细胞周期素D1在乳腺癌中与雌激素、孕激素受体的关系
作者：魏剑锋 林玲 欧阳宛炯 邱建龙 黄种心
单位：魏剑锋(福建医科大学 附属第二医院外科,泉州 362000)；林玲 欧阳宛炯(福建医科大学 附属第二医院内科,泉州 362000)；邱建龙 黄种心(福建医科大学 附属第二医院病理科,泉州 362000)
关键词：乳腺肿瘤；细胞周期素；雌激素受体；孕激素受体；免疫组织化学
福建医科大学学报000310
摘要: 目的 探讨细胞周期素D1(cyclin D1)在乳腺癌中与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)之间的关系。 方法 应用免疫组化SP法,对66例原发性乳腺癌进行cyclin D1及ER、PR表达的检测。 结果 cyclin D1的表达在ER阳性者中阳性率为84.8%(28/33),在ER阴性患者中的阳性表达率为54.5%(18/33),二者差异有显著性(P<0.01)。 结论 雌激素对乳腺癌的发生作用可能通过 cyclin D1途径,对cyclin D1、ER的检测可能为乳腺癌的临床治疗提供有益的参考。
, 百拇医药
中图分类号: R394.3; R446.61; R737.904 文献标识码: A
文章编号:1000-2235(2000)03-0237-03
Relationship of Cyclin D1 and Estrin Receptor,Progestin Receptor
in Breast Carcinoma
WEl Jian-feng
(Department of Surgery)
LIN Ling OUYANG Wan-jiong
(Department of Internal Medicine, The Affiliated Second Hospital,Fujian Medical Uninersity, Quanzhou 362000, China)
, 百拇医药
ABSTRACT: Objective To study the relationship of cyclin D1,and estrin receptor(ER),progestin receptor(PR) in breast carcinoma. Methods The expressions of cyclin D1 proteins,ER,PR were studied by immunohistochemical streptavidin peroxidase conjugated. In 66 breast carcinoma. Results Cyclin D1 was expressed in 84.8%(28/33) of ER-positive specimen,but,54.5%(18/33) of ER-negative specimen(P<0.01). Conclusion The expression of cyclin D1 was associated with ER status in breast carcinoma. To test the expression of cyclin D1 and ER in breast carcinoma may be helpful for the therapy of breast carcinoma.
, 百拇医药
KEY WORDS: breast cancer; cyclin; estrin receptor; progestin receptor; immunohistochemistry
细胞周期素(cyclin)D1基因被认为是一种原癌基因,国内外许多报道表明它与乳腺癌的发生,发展关系密切。而雌激素、孕激素及其受体(ER、PR)与乳腺癌的关系已众所周知,并已应用于临床多年。笔者自1998年6月至1999年6月,对66例乳腺癌进行cyclin D1、ER、PR的检测,以探讨它们之间的关系。
1 材料与方法
1.1 对象 收集我院1997年10月～1998年12月乳腺癌根治术标本66例,均为女性,年龄51.8±13.1岁(26～86岁);其中右侧33例,双侧2例。术前均未经化疗或放疗,术后均经病理检查而得到确诊。存档的标本均用中性福尔马林固定,石蜡包埋,所有组织块均重新制备连续切片厚4 μm。
, 百拇医药
1.2 方法 试剂:所有试剂cyclin D1、ER、PR及SP试剂盒均为福州迈新生物制品公司产品。
标本切片脱蜡和水化后,用PBS(pH 7.4)冲洗3次,每次5 min;每例取一张切片经高压锅处理(作cyclin D1染色),二张切片经微波炉处理(作ER、PR染色)。过氧化物酶阻断溶液(以阻断过氧化物酶活性),室温下孵育10 min,PBS冲洗3次,每次3～5 min;每张切片加非免疫性动物血清50 μl,室温下孵育10 min,以减少非特异性背景。加第一抗体,室温下孵育60 min,PBS冲洗3次,每次3～5 min。加生物素标记的第二抗体,室温下孵育10 min,PBS冲洗3次,每次3～5 min。加链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液50 μl,室温下孵育10 min,PBS冲洗3次,每次3～5 min;加新鲜配制DAB溶液100 μl显色,显微镜下观察。自来水冲洗,苏木素复染,中性树胶封固。
每份标本行常规HE染色作对照。
, http://www.100md.com
1.3 结果分析 采用阳性细胞计数法。阳性对照:染色过程中用已知阳性切片作阳性对照;阴性对照:PBS代替一抗作对照。
结果判断:染色阳性颗粒呈棕黄色。cyclin D1主要见于细胞核及细胞浆,ER、PR主要见于细胞核。显微镜下在每一切片对角及中央取5个高倍镜视野,各计数100个癌细胞中阳性细胞所占比例,阳性细胞数<5%为阴性,阳性细胞数5%～50%为阳性(+);阳性细胞数≥50%为强阳性()。
1.4 统计分析 采用χ2检验。
2 结 果
2.1 cyclin D1与ER、PR的关系(附表)
附表 在乳腺癌中与ER、PR的关系(n,%)
, 百拇医药
n
cyclin D1的表达
阳性率
+
-
ER
+
33
28
5
84.8
-
33
, 百拇医药
18
15
54.5
PR
+
27
22
5
81.5
-
39
24
15
61.5
, 百拇医药
与ER阴性组比较,:P<0.01.
2.2 染色情况说明 cyclin D1的表达主要在细胞核中,部分在细胞浆(图1,图2),ER、PR的表达主要在细胞核中(图3,图4)。
3 讨 论
近一个世纪以前人们发现了绝经前期卵巢切除后可引起乳腺癌患者癌肿的消退。对乳腺癌模型的研究发现,雌激素在乳腺癌的发生及发展中均起作用,而后又发现雌激素受体上的雌激素结合位点,并在临床上应用雌激素受体拮抗剂Tamoxinfen作为乳癌的内分泌治疗手段[1]。研究表明,早期乳癌行Tamoxinfen治疗后期显降低复发率,增加生存期及减少对侧乳腺癌变[2]。但仍有20%ER阳性乳腺癌患者激素治疗无效,研究激素治疗的作用机制将有助于揭示乳腺的发生机制及治疗应用。现在,对激素治疗作用机制的研究集中在其对细胞周期的影响上。
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细胞周期指连续分裂的细胞从一次分裂结束到下次有丝分裂完成所经历的一个连续过程,细胞周期的失调在肿瘤的发生中起关键的作用,而细胞周期调控系统包括细胞周期素(cyclin)、细胞周期素依赖性蛋白激酶(CDKS)、细胞周期素依赖性蛋白激酶的抑制蛋白(CKIS)三者共同组成,任何组分的异常都可能导致细胞的恶性增殖,其中cyclins的生物学作用最关键[3]。
cyclin D1分为A、B、C、D、E五类,当细胞受生长因子刺激时,细胞周期自静止态的G0至G1,此时cyclin D1～3的表达均增加,在G1末期cyclin E表达达到高峰,cyclin D1、cyclin E在G1→S期时逐渐降解而cyclin A的合成增加,在G2期主要为cyclin B,可见在G1→S期中cyclin D1作用较重要,而目前对细胞周期的研究表明,G1与S期之间的调控点是细胞周期不同时期间最重要的调控点[4]。cyclin D1在细胞增殖过程中的意义最大,是G1期细胞增殖信号的关键蛋白,在肿瘤的形成中发挥着重要的作用[5,6]。
, http://www.100md.com
因此,探讨cyclin D1与性激素受体在乳腺癌中的关系具有重要的意义。在先前的研究中,笔者发现cyclin D1与乳腺癌的发生有一定的关系,它在66例乳腺癌中的表达阳性率为69.7%(46/66),而在24例乳腺良性病变中的表达阳性率仅为16.7%(4/24)(P<0.01),两者差别有统计学意义[7]。本研究提示,cyclin D1在ER阳性乳腺癌患者中的表达较ER阴性者中为高,与国外学者研究相近[8,9]而抗雌激素治疗亦是通过减少cyclin D1的途径而使细胞的周期中止[10.11]。有学者研究表明,抗雌激素治疗的早期变化就有cyclin D1表达减少,而经抗雌激素物质控制的T47D细胞在异位cyclin D1作用下又可恢复细胞周期进程[12],可以推测雌激素对乳腺肿瘤的作用可能通过cyclin D1的途径[13],这有助于理解临床上20%ER(+)乳癌患者对抗雌激素治疗无效,那就是,对于ER阳性而cyclin D1阴性的乳癌患者,雌激素的作用可能不占主导地位,而是存在其他未知的作用因素,因此这部分患者就是临床上对内分泌疗法不敏感的ER阳性患者。
, 百拇医药
但是,雌激素还可通过受体诱导cyclin D1基因扩增,进而过表达cyclin D1,而使细胞进入增殖[14]。当基因扩增后,抗雌激素的治疗在即使ER阳性的患者中亦不起作用[15]。因此,这部分ER阳性而cyclin D1表现为基因扩增的患者对抗雌激素治疗效果不佳,这也可能是临床上20%ER阳性患者对抗雌激素治疗效果不佳的原因。
本研究ER阳性且cyclin D1阴性患者比例为15.2%,与临床上对内分泌治疗不敏感的患者比例相当,但雌激素通过受体诱导cyclin D1基因扩增而至细胞异常增殖的病例所占的比例仍未见报道。笔者将在以后的工作中搜集新鲜标本进行cyclin D1 mRNA的检测,研究cyclin D1 mRNA在乳腺癌中的表达情况及与ER、PR、临床特征的关系。
, 百拇医药
另外,本文还提示,cyclin D1在乳腺癌中,PR阳性与阴性两者间的表达差别无显著性,这可能与PR和cyclin D1同属ER的下位调节物有关[16,17]。
图1 乳腺癌中cyclin D1蛋白的阳性表法×100
图2 乳腺癌 中cyclin D1蛋白的阳性表达×400
图3 乳腺癌中ER蛋白的阳性表达×200
, 百拇医药
图4 乳腺癌中PR蛋白的阳性表达×200
(本课题得到福建医科大学附属第一医院肿瘤外科许东坡教授的悉心指导,在此表示衷心的感谢)。
基金项目:国家教委留学回国人员科研启动基金资助项目[教外司留(1997)436号]
作者简介:魏剑锋(1970～),男,住院医师.
参考文献:
[1] Lerner LJ,Jordan VC. Development of antiestrogens and their use in breast cancer:eighth cain memorial award lecture[J]. Cancer Res, 1990,50(14):4177～4189.
, 百拇医药
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[4] Nurse P. Ordering S phase and M phase in the cell cycle[J]. Cell, 1994,79(4):547～550.
[5] Dynlacht BD. Regulation of transcription by proteins that control the cell cycle[J]. Nature, 1997,389(6647):149～152.
, http://www.100md.com
[6] Kao GD,McKenna WG,Maity A,et al. cyclin B1 availability is a rate-limiting component of the radiation-induced G2 delay in Hela cells[J]. Cancer Res, 1997,57(4):753～758.
[7] 魏剑锋,林 玲,许东坡,等. cyclin D1在乳腺癌中的表达及临床意义[J]. 福建医药杂志, 1999,21(5):83～84.
[8] Michalidel R,Hageman PH,Van Tinteren H,et al. A clinicopathological study on overexpression of cyclin D1 and of p53 in a series of 248 patients with operable breast cancer[J]. Br J Cancer, 1996,73(6):728～734.
, http://www.100md.com
[9] Hong J,Shah NN,Thomas TJ,et al. Differential effects of estradiol and its analogs on cyclin D1 and CDK4 experssion in estrogen receptor positive MCF-7 and estrogen receptor transfected MCF-10 AEwt5 cells[J]. Oncol Rep, 1998,5(5):1025～1033.
[10] Smith WW. Aryl hydrocarbon receptor-mediated antiestrogenicity in MCF-7 cells:modulation of hormone-induced cell cycle enzymes[J]. Arch Biochem Biophys, 1998,356(2):2239～2248.
[11] Altucci L,Addeo R,Cicatiello L,et al. 17 beta-estradiol induces cyclin D1 gene transcription,p36D1-p34cdk4 complex activation and p105Rb phosphorylation during mitogenic stimulation of G1-arrested human breast cancer cells[J]. Oncogene, 1996,12(11):2315～2324.
, 百拇医药
[12] Howell A,Defriend D,Anderson E,et al. Mechanisms of response and resistance to endocrine therapy for breast cancer and the development of new treatments[J]. Endocrine Rel Cancer, 1993,43(5):21.
[13] Watts CK. Antiestragen regulation of cell cycle progression and cyclin D1 gene expression in MCF-7 human breast cancer cells[J]. Breast Cancer Res Treat, 1994,31(1):95～105.
[14] Kerkhoff E,Rapp UR. Induction of cell proliferation in quiescent NIH 3T3 cells by oncogenic c-Raf-1[J]. Mol Cell Biol, 1997,17(5):2576～2586.
, 百拇医药
[15] Dees C,Askari M,Foster JS,et al. DDT mimicks estradiol stimulation of breast cancer cells to enter the cell cycle[J]. Mol Carcinog, 1997,8(2):107～114.
[16] 张 蕾,龚 平. 雌、孕激素受体与乳腺癌内分泌治疗的抵抗[J]. 中国肿瘤临床, 1998,25(2):151～153.
[17] 阙 秀,薛卫成. 乳腺癌中PS2基因与雌激素及孕激素受体[J]. 中国肿瘤杂志, 1998,20(3):237～239.
收稿日期:1999-11-18, http://www.100md.com
单位：魏剑锋(福建医科大学 附属第二医院外科,泉州 362000)；林玲 欧阳宛炯(福建医科大学 附属第二医院内科,泉州 362000)；邱建龙 黄种心(福建医科大学 附属第二医院病理科,泉州 362000)
关键词：乳腺肿瘤；细胞周期素；雌激素受体；孕激素受体；免疫组织化学
福建医科大学学报000310
摘要: 目的 探讨细胞周期素D1(cyclin D1)在乳腺癌中与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)之间的关系。 方法 应用免疫组化SP法,对66例原发性乳腺癌进行cyclin D1及ER、PR表达的检测。 结果 cyclin D1的表达在ER阳性者中阳性率为84.8%(28/33),在ER阴性患者中的阳性表达率为54.5%(18/33),二者差异有显著性(P<0.01)。 结论 雌激素对乳腺癌的发生作用可能通过 cyclin D1途径,对cyclin D1、ER的检测可能为乳腺癌的临床治疗提供有益的参考。
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中图分类号: R394.3; R446.61; R737.904 文献标识码: A
文章编号:1000-2235(2000)03-0237-03
Relationship of Cyclin D1 and Estrin Receptor,Progestin Receptor
in Breast Carcinoma
WEl Jian-feng
(Department of Surgery)
LIN Ling OUYANG Wan-jiong
(Department of Internal Medicine, The Affiliated Second Hospital,Fujian Medical Uninersity, Quanzhou 362000, China)
, 百拇医药
ABSTRACT: Objective To study the relationship of cyclin D1,and estrin receptor(ER),progestin receptor(PR) in breast carcinoma. Methods The expressions of cyclin D1 proteins,ER,PR were studied by immunohistochemical streptavidin peroxidase conjugated. In 66 breast carcinoma. Results Cyclin D1 was expressed in 84.8%(28/33) of ER-positive specimen,but,54.5%(18/33) of ER-negative specimen(P<0.01). Conclusion The expression of cyclin D1 was associated with ER status in breast carcinoma. To test the expression of cyclin D1 and ER in breast carcinoma may be helpful for the therapy of breast carcinoma.
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KEY WORDS: breast cancer; cyclin; estrin receptor; progestin receptor; immunohistochemistry
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1 材料与方法
1.1 对象 收集我院1997年10月～1998年12月乳腺癌根治术标本66例,均为女性,年龄51.8±13.1岁(26～86岁);其中右侧33例,双侧2例。术前均未经化疗或放疗,术后均经病理检查而得到确诊。存档的标本均用中性福尔马林固定,石蜡包埋,所有组织块均重新制备连续切片厚4 μm。
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1.2 方法 试剂:所有试剂cyclin D1、ER、PR及SP试剂盒均为福州迈新生物制品公司产品。
标本切片脱蜡和水化后,用PBS(pH 7.4)冲洗3次,每次5 min;每例取一张切片经高压锅处理(作cyclin D1染色),二张切片经微波炉处理(作ER、PR染色)。过氧化物酶阻断溶液(以阻断过氧化物酶活性),室温下孵育10 min,PBS冲洗3次,每次3～5 min;每张切片加非免疫性动物血清50 μl,室温下孵育10 min,以减少非特异性背景。加第一抗体,室温下孵育60 min,PBS冲洗3次,每次3～5 min。加生物素标记的第二抗体,室温下孵育10 min,PBS冲洗3次,每次3～5 min。加链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液50 μl,室温下孵育10 min,PBS冲洗3次,每次3～5 min;加新鲜配制DAB溶液100 μl显色,显微镜下观察。自来水冲洗,苏木素复染,中性树胶封固。
每份标本行常规HE染色作对照。
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1.3 结果分析 采用阳性细胞计数法。阳性对照:染色过程中用已知阳性切片作阳性对照;阴性对照:PBS代替一抗作对照。
结果判断:染色阳性颗粒呈棕黄色。cyclin D1主要见于细胞核及细胞浆,ER、PR主要见于细胞核。显微镜下在每一切片对角及中央取5个高倍镜视野,各计数100个癌细胞中阳性细胞所占比例,阳性细胞数<5%为阴性,阳性细胞数5%～50%为阳性(+);阳性细胞数≥50%为强阳性()。
1.4 统计分析 采用χ2检验。
2 结 果
2.1 cyclin D1与ER、PR的关系(附表)
附表 在乳腺癌中与ER、PR的关系(n,%)
, 百拇医药
n
cyclin D1的表达
阳性率
+
-
ER
+
33
28
5
84.8
-
33
, 百拇医药
18
15
54.5
PR
+
27
22
5
81.5
-
39
24
15
61.5
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与ER阴性组比较,:P<0.01.
2.2 染色情况说明 cyclin D1的表达主要在细胞核中,部分在细胞浆(图1,图2),ER、PR的表达主要在细胞核中(图3,图4)。
3 讨 论
近一个世纪以前人们发现了绝经前期卵巢切除后可引起乳腺癌患者癌肿的消退。对乳腺癌模型的研究发现,雌激素在乳腺癌的发生及发展中均起作用,而后又发现雌激素受体上的雌激素结合位点,并在临床上应用雌激素受体拮抗剂Tamoxinfen作为乳癌的内分泌治疗手段[1]。研究表明,早期乳癌行Tamoxinfen治疗后期显降低复发率,增加生存期及减少对侧乳腺癌变[2]。但仍有20%ER阳性乳腺癌患者激素治疗无效,研究激素治疗的作用机制将有助于揭示乳腺的发生机制及治疗应用。现在,对激素治疗作用机制的研究集中在其对细胞周期的影响上。
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细胞周期指连续分裂的细胞从一次分裂结束到下次有丝分裂完成所经历的一个连续过程,细胞周期的失调在肿瘤的发生中起关键的作用,而细胞周期调控系统包括细胞周期素(cyclin)、细胞周期素依赖性蛋白激酶(CDKS)、细胞周期素依赖性蛋白激酶的抑制蛋白(CKIS)三者共同组成,任何组分的异常都可能导致细胞的恶性增殖,其中cyclins的生物学作用最关键[3]。
cyclin D1分为A、B、C、D、E五类,当细胞受生长因子刺激时,细胞周期自静止态的G0至G1,此时cyclin D1～3的表达均增加,在G1末期cyclin E表达达到高峰,cyclin D1、cyclin E在G1→S期时逐渐降解而cyclin A的合成增加,在G2期主要为cyclin B,可见在G1→S期中cyclin D1作用较重要,而目前对细胞周期的研究表明,G1与S期之间的调控点是细胞周期不同时期间最重要的调控点[4]。cyclin D1在细胞增殖过程中的意义最大,是G1期细胞增殖信号的关键蛋白,在肿瘤的形成中发挥着重要的作用[5,6]。
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因此,探讨cyclin D1与性激素受体在乳腺癌中的关系具有重要的意义。在先前的研究中,笔者发现cyclin D1与乳腺癌的发生有一定的关系,它在66例乳腺癌中的表达阳性率为69.7%(46/66),而在24例乳腺良性病变中的表达阳性率仅为16.7%(4/24)(P<0.01),两者差别有统计学意义[7]。本研究提示,cyclin D1在ER阳性乳腺癌患者中的表达较ER阴性者中为高,与国外学者研究相近[8,9]而抗雌激素治疗亦是通过减少cyclin D1的途径而使细胞的周期中止[10.11]。有学者研究表明,抗雌激素治疗的早期变化就有cyclin D1表达减少,而经抗雌激素物质控制的T47D细胞在异位cyclin D1作用下又可恢复细胞周期进程[12],可以推测雌激素对乳腺肿瘤的作用可能通过cyclin D1的途径[13],这有助于理解临床上20%ER(+)乳癌患者对抗雌激素治疗无效,那就是,对于ER阳性而cyclin D1阴性的乳癌患者,雌激素的作用可能不占主导地位,而是存在其他未知的作用因素,因此这部分患者就是临床上对内分泌疗法不敏感的ER阳性患者。
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但是,雌激素还可通过受体诱导cyclin D1基因扩增,进而过表达cyclin D1,而使细胞进入增殖[14]。当基因扩增后,抗雌激素的治疗在即使ER阳性的患者中亦不起作用[15]。因此,这部分ER阳性而cyclin D1表现为基因扩增的患者对抗雌激素治疗效果不佳,这也可能是临床上20%ER阳性患者对抗雌激素治疗效果不佳的原因。
本研究ER阳性且cyclin D1阴性患者比例为15.2%,与临床上对内分泌治疗不敏感的患者比例相当,但雌激素通过受体诱导cyclin D1基因扩增而至细胞异常增殖的病例所占的比例仍未见报道。笔者将在以后的工作中搜集新鲜标本进行cyclin D1 mRNA的检测,研究cyclin D1 mRNA在乳腺癌中的表达情况及与ER、PR、临床特征的关系。
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另外,本文还提示,cyclin D1在乳腺癌中,PR阳性与阴性两者间的表达差别无显著性,这可能与PR和cyclin D1同属ER的下位调节物有关[16,17]。
图1 乳腺癌中cyclin D1蛋白的阳性表法×100
图2 乳腺癌 中cyclin D1蛋白的阳性表达×400
图3 乳腺癌中ER蛋白的阳性表达×200
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图4 乳腺癌中PR蛋白的阳性表达×200
(本课题得到福建医科大学附属第一医院肿瘤外科许东坡教授的悉心指导,在此表示衷心的感谢)。
基金项目:国家教委留学回国人员科研启动基金资助项目[教外司留(1997)436号]
作者简介:魏剑锋(1970～),男,住院医师.
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[7] 魏剑锋,林 玲,许东坡,等. cyclin D1在乳腺癌中的表达及临床意义[J]. 福建医药杂志, 1999,21(5):83～84.
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[9] Hong J,Shah NN,Thomas TJ,et al. Differential effects of estradiol and its analogs on cyclin D1 and CDK4 experssion in estrogen receptor positive MCF-7 and estrogen receptor transfected MCF-10 AEwt5 cells[J]. Oncol Rep, 1998,5(5):1025～1033.
[10] Smith WW. Aryl hydrocarbon receptor-mediated antiestrogenicity in MCF-7 cells:modulation of hormone-induced cell cycle enzymes[J]. Arch Biochem Biophys, 1998,356(2):2239～2248.
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收稿日期:1999-11-18, http://www.100md.com