旁组织及转移淋巴结CD44v6、nm23/NDPK、p53蛋白、ras/p21及PCNA的表达情况，分析其与胃癌淋巴转移的相关性。结果 CD44v6、p53、ras/p21及PCNA与胃癌淋巴转移呈正相关，nm23/NDPK与胃癌淋巴转移呈负相关。当如上述任三种结果同时出现时，对预测胃癌淋巴转移的灵敏性为96.77%，特异性为70%。结论 癌组织中CD44v6、nm23/NDPK、p53蛋白、ras/p21及PCNA的表达水平与淋巴转移密切相关，联合检测如上指标有望成为预测胃癌淋巴转移的又一有价值的分子生物学手段。
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〔中图分类号〕 R735.2；R73-37 〔文献标识码〕B
The corelation between lymph node metastasis and the expression of cancer associated genes in tissues of stomach cancer.
WANG geng， YANG Dao-hua, Sun Qin, et al.
(Department of surgery,Taihe hospital,yunYang Medical College,Shiyan 442000)
〔Abstract〕 Objective To explore a novel molecular method to predict metastasis through the relationship between lymph node metastasis and expression of some cancer associated genes in gastric carcinoma.Methods 41 paraffin-embedded specimens of gastric carcinoma were studied,10 out of 41 cases had lymph node metastasis(LNM) in surgery.The expressions of CD44v6,nm23/NDPK,p53,ras/p21,and PCNA were examined with S-P immunohistochemical technique and correlated to the incidence of LNM.Results The LNM of gastric cancer was positively correlated with the level of expressions of CD44v6,p53,ras/p21,and PCNA,but negatively correlated with that of nm23 expression.The sensitivity and the specificity for predicting LNM with this method was 96.77%,and 70% respectively when any three co-indexes of them were observed.Conclusions The expressing level of CD44v6,nm23/NDPK,p53,ras/p21,and PCNA correlated with LNM of gastric cancer in different manner.The result of coexamination of them might be useful to predict LNM of the gastric cancer.
, 百拇医药
〔Key words〕 gastric/neoplasm;lymphatic metastasis;gene expression;immunohisto-chemistry
淋巴转移(LNM)是胃癌治疗失败的主要原因之一。手术中外科医师对LNM的判断仅靠“临床经验”，使胃癌的“根治性切除”具有一定的盲目性和不确定性。因此，如何在术前正确预测胃癌淋巴转移的范围，制定合理手术方式及切除范围，已成为胃癌研究的重要课题之一。本研究对41例胃癌手术标本进行CD44v6、nm23/NDPK、p53蛋白、ras/p21及PCNA的联合检测，探讨其与胃癌淋巴转移间的关系，寻求术前预测胃癌淋巴转移的方法，进一步指导临床实践。
材料与方法
41例胃癌手术标本选自本院外科1994～1996年的手术患者。男性31例，女性10例，年龄30～70岁，中位年龄50.39±12.25岁。病理类型：乳头状腺癌3例，管状腺癌23例，粘液腺癌6例，粘液细胞癌9例；其中高分化者6例，中分化者12例，低分化者23例。根据1989年国际UICC的TNM分期标准，Ⅰ、Ⅱ期13例，Ⅲ、Ⅳ期28例。
, 百拇医药
染色方法：标本经10%福尔马林固定、石蜡包埋，行层厚为4μm的连续切片后，采用S-P法免疫组织化学染色，按试剂盒说明书提供方法操作。抗原修复采用微波修复法。PBS缓冲液代替第一抗体做阴性对照。所有试剂均购自福州迈新公司。
判断标准 参照文献[1，2，3]，染色阳性细胞均呈棕黄色颗粒，连续观察6～8个高倍镜视野。CD44v6主要集中在细胞膜上，阳性率大于20%定为CD44v6染色阳性。nm23产物NDPK定位在胞浆，阳性率>20%定为nm23/NDPK染色阳性。p53蛋白定位于细胞核，阳性率>10%为p53阳性染色。ras产物p21主要定位在胞浆，部分可见于胞核，阳性率>10%为ras/p21染色阳性。PCNA定位于细胞核，阳性率>10%为PCNA染色阳性。
统计学处理 率的比较及相关性分析采用
检验，检测水准0.05。, 百拇医药
结果
本研究所选五种指标(CD44v6、nm23/NDPK、p53、ras/p21及PCNA)预测胃癌淋巴转移情况时，单指标的灵敏性均较低，特异性均较差。但其中任三种指标联合出现时，对预测胃癌LNM的灵敏性及特异性可分别达96.77%和70%。详见表1、2、3。
表1 31例胃癌、LNM灶及癌旁组织中CD44v6、nm23/NDPK、p53蛋白、ras/p21及PCNA的表达(%)
项目
CD44v6
nm23/NDPK
p53蛋白
ras/p21
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PCNA
癌
64*
29*
80*
64*
80*
癌旁
3
64
0
16
, http://www.100md.com
19
LNM
54*
16*
67*
61*
61*
*P<0.01 表2 癌组织CD44v6、nm23/NDPK、p53、ras/p21
及PCNA的表达与临床病理学的关系(%)
项目
, 百拇医药
n
CD44v6
nm23/NDPK
p53蛋白
ras/p21
PCNA
LNM+
31*
65*
29*
80*
70*
, http://www.100md.com
80*
LNM-
10
20
70
40
30
30
有浆膜累及
29*
66*
33*
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82*
65
68
无浆膜累及
12
25
41
42
50
67
Ⅰ，Ⅱ期
13
62
, 百拇医药
46
69
61
62
Ⅲ，Ⅳ期
28
50
36
71
61
71
*P<0.01 表3 相关指标预测胃癌淋巴转移的灵敏性与特异性
项目
, 百拇医药
LNM+
(N=31)
LNM-
(N=10)
灵敏性(%)
特异性(%)
CD44v6
20
2
65
80
nm23/NDPK
22
, 百拇医药
3
71
70
p53蛋白+
25
4
81
60
ras/p21+
22
3
71
70
, http://www.100md.com PCNA+
25
3
81
70
任二者
30
8
97
20
任三者
30
3
97
, 百拇医药
70
任四者
18
2
58
80
全部同时
1
0
10
100
讨论
人CD44分子基因位于第11号染色体短臂上，其基因编码产物是一种跨膜糖蛋白，是细胞粘附分子之一。可分两大类：一类主要在间质和造血细胞中表达，为透明质酸盐的主要受体，称标准型CD44(CD44s)；另一类主要在上皮性细胞和肿瘤细胞上表达，称变异型CD44(CD44v)。大量实验研究表明，CD44不仅在淋巴细胞功能及细胞间质的相互作用中，而且在肿瘤生长与转移过程中起重要作用[4]。这可能与作为透明质酸受体的CD44分子作用于细胞外基质，调节了肿瘤细胞的运动与形态有关。CD44v6是含外显子6的变异体。本研究显示，CD44v6在胃癌组织及LNM中表达均高于癌旁组织(P<0.005)，且有淋巴转移者明显高于无淋巴转移者(P<0.025)。提示CD44v6与胃癌的淋巴转移密切相关。
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nm23是位于人第17号染色体的肿瘤抑制基因，其表达产物能促使微管聚合，改变细胞的粘附能力和迁移能力。一般认为，nm23低表达与多种恶性肿瘤的侵袭与转移密切相关[5]。本研究发现，与癌旁组织相比nm23在癌与转移淋巴结中均呈低表达(P<0.005)；淋巴转移组的nm23表达明显低于无淋巴转移组(P<0.025)。表明胃癌组织nm23/NDPK的积聚与淋巴转移呈负相关。
抑癌基因p53是细胞周期的重要调节基因，当DNA受损时，可导致其大量表达，促使增生或NDA受损细胞发生程序性死亡(Apoptosis)，并激活WAF-1基因，使增生的细胞终止于G1-S期，当p53发生突变，细胞周期失控，某些癌基因激活，导致细胞生长失控，肿瘤侵袭增强，淋巴转移危险性增高。本研究发现胃癌组织及淋巴转移灶p53蛋白的积聚分别高达80.65%(25/31)和67.74%(21/31)，明显高于癌旁组织(P<0.025)，淋巴转移组明显高于无淋巴转移组(P<0.025)，伴浆膜累及者也明显高于无浆膜累及者(P<0.005)。此结果与已有理论基本一致。说明p53基因的高表达与胃癌侵袭及淋巴转移关系密切。
, 百拇医药
C-ras基因定位于人染色体11p上，包括H-ras、N-ras和K-ras基因，三者编码产物在结构和免疫学上相类似，分子量均为21kDa。p21位于细胞膜内侧，具有GTP酶活性，能将GTP迅速水解成GDP。突变后的p21不能迅速水解GTP，但可使靶细胞持续增殖。对细胞转染试验和肿瘤转移模型的研究发现，ras基因的激活在癌细胞转移潜能中起主要作用。Kim的资料表明p21的表达与胃癌淋巴转移或远处转移呈正相关[6]。本研究的结论与Kim的结论相似。
PCNA是一种分子量为36KD的核蛋白，又称周期素，能与DNA多聚酶σ结合，与DNA复制、增殖细胞的增殖周期有关。Yonemura[7]发现PCNA指数与胃癌癌肿大小呈正相关，在有浆膜累及淋巴转移的患者中表达率明显增高。Meda[8]认为PCNA指数与肿瘤分期、淋巴转移和远处转移有关。本研究也发现其在胃癌组织及淋巴转移灶中呈高表达，淋巴转移组p21积聚明显高于无淋巴转移组(P<0.025)。说明PCNA可能也是与胃癌淋巴转移有关的指标之一。但本研究未发现CD44v6、nm23/NDPK、p53、ras/p21及PCNA的表达与胃癌分期间的关系。
, 百拇医药
以上结果表明，CD44v6、nm23/NDPK、p53、ras/p21及PCNA均是与胃癌淋巴转移有密切关系的指标，可能有助于预测胃癌淋巴转移的状态。单一指标的检测结果(CD44v6阳性、nm23/NDPK阴性、p53蛋白阳性、ras/p21阳性、PCNA阳性)用于淋巴转移预测的灵敏性与特异性均不尽人意(见表3)，但任意三种指标检测结果同时出现对淋巴转移预测的灵敏性达96.77%，特异性为70%。具有较高的应用价值。说明该五种指标的联合检测对胃癌淋巴转移的预测具有重要的意义。
作者简介：王耕(1966-)，男，湖北十堰人，硕士，主治医师。从事普通外科专业。
陈立新(郧阳医学院附属太和医院普外科、病理科 湖北 十堰 442000)
易建华(郧阳医学院附属太和医院普外科、病理科 湖北 十堰 442000)
朱礼国(郧阳医学院附属太和医院普外科、病理科 湖北 十堰 442000)
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参考文献
1，Toshiki H,Tatsuo F,Hironobu N,et al.Expression of CD44 variant exon 6 in stage non-small cell lung carcinoma as a prognostic factor.Cancer Res,1998,58:1108
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收稿日期：1999-6-20, 百拇医药