不同瑞氏染液天青B含量及染色效果观察
作者：刘永春 李顺义 郝冀洪 王崇 李彦会
单位：(河北医科大学第二医院检验科 石家庄 050000)
关键词：集落计数,微生物；方法；染色法；天青
河北医科大学学报000328
中图号 R446.11+1▲
血涂片染色是医学检验中最常用、最重要的项目,染色剂中染料的质量,特别是天青B的含量可直接影响染色结果,ICSH推荐使用罗(Romanowsky)氏染色法,目前国内多采用瑞(Wright)氏染色法。为此,作者对5个厂家生产的不同批号瑞氏染料进行天青B含量分析及染色效果的观察,供国内实验室应用时参考。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 瑞氏染料:北京化工厂批号为780826、870528、660928,通县育才精细化工厂批号为950310、910129,上海试剂三厂批号为930728、860328、830418,上海新中化学厂批号为660921及沈阳试剂三厂批号为900050。
1.2 仪器:UV-3000可见紫外分光光度计(日本岛津)。
1.3 天青B含量分析:不同瑞氏染色均以粉剂100 mg,甲醇60 ml的比例配制染色液,经500倍甲醇稀释后,在UV-3 000分光光度计上分析天青B含量。测试条件为:吸光度范围0～3.0,波长500～700 nm,狭缝宽度1 nm,纸速为20 nm/cm,扫描速度10 nm/min,单波长,比色杯1 cm。天青B含量以646 nm吸光度值为标准。
1.4 吸光度比值测定:按Deam-Gilliland法。
, 百拇医药
1.5 染色效果观察:按ICSH判断标准。
2 结 果
不同瑞氏染料天青B含量及吸光度比值见表1。
染色效果观察:天青B含量低者(批号660928、910129)嗜酸性颗粒染为灰红色,淋巴细胞浆为灰蓝色,嗜天青颗粒着色浅,其余细胞染色达到ICSH标准。天青B含量高者(批号930728、660921)各种细胞染色均达到ICSH标准,嗜酸性颗粒为桔红色,淋巴细胞浆为蓝色,嗜天青颗粒着色深。
表1 不同瑞氏染料天青B含量及吸光度比值 生产厂家
批号
525 nm
646 nm
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650 nm
吸光度比值
北京化工厂
870528
0.289
0.290
0.622
1.38
北京化工厂
780826
0.220
0.366
0.388
, 百拇医药
1.76
北京化工厂
660928
0.145
0.222
0.203
1.40
育才精细化工厂
950310
0.212
0.341
0.337
1.59
, 百拇医药
育才精细化工厂
910129
0.157
0.251
0.255
1.62
上海试剂三厂
930728
0.239
0.410
0.428
1.79
上海试剂三厂
, http://www.100md.com
860328
0.233
0.334
0.326
1.39
上海试剂三厂
830418
0.233
0.349
0.337
1.45
上海新中化学厂
660921
, 百拇医药
0.258
0.393
0.395
1.53
沈阳试剂三厂
900050
0.216
0.384
0.383
1.77
3 讨 论
3.1 试剂选择:血涂片染色,ICSH推荐使用Romanowsky染色法,试剂成分为天青B和伊红Y。天青B试剂难得,而且价格较高,至今未在国内实验室普及。我国目前使用较多的是瑞氏染色法。有的使用姬(Giemsa)氏染色法或瑞-姬混合染色法。
, http://www.100md.com
3.2 含量分析:瑞氏染料的天青B含量不高,早为国外学者指出。1989年生物学染色委员会用薄层层析法对9家试剂厂生产的瑞氏染料的组分进行了分析,其中8种染料含天青B为35 %,亚甲蓝为30 %,天青A为25 %,天青C为10 %,另1种染料含天青B较高,达74 %,作者分析5个试剂厂10个批号的瑞氏染料,发现上海试剂三厂(930728)天青B含量最多,为0.41,上海新中化学厂(660921)为0.39,沈阳试剂厂(900050)为0.384,而北京化工厂的(870528和660928)为0.29和0.22,育才精细化工厂(910129)为0.25,天青B含量高低相差近1倍。说明瑞氏染料的质量有明显差异。
3.3 染色效果:ICSH推荐的罗氏染色法,染色效果取决于天青B含量。本文的结果显示天青B含量多者染色效果好,各种细胞染色结果可达到ICSH标准,天青B含量少者染色效果差,表现在嗜酸性颗粒和淋巴细胞浆的颜色更明显。但作者观察的染色效果与吸光度比值关系密切,天青B为0.41者,吸光度比值为1.79,天青B为0.22者,吸光度比值为1.40,染色效果都有明显不同。
收稿日期：1999-09-24, 百拇医药
单位：(河北医科大学第二医院检验科 石家庄 050000)
关键词：集落计数,微生物；方法；染色法；天青
河北医科大学学报000328
中图号 R446.11+1▲
血涂片染色是医学检验中最常用、最重要的项目,染色剂中染料的质量,特别是天青B的含量可直接影响染色结果,ICSH推荐使用罗(Romanowsky)氏染色法,目前国内多采用瑞(Wright)氏染色法。为此,作者对5个厂家生产的不同批号瑞氏染料进行天青B含量分析及染色效果的观察,供国内实验室应用时参考。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 瑞氏染料:北京化工厂批号为780826、870528、660928,通县育才精细化工厂批号为950310、910129,上海试剂三厂批号为930728、860328、830418,上海新中化学厂批号为660921及沈阳试剂三厂批号为900050。
1.2 仪器:UV-3000可见紫外分光光度计(日本岛津)。
1.3 天青B含量分析:不同瑞氏染色均以粉剂100 mg,甲醇60 ml的比例配制染色液,经500倍甲醇稀释后,在UV-3 000分光光度计上分析天青B含量。测试条件为:吸光度范围0～3.0,波长500～700 nm,狭缝宽度1 nm,纸速为20 nm/cm,扫描速度10 nm/min,单波长,比色杯1 cm。天青B含量以646 nm吸光度值为标准。
1.4 吸光度比值测定:按Deam-Gilliland法。
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1.5 染色效果观察:按ICSH判断标准。
2 结 果
不同瑞氏染料天青B含量及吸光度比值见表1。
染色效果观察:天青B含量低者(批号660928、910129)嗜酸性颗粒染为灰红色,淋巴细胞浆为灰蓝色,嗜天青颗粒着色浅,其余细胞染色达到ICSH标准。天青B含量高者(批号930728、660921)各种细胞染色均达到ICSH标准,嗜酸性颗粒为桔红色,淋巴细胞浆为蓝色,嗜天青颗粒着色深。
表1 不同瑞氏染料天青B含量及吸光度比值 生产厂家
批号
525 nm
646 nm
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650 nm
吸光度比值
北京化工厂
870528
0.289
0.290
0.622
1.38
北京化工厂
780826
0.220
0.366
0.388
, 百拇医药
1.76
北京化工厂
660928
0.145
0.222
0.203
1.40
育才精细化工厂
950310
0.212
0.341
0.337
1.59
, 百拇医药
育才精细化工厂
910129
0.157
0.251
0.255
1.62
上海试剂三厂
930728
0.239
0.410
0.428
1.79
上海试剂三厂
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860328
0.233
0.334
0.326
1.39
上海试剂三厂
830418
0.233
0.349
0.337
1.45
上海新中化学厂
660921
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0.258
0.393
0.395
1.53
沈阳试剂三厂
900050
0.216
0.384
0.383
1.77
3 讨 论
3.1 试剂选择:血涂片染色,ICSH推荐使用Romanowsky染色法,试剂成分为天青B和伊红Y。天青B试剂难得,而且价格较高,至今未在国内实验室普及。我国目前使用较多的是瑞氏染色法。有的使用姬(Giemsa)氏染色法或瑞-姬混合染色法。
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3.2 含量分析:瑞氏染料的天青B含量不高,早为国外学者指出。1989年生物学染色委员会用薄层层析法对9家试剂厂生产的瑞氏染料的组分进行了分析,其中8种染料含天青B为35 %,亚甲蓝为30 %,天青A为25 %,天青C为10 %,另1种染料含天青B较高,达74 %,作者分析5个试剂厂10个批号的瑞氏染料,发现上海试剂三厂(930728)天青B含量最多,为0.41,上海新中化学厂(660921)为0.39,沈阳试剂厂(900050)为0.384,而北京化工厂的(870528和660928)为0.29和0.22,育才精细化工厂(910129)为0.25,天青B含量高低相差近1倍。说明瑞氏染料的质量有明显差异。
3.3 染色效果:ICSH推荐的罗氏染色法,染色效果取决于天青B含量。本文的结果显示天青B含量多者染色效果好,各种细胞染色结果可达到ICSH标准,天青B含量少者染色效果差,表现在嗜酸性颗粒和淋巴细胞浆的颜色更明显。但作者观察的染色效果与吸光度比值关系密切,天青B为0.41者,吸光度比值为1.79,天青B为0.22者,吸光度比值为1.40,染色效果都有明显不同。
收稿日期：1999-09-24, 百拇医药