慢性肝病病人外周血中NO和TNF-α含量的检测
作者：李玉春 齐晓娅 李红军
单位：李玉春(青岛市骨伤医院内科 青岛 266021)；齐晓娅(青岛市骨伤医院内科 青岛 266021)；李红军(山东省立医院内科)
关键词：肝炎；肝硬化；肿瘤坏死因子；一氧化氮
齐鲁医学杂志000308 [摘要] ①目的 探讨慢性肝病病人外周血中一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量的变化及其意义。②方法 采用Griess法和双抗体夹心ELISA法测定11例慢性迁延性肝炎(CPH)、12例慢性活动性肝炎(CAH)、17例肝硬化(LC)病人外周血中NO和TNF-α的含量，并与33例正常人进行了比较。③结果 慢性肝病病人血清中TNF-α与NO明显高于对照组(t=2.377～7.074,P<0.05)，且TNF-α与NO呈正相关(r=0.811，P<0.01)。④结论 TNF-α参与了肝脏的活动性病变过程，NO对病毒性肝炎肝细胞有损伤作用。
, http://www.100md.com
[中图分类号] R575 [文献标识码] A [文章编号] 1008-0341(2000)03-0175-02
THE CONTENT OF TUMOR NECROSIS FACTOR ALPHA AND NITRIC OXIDE IN PATIENTS WITH CHRONIC LIVER DISEASES
LI Yuchun, QI Xiaoya, LI Hongjun
Department of Medicine, Qingdao Orthopedics and Traumatology Hospital, Qingdao 266021
[ABSTRACT] Objective To study the content of TNF-α and NO and its clinical significance in the patients with chronic liver diseases. Methods Using Griess and ELISA methods, the contents of TNF-α and NO in the peripheral blood of 11 patients with chronic persistent hepatitis (CPH), 12 patients with chronic active hepatitis (CAH) and 17 patients with liver cirrhosis (LC) were detected and compared with those of 33 healthy subjects. Results The contents of TNF-α and NO in patients with chronic liver diseases were significantly higher than those in normal controls (t=2.377-7.074,P<0.05). There was a positive correlation between TNF-α and NO levels. Conclusion These findings shows that TNF-α participates in the activity process of liver disease and NO participates in hepatocyte injury mechanism in viral hepatitis as an effective immunomolecule.
, 百拇医药
[KEY WORDS] hepatitis; liver cirrhosis; tumor necrosis factor; nitric oxide
肿瘤坏死因子α(TNF-α)和一氧化氮(NO)在慢性肝病发生发展中的作用已逐渐引起人们的重视，它们均与宿主的细胞免疫及体液免疫状态密切相关[1]。TNF-α是一种重要的细胞因子，NO则是巨噬细胞和肝细胞在肠源性细菌内毒素(LPS)和细胞因子(CK)诱导下产生的细胞毒性效应分子，为了解TNF-α和NO在肝脏损伤中的作用，我们对慢性肝病病人外周血中的TNF-α和NO进行了检测，现将结果报告如下。
1 资料与方法
1.1 研究对象
慢性肝病病人40例，男26例，女14例；年龄21～63岁，平均41.3岁。其中慢性迁延性肝炎(CPH)11例，慢性活动性肝炎(CAH)12例，肝硬化(LC)17例。所有病人的诊断均符合1990年全国病毒性肝炎学术会议(上海)修订的诊断标准，LC按临床诊断。选择33例健康献血者作为对照。各组年龄、性别间差异无显著意义(P>0.05)。
, 百拇医药
1.2 实验方法
1.2.1 标本采集 取空腹肘静脉血，分离血清，置于-20℃保存待测。
1.2.2 检测方法 采用双抗体夹心ELISA法检测TNF-α，药盒购自军事医学科学院，操作按说明书方法进行。NO测定按照文献[2]的方法进行，以NO-2含量表示NO生成量。
1.3 统计学处理
全部数据均以
±s表示,组间比较采用t检验，相关性采用直线相关分析。
2 结 果
慢性肝病病人血清TNF-α，NO-2水平测定结果见表1.由表1可见，慢性肝病病人TNF-α和NO-2水平较对照组均增高，差异均有显著意义(t=2.377～7.047,P<0.05,0.01)。其中CAH组TNF-α和NO-2增高最明显，与CPH组比较，差异有显著性(t=3.875,3.511,P<0.05)；与LC组比较,差异无显著性(t=0.927,2.042,P>0.05)。直线相关分析表明，40例慢性肝病病人TNF-α和NO-2水平呈正相关(r=0.811,P<0.01)。18例ALT正常的慢性肝病病人TNF-α为(5.8±6.7)μg/L,22例ALT升高的慢性肝病病人TNF-α为(17.2±17.6)μg/L，两者比较,差异有极显著性(t=2.800，P<0.01)。本组40例慢性肝病病人总胆红素>100μmol/L者15例，其TNF-α为(12.3±7.7)μg/L；总胆红素<100μmol/L者13例，TNF-α为(6.2±4.2)μg/L，两者差异有显著性(t=2.647，P<0.05)。
, 百拇医药
表1 慢性肝病病人血清TNF-α，NO-2水平测定结果(±s) 组别
n
TNF-α(ρ/μg*L-1)
NO-2(c/μmol*L-1)
对照组
33
3.9± 2.7
4.9± 1.1
CPH组
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11
6.8± 3.9*
15.2±12.6*
CAH组
12
15.1± 6.2**△
43.3±24.4**△
LC组
17
11.7±13.2*
27.5±13.2*
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与对照组比较，*t=2.377～2.708,P<0.05，**t=5.450,7.074,P<0.01;与CPH组比较,△t=3.875,3.511,P<0.05
3 讨 论
NO是由NO合酶(NOS)催化L-精氨酸加氧反应生成，肝脏中的NOS同工酶有两种，即cNOS和诱导型NOS(iNOS).慢性病毒性肝炎病人NO主要由iNOS催化生成，iNOS主要存在于巨噬细胞、中性粒细胞中，慢性肝病病人肝组织中有大量巨噬细胞、库普弗细胞，这些细胞在肠源性内毒素和多种细胞因子刺激下，特别在TNF-α刺激下激活iNOS，从而催化产生NO，iNOS催化合成的NO与免疫和细胞毒性有关[2]，同时有实验发现肝细胞也能产生大量的NO-2/NO-3[3,4].NO通过以下机制损伤肝细胞：①抑制肝细胞清蛋白的合成；②介导肝损伤，NO作为库普弗细胞释放的活性介质可能介导了肝损伤[5]。本组CAH病人外周血中NO-2含量最高，反映肝损伤程度和NO含量呈正比；③NO和活性氧自由基合成毒性更强的自由基,具有细胞毒性；④NO是巨噬细胞产生细胞毒性的效应分子之一,使中性粒细胞发生趋化反应和吸附反应，介导免疫复合物所致的组织损伤[6]。
, 百拇医药
TNF-α由激活的单核巨噬细胞产生，具有广泛的生物活性，慢性肝病病人TNF-α明显升高，并和肝细胞坏死密切相关[7]。本研究显示各组慢性肝病病人TNF-α水平升高,以CAH组增高明显，说明TNF-α与肝脏活动性炎症和细胞坏死相一致。
综上所述，TNF-α和NO参与了慢性肝病的发病过程，其表达增高与疾病的活动呈正相关。肝脏发生炎症时，由于免疫状态的改变，肝脏中出现大量单核巨噬细胞和库普弗细胞，它们不仅产生大量的TNF-α，同时分泌NO分子[8]。TNF-α还可诱导巨噬细胞、库普弗细胞及肝细胞中iNOS的合成，使NO升高。实验证明，NO可能是库普弗细胞释放的，TNF-α首先对肝细胞产生细胞毒作用，继而肝细胞接受TNF-α刺激合成NO，发挥其舒张血管、改善微循环、减少肝细胞缺血坏死的作用[9]。
本研究仅就慢性肝病病人血液中TNF-α，NO的含量进行检测，但其对肝细胞损伤的具体机制和两者之间的关系有待于进一步研究。
, 百拇医药
作者简介 李玉春，男，1968年9月生
参考文献
1，张定凤，任 红，郭树华，等.肿瘤坏死因子在病毒性肝炎肝坏死中的作用及其防护[J].中华医学杂志，1999,70:438
2，卢放根，方建珍，霍继荣，等.腹水中一氧化氮合成酶及肿瘤坏死因子的研究[J].中华内科杂志,1996,11:744
3，Dieter P,Ambs P,Fitzke E,et al.Comparatire study of cytotoxicity and the release of TNF-α,Nitric Oxide,and eicosanoids of liver macrophase treat with lipopplysacharide and liposomeencopsulated MTP-PE[J].J Immunol,1995,155:2595
, 百拇医药
4，Billiar TR,Curran RO,Stuehr DJ,et al.Inducitle cytosolic enzyme activty for the production of NO from L-Arginine in hepatocytes[J].Biochem Biophys Res Commun,1990,168:1034
5，Green SJ,Mellouk S,Hoffman SL,et al.Cellular mechanism of nonspecific immunity to intracellular infection:cytokin-induced synthesis of toxic NO from L-Arg by macrophages and hepatocytes[J]. Immunol Lett,1990,25:15
6，王根生，刘耕陶.一氧化氮与肝细胞损伤[J].中华医学杂志，1995, 75(1):57
, 百拇医药
7，Muto Y,Nauri-Arir KT,Meager A,et al. Enhanced tumor necrosis factor and IL-1 in fulminant hepatic failure[J]. Lancet, 1988, (2):72
8，Abbas Ak, Lichtman AH, Pober JS,eds. Cellular and moleucular immunology[M].Saunders： Philadel-Phia,1991.229～231
9，Laskin DL.Nonparenchymal cells and hepatoxicity semin[J].Liver Dis,1990,10:293
(1999-01-04收稿 2000-02-10修回), http://www.100md.com
单位：李玉春(青岛市骨伤医院内科 青岛 266021)；齐晓娅(青岛市骨伤医院内科 青岛 266021)；李红军(山东省立医院内科)
关键词：肝炎；肝硬化；肿瘤坏死因子；一氧化氮
齐鲁医学杂志000308 [摘要] ①目的 探讨慢性肝病病人外周血中一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量的变化及其意义。②方法 采用Griess法和双抗体夹心ELISA法测定11例慢性迁延性肝炎(CPH)、12例慢性活动性肝炎(CAH)、17例肝硬化(LC)病人外周血中NO和TNF-α的含量，并与33例正常人进行了比较。③结果 慢性肝病病人血清中TNF-α与NO明显高于对照组(t=2.377～7.074,P<0.05)，且TNF-α与NO呈正相关(r=0.811，P<0.01)。④结论 TNF-α参与了肝脏的活动性病变过程，NO对病毒性肝炎肝细胞有损伤作用。
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[中图分类号] R575 [文献标识码] A [文章编号] 1008-0341(2000)03-0175-02
THE CONTENT OF TUMOR NECROSIS FACTOR ALPHA AND NITRIC OXIDE IN PATIENTS WITH CHRONIC LIVER DISEASES
LI Yuchun, QI Xiaoya, LI Hongjun
Department of Medicine, Qingdao Orthopedics and Traumatology Hospital, Qingdao 266021
[ABSTRACT] Objective To study the content of TNF-α and NO and its clinical significance in the patients with chronic liver diseases. Methods Using Griess and ELISA methods, the contents of TNF-α and NO in the peripheral blood of 11 patients with chronic persistent hepatitis (CPH), 12 patients with chronic active hepatitis (CAH) and 17 patients with liver cirrhosis (LC) were detected and compared with those of 33 healthy subjects. Results The contents of TNF-α and NO in patients with chronic liver diseases were significantly higher than those in normal controls (t=2.377-7.074,P<0.05). There was a positive correlation between TNF-α and NO levels. Conclusion These findings shows that TNF-α participates in the activity process of liver disease and NO participates in hepatocyte injury mechanism in viral hepatitis as an effective immunomolecule.
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[KEY WORDS] hepatitis; liver cirrhosis; tumor necrosis factor; nitric oxide
肿瘤坏死因子α(TNF-α)和一氧化氮(NO)在慢性肝病发生发展中的作用已逐渐引起人们的重视，它们均与宿主的细胞免疫及体液免疫状态密切相关[1]。TNF-α是一种重要的细胞因子，NO则是巨噬细胞和肝细胞在肠源性细菌内毒素(LPS)和细胞因子(CK)诱导下产生的细胞毒性效应分子，为了解TNF-α和NO在肝脏损伤中的作用，我们对慢性肝病病人外周血中的TNF-α和NO进行了检测，现将结果报告如下。
1 资料与方法
1.1 研究对象
慢性肝病病人40例，男26例，女14例；年龄21～63岁，平均41.3岁。其中慢性迁延性肝炎(CPH)11例，慢性活动性肝炎(CAH)12例，肝硬化(LC)17例。所有病人的诊断均符合1990年全国病毒性肝炎学术会议(上海)修订的诊断标准，LC按临床诊断。选择33例健康献血者作为对照。各组年龄、性别间差异无显著意义(P>0.05)。
, 百拇医药
1.2 实验方法
1.2.1 标本采集 取空腹肘静脉血，分离血清，置于-20℃保存待测。
1.2.2 检测方法 采用双抗体夹心ELISA法检测TNF-α，药盒购自军事医学科学院，操作按说明书方法进行。NO测定按照文献[2]的方法进行，以NO-2含量表示NO生成量。
1.3 统计学处理
全部数据均以
±s表示,组间比较采用t检验，相关性采用直线相关分析。2 结 果
慢性肝病病人血清TNF-α，NO-2水平测定结果见表1.由表1可见，慢性肝病病人TNF-α和NO-2水平较对照组均增高，差异均有显著意义(t=2.377～7.047,P<0.05,0.01)。其中CAH组TNF-α和NO-2增高最明显，与CPH组比较，差异有显著性(t=3.875,3.511,P<0.05)；与LC组比较,差异无显著性(t=0.927,2.042,P>0.05)。直线相关分析表明，40例慢性肝病病人TNF-α和NO-2水平呈正相关(r=0.811,P<0.01)。18例ALT正常的慢性肝病病人TNF-α为(5.8±6.7)μg/L,22例ALT升高的慢性肝病病人TNF-α为(17.2±17.6)μg/L，两者比较,差异有极显著性(t=2.800，P<0.01)。本组40例慢性肝病病人总胆红素>100μmol/L者15例，其TNF-α为(12.3±7.7)μg/L；总胆红素<100μmol/L者13例，TNF-α为(6.2±4.2)μg/L，两者差异有显著性(t=2.647，P<0.05)。
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表1 慢性肝病病人血清TNF-α，NO-2水平测定结果(
±s) 组别n
TNF-α(ρ/μg*L-1)
NO-2(c/μmol*L-1)
对照组
33
3.9± 2.7
4.9± 1.1
CPH组
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11
6.8± 3.9*
15.2±12.6*
CAH组
12
15.1± 6.2**△
43.3±24.4**△
LC组
17
11.7±13.2*
27.5±13.2*
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与对照组比较，*t=2.377～2.708,P<0.05，**t=5.450,7.074,P<0.01;与CPH组比较,△t=3.875,3.511,P<0.05
3 讨 论
NO是由NO合酶(NOS)催化L-精氨酸加氧反应生成，肝脏中的NOS同工酶有两种，即cNOS和诱导型NOS(iNOS).慢性病毒性肝炎病人NO主要由iNOS催化生成，iNOS主要存在于巨噬细胞、中性粒细胞中，慢性肝病病人肝组织中有大量巨噬细胞、库普弗细胞，这些细胞在肠源性内毒素和多种细胞因子刺激下，特别在TNF-α刺激下激活iNOS，从而催化产生NO，iNOS催化合成的NO与免疫和细胞毒性有关[2]，同时有实验发现肝细胞也能产生大量的NO-2/NO-3[3,4].NO通过以下机制损伤肝细胞：①抑制肝细胞清蛋白的合成；②介导肝损伤，NO作为库普弗细胞释放的活性介质可能介导了肝损伤[5]。本组CAH病人外周血中NO-2含量最高，反映肝损伤程度和NO含量呈正比；③NO和活性氧自由基合成毒性更强的自由基,具有细胞毒性；④NO是巨噬细胞产生细胞毒性的效应分子之一,使中性粒细胞发生趋化反应和吸附反应，介导免疫复合物所致的组织损伤[6]。
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TNF-α由激活的单核巨噬细胞产生，具有广泛的生物活性，慢性肝病病人TNF-α明显升高，并和肝细胞坏死密切相关[7]。本研究显示各组慢性肝病病人TNF-α水平升高,以CAH组增高明显，说明TNF-α与肝脏活动性炎症和细胞坏死相一致。
综上所述，TNF-α和NO参与了慢性肝病的发病过程，其表达增高与疾病的活动呈正相关。肝脏发生炎症时，由于免疫状态的改变，肝脏中出现大量单核巨噬细胞和库普弗细胞，它们不仅产生大量的TNF-α，同时分泌NO分子[8]。TNF-α还可诱导巨噬细胞、库普弗细胞及肝细胞中iNOS的合成，使NO升高。实验证明，NO可能是库普弗细胞释放的，TNF-α首先对肝细胞产生细胞毒作用，继而肝细胞接受TNF-α刺激合成NO，发挥其舒张血管、改善微循环、减少肝细胞缺血坏死的作用[9]。
本研究仅就慢性肝病病人血液中TNF-α，NO的含量进行检测，但其对肝细胞损伤的具体机制和两者之间的关系有待于进一步研究。
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作者简介 李玉春，男，1968年9月生
参考文献
1，张定凤，任 红，郭树华，等.肿瘤坏死因子在病毒性肝炎肝坏死中的作用及其防护[J].中华医学杂志，1999,70:438
2，卢放根，方建珍，霍继荣，等.腹水中一氧化氮合成酶及肿瘤坏死因子的研究[J].中华内科杂志,1996,11:744
3，Dieter P,Ambs P,Fitzke E,et al.Comparatire study of cytotoxicity and the release of TNF-α,Nitric Oxide,and eicosanoids of liver macrophase treat with lipopplysacharide and liposomeencopsulated MTP-PE[J].J Immunol,1995,155:2595
, 百拇医药
4，Billiar TR,Curran RO,Stuehr DJ,et al.Inducitle cytosolic enzyme activty for the production of NO from L-Arginine in hepatocytes[J].Biochem Biophys Res Commun,1990,168:1034
5，Green SJ,Mellouk S,Hoffman SL,et al.Cellular mechanism of nonspecific immunity to intracellular infection:cytokin-induced synthesis of toxic NO from L-Arg by macrophages and hepatocytes[J]. Immunol Lett,1990,25:15
6，王根生，刘耕陶.一氧化氮与肝细胞损伤[J].中华医学杂志，1995, 75(1):57
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7，Muto Y,Nauri-Arir KT,Meager A,et al. Enhanced tumor necrosis factor and IL-1 in fulminant hepatic failure[J]. Lancet, 1988, (2):72
8，Abbas Ak, Lichtman AH, Pober JS,eds. Cellular and moleucular immunology[M].Saunders： Philadel-Phia,1991.229～231
9，Laskin DL.Nonparenchymal cells and hepatoxicity semin[J].Liver Dis,1990,10:293
(1999-01-04收稿 2000-02-10修回), http://www.100md.com