聚合酶链反应及斑点杂交技术对外耳道尖锐湿疣因学研究
作者：牟忠林 刘兆华 郭华阳 姬长友 周来新
单位：牟忠林(第三军医大学 医学业检验系临床生物化学业教研室，重庆 400038)；郭华阳(第三军医大学 医学业检验系临床生物化学业教研室，重庆 400038)；周来新(第三军医大学 医学业检验系临床生物化学业教研室，重庆 400038)；刘兆华(第三军医大学 第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所耳鼻咽喉科，重庆 400042)；姬长友(第三军医大学 第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所耳鼻咽喉科，重庆 400042)
关键词：外耳道尖锐湿疣；聚合酶链反应；斑点杂交
第三军医大学学报000334
中图法分类号 R764.1 文献标识码 B
A study on viral etiology of condyloma acuminata in exdternal auditory canal with GP-Pcr and dot blotting hybridization
, 百拇医药
尖锐湿疣(Condyloma acuminata,CA)由人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)感染引起，尽管近年来的发病率明显升高，但是发生于外耳道者罕见。研究外耳道CA的病因，对于减少传播、控制复发具有重要意义。
1 临床资料
男性患者，40岁，因右耳痛痒1月伴少量出血1 d入院。1月前在街头地摊上掏耳后常感耳内痒，自己掏挖，轻微疼痛，近来挖耳后少许出血。查：右外耳道前壁见一新生物，乳头状突起，质软，周围少许干血痂。否认冶游史，无外生殖器CA。活检：鳞状上皮乳头状瘤。于1994年9月29日在局麻加强化下行“右外耳道新生物切除加植皮术”，切除瘤组织，并凿除外耳道前上壁部分骨质后植皮。鼓膜完整，标志清楚。病理报告为“尖锐湿疣”，1周后出院。随访4年无复发，外耳道无狭窄。
DNA的制备：将石蜡切片放入0.5 ml的Eppendorff管中，二甲苯脱蜡，95%乙醇冲洗，真空抽干，然后加入100 μl消化缓冲液(50 mmol/L， Tris 1 mmol/L EDTA,0.5%吐温20，蛋白酶K 200 μg/ml,pH 8.5)，55°C孵育3 h，此消化液即作为PCR所需样品DNA。
, 百拇医药
按地高辛标记试剂盒说明标记寡聚核苷酸探针，参照文献[1]行PCR，参照文献[2]行斑点杂交。
2 结果
鳞状上皮呈乳头状或疣状增生，表皮脚增宽延长，角质层增生并角化不全， 棘层和基底层明显增生肥厚， 在表皮中层或表层见有群集或灶性的凹空细胞，真皮层毛细血管扩张及中等量慢性炎细胞浸润。取病例组织DNA用通用引物作PCR扩增，电泳，出现约450 bp条带者为阳性，然后将扩增产物分别用地高辛配基标记的HPV6、HPV11、HPV16和HPV18型特异性寡聚核苷酸探针进行斑点杂交分型，结果为HPV6。
3 讨论
本病应与外耳道乳头状瘤鉴别。常见的外耳道乳头状瘤无感染时，不流血性液体，检查外耳道干燥，肿物色棕黄而坚实，表面干燥而无湿润感，多发生于外耳道外段软骨部。确诊主要依赖病理组织学检查和免疫组化技术，分型则依据PCR、转印杂交或斑点杂交结果。我们使用的地高辛配基标记核酸探针技术克服了同位素半衰期短，需放射性防护等缺点，保持了较高的特异性和敏感性，操作简便，并且标记的探针可以反复使用。本研究斑点杂交结果与PCR扩增产物的电泳分析相同，均为HPV6型，与文献[3]报道的HPV6/11型是尖锐湿疣的主要病原体一致。
, 百拇医药
作者简介：牟忠林(1967.1)， 男， 湖北省松滋市人，博士研究生，主治医师，讲师，主要从事内淋巴积水方面的研究。
参考文献
[1] 郭华阳，李文维，谭 骏，等.聚合酶链反应及转印杂交对尖锐湿疣复发的病因学研究[J]. 中华皮肤科杂志， 1995，28(3)：155-157.
[2] 蔡文琴，王伯沄主编.实用免疫细胞化学与核酸分子杂交技术[M].成都：四川科学技术出版社，1994.479-582.
[3] 沈克慧，王望梅，际 球，等.尖锐湿疣新鲜组织HPV的聚合酶链反应与斑点杂交比较的研究[J]. 中华皮肤科杂志，1995，28(3)：173-174.
收稿日期：1998-10-30；修回日期：1999-07-15, http://www.100md.com
单位：牟忠林(第三军医大学 医学业检验系临床生物化学业教研室，重庆 400038)；郭华阳(第三军医大学 医学业检验系临床生物化学业教研室，重庆 400038)；周来新(第三军医大学 医学业检验系临床生物化学业教研室，重庆 400038)；刘兆华(第三军医大学 第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所耳鼻咽喉科，重庆 400042)；姬长友(第三军医大学 第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所耳鼻咽喉科，重庆 400042)
关键词：外耳道尖锐湿疣；聚合酶链反应；斑点杂交
第三军医大学学报000334
中图法分类号 R764.1 文献标识码 B
A study on viral etiology of condyloma acuminata in exdternal auditory canal with GP-Pcr and dot blotting hybridization
, 百拇医药
尖锐湿疣(Condyloma acuminata,CA)由人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)感染引起，尽管近年来的发病率明显升高，但是发生于外耳道者罕见。研究外耳道CA的病因，对于减少传播、控制复发具有重要意义。
1 临床资料
男性患者，40岁，因右耳痛痒1月伴少量出血1 d入院。1月前在街头地摊上掏耳后常感耳内痒，自己掏挖，轻微疼痛，近来挖耳后少许出血。查：右外耳道前壁见一新生物，乳头状突起，质软，周围少许干血痂。否认冶游史，无外生殖器CA。活检：鳞状上皮乳头状瘤。于1994年9月29日在局麻加强化下行“右外耳道新生物切除加植皮术”，切除瘤组织，并凿除外耳道前上壁部分骨质后植皮。鼓膜完整，标志清楚。病理报告为“尖锐湿疣”，1周后出院。随访4年无复发，外耳道无狭窄。
DNA的制备：将石蜡切片放入0.5 ml的Eppendorff管中，二甲苯脱蜡，95%乙醇冲洗，真空抽干，然后加入100 μl消化缓冲液(50 mmol/L， Tris 1 mmol/L EDTA,0.5%吐温20，蛋白酶K 200 μg/ml,pH 8.5)，55°C孵育3 h，此消化液即作为PCR所需样品DNA。
, 百拇医药
按地高辛标记试剂盒说明标记寡聚核苷酸探针，参照文献[1]行PCR，参照文献[2]行斑点杂交。
2 结果
鳞状上皮呈乳头状或疣状增生，表皮脚增宽延长，角质层增生并角化不全， 棘层和基底层明显增生肥厚， 在表皮中层或表层见有群集或灶性的凹空细胞，真皮层毛细血管扩张及中等量慢性炎细胞浸润。取病例组织DNA用通用引物作PCR扩增，电泳，出现约450 bp条带者为阳性，然后将扩增产物分别用地高辛配基标记的HPV6、HPV11、HPV16和HPV18型特异性寡聚核苷酸探针进行斑点杂交分型，结果为HPV6。
3 讨论
本病应与外耳道乳头状瘤鉴别。常见的外耳道乳头状瘤无感染时，不流血性液体，检查外耳道干燥，肿物色棕黄而坚实，表面干燥而无湿润感，多发生于外耳道外段软骨部。确诊主要依赖病理组织学检查和免疫组化技术，分型则依据PCR、转印杂交或斑点杂交结果。我们使用的地高辛配基标记核酸探针技术克服了同位素半衰期短，需放射性防护等缺点，保持了较高的特异性和敏感性，操作简便，并且标记的探针可以反复使用。本研究斑点杂交结果与PCR扩增产物的电泳分析相同，均为HPV6型，与文献[3]报道的HPV6/11型是尖锐湿疣的主要病原体一致。
, 百拇医药
作者简介：牟忠林(1967.1)， 男， 湖北省松滋市人，博士研究生，主治医师，讲师，主要从事内淋巴积水方面的研究。
参考文献
[1] 郭华阳，李文维，谭 骏，等.聚合酶链反应及转印杂交对尖锐湿疣复发的病因学研究[J]. 中华皮肤科杂志， 1995，28(3)：155-157.
[2] 蔡文琴，王伯沄主编.实用免疫细胞化学与核酸分子杂交技术[M].成都：四川科学技术出版社，1994.479-582.
[3] 沈克慧，王望梅，际 球，等.尖锐湿疣新鲜组织HPV的聚合酶链反应与斑点杂交比较的研究[J]. 中华皮肤科杂志，1995，28(3)：173-174.
收稿日期：1998-10-30；修回日期：1999-07-15, http://www.100md.com