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编号:10215587
一氧化氮前体-左旋精氨酸相关肽对大鼠血液流变性、凝血纤溶系统影响的初步研究
http://www.100md.com 《第一军医大学学报》 2000年第3期
     作者:周忠江 孟素荣 吴赛珠 周可祥 叶海燕

    单位:周忠江(第一军医大学南方医院心内科);孟素荣(第一军医大学南方医院心内科);吴赛珠(第一军医大学南方医院心内科);周可祥(第一军医大学南方医院病理科,广东 广州 510515);叶海燕(中山医科大学孙逸仙纪念医院妇产科,广东 广州 510089)

    关键词:左旋精氨酸肽;一氧化氮前体;凝血系统;纤溶系统;血液流变性

    第一军医大学学报000315 摘要: 目的 观察左旋精氨酸相关肽(L-ArgX)对大鼠血液流变性及凝血、纤溶系统的影响。方法 24只SD雄性大鼠随机分为3组,分别灌服乙酰水杨酸(ASA)36 mg/kg× b.w.、L-ArgX 61.4 mg/kg× b.w.及同体积空白对照液,每日1次,共8 d。观察大鼠血液流变性及凝血、纤溶系统相关指标的变化,并与ASA组对比。结果 L-ArgX可明显降低全血表观粘度、还原粘度、红细胞压积(HCT)和血浆粘度。L-ArgX还可延长血浆复钙时间、白陶士部分凝血活酶时间(APTT)及凝血酶原时间。结论L-ArgX可能通过L-Arg-NO(一氧化氮)代谢通路发挥抗血栓、改善血液流变性作用。
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    中图分类号: R973.2 文献标识码:A 文章编号:1000-2588 (2000)-03-0239-02

    Effect of nitric oxide precursor-L-arginine-related peptide on rat blood rheology, coagulation and fibrinolysis

    ZHOU Zhong-jiang1, MENG Su-rong1, WU Sai-zhu1, ZHOU Ke-xiang2, YE Hai-yan3

    1Department of Cardiology, 2Department of Pathology, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510515,China; 3 Department of Obstetrics, Sun Yat-sen Memorial Hospital, Sun Yat-Sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510089, China
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    Abstract: Objective To observe the effect of L-arginine-related peptide (L-ArgX) on rat blood rheology, coagulation and blood fibrinolysis system, in comparison with acetylsalicylic acid (ASA) and placebo. Methods Twenty-four Sprague Dewley rats were randomly divided into 3 groups (8 in each group). The rats were orally given L-Argx (61.4 mg/kg.b.w..d), ASA (36 mg/kg.b.w..d) and equal volume of placebo solution respectively. Eight days later all the rats were anesthesized and the blood samples were taken from the abdominal aorta with a plastic catheter, to measure the indexes of blood rheology, coagulation and blood fibrinolysis. Results In L-ArgX group, statistically significant decrease was observed in apparent viscosity and reduced viscosity of the whole blood, hematocrit (HCT) and plasma viscosity (P<0.05, vs placebo group), while significant increase was observed in blood reciprocal calcium time, activated partial thromboplastin time (APTT) and prothrombin time (PT) (P<0.05, vs placebo group). However, all these data showed no significant difference when compared with ASA group (P>0.05). Conclusion L-ArgX might be of good antihemostatic and antithrombotic effect with little adverse effect characteristic of ASA, which might be mediated by L-Arg-nitric oxide-cyclic GMP pathway, and the mechanism needs to be further studied.
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    Key words: L-arginine related peptide; nitric oxide precursor; aspirin; coagulation; fibrinolysis; hemodynamics

    乙酰水杨酸(ASA)因有效的抗凝、抗血栓形成、改善血液流变性等作用,早在20世纪70年代即用于冠心病的预防。但ASA也存在着某些副作用,如过敏、哮喘、胃肠道刺激、出血等。近年的研究提示一氧化氮(NO)及NO前体-左旋精氨酸(L-Arg)具有优越的心血管保护作用。本作者观察了另一NO前体-左旋精氨酸相关肽(L-ArgX)对大鼠血液流变性及凝血纤溶状态的影响。

    1 材料与方法

    1.1 动物

    SD雄性大鼠24只(由南方医院实验动物研究所提供),体质量220~ 250 g。
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    1.2 材料

    ASA(华北制药厂生产)、L-ArgX(北京医科大学药学院中德联合实验室提供);STEELLEX R80 VISCOMETER型锥板粘度计(北京世帝科学仪器公司产品)、ThromboScr-een 400C型血凝仪(美国Fisher科学公司产品)。

    1.3 方法

    1.3.1血液流变学指标测定 24只雄性SD大鼠随机分为3组,分别灌服 ASA(36 mg/kg.b.w.)、L-ArgX(61.4 mg/ kg.b.w.)及同体积对照液(0.5%羧甲基纤维素钠),每日1次,共8 d。ASA用对照液配成悬浊液。实验前禁食4 h,用3%戊巴比妥钠按1 ml/kg× b.w.腹腔麻醉大鼠。由腹主动脉插管取血,按每25 U肝素: 1 ml全血抗凝,测定各项血液流变学指标;用3.8%枸橼酸钠按1: 9抗凝,测定凝血、纤溶指标[1]
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    1.3.2凝血指标的测定

    1.3.2.1凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、白陶土部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(Fg)的测定 大鼠取血后将血置于Thromboscreen 400 C血凝仪(预热30 min),加入100 μ l枸橼酸钠抗凝血,按仪器提示分别加入PT试剂(兔脑浸液、1/40 mol/L Cacl2各50 μl)、TT试剂(凝血酶50 μl)及APTT试剂(鞣花酸50 μl),仪器自动测定并打印PT、TT、APTT、Fg值。

    1.3.2.2 血浆复钙时间(RT) 在试管中加入0.1 ml枸橼酸钠血浆和0.1 ml 0.025 mol/L CaCl2,记时。37℃水浴60~ 80 s,取出后静置,观察血浆中出现弥漫性白色颗粒的时间,重复3次,取平均值[2]

    1.3.3优球蛋白溶解时间(ELT) 取枸橼酸钠血浆0.5 ml,加入7.5 ml冷蒸馏水和0.12 ml 1%醋酸,混匀后静置(4℃,10 min)。3 000 r/min离心5 min,取沉淀,加硼酸缓冲液0.5 ml溶解沉淀。加凝血酶(8~12 U),37℃、水浴,待凝固后记时,记录至再完全溶解的时间。重复2次,取均值[3]
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    1.3.4血液流变学指标测定 取部分肝素抗凝血以3 000 r/min离心10 min,分离血浆供血浆粘度测定,其余抗凝血供红细胞压积(HCT)、全血粘度等指标测定。全部指标4 h内测毕[2]

    1.4 数据处理

    全部资料均以±s表示,采用方差分析及q检验,使用SAS软件包进行统计学处理。

    2 结果

    2.1 全血粘度的变化

    L-ArgX给药组及ASA组的全血表观粘度在不同切变率时均较对照组显著降低,3个组的全血表观粘度随切变率的降低而升高(表1)。

    表1 L-ArgX给药组血液流变学指标测定(±s, n=8)
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    Tab. 1 Effect of L-ArgX on blood hemorheology of rats (Mean ± SD, n=8)

    Indexes Control ASA L-ArgX

    blood

    High shear rat (100cp)

    8.73± 1.66

    5.86± 0.61*

    5.41± 1.28*

    Moderate shear rat (10cp)

    10.51± 2.31
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    6.76± 0.59*

    6.48± 1.79*

    Moderate shear rat (3cp)

    12.87± 3.27

    7.95± 0.56*

    7.90± 2.52*

    Low shear rat (1cp)

    17.24± 5.18

    10.07± 0.57*

    10.53± 3.91*

    Hematocrit (HCT,%)
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    47.13± 2.42

    43.75± 1.75*

    43.38± 2.50*

    Reduced viscosity at high shear (mpa.S)

    16.39± 3.37

    11.11± 1.39*

    10.08± 2.63*

    Reduced viscosity at low shear (mpa.S)

    34.36± 10.50
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    20.75± 1.32*

    21.63± 8.15*

    Aggregation index of erythrocyte

    1.94± 0.28

    1.73± 1.32

    1.88± 0.35

    K value of erythrocyte

    sedimentation equation

    9.25± 4.65

    19.00± 4.63
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    21.50± 10.69

    Plasma viscosity (mpa.S)

    5.34± 0.28

    3.18± 0.37*

    3.10± 0.41*

    ASA: acetylsalicylic acid; * P<0.05 vs control group

    2.2 全血还原粘度的变化

    灌服 L-ArgX及ASA 8 d后,全血高切还原粘度、低切还原粘度较对照显著降低。

    2.3 HCT的变化
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    灌服 L-ArgX及ASA 8 d后,两组红细胞比积均较对照组显著降低,两组间差别不显著。

    2.4 血浆粘度的变化

    给药组及ASA组血浆粘度均较对照组显著降低,给药组血浆粘度均数低于ASA组,但无统计学差异。

    2.5 红细胞聚集指数

    给药组及ASA组红细胞聚集指数与对照组相比,有下降趋势,但无统计学差异。

    2.6 凝血、纤溶指标的变化

    灌服

    灌服 L-ArgX及ASA 8 d后,RT、APTT、PT较对照组延长;ELT较对照组延长,但无统计学差异。给药后Fg浓度似较对照组降低,但无统计学意义(表2)。
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    表2 L-ArgX影响大鼠凝血纤溶系统的6项指标(±s, n=8)

    Tab. 2 Effect of L-ArgX on 6 indexes of coagulation

    and fibrinolysis system of rats (Mean ± SD , n=8)

    Indexes

    Unit

    Control

    ASA

    L-ArgX

    RT
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    s

    121.38± 27.12

    147.75± 29.19*

    149.13± 22.69*

    TT

    s

    48.94± 11.48

    49.93± 8.93

    42.16± 8.69

    APTT

    s

    21.14± 4.71
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    30.70± 4.63*

    30.27± 5.35*

    Fg

    g/L

    2.57± 0.41

    2.21± 0.49

    2.64± 0.43

    PT

    s

    17.30± 3.45

    21.80± 3.17*

    22.44± 3.52*
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    ELT

    s

    150± 24

    166± 30

    165± 28

    ASA: acetylsalicylic acid; * P<0.05 vs control group;

    3 讨论

    血栓栓塞性疾病除与血小板聚集、粘附等有关外,还与血液流变性异常、血液粘度增加、内皮功能障碍、血细胞变形能力降低及聚集能力增强有关[4]。ASA可抑制环氧化酶、干扰血小板膜花生四烯酸代谢、调节活性产物血栓素A2- 前列环素(TXA2- PGI2)的平衡,从而抗血小板聚集和抗血栓形成,但也有其副作用,如致过敏、消化道刺激症状、出血倾向等。
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    已有的研究证实体内普遍存在L-Arg-NO-cGMP代谢通路。NO是存在于血管、巨噬细胞和神经系统中的生理性调节因子和信息分子,它由L-Arg底物经NO合酶(NOS)催化合成。NO与受体结合,活化鸟苷酸环化酶,进而使三磷酸鸟苷酸转变为环磷酸鸟苷(cGMP)。cGMP作为第二信使,通过一系列信号放大,发挥生理调节功能,如舒张血管、降低血压;抑制平滑肌细胞增殖,维持其正常的有丝分裂;抑制血小板粘附、聚集;抑制白细胞粘附、浸润。研究表明NO抗血小板聚集、抗血小板和血细胞粘附的作用与NO抑制凝血酶和TXA2类似物诱导的血小板膜表面糖蛋白、P-选择素、CD63和血小板表面糖蛋白(GPIIb/IIIa)复合物表达

    的增强有关。有人推测L-Arg及其相关肽也可能通过促进NO的产生,产生抗血小板作用[5]

    本研究提示L-ArgX可改善血液流变性、改善凝血状态,尚未见显著影响纤溶系统,与ASA相比副作用小。考虑L-ArgX作用机理与NO有关,可能以L-Arg-NO-cGMP代谢通路为中介,通过降低红细胞压积、红细胞聚集程度以及降低血小板、凝血因子活性而发挥有益的抗凝、抗血小板、改善血液流变性的生物活性作用。
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    周忠江(1968-),男,湖北松滋人,1992年毕业于第四军医大学,现为在读博士生

    参考文献

    [1] Copley AL. Abstracts of papers presented at the third European Conference on clinical hemorheology[J]. Clinical hemorheology, 1983,3(3): 221~45.

    [2]王鸿儒,阮晓声,宋立川等. 血液流变学[M]. 北京:北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社, 1997. 33~60.

    [3] 宋善俊,郑岳辰,张克文.临床医师手册检验分册[M].第2版.上海科技出版社, 1988.79~97.

    [4] 马新亮.急性心肌梗塞后血液流变学变化及其临床意义[J].心血管病进展,1989, (2):34~8.

    [5] Vane JR, Anggard EE, Botting RM. Regulatory functions of the vascular endothelium[J]. N Engl J Med,1990, 323(1):27~36.

    1999-09-23, http://www.100md.com