肾上腺素能神经递质对人甲状腺细胞生长的影响
作者：刘翠萍 刘超 覃又文 段宇 武晓泓 狄福松 蒋须勤
单位：刘翠萍(南京医科大学第一附属医院内分泌研究室 210029)； 刘超(南京医科大学第一附属医院内分泌研究室 210029)； 覃又文(南京医科大学第一附属医院内分泌研究室 210029)； 段宇(南京医科大学第一附属医院内分泌研究室 210029)； 武晓泓(南京医科大学第一附属医院内分泌研究室 210029)； 狄福松(南京医科大学第一附属医院内分泌研究室 210029)； 蒋须勤(南京医科大学第一附属医院内分泌研究室 210029)
关键词：甲状腺；细胞培养；生长；肾上腺素能神经递质
江苏医药000304 摘 要：目的 研究肾上腺素能神经递质在甲状腺生长功能调控中的作用和意义。方法 选取人甲状腺腺瘤旁正常组织,以细胞单层培养技术和非同位素标记的细胞增殖分析法,检测肾上腺素和去甲肾上腺素对甲状腺细胞生长的影响。结果 肾上腺素对甲状腺细胞的增殖功能无明显影响,而去甲肾上腺素能够显著促进体外培养甲状腺细胞的生长作用。结论 肾上腺素能神经递质在甲状腺功能的调节中扮演重要角色。
, http://www.100md.com
Effect of adrenergic neurotransmitters on growth of cultured human thyroid cells
LIU Cuiping,LIU Chao,QIN Youwen,et al
(Department of Endocrinology,the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University,Nanjing 210029)
Abstract：Objective To investigate the effect of adrenergic neurotransmitters on the growth function of thyroid gland.Methods Cell Titer 96 Non-radioactive Cell Proliferation Assay was used to study the growth of cultured thyrocytes from paraadenomatous thyroid tissues in response to various concentrations of epinephrine and norepinephrine.Results Norepinephrine could significantly stimulate thyroid cell growth,while epinephrine had no effect on the growth of cultured thyrocytes.Conclusion Adrenergic neurotransmitters play an important role in the regulation of thyroid functions.
, 百拇医药
Key words：Thyroid Cell culture Growth Adrenergic neurotransmitters▲
甲状腺受胆碱能、肾上腺素能和肽能神经支配。这三类神经通过相应神经递质的介导,广泛地调节着甲状腺细胞的生长与分化功能[1,2]。肾上腺素和去甲肾上腺素是两种重要的神经递质,我们以往的研究显示,这两类激素能够促进甲状腺细胞生成环磷酸腺苷(cAMP)[2]。但是,其对甲状腺生长功能的影响尚不明确。本文采用人甲状腺细胞体外培养技术,以非同位素标记的细胞增殖分析法,研究肾上腺素及去甲肾上腺素在甲状腺细胞生长功能调节中的作用和地位。
材料与方法
一、甲状腺细胞培养
甲状腺取材于甲状腺腺瘤旁正常组织。经胰酶和胶原酶消化后,以含TSH 103mu/L的Eagle培养液调整细胞浓度为2×104/孔,置于96孔培养板中孵育24小时。换取新鲜培养液,继续培养48小时。
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二、神经递质刺激试验
细胞培养72小时后,换取含不同浓度肾上腺素、去甲肾上腺素的试验液,孵育0～72小时。
三、细胞增殖分析法
采用非同位素标记的细胞增殖分析法(Promega)检测细胞生长功能。即在培养结束后,加入20μl染色液,轻轻振摇,置37℃孵箱中孵育4小时,再加入100μl终止液。用酶标仪于波长490nm测定吸光值。
四、统计学处理
所有标本均设8复孔。文中资料以均数±标准差表示。显著性差异采用方差分析和Q检验。
结果
一、肾上腺素能神经递质对甲状腺细胞增殖影响的量效关系
, 百拇医药
以72小时为刺激时间,测定10-5mmol/L、10-3mmol/L及10-1mmol/L的肾上腺素和去甲肾上腺素对甲状腺细胞生长的影响作用。如图1所示,肾上腺素对甲状腺细胞无显著影响,而去甲肾上腺素则明显促进甲状腺细胞的生长功能。
注：A：空白对照：B：10-5mmol/L；C：10-3mmol/L；
D：10-1mmol/L 与其他浓度比较*P<0.05
图1 不同浓度肾上腺素和去甲肾上腺素对甲状腺细胞生长的影响
二、肾上腺素能神经递质对甲状腺细胞增殖影响的时效关系
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由图2可见,10-3mmol/L的去甲肾上腺素可以时间依赖性地刺激甲状腺细胞的生长。但肾上腺素在10-3mmol/L浓度下,刺激24小时、48小时或72小时,均不影响甲状腺细胞的生长功能。
注：与空白对照比较*P<0.05；与其他时相比较*P<0.01
图2 肾上腺素和去甲肾上腺素刺激不同时间对甲状腺细胞生长的影响
讨论
甲状腺是人体最大的内分泌腺体,在维持机体的生长、发育、生殖与衰老等方面起着举足轻重的作用。此腺体具有生长和分化两种功能。这些功能受促甲状腺激素(TSH)、碘、细胞因子等多种因素的广泛调节[3～5]。
, http://www.100md.com
此外,甲状腺滤泡及其血管周围富含肾上腺素能、胆碱能和肽能三类神经末梢,后者释放的神经递质亦是重要的甲状腺生物调节剂,参与甲状腺激素的合成及分泌功能的调节过程,维持着甲状腺的稳态[1,2]。然而,迄今为止,关于肾上腺素能神经递质对甲状腺生长的影响尚未见报道。
本研究采用细胞培养方法,以肾上腺素和去甲肾上腺素为刺激因子,发现在10-1～10-5mmol/L的剂量范围内,去甲肾上腺素时间与剂量依赖性地刺激甲状腺细胞的生长功能。说明肾上腺素能神经递质在甲状腺生长的调控方面扮演十分重要的角色。
甲状腺细胞膜上包含a和b两类肾上腺素能受体。去甲肾上腺素通过此受体的介导,通过影响甲状腺细胞释放cAMP等方式,一方面调节甲状腺的分化功能,另一方面则调节甲状腺的增殖效应。但是,我们并未发现,试验浓度的肾上腺素对甲状腺细胞的生长具有明显的影响作用,提示甲状腺功能调控的复杂性。
, 百拇医药
由于甲状腺功能受多种生物调节剂的调控,单一因素能否真正反应机体的实际状况尚需进一步探讨。■
参考文献：
[1]张峻岭.甲状腺调节肽的若干研究进展.国外医学内分泌分册,1992,12：120-123.
[2]刘超,蒋须勤,张忠邦,等.肾上腺素能神经递质对人正常甲状腺细胞cAMP生成的影响.南京医科大学学报,1994,14：290-292.
[3]蔡东升,刘超.细胞因子与甲状腺.国外医学内分泌分册,1997,17：7-10.
[4]刘翠萍,刘超,覃又文,等.正常人和甲亢患者甲状腺细胞对白介素-1的反应性.中华内分泌代谢杂志,1999,15：53.
[5]Liu Chao.The effect of iodide on thyroid gland.Am J Compreh Med,1999,1：191-198.
收稿日期：1999-09-30
修稿日期：1999-11-01, 百拇医药
单位：刘翠萍(南京医科大学第一附属医院内分泌研究室 210029)； 刘超(南京医科大学第一附属医院内分泌研究室 210029)； 覃又文(南京医科大学第一附属医院内分泌研究室 210029)； 段宇(南京医科大学第一附属医院内分泌研究室 210029)； 武晓泓(南京医科大学第一附属医院内分泌研究室 210029)； 狄福松(南京医科大学第一附属医院内分泌研究室 210029)； 蒋须勤(南京医科大学第一附属医院内分泌研究室 210029)
关键词：甲状腺；细胞培养；生长；肾上腺素能神经递质
江苏医药000304 摘 要：目的 研究肾上腺素能神经递质在甲状腺生长功能调控中的作用和意义。方法 选取人甲状腺腺瘤旁正常组织,以细胞单层培养技术和非同位素标记的细胞增殖分析法,检测肾上腺素和去甲肾上腺素对甲状腺细胞生长的影响。结果 肾上腺素对甲状腺细胞的增殖功能无明显影响,而去甲肾上腺素能够显著促进体外培养甲状腺细胞的生长作用。结论 肾上腺素能神经递质在甲状腺功能的调节中扮演重要角色。
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Effect of adrenergic neurotransmitters on growth of cultured human thyroid cells
LIU Cuiping,LIU Chao,QIN Youwen,et al
(Department of Endocrinology,the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University,Nanjing 210029)
Abstract：Objective To investigate the effect of adrenergic neurotransmitters on the growth function of thyroid gland.Methods Cell Titer 96 Non-radioactive Cell Proliferation Assay was used to study the growth of cultured thyrocytes from paraadenomatous thyroid tissues in response to various concentrations of epinephrine and norepinephrine.Results Norepinephrine could significantly stimulate thyroid cell growth,while epinephrine had no effect on the growth of cultured thyrocytes.Conclusion Adrenergic neurotransmitters play an important role in the regulation of thyroid functions.
, 百拇医药
Key words：Thyroid Cell culture Growth Adrenergic neurotransmitters▲
甲状腺受胆碱能、肾上腺素能和肽能神经支配。这三类神经通过相应神经递质的介导,广泛地调节着甲状腺细胞的生长与分化功能[1,2]。肾上腺素和去甲肾上腺素是两种重要的神经递质,我们以往的研究显示,这两类激素能够促进甲状腺细胞生成环磷酸腺苷(cAMP)[2]。但是,其对甲状腺生长功能的影响尚不明确。本文采用人甲状腺细胞体外培养技术,以非同位素标记的细胞增殖分析法,研究肾上腺素及去甲肾上腺素在甲状腺细胞生长功能调节中的作用和地位。
材料与方法
一、甲状腺细胞培养
甲状腺取材于甲状腺腺瘤旁正常组织。经胰酶和胶原酶消化后,以含TSH 103mu/L的Eagle培养液调整细胞浓度为2×104/孔,置于96孔培养板中孵育24小时。换取新鲜培养液,继续培养48小时。
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二、神经递质刺激试验
细胞培养72小时后,换取含不同浓度肾上腺素、去甲肾上腺素的试验液,孵育0～72小时。
三、细胞增殖分析法
采用非同位素标记的细胞增殖分析法(Promega)检测细胞生长功能。即在培养结束后,加入20μl染色液,轻轻振摇,置37℃孵箱中孵育4小时,再加入100μl终止液。用酶标仪于波长490nm测定吸光值。
四、统计学处理
所有标本均设8复孔。文中资料以均数±标准差表示。显著性差异采用方差分析和Q检验。
结果
一、肾上腺素能神经递质对甲状腺细胞增殖影响的量效关系
, 百拇医药
以72小时为刺激时间,测定10-5mmol/L、10-3mmol/L及10-1mmol/L的肾上腺素和去甲肾上腺素对甲状腺细胞生长的影响作用。如图1所示,肾上腺素对甲状腺细胞无显著影响,而去甲肾上腺素则明显促进甲状腺细胞的生长功能。
注：A：空白对照：B：10-5mmol/L；C：10-3mmol/L；
D：10-1mmol/L 与其他浓度比较*P<0.05
图1 不同浓度肾上腺素和去甲肾上腺素对甲状腺细胞生长的影响
二、肾上腺素能神经递质对甲状腺细胞增殖影响的时效关系
, http://www.100md.com
由图2可见,10-3mmol/L的去甲肾上腺素可以时间依赖性地刺激甲状腺细胞的生长。但肾上腺素在10-3mmol/L浓度下,刺激24小时、48小时或72小时,均不影响甲状腺细胞的生长功能。
注：与空白对照比较*P<0.05；与其他时相比较*P<0.01
图2 肾上腺素和去甲肾上腺素刺激不同时间对甲状腺细胞生长的影响
讨论
甲状腺是人体最大的内分泌腺体,在维持机体的生长、发育、生殖与衰老等方面起着举足轻重的作用。此腺体具有生长和分化两种功能。这些功能受促甲状腺激素(TSH)、碘、细胞因子等多种因素的广泛调节[3～5]。
, http://www.100md.com
此外,甲状腺滤泡及其血管周围富含肾上腺素能、胆碱能和肽能三类神经末梢,后者释放的神经递质亦是重要的甲状腺生物调节剂,参与甲状腺激素的合成及分泌功能的调节过程,维持着甲状腺的稳态[1,2]。然而,迄今为止,关于肾上腺素能神经递质对甲状腺生长的影响尚未见报道。
本研究采用细胞培养方法,以肾上腺素和去甲肾上腺素为刺激因子,发现在10-1～10-5mmol/L的剂量范围内,去甲肾上腺素时间与剂量依赖性地刺激甲状腺细胞的生长功能。说明肾上腺素能神经递质在甲状腺生长的调控方面扮演十分重要的角色。
甲状腺细胞膜上包含a和b两类肾上腺素能受体。去甲肾上腺素通过此受体的介导,通过影响甲状腺细胞释放cAMP等方式,一方面调节甲状腺的分化功能,另一方面则调节甲状腺的增殖效应。但是,我们并未发现,试验浓度的肾上腺素对甲状腺细胞的生长具有明显的影响作用,提示甲状腺功能调控的复杂性。
, 百拇医药
由于甲状腺功能受多种生物调节剂的调控,单一因素能否真正反应机体的实际状况尚需进一步探讨。■
参考文献：
[1]张峻岭.甲状腺调节肽的若干研究进展.国外医学内分泌分册,1992,12：120-123.
[2]刘超,蒋须勤,张忠邦,等.肾上腺素能神经递质对人正常甲状腺细胞cAMP生成的影响.南京医科大学学报,1994,14：290-292.
[3]蔡东升,刘超.细胞因子与甲状腺.国外医学内分泌分册,1997,17：7-10.
[4]刘翠萍,刘超,覃又文,等.正常人和甲亢患者甲状腺细胞对白介素-1的反应性.中华内分泌代谢杂志,1999,15：53.
[5]Liu Chao.The effect of iodide on thyroid gland.Am J Compreh Med,1999,1：191-198.
收稿日期：1999-09-30
修稿日期：1999-11-01, 百拇医药