膀胱癌组织中Ki-67/MIB-1、PCNA及nm23表达的意义
作者：刘屹立 朴莹 王侠 刘同才 孙志熙 王平 孔垂泽 李昕
单位：刘屹立(中国医科大学第一临床学院泌尿外科，沈阳 110001)；朴莹(中国医科大学第一临床学院泌尿外科，沈阳 110001)；王侠(中国医科大学第一临床学院泌尿外科，沈阳 110001)；刘同才(中国医科大学第一临床学院泌尿外科，沈阳 110001)；孙志熙(中国医科大学第一临床学院泌尿外科，沈阳 110001)
关键词：膀胱移行细胞癌；复发；基因
中国医科大学学报000318 摘要 目的：研究Ki-67、PCNA、nm23基因表达与膀胱移行细胞癌分级、分期及复发的关系, 对预后作出估计。方法：膀胱移行细胞癌石蜡包埋标本44例, 正常对照标本8例。采用免疫组化SABC法, 对标本切片进行染色。结果：Ki-67/MIB-1在G1、G2、G3各级别间及pTa+pT1、pT2、pT3各期别间差异显著(P<0.05 );PCNA蛋白在 G1+G2和G3间,pTa+pT1和pT2+PT3间差异显著(P<0.05)。二者表达强度与膀胱癌分级、分期呈正相关性。高表达组的病人，膀胱癌复发率高于低表达组(P<0.05)。 nm23在低分化和高期别的肿瘤组织中有表达减少的趋势。复发组与未复发组比较，nm23表达无差异性。结论：Ki-67和PCNA的表达可作为膀胱肿瘤预后估计的指标,Ki-67可能会更精确；nm23可能是膀胱癌的抑癌基因。
, 百拇医药
Prognostic Value of Ki-67, PCNA and nm23 for Recurrence and Progression
of Bladder Transitional Cell Carcinoma
Liu Yili Piao Ying Wang Xia Liu Tongcai Sun Zhixi Wang Ping Kong Chuize Li Xin
(Department of Urology ,The First Clinical College ,China Medical University,Shenyang， 110001)
ABSTRACT Objective:We retrospectively reviewed 44 patients with bladder cancer to study whether the expression of Ki-67, PCNA ,and nm23 predicts recurrence and progression. Methods: The specimens of bladder cancer were immunostained with Ki-67, PCNA ,and nm23.Results: The recurrence rate , the stage, and the grade were significantly higher in patient with higher expression of Ki-67 , PCNA than those with low expression (P< 0.05). The recurrence rate in patients with moderate and high expression of Ki-67 is 75% (P<0.01) , and that of PCNA is 69.2% (P<0.05).There are less evidence in correlation between the recurrence rate ,the stage ,and the expression of nm23.Conclusion:Both of the Ki-67 and PCNA labeling index are predictive factor for recurrence of superficial bladder cancer, but the Ki-67 may be better than PCNA.
, 百拇医药
KEY WORDS bladder transitional cell carcinoma ; recurrence; prognosis
为探讨膀胱癌中癌基因的表达与其生物学行为的关系，采取免疫组化SABC法对44例膀胱癌组织中核增殖相关抗原MIB-1、增殖细胞核抗原PCNA、抑癌基因nm23蛋白的表达进行测定。
1 材料与方法
1.1材料来源
1995～1996年我院膀胱移行细胞癌石蜡包埋标本 44 例，男 32 例，女 12 例。年龄 29～76 岁。G1期9例，G2期23例，G3期12例。 pTa11例， pT1 15 例， pT2 11例，pT3 7例。随访 2 年，6 例失访，38 例中 23 例复发，时间间隔 4～ 20个月。8例正常膀胱粘膜标本作对照。
, 百拇医药
1.2 试剂与方法
一抗鼠抗人Ki-67(MIB-1)抗体，鼠抗人nm23抗体，鼠抗人PCNA抗体，DAB显色剂，SABC免疫组化试剂盒购自博士德公司。采用链霉亲合素-生物素化过氧化酶复合物(SABC)法。免疫组化步骤按试剂盒说明进行，均用微波炉法抗原修复。PBS代替一抗作空白对照。细胞着色棕黄色为阳性。每张切片随机计数 4个视野，每个视野计数200个细胞，共800个细胞，计算阳性细胞所占比率。标准：阳性细胞<10%为弱阳性(+)，10%～30%为阳性(
)，>30%为强阳性(
)。统计学计数资料用χ2检验，计量资料用t检验。
2 结果
2.1 MIB-1、PCNA、nm23的表达与膀胱癌分级、分期的关系
, 百拇医药
MIB-1与PCNA染色定位于细胞核。二者的表达在膀胱癌与正常组织间差异显著(P<0.05)。MIB-1表达在G1、G2与G3组间，在pTa+pT1与其他分期间有显著差异(P<0.05) 。PCNA在 G1+G2与G3间，pTa+pT1与pT2+pT3间有显著差异(P<0.05)。nm23的表达定位在胞浆，随分级、分期的升高有减少趋势，但各组间无显著差异(P>0.05)。见表1。
表1 MIB-1、PCNA、nm23 在不同期别、级别的膀胱癌组织中的表达(
±s，%)
Table 1 The expression of MIB-1，PCNA，nm23 in the bladder cancer tissues with different stage and grade (±s，%) 项目
, 百拇医药
MIB-1
PCNA
nm23
G1
6.7± 3.9
5.4±4.0
37.7±12.9
G2
20.5±16.7
17.8±13.2
27.1±10.0
G3
, 百拇医药
41.5±19.4
39.2±20.5
20.4±17.3
pTa
5.3±4.8
7.1±5.1
30.5± 9.3
pT1
17.2±15.1
16.3±10.5
24.9±14.6
, 百拇医药 pT2
21.1±17.7
19.5±17.1
20.2±13.4
pT3
40.2±23.7
39.6±20.8
16.5± 9.8
正常组织
(-)
(-)
67.9±19.9
, 百拇医药
2.2 MIB-1、PCNA、nm23的表达与膀胱癌复发的关系
膀胱癌组织中MIB-1及PCNA蛋白呈中高度表达者，膀胱癌复发率比低表达者显著升高(P<0.05)。 然而在复发组与未复发组比较中，nm23未见统计学意义(P>0.05)。见表2。表2 MIB-1，PCNA，nm23的表达与膀胱癌复发的关系
Tab.2 The relationship between the expression of MIB-1，PCNA，nm23 and， the recurrence of bladder cancer 项目
n
MIB-1
PCNA
nm23
, 百拇医药
-/+
/
-/+
/
-/+
/
复 发
23
8
15
7
16
10
13
, http://www.100md.com
未复发
15
10
5
8
7
7
8
3 讨论
膀胱移行细胞癌是常见的肿瘤之一，具有易复发性，其复发规律及其与生物学特性的关系至今仍不清楚。Ki-67、PCNA是目前较为肯定的核增殖标志基因。Ki-67表达蛋白为MIB-1，在除G0期以外的细胞周期各时相均有表达，M期达最大表达峰。早期的Ki-67抗体只适用于冰冻标本，DOKA公司推出的新一代抗体可用于石蜡切片，为回顾性研究创造了条件。PCNA在G0、G1期无明显表达, 在G1后期及其他各期表达增加, S期达高峰。但PCNA蛋白表达易受生长因子等因素诱导，而且半衰期长，因此在检测中可能影响结果统计的精确性。在多种肿瘤研究中，Ki-67及PCNA的表达与肿瘤的分期、预后有关。在膀胱移行细胞癌的研究中，国外资料表明二者的表达强度随肿瘤的分级、分期升高而增高，而且高表达率与不良预后密切相关[1,2]。但二者中何者特异性较高尚不肯定。本研究结果提示，总体二者阳性表达率在肿瘤不同级别、期别之间均有差异，提示可以作为肿瘤恶性程度及预后评价的参考指标, 与国外报告基本一致[3]。而比较二者表达发现，在 G1、G2、G3各级间，以及PTa+PT1、PT2、PT3各期间比较，Ki-67均能显现出阳性表达的显著性差别，而PCNA只在G1+G2与 G3、pTa+pT1与pT2+pT3间有统计学意义，提示Ki-67蛋白表达检测的敏感性相对较高，对恶性程度的分辨较为细腻。Ki-67中高度表达的病例中肿瘤复发率为75%, PCNA中高度表达者复发率为69. 2%。上述比较是否能否说明KI-67作为预后估计指标可能优于PCNA，仍需在分子生物学水平做进一步检测。在本研究中，对肿瘤转移抑制基因nm23应用免疫组化法进行了蛋白表达测定，其结果与国内程伟[4]等报告基本一致，提示在分化较低、期别较高的癌组织中其表达为下降趋势，但本组未见统计学差异(P>0.05)。目前认为nm23为转移抑制基因，资料中统计学比较显著性较差，这可能与本组病例中，肿瘤膀胱外侵袭、淋巴结转移、远隔转移等病例较少有关，可以在今后增大此类样本量继续加以研究。
, 百拇医药
王平(中国医科大学第一临床学院泌尿外科，沈阳 110001)
孔垂泽(中国医科大学第一临床学院泌尿外科，沈阳 110001)
李昕(沈阳军区总医院泌尿外科)
参考文献
1，Koyuncuoglu M , Kargi A. Investigation of p53, c-erbB-2, PCNA immunoreactivity, DNA content, AgNOR and apoptosis in bladder carcinoma as prognostic parameters. Cancer Lett, 1998 ,126(2):143—148
2，Asakura T, Takano Y, Iki M,et al. Prognostic value of Ki-67 for recurrence and progression of superficial bladder cancer. J Urol, 1997 , 158(2):385—388
3，Golam M ,Keiji K ,Hiromi K ,et al. The proliferation index of MIB-1 as a prognostic factor for patients with transitional cell carcinoma of the upper urinary tract.Cancer,1996,78(4):827—833
4，程伟，邵国兴，赵世平,等.nm23基因产物/NDPK在膀胱癌中的表达及其临床意义. 中华泌尿外科杂志,1997,18(7):440～441
收稿日期：1999-03-30, http://www.100md.com
单位：刘屹立(中国医科大学第一临床学院泌尿外科，沈阳 110001)；朴莹(中国医科大学第一临床学院泌尿外科，沈阳 110001)；王侠(中国医科大学第一临床学院泌尿外科，沈阳 110001)；刘同才(中国医科大学第一临床学院泌尿外科，沈阳 110001)；孙志熙(中国医科大学第一临床学院泌尿外科，沈阳 110001)
关键词：膀胱移行细胞癌；复发；基因
中国医科大学学报000318 摘要 目的：研究Ki-67、PCNA、nm23基因表达与膀胱移行细胞癌分级、分期及复发的关系, 对预后作出估计。方法：膀胱移行细胞癌石蜡包埋标本44例, 正常对照标本8例。采用免疫组化SABC法, 对标本切片进行染色。结果：Ki-67/MIB-1在G1、G2、G3各级别间及pTa+pT1、pT2、pT3各期别间差异显著(P<0.05 );PCNA蛋白在 G1+G2和G3间,pTa+pT1和pT2+PT3间差异显著(P<0.05)。二者表达强度与膀胱癌分级、分期呈正相关性。高表达组的病人，膀胱癌复发率高于低表达组(P<0.05)。 nm23在低分化和高期别的肿瘤组织中有表达减少的趋势。复发组与未复发组比较，nm23表达无差异性。结论：Ki-67和PCNA的表达可作为膀胱肿瘤预后估计的指标,Ki-67可能会更精确；nm23可能是膀胱癌的抑癌基因。
, 百拇医药
Prognostic Value of Ki-67, PCNA and nm23 for Recurrence and Progression
of Bladder Transitional Cell Carcinoma
Liu Yili Piao Ying Wang Xia Liu Tongcai Sun Zhixi Wang Ping Kong Chuize Li Xin
(Department of Urology ,The First Clinical College ,China Medical University,Shenyang， 110001)
ABSTRACT Objective:We retrospectively reviewed 44 patients with bladder cancer to study whether the expression of Ki-67, PCNA ,and nm23 predicts recurrence and progression. Methods: The specimens of bladder cancer were immunostained with Ki-67, PCNA ,and nm23.Results: The recurrence rate , the stage, and the grade were significantly higher in patient with higher expression of Ki-67 , PCNA than those with low expression (P< 0.05). The recurrence rate in patients with moderate and high expression of Ki-67 is 75% (P<0.01) , and that of PCNA is 69.2% (P<0.05).There are less evidence in correlation between the recurrence rate ,the stage ,and the expression of nm23.Conclusion:Both of the Ki-67 and PCNA labeling index are predictive factor for recurrence of superficial bladder cancer, but the Ki-67 may be better than PCNA.
, 百拇医药
KEY WORDS bladder transitional cell carcinoma ; recurrence; prognosis
为探讨膀胱癌中癌基因的表达与其生物学行为的关系，采取免疫组化SABC法对44例膀胱癌组织中核增殖相关抗原MIB-1、增殖细胞核抗原PCNA、抑癌基因nm23蛋白的表达进行测定。
1 材料与方法
1.1材料来源
1995～1996年我院膀胱移行细胞癌石蜡包埋标本 44 例，男 32 例，女 12 例。年龄 29～76 岁。G1期9例，G2期23例，G3期12例。 pTa11例， pT1 15 例， pT2 11例，pT3 7例。随访 2 年，6 例失访，38 例中 23 例复发，时间间隔 4～ 20个月。8例正常膀胱粘膜标本作对照。
, 百拇医药
1.2 试剂与方法
一抗鼠抗人Ki-67(MIB-1)抗体，鼠抗人nm23抗体，鼠抗人PCNA抗体，DAB显色剂，SABC免疫组化试剂盒购自博士德公司。采用链霉亲合素-生物素化过氧化酶复合物(SABC)法。免疫组化步骤按试剂盒说明进行，均用微波炉法抗原修复。PBS代替一抗作空白对照。细胞着色棕黄色为阳性。每张切片随机计数 4个视野，每个视野计数200个细胞，共800个细胞，计算阳性细胞所占比率。标准：阳性细胞<10%为弱阳性(+)，10%～30%为阳性(
)，>30%为强阳性()。统计学计数资料用χ2检验，计量资料用t检验。2 结果
2.1 MIB-1、PCNA、nm23的表达与膀胱癌分级、分期的关系
, 百拇医药
MIB-1与PCNA染色定位于细胞核。二者的表达在膀胱癌与正常组织间差异显著(P<0.05)。MIB-1表达在G1、G2与G3组间，在pTa+pT1与其他分期间有显著差异(P<0.05) 。PCNA在 G1+G2与G3间，pTa+pT1与pT2+pT3间有显著差异(P<0.05)。nm23的表达定位在胞浆，随分级、分期的升高有减少趋势，但各组间无显著差异(P>0.05)。见表1。
表1 MIB-1、PCNA、nm23 在不同期别、级别的膀胱癌组织中的表达(
±s，%)Table 1 The expression of MIB-1，PCNA，nm23 in the bladder cancer tissues with different stage and grade (
±s，%) 项目, 百拇医药
MIB-1
PCNA
nm23
G1
6.7± 3.9
5.4±4.0
37.7±12.9
G2
20.5±16.7
17.8±13.2
27.1±10.0
G3
, 百拇医药
41.5±19.4
39.2±20.5
20.4±17.3
pTa
5.3±4.8
7.1±5.1
30.5± 9.3
pT1
17.2±15.1
16.3±10.5
24.9±14.6
, 百拇医药 pT2
21.1±17.7
19.5±17.1
20.2±13.4
pT3
40.2±23.7
39.6±20.8
16.5± 9.8
正常组织
(-)
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2.2 MIB-1、PCNA、nm23的表达与膀胱癌复发的关系
膀胱癌组织中MIB-1及PCNA蛋白呈中高度表达者，膀胱癌复发率比低表达者显著升高(P<0.05)。 然而在复发组与未复发组比较中，nm23未见统计学意义(P>0.05)。见表2。表2 MIB-1，PCNA，nm23的表达与膀胱癌复发的关系
Tab.2 The relationship between the expression of MIB-1，PCNA，nm23 and， the recurrence of bladder cancer 项目
n
MIB-1
PCNA
nm23
, 百拇医药
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3 讨论
膀胱移行细胞癌是常见的肿瘤之一，具有易复发性，其复发规律及其与生物学特性的关系至今仍不清楚。Ki-67、PCNA是目前较为肯定的核增殖标志基因。Ki-67表达蛋白为MIB-1，在除G0期以外的细胞周期各时相均有表达，M期达最大表达峰。早期的Ki-67抗体只适用于冰冻标本，DOKA公司推出的新一代抗体可用于石蜡切片，为回顾性研究创造了条件。PCNA在G0、G1期无明显表达, 在G1后期及其他各期表达增加, S期达高峰。但PCNA蛋白表达易受生长因子等因素诱导，而且半衰期长，因此在检测中可能影响结果统计的精确性。在多种肿瘤研究中，Ki-67及PCNA的表达与肿瘤的分期、预后有关。在膀胱移行细胞癌的研究中，国外资料表明二者的表达强度随肿瘤的分级、分期升高而增高，而且高表达率与不良预后密切相关[1,2]。但二者中何者特异性较高尚不肯定。本研究结果提示，总体二者阳性表达率在肿瘤不同级别、期别之间均有差异，提示可以作为肿瘤恶性程度及预后评价的参考指标, 与国外报告基本一致[3]。而比较二者表达发现，在 G1、G2、G3各级间，以及PTa+PT1、PT2、PT3各期间比较，Ki-67均能显现出阳性表达的显著性差别，而PCNA只在G1+G2与 G3、pTa+pT1与pT2+pT3间有统计学意义，提示Ki-67蛋白表达检测的敏感性相对较高，对恶性程度的分辨较为细腻。Ki-67中高度表达的病例中肿瘤复发率为75%, PCNA中高度表达者复发率为69. 2%。上述比较是否能否说明KI-67作为预后估计指标可能优于PCNA，仍需在分子生物学水平做进一步检测。在本研究中，对肿瘤转移抑制基因nm23应用免疫组化法进行了蛋白表达测定，其结果与国内程伟[4]等报告基本一致，提示在分化较低、期别较高的癌组织中其表达为下降趋势，但本组未见统计学差异(P>0.05)。目前认为nm23为转移抑制基因，资料中统计学比较显著性较差，这可能与本组病例中，肿瘤膀胱外侵袭、淋巴结转移、远隔转移等病例较少有关，可以在今后增大此类样本量继续加以研究。
, 百拇医药
王平(中国医科大学第一临床学院泌尿外科，沈阳 110001)
孔垂泽(中国医科大学第一临床学院泌尿外科，沈阳 110001)
李昕(沈阳军区总医院泌尿外科)
参考文献
1，Koyuncuoglu M , Kargi A. Investigation of p53, c-erbB-2, PCNA immunoreactivity, DNA content, AgNOR and apoptosis in bladder carcinoma as prognostic parameters. Cancer Lett, 1998 ,126(2):143—148
2，Asakura T, Takano Y, Iki M,et al. Prognostic value of Ki-67 for recurrence and progression of superficial bladder cancer. J Urol, 1997 , 158(2):385—388
3，Golam M ,Keiji K ,Hiromi K ,et al. The proliferation index of MIB-1 as a prognostic factor for patients with transitional cell carcinoma of the upper urinary tract.Cancer,1996,78(4):827—833
4，程伟，邵国兴，赵世平,等.nm23基因产物/NDPK在膀胱癌中的表达及其临床意义. 中华泌尿外科杂志,1997,18(7):440～441
收稿日期：1999-03-30, http://www.100md.com