恙虫病患者血清TNF-α、IL-8和P-sel水平的检测及其临床意义
作者：罗清逢 高孝慈 龙尧 徐军发
单位：罗清逢(广东医学院附属医院感染内科)；高孝慈(广东医学院附属医院感染内科)；龙尧(广东医学院附属医院感染内科)；徐军发(广东医学院检验系，湛江 524001)
关键词：恙虫病；肿瘤坏死因子；白细胞介素-8；血浆选择素
广东医学院学报000308 摘要 目的：观察恙虫病患者血清TNF-α、IL-8和血浆选择素(P-sel)水平及其临床意义。方法：应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定36例恙虫病患者血清TNF-α、IL-8和P-sel的水平。结果：恙虫病患者血清TNF-α、IL-8和P-sel水平明显高于对照组(血清TNF-α和P-sel组P<0.01，IL-8组P<0.001)。12例重症患者血清THF-α、IL-8和P-sel水平明显高于24例轻症患者。结论：TNF-α、IL-8和P-sel可能参与了恙虫病的发病机理，恙虫病临床症状的出现可能与高细胞因子血症有关。检测患者血清TNF-α、IL-8和P-sel水平似可作为判断恙虫病病情的严重程度和指导临床用药的参考指标。
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【中图分类号】R513 【文献标识码】A
文章编号：1005-4057(2000)03-0245-02
Measuring serum levels of TNF-α，IL-8 and plasma selectin in patients with scrub typhus and their clinical significance
Luo Qingfeng Gao Xiaoci Long Yao et al
(Department of Infectious Diseases，Affiliated Hospital of Guangdong Medical College，Zhangjian 524001)
Abstract Objective：To observe the levels of serum TNF-α，IL-8 and plasma selectin in patients with scrub typhus and their clinical significance.Methods：The concentrations of serum TNF-α，IL-8 and plasma selectin were determinded by sandwich enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) in 36 patients with scrub typhus.Results：The levels of serum TNF-α，IL-8 and plasma selectinin patients with scrub typhus were significantly higher than those of the control group (TNF-α and plasma selectin groups P<0.01 but IL-8 Group P<0.001).The levels of serum TNF-α，IL-8 and plasma selectinin 12 severe patients with scrub typhus were significantly higher than those of the 24 ordinary patients.Conclusion：TNF-α，IL-8 and plasma selectin may be involved in the pathogenesis of scrub typhus.Hypercytokinemia appeared to be responsible for the emergence of the symptoms of scrub typhus.Measurement of levels of serum TNF-α，IL-8 and plasma selectin might be taken as a useful marker to judge the severity and guide treatment in patients with scrub typhus.
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Key words：scrub typhus；tumor necrosis factor；interleukin-8；plasma selectin
恙虫病是恙虫病立克次体引起的急性自然疫源性疾病，临床症状差别甚大，有的症状轻微，主要表现为发热，有的则表现为多器官功能损害甚至为致命性多器官功能衰竭，其发病机理尚未彻底明了[1，2]。本研究通过对恙虫病患者血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)和血浆选择素(P-selectin，P-sel)的检测，以探讨其在恙虫病发生发展过程中的作用。
1 材料和方法
1.1 研究对象
36例恙虫病患者均为本科住院患者，其中男23例，女13例，年龄6～69岁。均符合恙虫病诊断标准[1]。正常对照组为健康检查者35例，其中男18例，女17例，年龄6～70岁。根据病情严重程度的不同，将恙虫病患者分为两组：Ⅰ组是指主要表现为发热而无明显内脏损害的轻症恙虫病患者，Ⅱ组是指除发热外还并发肺炎或呼吸窘迫综合征、心肌炎、肝炎、脑病等一个脏器以上损害的重症恙虫病患者。
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1.2 方法
1.2.1 标本采集 所有受试者于入院第2天晨起空腹取静脉血6mL，分置2管，一管用10% EDTA-Na2抗凝，另一管分离血清标本置于-20℃低温保存待检。所有受试者采血前2月无使用免疫增强剂或免疫抑制药物，无输血史。
1.2.2 TNF-α、IL-8和P-sel的测定 采用双抗体夹心ELISA法。TNF-α试剂盒由邦定公司提供，IL-8试剂盒由第四军医大学免疫教研室提供，P-sel试剂盒由苏州医学院血栓与止血研究所提供，严格按说明书操作。
1.3 统计学处理
实验数据以
±s表示，均数比较采用t检验，相关性分析采用直线回归相关分析。
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2 结果
2.1 恙虫病患者和对照组血清INF-α、IL-8和P-sel水平的比较
表1中显示恙虫病患者血清TNF-α、IL-8和P-sel水平均明显高于对照组(血清INF-α和P-sel P<0.01，IL-8，P<0.001)。
表1 恙虫病患者血清TNF-α、IL-8和P-sel水平 (±s，c/μg.L-1) 组别
n
TNF-α
IL-8
P-sel
, 百拇医药
恙虫病
36
0.236±0.026*
0.419±0.068**
35.3±9.6*
对照组
35
0.141±0.016
0.053±0.011
18.5±7.2
两组比较 *P<0.01；**P<0.001
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2.2 不同病情患者血清TNF-α、IL-8和P-sel水平的比较
表2中显示重症恙虫病组(Ⅱ组)患者血清TNF-α、IL-8和P-sel水平比轻症恙虫病组(Ⅰ组)患者水平明显增高(血清TNF-α和P-sel P<0.01，IL-8 P<0.001。表2 两组患者血清TNF-α、IL-8和P-sel水平的比较(±s，c/μgL-1) 组别
n
TNF-α
IL-8
P-sel
Ⅰ
12
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0.174±0.036
0.196±0.058
28.5±4.7
Ⅱ
24
0.269±0.036*
0.531±0.073**
38.8±10.6*
与Ⅰ组比较*P<0.01；**P<0.001
2.3 恙虫病患者血清TNF-α、IL-8和P-sel水平之间的相关性比较
, 百拇医药
应用直线相关回归分析发现恙虫病患者血清TNF-α与IL-8和P-sel水平之间以及恙虫病患者血清IL-8和P-sel水平之间均呈正相关。相关系数(r)分别为0.6062、0.6366、0.3826和P<0.001、P<0.001、P<0.01。
3 讨论
关于细胞因子与粘附分子在许多疾病发病机理中的作用的研究日益受到人们重视，但研究细胞因子、粘附分子与恙虫病发病机理的关系，目前国内外较少报道。
TNF-α是一种具有多种生物学活性的重要的细胞因子，它能激活IL-8和P-sel的合成和释放。IL-8具有显著的中性粒细胞趋化激活作用，促进中性粒细胞浸润，刺激单核巨噬细胞、中性粒细胞等分泌白三烯、血小板活化因资等炎症介质，诱导细胞变形、脱颗粒反应、释放溶酶体酶、蛋白水解酶、氧自由基等，有利于清除立克次体感染。P-sel是一种粘附分子，对血小板活化、中性粒细胞和单核细胞趋向、粘附于血管内皮起关键作用。本研究结果显示，恙虫病患者血清TNF-α、IL-8和P-sel水平明显高于对照组，其原因可能是恙虫病立克次体进入人体血循环后，在血管内皮细胞和单核巨噬细胞系统内生长繁殖，形成立克次体血症，刺激机体单核巨噬细胞释放以TNF-α为核心的一系列细胞因子、粘附分子，引起机体的炎症反应。
, 百拇医药
本研究结果还显示，恙虫病患者病情严重程度与血清TNF-α、IL-8和P-sel水平相关。患者病情越重则血清TNF-α、IL-8和P-sel水平增高越显著。血清TNF-α、IL-8和P-sel水平增高间接反映患者体内立克次体血症的严重程度。另外，IL-8作为一种与中性粒细胞和T淋巴细胞有关的趋化因子，具有对炎症的双向调节作用，重症恙虫病患者是否存在免疫病理损伤，尚需进一步研究。恙虫病立克次体感染可诱导鼠淋巴细胞凋亡[3]，在人体内是否存在这种情况，目前尚不清楚。
本研究结果提示，TNF-α、IL-8和P-sel在恙虫病炎症反应过程中可能发挥重要作用。国外的研究表明[4]，恙虫病症状的出现可能与高细胞因子血症(Hypercytokinemia)有关。本研究结果与国外研究结果基本一致。TNF-α、IL-8和P-sel作为非特导性免疫炎症反应介质，共同协同参与恙虫病的发病机理。检测血清TNF-α、IL-8和P-sel水平对判断患者的病情和预后有一定的帮助。另外，临床上治疗重症恙虫病患者时，除病因原治疗外，应注意适当应用肾上腺皮质激素，抑制TNF-α、IL-8和P-sel的过度产生和释放，有效抑制、减轻炎症反应，有利于患者早日康复。
, 百拇医药
作者简介：罗清逢，男，1958年12月出生，硕士，讲师
参考文献
[1]彭文伟主编.传染病学.第4版.北京：人民卫生出版社，1999.89～92
[2]ChiWC，HuangJJ，Sung JM，etal.Scrub typhus associated with multiorgan failure：acaser eport.Scand JInfect Dis，1997，29(6)：634～635
[3]Kasuya S，Nagano I，Ikeda T，et al.Apoptosis of lymphocytes in mice induced by infection with Rickettsia tsutsugamushi.Infect Immun.1996，(9)：3937～3941
[4]Iwasaki H，Takada N，Nakamura T，et al.Increased levels of macrophage colony-stimulating factor，interferon-γ，TNF-α in sera of patients with orientia tsutsugamushi infection.J Clin Microbiol，1997，35(12)：3320～3322
收稿日期：2000-03-31
修订日期：2000-04-25, http://www.100md.com
单位：罗清逢(广东医学院附属医院感染内科)；高孝慈(广东医学院附属医院感染内科)；龙尧(广东医学院附属医院感染内科)；徐军发(广东医学院检验系，湛江 524001)
关键词：恙虫病；肿瘤坏死因子；白细胞介素-8；血浆选择素
广东医学院学报000308 摘要 目的：观察恙虫病患者血清TNF-α、IL-8和血浆选择素(P-sel)水平及其临床意义。方法：应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定36例恙虫病患者血清TNF-α、IL-8和P-sel的水平。结果：恙虫病患者血清TNF-α、IL-8和P-sel水平明显高于对照组(血清TNF-α和P-sel组P<0.01，IL-8组P<0.001)。12例重症患者血清THF-α、IL-8和P-sel水平明显高于24例轻症患者。结论：TNF-α、IL-8和P-sel可能参与了恙虫病的发病机理，恙虫病临床症状的出现可能与高细胞因子血症有关。检测患者血清TNF-α、IL-8和P-sel水平似可作为判断恙虫病病情的严重程度和指导临床用药的参考指标。
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【中图分类号】R513 【文献标识码】A
文章编号：1005-4057(2000)03-0245-02
Measuring serum levels of TNF-α，IL-8 and plasma selectin in patients with scrub typhus and their clinical significance
Luo Qingfeng Gao Xiaoci Long Yao et al
(Department of Infectious Diseases，Affiliated Hospital of Guangdong Medical College，Zhangjian 524001)
Abstract Objective：To observe the levels of serum TNF-α，IL-8 and plasma selectin in patients with scrub typhus and their clinical significance.Methods：The concentrations of serum TNF-α，IL-8 and plasma selectin were determinded by sandwich enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) in 36 patients with scrub typhus.Results：The levels of serum TNF-α，IL-8 and plasma selectinin patients with scrub typhus were significantly higher than those of the control group (TNF-α and plasma selectin groups P<0.01 but IL-8 Group P<0.001).The levels of serum TNF-α，IL-8 and plasma selectinin 12 severe patients with scrub typhus were significantly higher than those of the 24 ordinary patients.Conclusion：TNF-α，IL-8 and plasma selectin may be involved in the pathogenesis of scrub typhus.Hypercytokinemia appeared to be responsible for the emergence of the symptoms of scrub typhus.Measurement of levels of serum TNF-α，IL-8 and plasma selectin might be taken as a useful marker to judge the severity and guide treatment in patients with scrub typhus.
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Key words：scrub typhus；tumor necrosis factor；interleukin-8；plasma selectin
恙虫病是恙虫病立克次体引起的急性自然疫源性疾病，临床症状差别甚大，有的症状轻微，主要表现为发热，有的则表现为多器官功能损害甚至为致命性多器官功能衰竭，其发病机理尚未彻底明了[1，2]。本研究通过对恙虫病患者血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)和血浆选择素(P-selectin，P-sel)的检测，以探讨其在恙虫病发生发展过程中的作用。
1 材料和方法
1.1 研究对象
36例恙虫病患者均为本科住院患者，其中男23例，女13例，年龄6～69岁。均符合恙虫病诊断标准[1]。正常对照组为健康检查者35例，其中男18例，女17例，年龄6～70岁。根据病情严重程度的不同，将恙虫病患者分为两组：Ⅰ组是指主要表现为发热而无明显内脏损害的轻症恙虫病患者，Ⅱ组是指除发热外还并发肺炎或呼吸窘迫综合征、心肌炎、肝炎、脑病等一个脏器以上损害的重症恙虫病患者。
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1.2 方法
1.2.1 标本采集 所有受试者于入院第2天晨起空腹取静脉血6mL，分置2管，一管用10% EDTA-Na2抗凝，另一管分离血清标本置于-20℃低温保存待检。所有受试者采血前2月无使用免疫增强剂或免疫抑制药物，无输血史。
1.2.2 TNF-α、IL-8和P-sel的测定 采用双抗体夹心ELISA法。TNF-α试剂盒由邦定公司提供，IL-8试剂盒由第四军医大学免疫教研室提供，P-sel试剂盒由苏州医学院血栓与止血研究所提供，严格按说明书操作。
1.3 统计学处理
实验数据以
±s表示，均数比较采用t检验，相关性分析采用直线回归相关分析。, http://www.100md.com
2 结果
2.1 恙虫病患者和对照组血清INF-α、IL-8和P-sel水平的比较
表1中显示恙虫病患者血清TNF-α、IL-8和P-sel水平均明显高于对照组(血清INF-α和P-sel P<0.01，IL-8，P<0.001)。
表1 恙虫病患者血清TNF-α、IL-8和P-sel水平 (
±s，c/μg.L-1) 组别n
TNF-α
IL-8
P-sel
, 百拇医药
恙虫病
36
0.236±0.026*
0.419±0.068**
35.3±9.6*
对照组
35
0.141±0.016
0.053±0.011
18.5±7.2
两组比较 *P<0.01；**P<0.001
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2.2 不同病情患者血清TNF-α、IL-8和P-sel水平的比较
表2中显示重症恙虫病组(Ⅱ组)患者血清TNF-α、IL-8和P-sel水平比轻症恙虫病组(Ⅰ组)患者水平明显增高(血清TNF-α和P-sel P<0.01，IL-8 P<0.001。表2 两组患者血清TNF-α、IL-8和P-sel水平的比较(
±s，c/μgL-1) 组别n
TNF-α
IL-8
P-sel
Ⅰ
12
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0.174±0.036
0.196±0.058
28.5±4.7
Ⅱ
24
0.269±0.036*
0.531±0.073**
38.8±10.6*
与Ⅰ组比较*P<0.01；**P<0.001
2.3 恙虫病患者血清TNF-α、IL-8和P-sel水平之间的相关性比较
, 百拇医药
应用直线相关回归分析发现恙虫病患者血清TNF-α与IL-8和P-sel水平之间以及恙虫病患者血清IL-8和P-sel水平之间均呈正相关。相关系数(r)分别为0.6062、0.6366、0.3826和P<0.001、P<0.001、P<0.01。
3 讨论
关于细胞因子与粘附分子在许多疾病发病机理中的作用的研究日益受到人们重视，但研究细胞因子、粘附分子与恙虫病发病机理的关系，目前国内外较少报道。
TNF-α是一种具有多种生物学活性的重要的细胞因子，它能激活IL-8和P-sel的合成和释放。IL-8具有显著的中性粒细胞趋化激活作用，促进中性粒细胞浸润，刺激单核巨噬细胞、中性粒细胞等分泌白三烯、血小板活化因资等炎症介质，诱导细胞变形、脱颗粒反应、释放溶酶体酶、蛋白水解酶、氧自由基等，有利于清除立克次体感染。P-sel是一种粘附分子，对血小板活化、中性粒细胞和单核细胞趋向、粘附于血管内皮起关键作用。本研究结果显示，恙虫病患者血清TNF-α、IL-8和P-sel水平明显高于对照组，其原因可能是恙虫病立克次体进入人体血循环后，在血管内皮细胞和单核巨噬细胞系统内生长繁殖，形成立克次体血症，刺激机体单核巨噬细胞释放以TNF-α为核心的一系列细胞因子、粘附分子，引起机体的炎症反应。
, 百拇医药
本研究结果还显示，恙虫病患者病情严重程度与血清TNF-α、IL-8和P-sel水平相关。患者病情越重则血清TNF-α、IL-8和P-sel水平增高越显著。血清TNF-α、IL-8和P-sel水平增高间接反映患者体内立克次体血症的严重程度。另外，IL-8作为一种与中性粒细胞和T淋巴细胞有关的趋化因子，具有对炎症的双向调节作用，重症恙虫病患者是否存在免疫病理损伤，尚需进一步研究。恙虫病立克次体感染可诱导鼠淋巴细胞凋亡[3]，在人体内是否存在这种情况，目前尚不清楚。
本研究结果提示，TNF-α、IL-8和P-sel在恙虫病炎症反应过程中可能发挥重要作用。国外的研究表明[4]，恙虫病症状的出现可能与高细胞因子血症(Hypercytokinemia)有关。本研究结果与国外研究结果基本一致。TNF-α、IL-8和P-sel作为非特导性免疫炎症反应介质，共同协同参与恙虫病的发病机理。检测血清TNF-α、IL-8和P-sel水平对判断患者的病情和预后有一定的帮助。另外，临床上治疗重症恙虫病患者时，除病因原治疗外，应注意适当应用肾上腺皮质激素，抑制TNF-α、IL-8和P-sel的过度产生和释放，有效抑制、减轻炎症反应，有利于患者早日康复。
, 百拇医药
作者简介：罗清逢，男，1958年12月出生，硕士，讲师
参考文献
[1]彭文伟主编.传染病学.第4版.北京：人民卫生出版社，1999.89～92
[2]ChiWC，HuangJJ，Sung JM，etal.Scrub typhus associated with multiorgan failure：acaser eport.Scand JInfect Dis，1997，29(6)：634～635
[3]Kasuya S，Nagano I，Ikeda T，et al.Apoptosis of lymphocytes in mice induced by infection with Rickettsia tsutsugamushi.Infect Immun.1996，(9)：3937～3941
[4]Iwasaki H，Takada N，Nakamura T，et al.Increased levels of macrophage colony-stimulating factor，interferon-γ，TNF-α in sera of patients with orientia tsutsugamushi infection.J Clin Microbiol，1997，35(12)：3320～3322
收稿日期：2000-03-31
修订日期：2000-04-25, http://www.100md.com