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编号:10215584
流式细胞仪对系统性红斑狼疮患者T淋巴细胞亚群及NK细胞的检测
http://www.100md.com 《第一军医大学学报》 2000年第3期
     作者:杨春莉 裘宇容

    单位:杨春莉(第一军医大学南方医院检验科,广东 广州 510515);裘宇容(第一军医大学南方医院检验科,广东 广州 510515)

    关键词:SLE;T淋巴细胞亚群;流式细胞仪

    第一军医大学学报000334 摘要:目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者的细胞免疫功能。方法 用流式细胞仪检测了30例SLE患者外周血T细胞亚群及NK细胞百分数。结果 SLE活动组病人,CD4+细胞百分率显著降低(P<0.01),CD8+细胞百分率增高(P<0.01),NK细胞数降低,与对照组相比具有非常显著差异(P<0.01)。稳定期病人CD4+细胞百分率正常,CD8+细胞百分率稍高于对照组 (P>0.05),NK细胞百分率高于活动组病人组仍低于正常对照组。结论 SLE病人细胞免疫功能是异常的,T细胞亚群和NK细胞的测定可作为诊断活动期与非活动期SLE病人的一项有价值的参考指标。
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    中图分类号:R593.241; R446.113 文献标识码:B 文章编号:1000-2588(2000)03-0274-02

    Detection of cellular immune function of Systemic Lupus Erythematosus patients by flow cytometry

    YANG Chun-li, QIU Yu-rong

    Clinical Laboratory, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510515, China

    Abstract: Objective To evaluate the cellular immunity of patients with systemic lupus erythematosus (SLE). Method T cell subsets and the percentage of NK cells in peripheral blood of 30 SLE patients were tested with flow cytometry. Result The percentages of CD4+ cells and NK cells decreased (P<0.01) and that of CD8+ cells increased(P<0.01) in SLE patients in active stage, with significant difference from those of the controls (P<0.01). The percentage of CD8+ cells in SLE patients in stable stage were higher than that of the controls (P>0.05) and the percentages of CD4+ cell were normal. The percentage of NK cells in SLE patients in stable stage was higher than that in the active SLE patients, but lower than that in the controls. Conclusion The cellular immunity of SLE patients is impaired. The evaluation of the function of T cell subsets and the NK cells may be of valuable as reference in the diagnosis of active SLE and the stable SLE.
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    Key words: systemic lupus erythematosus; cellular immune; flow cytometry

    系统性红斑狼疮(SLE)是一种典型的自身免疫性疾病,多发于女性,发病机制目前仍不清楚。近年来的研究显示,SLE与免疫调节T细胞的数量及功能改变密切相关。本文采用流式细胞术对30例SLE患者进行了T淋巴细胞亚群和NK细胞的检测,现报告如下。

    1 材料和方法

    1.1 实验对象

    正常对照组为20例健康体检者,平均年龄21岁;SLE病例组30例,均为临床确诊,其中17例为疾病活动期,平均年龄30.4岁;13例处于稳定期,平均年龄24.5岁。

    1.2 实验方法 2只试管中各加入100 μl EDTA抗凝静脉血,再分别加入20 μl的双标记单克隆抗体CD3/CD16+56 和CD4/CD8,室温避光孵育20 min 后,加500 μl 红细胞溶解液溶解红细胞15 min,1 000 r/min离心5 min,弃上清,用PBS缓冲液冲洗2次,再以 0.5 ml PBS缓冲液悬浮细胞,流式细胞仪分析5 000个细胞 (双标记单克隆抗体CD3/CD 16+56,CD4/CD8及红细胞溶解液均购自法国国际免疫公司) 。
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    2 结果

    30例SLE患者与正常对照组相比,CD4+细胞百分率在活动期明显降低(P<0.01),稳定期正常;CD8+细胞百分率在活动期明显增高(P<0.01),稳定期增高不明显(P>0.05);CD4/CD8比值在活动期及稳定期中均降低(P<0.01)和(P<0.05);NK细胞百分率在活动期及稳定期均显著降低(P<0.01);CD3+细胞在活动期及稳定期与正常对照组无显著差异(P<0.05)(表1)。

    表1 SLE病人T淋巴细胞亚群和NK细胞检测结果

    Tab.1 The percentages of T cell subsets and NK cells in SLE patients

    Control(n=20)
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    Active SLE (n=17)

    Stable SLE (n=13)

    CD3

    70.4± 5.87

    65.8± 10.9

    68.5± 8.95

    CD4

    35.0± 5.70

    22.1± 4.15**

    34.5± 4.23

    CD8

, 百拇医药     27.9± 5.73

    45.7± 9.58**

    32.7± 9.01

    CD4/CD8

    1.27± 0.14

    0.43± 0.12**

    1.05± 0.26*

    NK

    17.8± 5. 48

    4.37± 3.31**

    7.59± 5.01**

, http://www.100md.com     *P<0.05, **P<0.01 vs normal control

    3 讨论

    以往对SLE患者外周血T细胞亚群的研究结果表明,该病的主要表现为CD4+细胞增多或CD8+细胞减少,CD4/CD8细胞比例失调[1], 并因此认为SLE是由于CD8+细胞亚群的减少和功能缺陷而引起的免疫功能亢进所造成。本研究却得到了相反的结果, CD4+细胞百分数在SLE活动期降低,而CD8+细胞百分数却增高,CD4/CD8比值倒置,与近期报道结果相符[2、3]。造成这一矛盾结果的原因有多种。首先,CD8+ 细胞数量减少只是免疫反应异常的一个因素,CD8+细胞功能的改变才是免疫失衡的一个重要原因。近年来将CD8+细胞分为抑制性CD8+细胞(CD8+VV)和反抑制性CD8+细胞[4]。在对SLE患者的反抑制性T细胞研究中发现,SLE患者活动期虽然CD8+细胞百分率正常甚至增高,但增多的绝大多数是不具抑制活性的CD8+VV+细胞,真正具有抑制活性的CD8+V细胞所占比例却很低。增高的CD8+VV一方面表现为对抗T抑制细胞的功能,另一方面却直接作用于T辅助细胞,并通过阻断T辅助细胞接受来自T抑制细胞的抑制信号而发挥正向调节作用。这就可以解释SLE患者CD8+细胞增多,病人却表现为免疫亢进损害。此外,近年来对CD8+细胞的深入研究还发现,原先被认为是T辅助细胞具有的辅助效应,在CD8+细胞亚群中也有发现[5],因此认为CD4+细胞的辅助功能受限时,可通过体内增高的CD4+ T辅助细胞,分泌IL-4,诱导活化B细胞,导致体内产生大量自身抗体。
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    其次,本实验还发现,活动期SLE患者CD4+细胞明显减少,而体内却有大量自身抗体产生,这与CD4+细胞亚群产生辅助抗体的功能相矛盾,因而推测CD4+细胞功能的改变可能是导致人体免疫功能亢进的另一个重要原因。

    本研究还发现,SLE患者NK细胞的百分数在活动期和稳定期中显著下降,与其他作者研究一致。其具体机制不甚清楚,推测可能与IL-2产生不足有关。有文献报道[6]IL-2能促进NK细胞的增殖及分化,并且还能诱导增强其杀伤效应。因此IL-2产生不足可能是导致SLE患者NK细胞减少的重要因素。

    从表1可看出,活动期病人CD4+细胞百分率显著降低,CD8+细胞百分率显著增高, 稳定期病人CD4+细胞百分率正常,CD8+细胞百分率稍高于对照组, 但无显著性差异, 而NK细胞百分率稳定组期病人高于活动期病人,由此可见,T淋巴细胞亚群和NK细胞的检测,在临床上可作为诊断活动期与非活动期SLE病人的一项有价值的参考指标。杨春莉(1968-),女,湖南邵东人,1994年毕业于第一军医大学,大专,技师
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    参考文献

    [1] 徐文玉. SLE免疫调节功能紊乱的机理—T细胞亚群的失衡和抗淋巴细胞抗体的作用[J]. 上海免疫学杂志, 1992, 120(4): 253~5.

    [2] 杨嘉林, 陈培珍. SLE患者T细胞亚群初步研究[J]. 中华微生物学和免疫学杂志, 1988, 8(6): 370~1.

    [3] 张冬青, 赵丹凤等. 人体T细胞CD8+VV+亚群在活动性SLE患者中显示反抑制活性[J]. 中国免疫学杂志, 1993, 9(3):173~5.

    [4] Brines R, Lehber T. Characterization of human T8+ suppressor and contrasuppressor cells separated by the lectin Vicia villosa[J]. Immunology, 1988, 63:247~58.

    [5] Keney DM, Nobel A, Beverly J. Lmmune regulation: a new role for the CD8+T cell [J]. Immunol Today 1994, 15(3): 107~10.

    [6] Jelinek DF, Lipsky PE. Inhibitory influence of IL-4 on human B cell responsiveness [J]. Immunology, 1988, 141: 164~7.

    1999-4-25, 百拇医药