胃癌及癌前病变中表皮生长因子和受体表达的研究
作者：兰春慧 吴小翎
单位：兰春慧(第三军医大学大坪医院消化内科 400042)；吴小翎(重庆医科大学)
关键词：表皮生长因子；表皮生长因子受体；胃肿瘤；癌前病变；免疫组化
重庆医学000302 摘 要 目的 探讨表皮生长因子(EGF)和表皮生长因子受体(EGFR)在胃癌的表达及与胃癌发生发展的关系。方法 采用免疫组化S-P法对正常胃粘膜(n=5)，各级胃粘膜异型增生(轻度n=9，中度n=6，重度n=5)，早期胃癌(n=10)，进展期胃癌(n=40)，癌旁组织(n=27)进行研究。结果 EGF及EGFR在正常胃粘膜中均为阴性，在异型增生病变中随异型增生程度的增加，阳性率逐渐升高。EGF在轻、中、重度异型增生中的阳性率分别为22.2%(2/9)、50%(3/6)和80%(4/5)；EGFR在轻、中、重度异型增生中的阳性率分别为33.3%(3/9)、66.7%(4/6)、60%(3/5)。EGF和EGFR在早期胃癌中的阳性率均为20%(2/10)；在进展期胃癌的阳性率分别为62.5%(25/40)和60%(24/40)。进展期胃癌EGF和EGFR的阳性率显著高于早期胃癌(P<0.05)，癌旁异常组织组的EGF和EGER阳性率均高于癌旁正常组织组(77.8%vs22.2%，P<0.05。83.3%vs44.4%，P<0.05)。结论 EGF及EGFR参与了胃癌的发生、发展，是胃癌前病变的一项有意义的标志物。
, http://www.100md.com
Expression of Epidermal Growth Factor and its Receptor in Gastric Carcinoma and Precancerous Lesions
Lan Chunhui Wu Xiaoling
(Department of Gastroenterology, the Daping Hospital of the Third Military Medical University, Chongqing)
Abstract:Objectire To study the expression and significance of EGF and EGFR in the process of gastric carcinogenisis. Methods:S-P immunohistochemical method was used to examine the expression of EGF and EGFR in 75cases (5 normal gastric mucosas, 20 gastric mucosas, 50 gastric carcinomas and 27 paracarcinomas tissues).Results:Normal gastric mucosa was negative for EGF and EGFR. Increased expression of EGF and EGFR was found in slight, moderate and severe dysplasia. EGF expression was 22.2%,50% and 80%, EGFR expression was 33.3%,66.7% and 60%. The positive rates of EGF and EGFR in early gastric carcinomas were both 20%. The positive rates of EGF and EGFR in advanced gastric carcinomas were 62.5% and 60% respectivly. The positive rates of EGF and EGFR in advanced gastric carcinomas were significantly higher than those in early gastric carcinomas (P<0.05). The positive rates of EGF and EGFR in paracarcinomas abnormal tissues were significantly higher than those in paracarcinomas normal tissues (77.8% vs 22.2%, P<0.05. 83.3% vs 44.4%, P<0.05).Conclusion:EGF and EGFR positive expression might play an important role in the process of carcinogenesis of gastric mucosa and might serve as an important molecular marker of gastric premalignant lesions.
, 百拇医药
Key words:epidermal growth factor;epidermal growth factor receptor;stomach neoplams;precancerous lesions;immunohistochemistry
表皮生长因子(Epidermal growth factor, EGF)与细胞的增殖、分化及癌变均有密切联系，其受体(Epidermal growth factor receptor, EGFR)与癌基因erb-B2的蛋白产物高度同源。研究发现，许多肿瘤组织都有EGF及EGFR的高表达，提示它们与肿瘤的发生有关[1、2]。但EGF及EGFR在胃癌前病变组织及癌旁组织的表达报道不多。我们采用S-P免疫组化法检测EGF及EGFR在胃癌及癌前病变中的表达，探讨其在胃癌发生发展中的作用。
1 材料和方法
, http://www.100md.com 1.1 材料
收集1992年～1996年重庆医科大学第二临床学院手术切除或内镜活检胃组织标本75例，其中正常胃粘膜5例，胃粘膜轻度异型增生6例；中度异型增生9例，重度异型增生5例；早期胃癌10例，进展期胃癌40例。50例胃癌中27例带有癌旁组织，其中18例出现慢性萎缩性胃炎、肠化生及轻度异型增生等改变，判定为癌旁异常组织，其余9例形态学基本正常，为癌旁正常组织。所有标本均经10%甲醛固定，常规石蜡包埋，连续4um切片。
1.2 方法
采用S-P法作EGF及EGFR两种免疫组织化学检测，EGF抗体、EGFR抗体和S-P免疫组化试剂均购自福州迈新生物技术开发公司，即用型，操作按说明书进行。用已知的阳性片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判定
, 百拇医药 EGF及EGFR的阳性染色为位于胞浆及胞膜，个别位于胞核的棕黄色颗粒。由同一名医师在400倍视野下任意选择5个视野，每个视野记数200个细胞，阳性细胞≥25%为阳性表达。
统计学处理采用卡方检验。
2 结果
5例正常胃粘膜EGF、EGFR表达均为阴性。EGF和EGFR的阳性表达随着异型增生程度的加重，有逐渐增高的趋势，但三级异型增生之间的差异无统计学意义。进展期胃癌EGF、EGFR的阳性表达均高于早期胃癌(P<0.05，表1)；癌旁异常组织组EGF、EGFR的阳性表达均高于癌旁正常组织组(P<0.05，表1)。
3 讨论
EGF是一种分子量为6000(取决于种系)的低分子多肽，它能通过与靶细胞膜上的EGFR结合产生生物效应。EGFR是一分子量约为170000的跨膜糖蛋白，它与EGF结合后能激活自身的酪氨酸激酶，使其磷酸化，提供持续分裂信号到细胞内，引起细胞增殖、分化[3]。
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我们的研究表明：正常胃粘膜中EGF及EGFR的表达无一例阳性，与文献报道一致。在癌前病变中EGF和EGFR有较高的阳性率，随着异型增生程度的加重，阳性率呈上升趋势。胃粘膜发生癌变后，阳性率下降，至进展期EGF及EGFR的阳性率又增高。癌前病变EGF及EGFR增高的原因可能是：①此阶段细胞增生一修复过程活跃，使EGF及EGFR生理性分泌增加；②某些异性增生的细胞可能已出现基因变异，遗传学的改变使这些细胞具备了与肿瘤细胞类似的自泌功能，即自身分泌EGF并表达相应受体。而一旦癌发生后，EGF及EGFR的阳性率有所下降，其原因尚未阐明，可能与肿瘤的发生、发展具渐进性有关，此过程中基因的活化和表达是影响EGF和EGFR水平的关键。erb-B2基因与EGFR关系最为密切，它编码的蛋白是EGFR胞浆酪氨酸蛋白激酶部分，即“截短”的EGFR，它不必与EGF等配体结合，即能自身激活酪氨酸蛋白激酶[4]。由于erb-B2基因在不同病变阶段开放的程度不同，当胃粘膜癌变后，一部分erb-B2基因关闭，使EGFR表达水平下降，此外，EGFR的大量磷酸化据报道能诱导某些原癌基因如C-fos、C-myc等过度表达，这些基因的表达可抑制EGF、EGFR的分泌[5]，其三可能是由于EGF、EGFR的表达还依赖于个体细胞的生长状态和肿瘤的分化状态，与细胞周期有关。随着肿瘤的不断生长，自身也能大量分泌EGF及EGFR，故进展期胃癌EGF及EGFR水平明显增高。EGF及EGFR在胃各级病变 的动态变化，提示他们参与了胃癌的发生、发展。
, http://www.100md.com
在本实验中，我们还观察了胃癌癌旁组织EGF、EGFR的表达情况。癌旁异常组织组的EGF和EGFR阳性率分别为77.8%和83.3%，显著高于癌旁正常组织组(P<0.05)，这可能是肿瘤周围的细胞受到肿瘤细胞分泌的某种因子的刺激开始表达EGF、EGFR，致使“正常”的肿瘤周围细胞逐渐向恶性表型转化。Shin et al[6]在36例头颈部鳞癌的癌旁组织亦观察到EGFR的表达两倍高于对照正常上皮组织，认为尽管EGFR在受损的上皮组织中可能起到修复作用，但在这个过程中已伴随着基因的改变。这些研究表明EGF和EGFR在胃粘膜恶性化过程中起着重要的作用。
胃粘膜异型增生已确定为胃癌的癌前病变。随访研究表明，不同程度的异型增生皆可逆转或恶变，但其中哪些更具潜在恶变倾向仍缺乏明确依据。我们的研究提示应用抗EGF、抗EGFR单抗对胃癌前病变进行免疫组化染色，把阳性者尤其是高表达者视为高危性癌前病变，结合其他指标，对其进行针对性随访，有可能从中发现部分早期胃癌，使其得到及时治疗。
, 百拇医药
参考文献
1，孙惠川，汤钊猷.表皮生长因子受体与肿瘤研究进展.国外医学肿瘤学分册，1995，22：193
2，Tokunaga A, Onda M, Teramoto T, et al, Clinical significance of Epidermal growth factor(EGF),EGF receptor and c-erbB-2 in human gastric cancer. Cancer, 1995,75(6):1418
3，Boonstra J, Rijken P, Humbel B, et al, The epidermal growth factor. Cell Biology International, 1995,19(5):413
4，Akiyama T, Sudo C, Ogawara H, et al, The Product of the human c-erbB-2 gene; a 185-kilodalton glycoprotein with tyrosine kinase activity. Science, 1986,232:1644
, 百拇医药
5，Muller R, Bravo R, Vurckhardt J, et al, Induction of c-fos gene and protein by growth factors precedes activation of c-myc. Nature, 1984,312:716
6，Shin DM, Ro JY, Hong WK, et al, Dysregulation of epidermal growth factor receptor expression in premalignant lesions during head and neck tumorigenesis. Cancer Res, 1994, 54(15):3153, 百拇医药
单位：兰春慧(第三军医大学大坪医院消化内科 400042)；吴小翎(重庆医科大学)
关键词：表皮生长因子；表皮生长因子受体；胃肿瘤；癌前病变；免疫组化
重庆医学000302 摘 要 目的 探讨表皮生长因子(EGF)和表皮生长因子受体(EGFR)在胃癌的表达及与胃癌发生发展的关系。方法 采用免疫组化S-P法对正常胃粘膜(n=5)，各级胃粘膜异型增生(轻度n=9，中度n=6，重度n=5)，早期胃癌(n=10)，进展期胃癌(n=40)，癌旁组织(n=27)进行研究。结果 EGF及EGFR在正常胃粘膜中均为阴性，在异型增生病变中随异型增生程度的增加，阳性率逐渐升高。EGF在轻、中、重度异型增生中的阳性率分别为22.2%(2/9)、50%(3/6)和80%(4/5)；EGFR在轻、中、重度异型增生中的阳性率分别为33.3%(3/9)、66.7%(4/6)、60%(3/5)。EGF和EGFR在早期胃癌中的阳性率均为20%(2/10)；在进展期胃癌的阳性率分别为62.5%(25/40)和60%(24/40)。进展期胃癌EGF和EGFR的阳性率显著高于早期胃癌(P<0.05)，癌旁异常组织组的EGF和EGER阳性率均高于癌旁正常组织组(77.8%vs22.2%，P<0.05。83.3%vs44.4%，P<0.05)。结论 EGF及EGFR参与了胃癌的发生、发展，是胃癌前病变的一项有意义的标志物。
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Expression of Epidermal Growth Factor and its Receptor in Gastric Carcinoma and Precancerous Lesions
Lan Chunhui Wu Xiaoling
(Department of Gastroenterology, the Daping Hospital of the Third Military Medical University, Chongqing)
Abstract:Objectire To study the expression and significance of EGF and EGFR in the process of gastric carcinogenisis. Methods:S-P immunohistochemical method was used to examine the expression of EGF and EGFR in 75cases (5 normal gastric mucosas, 20 gastric mucosas, 50 gastric carcinomas and 27 paracarcinomas tissues).Results:Normal gastric mucosa was negative for EGF and EGFR. Increased expression of EGF and EGFR was found in slight, moderate and severe dysplasia. EGF expression was 22.2%,50% and 80%, EGFR expression was 33.3%,66.7% and 60%. The positive rates of EGF and EGFR in early gastric carcinomas were both 20%. The positive rates of EGF and EGFR in advanced gastric carcinomas were 62.5% and 60% respectivly. The positive rates of EGF and EGFR in advanced gastric carcinomas were significantly higher than those in early gastric carcinomas (P<0.05). The positive rates of EGF and EGFR in paracarcinomas abnormal tissues were significantly higher than those in paracarcinomas normal tissues (77.8% vs 22.2%, P<0.05. 83.3% vs 44.4%, P<0.05).Conclusion:EGF and EGFR positive expression might play an important role in the process of carcinogenesis of gastric mucosa and might serve as an important molecular marker of gastric premalignant lesions.
, 百拇医药
Key words:epidermal growth factor;epidermal growth factor receptor;stomach neoplams;precancerous lesions;immunohistochemistry
表皮生长因子(Epidermal growth factor, EGF)与细胞的增殖、分化及癌变均有密切联系，其受体(Epidermal growth factor receptor, EGFR)与癌基因erb-B2的蛋白产物高度同源。研究发现，许多肿瘤组织都有EGF及EGFR的高表达，提示它们与肿瘤的发生有关[1、2]。但EGF及EGFR在胃癌前病变组织及癌旁组织的表达报道不多。我们采用S-P免疫组化法检测EGF及EGFR在胃癌及癌前病变中的表达，探讨其在胃癌发生发展中的作用。
1 材料和方法
, http://www.100md.com 1.1 材料
收集1992年～1996年重庆医科大学第二临床学院手术切除或内镜活检胃组织标本75例，其中正常胃粘膜5例，胃粘膜轻度异型增生6例；中度异型增生9例，重度异型增生5例；早期胃癌10例，进展期胃癌40例。50例胃癌中27例带有癌旁组织，其中18例出现慢性萎缩性胃炎、肠化生及轻度异型增生等改变，判定为癌旁异常组织，其余9例形态学基本正常，为癌旁正常组织。所有标本均经10%甲醛固定，常规石蜡包埋，连续4um切片。
1.2 方法
采用S-P法作EGF及EGFR两种免疫组织化学检测，EGF抗体、EGFR抗体和S-P免疫组化试剂均购自福州迈新生物技术开发公司，即用型，操作按说明书进行。用已知的阳性片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判定
, 百拇医药 EGF及EGFR的阳性染色为位于胞浆及胞膜，个别位于胞核的棕黄色颗粒。由同一名医师在400倍视野下任意选择5个视野，每个视野记数200个细胞，阳性细胞≥25%为阳性表达。
统计学处理采用卡方检验。
2 结果
5例正常胃粘膜EGF、EGFR表达均为阴性。EGF和EGFR的阳性表达随着异型增生程度的加重，有逐渐增高的趋势，但三级异型增生之间的差异无统计学意义。进展期胃癌EGF、EGFR的阳性表达均高于早期胃癌(P<0.05，表1)；癌旁异常组织组EGF、EGFR的阳性表达均高于癌旁正常组织组(P<0.05，表1)。
3 讨论
EGF是一种分子量为6000(取决于种系)的低分子多肽，它能通过与靶细胞膜上的EGFR结合产生生物效应。EGFR是一分子量约为170000的跨膜糖蛋白，它与EGF结合后能激活自身的酪氨酸激酶，使其磷酸化，提供持续分裂信号到细胞内，引起细胞增殖、分化[3]。
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我们的研究表明：正常胃粘膜中EGF及EGFR的表达无一例阳性，与文献报道一致。在癌前病变中EGF和EGFR有较高的阳性率，随着异型增生程度的加重，阳性率呈上升趋势。胃粘膜发生癌变后，阳性率下降，至进展期EGF及EGFR的阳性率又增高。癌前病变EGF及EGFR增高的原因可能是：①此阶段细胞增生一修复过程活跃，使EGF及EGFR生理性分泌增加；②某些异性增生的细胞可能已出现基因变异，遗传学的改变使这些细胞具备了与肿瘤细胞类似的自泌功能，即自身分泌EGF并表达相应受体。而一旦癌发生后，EGF及EGFR的阳性率有所下降，其原因尚未阐明，可能与肿瘤的发生、发展具渐进性有关，此过程中基因的活化和表达是影响EGF和EGFR水平的关键。erb-B2基因与EGFR关系最为密切，它编码的蛋白是EGFR胞浆酪氨酸蛋白激酶部分，即“截短”的EGFR，它不必与EGF等配体结合，即能自身激活酪氨酸蛋白激酶[4]。由于erb-B2基因在不同病变阶段开放的程度不同，当胃粘膜癌变后，一部分erb-B2基因关闭，使EGFR表达水平下降，此外，EGFR的大量磷酸化据报道能诱导某些原癌基因如C-fos、C-myc等过度表达，这些基因的表达可抑制EGF、EGFR的分泌[5]，其三可能是由于EGF、EGFR的表达还依赖于个体细胞的生长状态和肿瘤的分化状态，与细胞周期有关。随着肿瘤的不断生长，自身也能大量分泌EGF及EGFR，故进展期胃癌EGF及EGFR水平明显增高。EGF及EGFR在胃各级病变 的动态变化，提示他们参与了胃癌的发生、发展。
, http://www.100md.com
在本实验中，我们还观察了胃癌癌旁组织EGF、EGFR的表达情况。癌旁异常组织组的EGF和EGFR阳性率分别为77.8%和83.3%，显著高于癌旁正常组织组(P<0.05)，这可能是肿瘤周围的细胞受到肿瘤细胞分泌的某种因子的刺激开始表达EGF、EGFR，致使“正常”的肿瘤周围细胞逐渐向恶性表型转化。Shin et al[6]在36例头颈部鳞癌的癌旁组织亦观察到EGFR的表达两倍高于对照正常上皮组织，认为尽管EGFR在受损的上皮组织中可能起到修复作用，但在这个过程中已伴随着基因的改变。这些研究表明EGF和EGFR在胃粘膜恶性化过程中起着重要的作用。
胃粘膜异型增生已确定为胃癌的癌前病变。随访研究表明，不同程度的异型增生皆可逆转或恶变，但其中哪些更具潜在恶变倾向仍缺乏明确依据。我们的研究提示应用抗EGF、抗EGFR单抗对胃癌前病变进行免疫组化染色，把阳性者尤其是高表达者视为高危性癌前病变，结合其他指标，对其进行针对性随访，有可能从中发现部分早期胃癌，使其得到及时治疗。
, 百拇医药
参考文献
1，孙惠川，汤钊猷.表皮生长因子受体与肿瘤研究进展.国外医学肿瘤学分册，1995，22：193
2，Tokunaga A, Onda M, Teramoto T, et al, Clinical significance of Epidermal growth factor(EGF),EGF receptor and c-erbB-2 in human gastric cancer. Cancer, 1995,75(6):1418
3，Boonstra J, Rijken P, Humbel B, et al, The epidermal growth factor. Cell Biology International, 1995,19(5):413
4，Akiyama T, Sudo C, Ogawara H, et al, The Product of the human c-erbB-2 gene; a 185-kilodalton glycoprotein with tyrosine kinase activity. Science, 1986,232:1644
, 百拇医药
5，Muller R, Bravo R, Vurckhardt J, et al, Induction of c-fos gene and protein by growth factors precedes activation of c-myc. Nature, 1984,312:716
6，Shin DM, Ro JY, Hong WK, et al, Dysregulation of epidermal growth factor receptor expression in premalignant lesions during head and neck tumorigenesis. Cancer Res, 1994, 54(15):3153, 百拇医药