分光光度法测定不同产地远志总皂甙的含量
作者：刘友平 万德光 刘涛 吴天骄
单位：成都中医药大学 药学院,四川 成都 610075
关键词：远志；远志酸；分光光度法；中药研究
成都中医药大学学报000225摘 要：目的：为合理利用远志药材资源提供依据。方法：以远志酸为对照品，香草醛-高氯酸为显色剂，采用分光光度法在560nm处测定远志总皂甙含量。结果：对照品在10.02～30.6μg范围内线性良好(r=0.9967)，平均回收率为97.98%, RSD=1.45%(n=5)。结论：该方法简便，准确，灵敏，重现性好,可用于远志及远志复方制剂的质量控制指标。
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1000-0668(2000)02-0046-02
基金项目：国家九五攻关项目(No.95-903-02-04)
, 百拇医药
作者简介：刘友平，女，1964年4月生；医学博士，副教授；研究方向：中药有效成分及品质研究。
远志为常用中药之一，药用历史悠久，在《神农本草经》中列为上品, 《中国药典》一九九五年版一部规定其来源为远志科(Polygalaceae)植物远志(Polygala tenuifolia Willd )或卵叶远志 (P. Sibrica L.)的干燥根[1]。具有安神益智,祛痰，消肿之功。临床应用范围较广，疗效确切。有学者已从远志根中分离鉴定了远志皂甙A，B，E，F和G(onjisaponion A，B，E，F，G)5种三萜皂甙[2，3]，还分离鉴定了氧杂蒽酮类化合物[5～7]，酚甙类化合物[8]，糖类及低聚糖多酯衍生物[9]和生物碱类[10]等化学成分。关于远志的质量控制，《中国药典》一九九五年版一部远志项下仅对其性状、根横切面显微组织结构作了定性描述，进行了泡沫实验鉴别和对灰分限量作了规定,尚缺乏定性、定量指标以控制远志药材的内在质量。为了制定规范的、科学的中药质量标准，本课题组对远志的质量标准进行了较为全面深入的研究。
, 百拇医药
研究表明，远志皂甙为远志的镇静、祛痰活性成分。关于远志皂甙和总皂甙含量的测定方法,有用薄层扫描法、紫外-薄层扫描法等[11～13]。本文报告以远志酸为对照品，香草醛-高氯酸为显色剂，采用分光光度法测定不同产地药材中远志总皂甙的含量。现将测定结果报告如下。
1 实验材料
BP210D.AG 电子天平(德国赛多利斯股份有限公司)；SB2000超声清洗机(上海贝森)；751GW分光光度计(上海分析仪器厂)；微量注射器(上海注射器三厂)。对照品远志酸(由作者自远志Polygala tenuifolia Willd.中分离，结构经光谱鉴定，结果另文报道)。所用试剂均为分析纯。
所用远志药材为作者采自或购自不同产地，均经本校药用植物教研室万德光教授鉴定。
2 方法与结果
, 百拇医药
2.1 供试品溶液的制备
取远志药材粗粉约1.0g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，回流4 h，取出，药渣挥尽乙醚后加甲醇40 mL冷浸过夜，再加甲醇适量，回流4 h，提取液回收甲醇至10 mL，加入4倍量乙醚，放置过夜，滤过，将沉淀以甲醇定容至25 mL容量中,作为供试品溶液。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重对照品，加甲醇制成1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.3 最大吸收波长选择
精密吸取供试品溶液、对照品溶液50μL 于具塞试管中,按标准曲线项下方法显色，于480～610 nm扫描测定最大吸收度，结果显示,对照品及供试品溶液均在560nm处有最大吸收，故选择560 nm为测定波长。
, 百拇医药
2.4 标准曲线的制备
精密吸取30,40,50,60,70μL，于5支具塞磨口试管中，水浴加热挥去溶剂，于每支试管中分别精密加入0.2 mL 5%香草醛试剂，0.8 mL高氯酸，密塞。于70℃水浴中恒温加热20 min，取出，流水冷却，摇匀，于560 nm波长处测定吸收度，随行试剂作空白参比。以吸收度(A)为纵坐标，远志酸的质量(μg)为横坐标，求得回归方程A=0.04003C-0.2320 ，r=0.9975，对照品质量在10.02～30.6μg范围内与吸收度线性关系良好。
2.5 稳定性考查
取供试液,依法显色后，分别在以下时间于561 nm处测定吸收度，考查其显色后稳定性，结果供试品溶液显色后1小时内测定，吸收度稳定。
2.6 加样回收率实验
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取同一批远志药材，依法制备供试液，加入20μL对照品溶液(C=0.77μg/μL)，依法显色后测定吸收度，计算加样回收率,结果见表1。
表1 加样回收率表 样品含量
(μg)
加入量
(μg)
测得量
(μg)
回收率
(%)
平均回收率为
(%)
, http://www.100md.com
RSD
(%)
21.83
15.4
36.96
97.81
26.98
15.4
41.79
96.17
32.26
15.4
47.33
, 百拇医药
97.86
97.778%
1.45
35.94
15.4
50.88
97.0
30.27
15.4
45.66
99.99
2.7 样品的含量测定
对不同产地的远志药材按供试品溶液制备供试液，精密吸取该溶液60μL，依法显色，测定吸收度，计算远志总皂甙含量，结果见表2。表2 不同产地远志总皂甙的含量 编号
, http://www.100md.com
产 地
基 源
含量(%)
1
山西省
Polygala tenuifolia Willd.
2.54
2
山西省洪洞县
Polygala tenuifolia Willd.
3.57
3
, 百拇医药
山西省汾县
Polygala tenuifolia Willd.
3.94
4
山西省太谷县
Polygala tenuifolia Willd.
4.38
5
甘肃省东乡县
Polygala tenuifolia Willd.
3.37
, http://www.100md.com
6
吉林省长春市
Polygala tenuifolia Willd.
2.52
7
青海省民和县
Polygala tenuifolia Willd.
3.49
8
四川省南坪县
Polygala tenuifolia Willd.
, http://www.100md.com 3.56
9
内蒙古自治区
Polygala tenuifolia Willd.
3.81
10
甘肃省永靖县
Polygala tenuifolia Willd.
3.28
11
甘肃省庆阳县
Polygala tenuifolia Willd.
, 百拇医药
4.21
12
陕西省合阳县
Polygala tenuifolia Willd.
3.53
2.8 不同药用部位远志总皂甙的含量测定
由于远志药用资源的日趋减少,而在古代有药用远志地上部分的记载。为了进一步探讨远志的地上部分的药用价值，合理利用药用资源，对不同药用部位远志总皂甙含量的进行了测定,测定结果为远志(Polygala tenuifolia Willd.)茎叶部分总皂甙含量为2.46%，根为3.29%；卵叶远志(Polygala sibirica L.)茎叶含量为1.50%，根为1.61%。
3 讨 论
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3.1 文献报道，供试液显色后用冰醋酸稀释后测定[12]。但我们在实验中发现，以冰醋酸稀释后吸收度不稳定，这可能是由于冰醋酸易挥发所致。在本实验中显色剂用量较文献报道大，吸收度稳定，结果满意。
3.2 以远志酸为对照品来测定和计算远志药材中总皂甙的含量,所得结果并不表示远志总皂甙的真实含量，而是以远志酸计算的相对含量，测定结果可作为判断总皂甙含量的主要依据。
3.3 本实验所用的香草醛-冰醋酸液(0.5%)不稳定，使用时应新配，并低温保存。
3.4 远志及卵叶远志地上部分均含有活性成分总皂甙，且含量不低于1%，提示远志地上部分有一定的药用价值，值得进一步深入研究，本研究为合理利用远志药材资源提供依据。
参考文献
1 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典[M].一九九五年版.广 州:广东科技出版社-化学工业出版社，1995.132
, 百拇医药
2 Sakuma Seiich, Shoji Junzo. Studies on the Constituents of the Root of Polygala tenuifolia Willd. I Isolation of Saponins and the Structures of Onjisaponins G and F[J]. Chem Pharm Bull, 1981,29(9):2431
3 Sakuma Seiich, Shoji Junzo. Studies on the Constituents of the Root of Polygala tenuifolia Willd. II on the Structures of Onjisaponins A, B and E[J]. Chem Pharm Bull, 1982,30(3):810
4 Hanjio Ito, Haruo Taniguchi, Tohko Matsuki, et al. Xanthones and A Cinnamic Acid Derivaives from Polygala tenuifolia Willd[J]. Phytochemistry, 1977, (16):1614
, 百拇医药
5 IKEYA Yukinobu, SUGAMA Ko, OKADA Minoru, et al. Two Xanthones from Polygala tenuifolia[J]. Phytochemistry, 1991 , 30(6):2061
6 Fujita Tetsuro, Liu Da-You, Ueda Shinichi et al. Xanthones from Polygala tenuifolia[J]. Phytochemistry, 1992 , 31:3997
7 Ikeya Yukinobu, Sugama Ko, Maruno Masao. Xanthones C-Glycoside and Acylated Sugar from Polygala tenuifolia[J]. Chem Pharm Bull, 1994, 42(11):2305
, 百拇医药 8 Ikeya Yukinobu, Sugama Ko, Okada Minoru, et al. Four New Phenolic Glycosides From Polygala tenuifolia[J]. Chem Pharm Bull,1991,39(10):2600
9 Miyase Tosho, Iwata Yukiko, Uend Akira. Tenuifolises A-F, Oligosaccharide Mullt-Esters From the Roots of Polygala tenuifolia Willd[J]. Chem. Pharm. Bull. ,1991,39(11):3082
10 金宝渊,朴政一. 远志生物碱成分的研究[J]. 中国中药杂志, 1993,18(11):675
11 孙文基, 沙振方,向红红. 远志及其制剂中远志皂甙元的薄层扫描法测定[J]. 中成药, 1990, 12(5):15
12 38.郭一敏，郭希圣.远志的薄层分离和分光光度测定[J].中草药通讯，1975，6(3)：19
13 万德光，陈幼竹，刘友平.远志活性成分的动态变化[J].成都中医药大学学报，1999，(3)：42
(收稿日期：1999-11-23)
, http://www.100md.com
单位：成都中医药大学 药学院,四川 成都 610075
关键词：远志；远志酸；分光光度法；中药研究
成都中医药大学学报000225摘 要：目的：为合理利用远志药材资源提供依据。方法：以远志酸为对照品，香草醛-高氯酸为显色剂，采用分光光度法在560nm处测定远志总皂甙含量。结果：对照品在10.02～30.6μg范围内线性良好(r=0.9967)，平均回收率为97.98%, RSD=1.45%(n=5)。结论：该方法简便，准确，灵敏，重现性好,可用于远志及远志复方制剂的质量控制指标。
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1000-0668(2000)02-0046-02
基金项目：国家九五攻关项目(No.95-903-02-04)
, 百拇医药
作者简介：刘友平，女，1964年4月生；医学博士，副教授；研究方向：中药有效成分及品质研究。
远志为常用中药之一，药用历史悠久，在《神农本草经》中列为上品, 《中国药典》一九九五年版一部规定其来源为远志科(Polygalaceae)植物远志(Polygala tenuifolia Willd )或卵叶远志 (P. Sibrica L.)的干燥根[1]。具有安神益智,祛痰，消肿之功。临床应用范围较广，疗效确切。有学者已从远志根中分离鉴定了远志皂甙A，B，E，F和G(onjisaponion A，B，E，F，G)5种三萜皂甙[2，3]，还分离鉴定了氧杂蒽酮类化合物[5～7]，酚甙类化合物[8]，糖类及低聚糖多酯衍生物[9]和生物碱类[10]等化学成分。关于远志的质量控制，《中国药典》一九九五年版一部远志项下仅对其性状、根横切面显微组织结构作了定性描述，进行了泡沫实验鉴别和对灰分限量作了规定,尚缺乏定性、定量指标以控制远志药材的内在质量。为了制定规范的、科学的中药质量标准，本课题组对远志的质量标准进行了较为全面深入的研究。
, 百拇医药
研究表明，远志皂甙为远志的镇静、祛痰活性成分。关于远志皂甙和总皂甙含量的测定方法,有用薄层扫描法、紫外-薄层扫描法等[11～13]。本文报告以远志酸为对照品，香草醛-高氯酸为显色剂，采用分光光度法测定不同产地药材中远志总皂甙的含量。现将测定结果报告如下。
1 实验材料
BP210D.AG 电子天平(德国赛多利斯股份有限公司)；SB2000超声清洗机(上海贝森)；751GW分光光度计(上海分析仪器厂)；微量注射器(上海注射器三厂)。对照品远志酸(由作者自远志Polygala tenuifolia Willd.中分离，结构经光谱鉴定，结果另文报道)。所用试剂均为分析纯。
所用远志药材为作者采自或购自不同产地，均经本校药用植物教研室万德光教授鉴定。
2 方法与结果
, 百拇医药
2.1 供试品溶液的制备
取远志药材粗粉约1.0g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，回流4 h，取出，药渣挥尽乙醚后加甲醇40 mL冷浸过夜，再加甲醇适量，回流4 h，提取液回收甲醇至10 mL，加入4倍量乙醚，放置过夜，滤过，将沉淀以甲醇定容至25 mL容量中,作为供试品溶液。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重对照品，加甲醇制成1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.3 最大吸收波长选择
精密吸取供试品溶液、对照品溶液50μL 于具塞试管中,按标准曲线项下方法显色，于480～610 nm扫描测定最大吸收度，结果显示,对照品及供试品溶液均在560nm处有最大吸收，故选择560 nm为测定波长。
, 百拇医药
2.4 标准曲线的制备
精密吸取30,40,50,60,70μL，于5支具塞磨口试管中，水浴加热挥去溶剂，于每支试管中分别精密加入0.2 mL 5%香草醛试剂，0.8 mL高氯酸，密塞。于70℃水浴中恒温加热20 min，取出，流水冷却，摇匀，于560 nm波长处测定吸收度，随行试剂作空白参比。以吸收度(A)为纵坐标，远志酸的质量(μg)为横坐标，求得回归方程A=0.04003C-0.2320 ，r=0.9975，对照品质量在10.02～30.6μg范围内与吸收度线性关系良好。
2.5 稳定性考查
取供试液,依法显色后，分别在以下时间于561 nm处测定吸收度，考查其显色后稳定性，结果供试品溶液显色后1小时内测定，吸收度稳定。
2.6 加样回收率实验
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取同一批远志药材，依法制备供试液，加入20μL对照品溶液(C=0.77μg/μL)，依法显色后测定吸收度，计算加样回收率,结果见表1。
表1 加样回收率表 样品含量
(μg)
加入量
(μg)
测得量
(μg)
回收率
(%)
平均回收率为
(%)
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RSD
(%)
21.83
15.4
36.96
97.81
26.98
15.4
41.79
96.17
32.26
15.4
47.33
, 百拇医药
97.86
97.778%
1.45
35.94
15.4
50.88
97.0
30.27
15.4
45.66
99.99
2.7 样品的含量测定
对不同产地的远志药材按供试品溶液制备供试液，精密吸取该溶液60μL，依法显色，测定吸收度，计算远志总皂甙含量，结果见表2。表2 不同产地远志总皂甙的含量 编号
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产 地
基 源
含量(%)
1
山西省
Polygala tenuifolia Willd.
2.54
2
山西省洪洞县
Polygala tenuifolia Willd.
3.57
3
, 百拇医药
山西省汾县
Polygala tenuifolia Willd.
3.94
4
山西省太谷县
Polygala tenuifolia Willd.
4.38
5
甘肃省东乡县
Polygala tenuifolia Willd.
3.37
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6
吉林省长春市
Polygala tenuifolia Willd.
2.52
7
青海省民和县
Polygala tenuifolia Willd.
3.49
8
四川省南坪县
Polygala tenuifolia Willd.
, http://www.100md.com 3.56
9
内蒙古自治区
Polygala tenuifolia Willd.
3.81
10
甘肃省永靖县
Polygala tenuifolia Willd.
3.28
11
甘肃省庆阳县
Polygala tenuifolia Willd.
, 百拇医药
4.21
12
陕西省合阳县
Polygala tenuifolia Willd.
3.53
2.8 不同药用部位远志总皂甙的含量测定
由于远志药用资源的日趋减少,而在古代有药用远志地上部分的记载。为了进一步探讨远志的地上部分的药用价值，合理利用药用资源，对不同药用部位远志总皂甙含量的进行了测定,测定结果为远志(Polygala tenuifolia Willd.)茎叶部分总皂甙含量为2.46%，根为3.29%；卵叶远志(Polygala sibirica L.)茎叶含量为1.50%，根为1.61%。
3 讨 论
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3.1 文献报道，供试液显色后用冰醋酸稀释后测定[12]。但我们在实验中发现，以冰醋酸稀释后吸收度不稳定，这可能是由于冰醋酸易挥发所致。在本实验中显色剂用量较文献报道大，吸收度稳定，结果满意。
3.2 以远志酸为对照品来测定和计算远志药材中总皂甙的含量,所得结果并不表示远志总皂甙的真实含量，而是以远志酸计算的相对含量，测定结果可作为判断总皂甙含量的主要依据。
3.3 本实验所用的香草醛-冰醋酸液(0.5%)不稳定，使用时应新配，并低温保存。
3.4 远志及卵叶远志地上部分均含有活性成分总皂甙，且含量不低于1%，提示远志地上部分有一定的药用价值，值得进一步深入研究，本研究为合理利用远志药材资源提供依据。
参考文献
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, 百拇医药
2 Sakuma Seiich, Shoji Junzo. Studies on the Constituents of the Root of Polygala tenuifolia Willd. I Isolation of Saponins and the Structures of Onjisaponins G and F[J]. Chem Pharm Bull, 1981,29(9):2431
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4 Hanjio Ito, Haruo Taniguchi, Tohko Matsuki, et al. Xanthones and A Cinnamic Acid Derivaives from Polygala tenuifolia Willd[J]. Phytochemistry, 1977, (16):1614
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5 IKEYA Yukinobu, SUGAMA Ko, OKADA Minoru, et al. Two Xanthones from Polygala tenuifolia[J]. Phytochemistry, 1991 , 30(6):2061
6 Fujita Tetsuro, Liu Da-You, Ueda Shinichi et al. Xanthones from Polygala tenuifolia[J]. Phytochemistry, 1992 , 31:3997
7 Ikeya Yukinobu, Sugama Ko, Maruno Masao. Xanthones C-Glycoside and Acylated Sugar from Polygala tenuifolia[J]. Chem Pharm Bull, 1994, 42(11):2305
, 百拇医药 8 Ikeya Yukinobu, Sugama Ko, Okada Minoru, et al. Four New Phenolic Glycosides From Polygala tenuifolia[J]. Chem Pharm Bull,1991,39(10):2600
9 Miyase Tosho, Iwata Yukiko, Uend Akira. Tenuifolises A-F, Oligosaccharide Mullt-Esters From the Roots of Polygala tenuifolia Willd[J]. Chem. Pharm. Bull. ,1991,39(11):3082
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11 孙文基, 沙振方,向红红. 远志及其制剂中远志皂甙元的薄层扫描法测定[J]. 中成药, 1990, 12(5):15
12 38.郭一敏，郭希圣.远志的薄层分离和分光光度测定[J].中草药通讯，1975，6(3)：19
13 万德光，陈幼竹，刘友平.远志活性成分的动态变化[J].成都中医药大学学报，1999，(3)：42
(收稿日期：1999-11-23)
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