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编号:10217441
凝血酶原片段(F1+2)及凝血酶-抗凝血酶(TAT)研究进展
http://www.100md.com 《现代诊断与治疗》 2000年第3期
     作者:宋海容 李卓江

    单位:宋海容(贵阳医学院附属医院血液内科,贵州 贵阳 550004);李卓江(贵阳医学院附属医院血液内科,贵州 贵阳 550004)

    关键词:F1+2;TAT;检则方法;临床应用

    现代诊断与治疗000309

    摘要:随着血液生理、生化研究进展,凝血酶原片段(Prothrombin fragment 1+2,F1+2)与凝血酶-抗凝血酶(Thrombin-antithrombin,TAT)已从实验研究走向临床研究。目前常用ELISA方法检测F1+2及TAT含量,其敏感性及特异性均较好。二项指标的临床应用相得益彰,各有所长,对检测血栓前状态及DIC诊断较准确,可监测抗凝、溶栓疗效,在恶性血液病患者中含量均显著升高。

    分类号:R554 文献标识码:A
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    文章编号:1001-8174(2000)03-0149-03

    Research Progress in Prothrombin Fragment 1+2(F1+2) and Thrombin-

    Antithrombin(TAT)

    SONG Hai-rong

    (The Affiliated Hospital of Guiyang Medical College,Guiyang 550004,China)

    F1+2及TAT是两种具有代表性的凝血激活分子标志物。F1+2及TAT的检则,可较好地反映体内凝血系统的活化。本文就其特性、检测方法及临床应用进展作梗概综述。

    1 F1+2及TAT特性
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    1.1 F1+2的特性 F1+2是血浆中凝血酶原在因子Xa或其复合物作用下,其肽键Arg(273)-Thr(274)及Arg(322)-Ile(323)同时裂解,从NH2端释放出的多肽片段,由273个氨基酸残基组成,分子量约35000,其理化性质稳定。F1+2是凝血酶原激活的特异分子标志物,它对因子Xa催化的凝血酶原激活有一定抑制作用,其机制可能是通过r-羧基谷氨酸区域与凝血酶原、因子Xa竞争磷脂表面的结合位点而实现,此作用与F1+2量呈一定依赖关系。

    1.2 TAT的特性 TAT是凝血酶与抗凝血酶Ⅲ(Antithrombin Ⅲ,AT-Ⅲ)以1∶1mol结合生成酰基共价键的复合物,分子量约100000,其内部酰化键较牢固,在pH中性时,加蛋白变性剂并加热至100℃不解离,它是凝血酶早期形成的分子标志物之一。TAT与蛋白S(Protein S,PS)具有高度亲和力,可形成PS-TAT复合物,在血栓形成中对凝血酶的失活起保护作用。此外,TAT与内皮细胞结合速度介于凝血酶与AT-Ⅲ之间,这一特性可能反映AT-Ⅲ、凝血酶与内皮细胞的相互作用。
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    2 F1+2及TAT的检测[1,2]

    1989年Pelzer使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆F1+2及TAT含量。根据夹心法原理,使用抗F1+2抗体(抗凝血酶抗体),与血浆标本相应抗原反应后,加入辣根过氧化物酶标记的抗凝血酶抗体(抗AT-Ⅲ抗体),形成抗体-抗原-标记抗体复合物,最后加入与过氧化物酶反应能显色的底物,据颜色深浅,通过比色对照标准曲线,测出F1+2(TAT)浓度。该法灵敏度F1+2为0.02nm/L、TAT为0.5mg/ml。上述抗体均为免疫家兔获得的多克隆抗体。1993年Hursting用PF2-卵清蛋白免疫鼠,经融合、克隆得到高效特异的单抗5.-3B(McAB.5-3B),使血浆F1+2、TAT检测更具灵敏性及特异性。

    3 F1+2及TAT检测的临床意义

    3.1 恶性血液病 人类白血病细胞中含有大量促凝物质是导致播散性血管内凝血(Disseminated intravascular coagulation,DIC)的主要原因之一。Weltermann等[3]对1978~1997年中379名急性粒白血病(Acute myeloid leukemia,AML)(FAB分型包括M1、M2、M4-7)患者进行研究时发现,除M7外,其他亚型F1+2、TAT水平显著升高,并出现DIC,以M5型最常见,可能该型白血病细胞所含促凝物质多于其它亚型,化疗后二项指标均显著下降。Martin等[4]发现急性早幼粒细胞可释放具有半胱氨酸酶活性的促凝物,可直接激活X因子致F1+2水平升高,尤其在化疗中,提示临床上对急性APL患者化疗前可适当给予抗凝药。
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    检测凝血激活指标有助于临床上对化疗方案的选择。Zurborn等[5]研究不同化疗方案对非何杰金氏淋巴瘤(Non-Hodgkins lympnomas,NHL)及急性白血病患者凝血或纤溶激活影响。用强化疗方案治疗的患者,TAT水平升高,D-dimer无显著变化,但D-dimer/TAT值显著降低,提示促凝因子释放后凝血酶增多与纤溶激活不相平行。相反,用较温和的化疗方案治疗的患者,血液学参数无显著变化。可见,促凝因子释放与肿瘤对药物的敏感性及大量肿瘤细胞被破坏有关。

    3.2 DIC Wada等[6]对273名DIC患者及50名DIC前期患者进行研究,发现患者在发生DIC前6~7天,TAT水平轻度低于DIC前期患者的平均水平;发生DIC前一天,又轻度高于该平均水平。可见TAT对于预测DIC的发生较敏感。

    F1+2与TAT同时检测有利于探讨不同类型DIC的发生机理。Asakura等[7]同时检测86名DIC患者F1+2及TAT水平。结果发现,F1+2在暴发性肝炎及肝功衰竭所致DIC患者中无显著升高,推测肝功衰竭可能不会导致凝血酶生成过多,DIC与之无关。但在其它疾病如急性早幼粒细胞白血病(Acute promyeloid leukemia,APL)、AML、慢性粒细胞白血病(Chronic myeloid leukemia,CML)、NHL等所致的DIC中均显著升高(P<0.01)。TAT水平在每组DIC中显著升高,且与F1+2有显著相关性(r=0.682,P<0.01),在APL中,二者升高最明显,提示恶性血液病凝血系统激活增强。
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    3.3 血栓性疾病 F1+2在监测血栓疾病的高凝状态有重要地位。Li等[8]对100例接受口服抗凝治疗的血栓疾病患者进行了F1+2及PT检测,研究二者比率关系,结果显示F1+2降低与PT增高呈低度负相关(r=-0.208),且F1+2较PT敏感,提示测定PT时应测定F1+2水平。

    Fujii等[9]观察37名脊柱受伤者,其中21名颈椎及下肢瘫痪者出现下肢深部静脉血栓(Deep vein thrombossi,DVT)。由于瘫痪不能运动导致血流减慢,血粘度高使血管内皮受损,激活凝血系统,TAT水平始终高于无DVT患者的水平。21名放射性纤维蛋白原摄取试验(Radioctive fibrinogen uptake test,RFUT)阳性患者,11名在RFUT变为阳性前就已发现TAT水平升高,提示TAT可能有预测价值。

    Boneu等[10]对116名怀疑有DVT患者同时检测F1+2及TAT水平,发现F1+2及TAT对DVT诊断的敏感性分别为47%和64%,两项同时检测为38%;特异性分别为80%和77%,两项同时检测为88%。提示TAT的敏感性优于F1+2,但特异性次于F1+2。如合用大大提高对DVT诊断的特异性,因此,对该病最好二者同时检测。
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    3.4 溶栓治疗[11] Caricia等对33名急性、亚急性下肢动脉血栓症的患者用重组组织纤溶酶原激活物(rt-PA)治疗3小时后同时检测F1+2及TAT水平,结果F1+2水平明显升高,24小时后回到正常水平;TAT水平剧烈升高,24小时后回到轻度升高水平,且F1+2与TAT呈正相关(r=0.57,P<0.05),表明二者对监测溶栓疗效有同样价值,同时指导溶栓治疗用药剂量及疗程。

    3.5 慢性肺源性心脏病[12] F1+2的检测在该病中可及时发现患者出现高凝状态。徐凤华等检测了一组慢性肺源性心脏病患者,发现F1+2水平明显高于对照组(P<0.01)。该病由于血流淤滞、缺氧,酸碱平衡失调及肺动脉高压持续存在,肺血管内皮细胞严重受损,激活外凝途经,结果F1+2显著增高,说明患者处于高凝状态。笔者认为适当给予抗凝药以改善肺动脉高压,减轻心脏负荷。

    3.6 冠心病[13] 对冠心病患者检测F1+2可鉴别是否有冠脉狭窄,提高该病的确诊率。Kinenast等对225例心绞痛患者行冠脉造影术,并测定F1+2水平,发现冠脉狭窄者F1+2水平高于造影正常者,表明冠状动脉粥样硬化与F1+2水平相关,主因冠状动脉粥样硬化使内皮细胞受损易致血栓形成。该作者还报道了心梗患者F1+2水平升高(P<0.01)。
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    3.7 肾病综合征[14] 肾病综合征可伴高凝状态。Tsai等检测21名肾病综合征患者F1+2、TAT水平,结果均显著高于正常组,一年后均发生血栓栓塞并发症。该研究还发现,F1+2升高异常显著,与TAT无明显相关,提示可能为肾小球系统受损激活凝血系统,使体内凝血酶的产生多于尿中丢失的AT-Ⅲ。因此,肾病综合征一旦确诊,应常规检查患者F1+2及TAT水平,如有升高,及时抗凝治疗,可降低并发症的发生,预后良好。

    3.8 糖尿病[15] 心血管疾病是糖尿病常见的并发症,也是死亡的重要因素之一。作者对127例未经抗凝治疗且合并肾脏病变的非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM)患者检测TAT水平,结果TAT值显著增高,与尿白蛋白指数呈低水平相关(r=0.194),认为由于肾脏病变加重血液凝固系统活化,从而成为缺血性心血管疾病的发病因素。因此,临床上常规应用抗凝药,能延缓并发症的出现,降低病死率。

    3.9 人工瓣膜替换术[16] 通过检测F1+2及TAT水平可监测患者术后病情变化。Nakamura等对48名人工瓣膜替换术者同时检测F1+2及TAT水平。术前,二项指标均增高,术后给予华法令者第7天F1+2水平明显低于术前(P<0.01),第21天仍保持恒定水平;TAT在第7天有一高峰值,第21天显著低于第7天水平。F1+2与TAT存在低度相关性(r=0.359),说明患者术后病情平稳,表明F1+2受外界因素影响小于TAT,比TAT更能准确反映凝血功能。
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    3.10 冠状动脉移植术[17] F1+2是监测该手术凝血系统激活的适宜分子标志物。Knudsent等通过检测F1+2水平,监测20例在体外循环条件下行冠状动脉移植术患者体内凝血酶的产生。术前已用大量肝素,但整个手术过程中F1+2水平升高,推测系使用冠状动脉回形夹使心肌局部缺血而致凝血酶产生过多。当松开血管夹后,淤积在肺血管床的血液获释,F1+2水平显著升高,与夹子使用时间长短有关。

    3.11 妊高征[18] Haznedarglu等调查了22名妊高症孕妇(孕期28~34周),发现F1+2、TAT水平显著高于正常孕妇及非怀孕正常组,提示妊高症存在高凝状态可能为一慢性DIC过程。可见,二项指标的检测可协助诊断妊高症。

    3.12 促红细胞生成素应用[19] 促红细胞生成素可用于再生障碍性贫血及尿毒症患者,以改善贫血症状,但Clyne对健康成人用重组促红细胞生成素(Recombinant erythropoitin,r-EPO)6周后,发现红细胞容积增高,TAT水平亦增高,提示EPO有增加血栓形成危险,TAT可作为应用EPO治疗过程中凝血激活的一项监测指标。
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    3.13 成分输血[20] 目前,临床上少数人对成分输血仍有偏见和怀疑。Ander等对10名健康男性研究出血及成分输血对凝血系统的影响,发现急性失血达血容量10%时TAT水平增高,输入浓红细胞或冰冻血浆不会导致TAT含量显著变化,表明出血可导致凝血系统的激活,但成分输血对止血无负性效应,故对临床上的急性失血患者,可放心使用成分输血挽救生命。

    综上所述,F1+2及TAT是反映凝血系统激活程度的较敏感指标,对于探讨疾病凝血异常机制及对疾病的早期诊断、治疗有重要实用价值。

    (达万明教授 审)

    作者简介:宋海容(1972-),女(布依族),贵州省贵阳市人,贵阳医学院血液内科,97级硕士生,主要从事止血与血栓研究。

    参考文献:

    [1]Pelzer H,Schwarz A,Stiiber W,et al.Determination of human prothrombin activation fragment 1+2 in plasma with an antibody against a synthetic peptide[J].Thromb Haemost,1991,65(1):153-169.
, http://www.100md.com
    [2]Hursting MJ,Bolibar I,Pfliegler G,et al.Monoclonal antibodies specific for prothrombin fragment 1+2 and their use:a quantitative enzme-lined immunosorbent assay[J].Clin Chem,1993,39(4):583-590.

    [3]Weltermann A,Pabinger I,Geissler K,et al.Hypofibrinogenemia in non-M3 acute myeloid leukemia,incidence,clinical and laboratory characteristics and prognosis[J].Leukemia,1998,12(8):1182-1186.

    [4]Martin S,Tallman,Hau C,et al.Reassessing the hemostatic disorder associated with acute promyelocytic leukemia[J].Blood,1992,79(3):543-550.
, 百拇医药
    [5]Zurborn KH,Gram J,Glander K,et al.Influence of cytostatic treatment on the coagulation system and fibrinolysis in patients with non-Hodgkin's Lymphomas and acute leukemias[J]. Eur J Haematol,1991,47(1):55-59.

    [6]Wada H,Sakuragawa N,Shiku H,et al.Haemostatic molecuar markers before onset of DIC in leukemic patients[J].Am J Hematol,1993,43(2):190-194.

    [7]Asakura H,Jokaji H,Saito M,et al.Changes in plasma levels of F1+2 in case of DIC[J].Acta Haematol,1993,89(1):22-25.
, 百拇医药
    [8]Li ZJ,Wu J,Mammen F.Prothrombin fragment F1+2,prothombin time ration and oral anticoagulant therapy[J].Thomb Res,1994,75(6):601-607.

    [9]Fujii y,Mammen EF,Farog A,et al.Thrombosis in spinal cord injury[J].Thromb Res.1992,68(4):357-368.

    [10]Boneu B,Bes G.D-dimers, TAT and F1+2 diagnostic clue in clinically suspected deep Vein thrombosis[J].Thromb Haemost,1991,65(1):28-32.

    [11]Garcia Avello A,Garlia,Frade LT,et al.High F1+2 fragment of prothrombin, thrombin-antithrombinⅢ and soluble fibrin plasma levels demonstrate hypercoagulabity induced during locoregional thromlytic therapy with rt-PA[J].Thromb Res,1994,73(2):109-115.
, http://www.100md.com
    [12]徐凤华,门剑龙.慢性肺源性心脏病部分凝血功能及凝血因子活化指标的测定[J].临床检验杂志,1998,16(4):247-248.

    [13]Kinenast J.Relation of fibrinogen to presence and severity of coronary artery disease is independent of other coexisting heart disease[J].Am Heart J,1993,125(6):1601-1609.

    [14]Tsai YC,Chieng CH.Hemostatic molecular makers in nephrotic syndrome[J].Am J Haematol,1993,44(1):276-279.

    [15]清水弘行.(王 军译).糖尿病白蛋白尿患者中TAT浓度增高[J].国外医学内分泌分册,1997,17(3):162.
, 百拇医药
    [16]Nakamura K,Toyohliza T.Relationship between changes in F1+2 and TAT levels and blood coagulation early after prosthetic valve replacement[J].Thromb Res,1997,86(2):161-171.

    [17]Knudsen L,Hasenkam JM,Kure HH,et al.Monitoring thrombin generation with prothrombin fragment 1,2 assay during cardiopulmonary bypass surgery[J].Thromb Res,1996,84(1):45-54.

    [18]Haznedaroglu S,Tulinozcan.Hemostatic markers in preterm labo[J].Thromb Res,1997,86(1):89-90.
, 百拇医药
    [19]Clyne N,Berghund Bo.Treatment with recombinant human ergthropoietin induces a moderate rise in hematocrit and thrombin antithrombin in health subuects[J].Thromb Res,1995,79(1):125-129.

    [20]Anders E, Henriksson.Experimental heamorrhage and blood component transfusion in human;No charge in plasma concentration of TAT complex and PAP complex[J].Thromb Res,1996,82(5);409-415.

    收稿日期:2000-01-18, 百拇医药