益气活血剂对阿霉素肾病模型的影响
作者：章文平 宋国维 谢瑞珍
单位：广州中医药大学第一附属医院儿科，广州 510405
关键词：肾变病综合征/中药疗法；益气活血；补气药/药理学；活血祛瘀药/药理学；血液流变学/药物作用；超氧化物歧化酶类；过氧化脂质类；谷胱甘肽过氧化酶类
广州中医药大学学报000219摘要：为探讨益气活血剂治疗肾病综合征的作用机理，采用盐酸阿霉素成功复制出大鼠肾病模型，随机分为4组，每组10只，分别为正常对照组、模型对照组、强的松治疗组、强的松加益气活血剂治疗组。用药8周后，选取血液流变学、血清白蛋白、总蛋白、血液自由基3项、组织自由基3项作为观察指标。结果：强的松加益气活血剂治疗组与模型对照组比较，绝大部分指标有改善(P<0.05或P<0.01)；与强的松治疗组比较，血清白蛋白(A)、超氧化物歧化酶(SOD)及血液流变学指标均有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结果表明：大鼠肾病综合征模型血液呈高凝状态，抗氧化能力下降，氧自由基增加；益气活血剂有改善血液高凝状态及抗氧化的作用。
, 百拇医药
中图分类号：R692 文献标识码：A
文章编号：1007-3213(2000)02-0155-04
在肾病综合征发病过程中，持续大量蛋白尿，长期应用肾上腺皮质激素，均可刺激血小板增生，增加凝血因子活性，同时降低肝素的释放；低蛋白血症使血浆中胶体渗透压下降，引起血容量下降、血液浓缩；此外，高度浮肿时应用利尿剂亦可加重血液浓缩，促进血栓形成。肾内凝血可进一步使肾小球病变发展、恶化[1]。另一方面，肾病综合征肾脏抗氧化能力下降[2]，肾脏自由基的大量增加，导致肾小球结构卤化、内皮细胞肿胀、上皮细胞轴突融合、肾小球基膜降解等一系列组织细胞损伤。类似中医气虚血瘀状态。现代药理证实，益气活血类药物具有改善微循环、抗氧化作用。本文从实验角度探讨益气活血剂对肾病综合征的作用。
1 研究对象与方法
, 百拇医药
1.1 对象 采用广东省动物场提供的纯系SD大鼠40只，雌雄各半，5周龄，体重140～150g，雌雄分开喂养。阿霉素由意大利Farmitalia公司提供，10mg/支。
1.2 方法 将大鼠编号，按随机化原则，先分成正常对照组和实验组。正常组共10只，实验组30只，将实验组大鼠按7.5mg/kg经大鼠尾静脉注射阿霉素1次[3]。造模7d后，大鼠出现少动、稀便、剩食及毛蓬松等现象。之后每天用试管收集大鼠小便，并用试纸法检测尿蛋白情况。2～3d后尿蛋白出现，且呈进行性增加，证明造模成功。经造模后的大鼠，再按随机化原则分成模型组、激素组、激素加益气活血剂组，每组各10只。中药黄芪30g、丹参30g、川芎20g、桃仁20g，制成含生药量0.1kg/L的煎剂100mL，置于冰箱备用，不够再制。大鼠在造模2周后，开始灌胃，正常组和模型组每天自由饮食，没有添加其他因素；激素组除每天自由饮食外，尚按12.5mg/kg予强的松溶成2mL水溶液灌胃(强的松剂量由公式D2=D1/R1.R2求得，取最大值)，每天1次；激素加益气活血剂组除采用激素组措施外，另加益气活血剂制剂2mL灌胃[4]。用药8周后，眼球采血，即用乙醚实施浅麻醉，取毛玻管眼底静脉丛采血，送附院临床药理研究室，采用锥杖粘度计方法测定血液流变学，邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶(SOD)，TBA比色法测定过氧化脂质(LPO)，DTNS直接法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)，并同时测定血清白蛋白(A)、总蛋白(TP)。采血完毕，即取新鲜肾脏标本制成匀浆后作组织自由基检查(方法同上)。
, 百拇医药
1.3 统计方法 组间比较采用t检验。
2 结果
2.1 血清白蛋白(ρA)、总蛋白(ρTP)
表1表明：各组ρTP、ρA均比正常组下降，其中模型组下降最甚，激素组次之，激素加益气活血剂组下降最少；激素组及激素加益气活血剂组均比模型组高。而激素加益气活血剂组的ρA较激素组为高，差异有显著性。
表1 灌胃8周后各组大鼠血清TP、A比较(
±s) 分 组
N/只
ρTP/(g.L-1)
, 百拇医药
ρA/(g.L-1)
正常组
10
75.80±6.40
36.30±5.70
模型组
10
59.00±4.70**
18.50±3.60**
激素组
10
, 百拇医药
64.10±5.20**△
24.50±3.90**△△
激素加益
气活血剂组
10
68.90±6.10*△△
28.90±4.90**△△#
*与正常组比较，P<0.05，**P<0.01；△与模型组比较，P<0.05，△△P<0.01；#与激素组比较，P<0.05，##P<0.01(下同)
2.2 血液流变学
, 百拇医药
表2表明：与正常组比较，模型组和激素组的全血粘度、还原粘度、血浆比粘度、RBC聚集指数均有不同程度增高；而激素加益气活血剂组仅全血粘度、RBC聚集指数增加，血浆比粘度反而下降。与模型组比较，激素组的血浆比粘度增高，差异有显著意义；而激素加益气活血剂组的血液流变学指标均降低，差异均有显著性。与激素组比较，激素加益气活血剂组的各项指标均降低，差异有显著性。
2.3 血液自由基3项
表3表明：与正常组比较，模型组的SOD、GSH-Px降低，LPO升高，其中SOD差异有显著性；激素组的SOD升高、LPO降低有显著性差异；激素加益气活血剂组SOD、GSH-Px升高和LPO降低均有显著性差异。与模型组比较，激素组的SOD升高、LPO降低差异有显著性；激素加益气活血剂组SOD、GSH-Px升高和LPO降低均有显著性差异。与激素组比较，激素加益气活血剂组的SOD升高有显著性差异。
2.4 组织自由基3项
, 百拇医药
表4表明：与正常组比较，模型组的SOD、GSH-Px降低，LPO升高，其中SOD差异有显著性；激素组的GSH-Px升高，差异有显著性；激素加益气活血剂组的SOD、GSH-Px升高，差异有显著性。与模型组比较，激素组的SOD、GSH-Px升高，差异有显著性；激素加益气活血剂组SOD、GSH-Px升高和LPO降低均有显著性差异。与激素组比较，激素加益气活血剂组改善更甚，其中SOD升高有显著性差异。
表2 灌胃8周后各组大鼠血液流变学比较(±s) 分 组
N/只
η全血/(mPa.s-1)
η还原/(mPa.s-1)
, 百拇医药
η血浆比/(mPa.s-1)
IRBC聚集
正常组
10
12.31±4.19
27.86±8.48
1.56±0.09
1.63±0.15
模型组
10
33.79±9.70**
, 百拇医药
62.26±19.74**
1.75±0.10**
4.63±1.29**
激素组
10
28.44±6.13**
50.21±13.24**
2.12±0.19**△△
3.98±0.97**
激素加益气
, http://www.100md.com
活血剂组
10
18.55±5.11**△△##
29.50±8.98△△##
1.46±0.08**△△##
2.65±0.65**△△##
表3 灌胃8周后各组大白鼠血液自由基3项比较(±s) 分 组
N/只
, 百拇医药
JSOD/(kU.L-1)
cLPO/(μmol.L-1)
JGSH-Px/(kU.L-1)
正常组
10
24.7±6.2
13.6±5.8
80.7±32.4
模型组
, http://www.100md.com 10
20.1±5.4*
18.1±7.1
65.2±27.7
激素组
10
30.5±8.3*△△
8.5±4.2*△△
89.1±34.9
激素加益气
活血剂组
10
, 百拇医药
38.8±9.5**△△#
6.4±4.1**△△
103.5±40.9△
表4 灌胃8周后各组大鼠组织自由基3项比较(±s) 分 组
N/只
JSOD/(U.g-1)
bLPO/(nmol.g-1)
JGSH-Px/(U.g-1)
, 百拇医药
正常组
10
3009±296
296±87
6165±1001
模型组
10
2715±269*
335±89
5727±923
激素组
10
, 百拇医药 3132±301△△
270±79
8425±1978**△△
激素加益气
活血剂组
10
3495±342**△△#
263±75△
9738±2348**△△
3 讨论
阿霉素诱发的大鼠肾病模型，由于制备简单、方便，病理改变类似人类微小病变型肾病，目前已成为研究肾病综合征的常用模型之一。本实验肾病综合征模型大鼠与正常大鼠比较，SOD、GSH-Px均降低，LPO升高，同时血液流变学大部分指标较正常大鼠升高，证明模型确实伴有高凝状态。
, 百拇医药
益气活血剂由黄芪、丹参、川芎、桃仁组成。黄芪性微温、味甘，能补气升阳、利水消肿，增强机体免疫功能、促进代谢、利尿和抗实验性肾炎及对心血管有一定作用，其活性提取成分具有较强的抗氧化作用[5]。丹参性微寒，味苦，养血活血化瘀，能影响血流动力学、抗血栓形成和改善血液流变学、改善微循环，亦有清除自由基、抗氧化作用[6]。川芎为血中气药，性温味辛，活血化瘀，行气止痛，能提高血小板中cAMP含量，降低血小板表面活性，抑制血小板聚集，对抗血栓形成，其提取物川芎嗪有抗氧化作用[7]。桃仁性辛味苦，活血化瘀，有抗凝血及较弱的溶血作用，对血流阻滞、血行障碍有明显改善作用，其提取物有抗氧化作用[8]。益气活血剂以黄芪为君药，寓活血于行气之中，丹参为臣药，专擅活血化瘀，川芎、桃仁为佐使药，合用具有较强的益气活血功效。本实验结果提示，该方有改善阿霉素肾病模型的微循环、祛除血液和组织自由基，提高机体抗氧化能力的作用。
作者简介：第一作者，章文平 男，1969年出生，医学硕士
, 百拇医药
参考文献：
[1]张国华.肾病综合征高凝倾向及其防治[J].国外医学.内科学分册，1997，24(9)：373
[2]杨国辉，朱春玲，周志邦，等.肾脏病患者血浆过氧化脂质含量和血清超氧化物岐化酶含量的观察[J].贵州医药，1995，19(2)：90
[3]徐淑云，卞如濂，陈修，等.药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，1991.1070
[4]贺石林.中医科研设计与统计方法[M].长沙：湖南科学技术出版社，1986.54～55
[5]汪德清，沈文梅，田亚平，等.黄芪活性提取成分对膜脂质过氧化损伤的防护作用[J].中国中药杂志，1996，21(12)：746
[6]任伟，杨沐，柴树人，等.黄芪注射液与复方丹参注射液合用治疗原发性肾病综合征47例临床观察[J].安徽中医临床杂志，1999，11(2)：86
[7]孔维信，叶志斌，刘银坤，等.川芎嗪和SOD对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用[J].镇江医学院学报，1998，8(2)：147
[8]季光，胡梅，孙维强，等.桃仁抗肝脂质过氧化损伤作用的研究[J].江西中医学院学报，1995，7(3)：34
收稿日期：1999-09-02, http://www.100md.com
单位：广州中医药大学第一附属医院儿科，广州 510405
关键词：肾变病综合征/中药疗法；益气活血；补气药/药理学；活血祛瘀药/药理学；血液流变学/药物作用；超氧化物歧化酶类；过氧化脂质类；谷胱甘肽过氧化酶类
广州中医药大学学报000219摘要：为探讨益气活血剂治疗肾病综合征的作用机理，采用盐酸阿霉素成功复制出大鼠肾病模型，随机分为4组，每组10只，分别为正常对照组、模型对照组、强的松治疗组、强的松加益气活血剂治疗组。用药8周后，选取血液流变学、血清白蛋白、总蛋白、血液自由基3项、组织自由基3项作为观察指标。结果：强的松加益气活血剂治疗组与模型对照组比较，绝大部分指标有改善(P<0.05或P<0.01)；与强的松治疗组比较，血清白蛋白(A)、超氧化物歧化酶(SOD)及血液流变学指标均有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结果表明：大鼠肾病综合征模型血液呈高凝状态，抗氧化能力下降，氧自由基增加；益气活血剂有改善血液高凝状态及抗氧化的作用。
, 百拇医药
中图分类号：R692 文献标识码：A
文章编号：1007-3213(2000)02-0155-04
在肾病综合征发病过程中，持续大量蛋白尿，长期应用肾上腺皮质激素，均可刺激血小板增生，增加凝血因子活性，同时降低肝素的释放；低蛋白血症使血浆中胶体渗透压下降，引起血容量下降、血液浓缩；此外，高度浮肿时应用利尿剂亦可加重血液浓缩，促进血栓形成。肾内凝血可进一步使肾小球病变发展、恶化[1]。另一方面，肾病综合征肾脏抗氧化能力下降[2]，肾脏自由基的大量增加，导致肾小球结构卤化、内皮细胞肿胀、上皮细胞轴突融合、肾小球基膜降解等一系列组织细胞损伤。类似中医气虚血瘀状态。现代药理证实，益气活血类药物具有改善微循环、抗氧化作用。本文从实验角度探讨益气活血剂对肾病综合征的作用。
1 研究对象与方法
, 百拇医药
1.1 对象 采用广东省动物场提供的纯系SD大鼠40只，雌雄各半，5周龄，体重140～150g，雌雄分开喂养。阿霉素由意大利Farmitalia公司提供，10mg/支。
1.2 方法 将大鼠编号，按随机化原则，先分成正常对照组和实验组。正常组共10只，实验组30只，将实验组大鼠按7.5mg/kg经大鼠尾静脉注射阿霉素1次[3]。造模7d后，大鼠出现少动、稀便、剩食及毛蓬松等现象。之后每天用试管收集大鼠小便，并用试纸法检测尿蛋白情况。2～3d后尿蛋白出现，且呈进行性增加，证明造模成功。经造模后的大鼠，再按随机化原则分成模型组、激素组、激素加益气活血剂组，每组各10只。中药黄芪30g、丹参30g、川芎20g、桃仁20g，制成含生药量0.1kg/L的煎剂100mL，置于冰箱备用，不够再制。大鼠在造模2周后，开始灌胃，正常组和模型组每天自由饮食，没有添加其他因素；激素组除每天自由饮食外，尚按12.5mg/kg予强的松溶成2mL水溶液灌胃(强的松剂量由公式D2=D1/R1.R2求得，取最大值)，每天1次；激素加益气活血剂组除采用激素组措施外，另加益气活血剂制剂2mL灌胃[4]。用药8周后，眼球采血，即用乙醚实施浅麻醉，取毛玻管眼底静脉丛采血，送附院临床药理研究室，采用锥杖粘度计方法测定血液流变学，邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶(SOD)，TBA比色法测定过氧化脂质(LPO)，DTNS直接法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)，并同时测定血清白蛋白(A)、总蛋白(TP)。采血完毕，即取新鲜肾脏标本制成匀浆后作组织自由基检查(方法同上)。
, 百拇医药
1.3 统计方法 组间比较采用t检验。
2 结果
2.1 血清白蛋白(ρA)、总蛋白(ρTP)
表1表明：各组ρTP、ρA均比正常组下降，其中模型组下降最甚，激素组次之，激素加益气活血剂组下降最少；激素组及激素加益气活血剂组均比模型组高。而激素加益气活血剂组的ρA较激素组为高，差异有显著性。
表1 灌胃8周后各组大鼠血清TP、A比较(
±s) 分 组N/只
ρTP/(g.L-1)
, 百拇医药
ρA/(g.L-1)
正常组
10
75.80±6.40
36.30±5.70
模型组
10
59.00±4.70**
18.50±3.60**
激素组
10
, 百拇医药
64.10±5.20**△
24.50±3.90**△△
激素加益
气活血剂组
10
68.90±6.10*△△
28.90±4.90**△△#
*与正常组比较，P<0.05，**P<0.01；△与模型组比较，P<0.05，△△P<0.01；#与激素组比较，P<0.05，##P<0.01(下同)
2.2 血液流变学
, 百拇医药
表2表明：与正常组比较，模型组和激素组的全血粘度、还原粘度、血浆比粘度、RBC聚集指数均有不同程度增高；而激素加益气活血剂组仅全血粘度、RBC聚集指数增加，血浆比粘度反而下降。与模型组比较，激素组的血浆比粘度增高，差异有显著意义；而激素加益气活血剂组的血液流变学指标均降低，差异均有显著性。与激素组比较，激素加益气活血剂组的各项指标均降低，差异有显著性。
2.3 血液自由基3项
表3表明：与正常组比较，模型组的SOD、GSH-Px降低，LPO升高，其中SOD差异有显著性；激素组的SOD升高、LPO降低有显著性差异；激素加益气活血剂组SOD、GSH-Px升高和LPO降低均有显著性差异。与模型组比较，激素组的SOD升高、LPO降低差异有显著性；激素加益气活血剂组SOD、GSH-Px升高和LPO降低均有显著性差异。与激素组比较，激素加益气活血剂组的SOD升高有显著性差异。
2.4 组织自由基3项
, 百拇医药
表4表明：与正常组比较，模型组的SOD、GSH-Px降低，LPO升高，其中SOD差异有显著性；激素组的GSH-Px升高，差异有显著性；激素加益气活血剂组的SOD、GSH-Px升高，差异有显著性。与模型组比较，激素组的SOD、GSH-Px升高，差异有显著性；激素加益气活血剂组SOD、GSH-Px升高和LPO降低均有显著性差异。与激素组比较，激素加益气活血剂组改善更甚，其中SOD升高有显著性差异。
表2 灌胃8周后各组大鼠血液流变学比较(
±s) 分 组N/只
η全血/(mPa.s-1)
η还原/(mPa.s-1)
, 百拇医药
η血浆比/(mPa.s-1)
IRBC聚集
正常组
10
12.31±4.19
27.86±8.48
1.56±0.09
1.63±0.15
模型组
10
33.79±9.70**
, 百拇医药
62.26±19.74**
1.75±0.10**
4.63±1.29**
激素组
10
28.44±6.13**
50.21±13.24**
2.12±0.19**△△
3.98±0.97**
激素加益气
, http://www.100md.com
活血剂组
10
18.55±5.11**△△##
29.50±8.98△△##
1.46±0.08**△△##
2.65±0.65**△△##
表3 灌胃8周后各组大白鼠血液自由基3项比较(
±s) 分 组N/只
, 百拇医药
JSOD/(kU.L-1)
cLPO/(μmol.L-1)
JGSH-Px/(kU.L-1)
正常组
10
24.7±6.2
13.6±5.8
80.7±32.4
模型组
, http://www.100md.com 10
20.1±5.4*
18.1±7.1
65.2±27.7
激素组
10
30.5±8.3*△△
8.5±4.2*△△
89.1±34.9
激素加益气
活血剂组
10
, 百拇医药
38.8±9.5**△△#
6.4±4.1**△△
103.5±40.9△
表4 灌胃8周后各组大鼠组织自由基3项比较(
±s) 分 组N/只
JSOD/(U.g-1)
bLPO/(nmol.g-1)
JGSH-Px/(U.g-1)
, 百拇医药
正常组
10
3009±296
296±87
6165±1001
模型组
10
2715±269*
335±89
5727±923
激素组
10
, 百拇医药 3132±301△△
270±79
8425±1978**△△
激素加益气
活血剂组
10
3495±342**△△#
263±75△
9738±2348**△△
3 讨论
阿霉素诱发的大鼠肾病模型，由于制备简单、方便，病理改变类似人类微小病变型肾病，目前已成为研究肾病综合征的常用模型之一。本实验肾病综合征模型大鼠与正常大鼠比较，SOD、GSH-Px均降低，LPO升高，同时血液流变学大部分指标较正常大鼠升高，证明模型确实伴有高凝状态。
, 百拇医药
益气活血剂由黄芪、丹参、川芎、桃仁组成。黄芪性微温、味甘，能补气升阳、利水消肿，增强机体免疫功能、促进代谢、利尿和抗实验性肾炎及对心血管有一定作用，其活性提取成分具有较强的抗氧化作用[5]。丹参性微寒，味苦，养血活血化瘀，能影响血流动力学、抗血栓形成和改善血液流变学、改善微循环，亦有清除自由基、抗氧化作用[6]。川芎为血中气药，性温味辛，活血化瘀，行气止痛，能提高血小板中cAMP含量，降低血小板表面活性，抑制血小板聚集，对抗血栓形成，其提取物川芎嗪有抗氧化作用[7]。桃仁性辛味苦，活血化瘀，有抗凝血及较弱的溶血作用，对血流阻滞、血行障碍有明显改善作用，其提取物有抗氧化作用[8]。益气活血剂以黄芪为君药，寓活血于行气之中，丹参为臣药，专擅活血化瘀，川芎、桃仁为佐使药，合用具有较强的益气活血功效。本实验结果提示，该方有改善阿霉素肾病模型的微循环、祛除血液和组织自由基，提高机体抗氧化能力的作用。
作者简介：第一作者，章文平 男，1969年出生，医学硕士
, 百拇医药
参考文献：
[1]张国华.肾病综合征高凝倾向及其防治[J].国外医学.内科学分册，1997，24(9)：373
[2]杨国辉，朱春玲，周志邦，等.肾脏病患者血浆过氧化脂质含量和血清超氧化物岐化酶含量的观察[J].贵州医药，1995，19(2)：90
[3]徐淑云，卞如濂，陈修，等.药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，1991.1070
[4]贺石林.中医科研设计与统计方法[M].长沙：湖南科学技术出版社，1986.54～55
[5]汪德清，沈文梅，田亚平，等.黄芪活性提取成分对膜脂质过氧化损伤的防护作用[J].中国中药杂志，1996，21(12)：746
[6]任伟，杨沐，柴树人，等.黄芪注射液与复方丹参注射液合用治疗原发性肾病综合征47例临床观察[J].安徽中医临床杂志，1999，11(2)：86
[7]孔维信，叶志斌，刘银坤，等.川芎嗪和SOD对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用[J].镇江医学院学报，1998，8(2)：147
[8]季光，胡梅，孙维强，等.桃仁抗肝脂质过氧化损伤作用的研究[J].江西中医学院学报，1995，7(3)：34
收稿日期：1999-09-02, http://www.100md.com