中药扶正方对小鼠免疫调节作用的研究
作者：冯永生 杜根安 吴南屏 姚杭平 毛连根
单位：冯永生 杜根安(浙江省建工医院 杭州 310014)；吴南屏 姚杭平 毛连根(浙江大学湖滨校区)
关键词：扶正中药；白细胞介素-2；一氧化氮；免疫调节
浙江中西医结合杂志000308 摘要 目的：研究中药扶正方对小鼠免疫调节的作用。方法：将小鼠分成不同组别，采用扶正方1号、2号、川芎组，不同剂量喂养20天后取血，用硝酸还原法测一氧化氮(NO)，用ILISA法测定白细胞介素2(IL-2)。结果：各中药组NO、IL-2值明显高于对照组，两者差异显著，P<0.001。结论：提示扶正中药对小鼠的免疫调节具有积极作用，为临床肿瘤病人术后、化疗后的中药扶正提供理论依据。
我们运用扶正中药对小鼠进行一氧化氮(NO)和白细胞介素2(IL-2) 测定，以了解中药对小鼠免疫调节作用的影响，现报道如下。
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1 材 料
1.1 药物 扶正Ⅰ号方主要由丹参、党参、生白术、泽泻等组成，扶正Ⅱ号方由桃仁、白术、泽泻等组成，川芎注射液由无锡第七制药厂生产。生理盐水作为对照组用药。中药经组方、浸泡、煎煮、蒸馏、浓缩制成，每ml含生药：1号方2.9g/ml，2号方2.6g/ml。
1.2 动物 昆明小鼠70只，由浙江大学动物房提供，雄性每只重22～25g，随机分为7组，每组10只。
2 方 法
2.1 70只小鼠随机分为7组，每组10只。对照组用生理盐水灌胃，川芎组、扶正1号、扶正2号均分大剂量和小剂量组。大剂量组每天1次，每次0.4ml，小剂量组每天1次，每次0.28ml，喂养20天为1疗程。经腹股沟消毒取血，进行一氧化氮和白细胞介素2(NO和IL-2)测定。
, 百拇医药 2.2 一氧化氮测定试剂盒(深圳晶美生物工程有限公司提供)，NO试剂利用NO化学性质活泼，在体内很快转变为NO3-NO2-原理，将NO转化为NO2-，NO2-进一步转化为NO3-，本法用硝酸还原酶特异性地将NO3-还原为NO2-，通过显色深浅测定其浓度的高低(波长550nm)，NOμmol测定管A/标准管A×100。
白细胞介素2酶联免疫ELISA法(上海森雄科技实业公司进口分装)，利用双抗体——生物素酶标法测定(波长492nm)，样品OD值在相应的IL-2标准曲线上查到相应IL-2浓度。
2.3 统计学处理，以均数±标准差表示，并以t检验作各组间差异性与相关性分析。
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3 结 果
实验结果见表1，2。
表1 用药20天后小鼠NO含量变化 分组
数量/只
用药/ml
NO指数
生理盐水组
9
0.4
99.0±38.8
川芎组(大)
9
, 百拇医药
0.4
163.8±55.5△△
川芎组(小)
8
0.28
148.9±57.5△△
药1组(大)
9
0.4
166.2±70.6△△
药1组(小)
, 百拇医药
7
0.28
191.3±108.8△△
药2组(大)
10
0.4
198.6±79.1△△
药2组(小)
7
0.28
182.6±47.0△△
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与生理盐水组比较：△P<0.05; △△P<0.001
表1结果显示，川芎组、扶正1号、扶正2号组经中药20天给药后其NO水平与对照组(生理盐水组)相比均有非常显著性差异(P<0.001)，而且同一药物大剂量组和小剂量组之间除扶正1号有差异外(P<0.05)，其余均无显著性差异。
表2 用药20天后小鼠IL-2含量变化 分组
n/只
药量/ml
IL-2
生理盐水组
8
0.4
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139.4±24.0
川芎组(大)
8
0.4
665.0±552.4
川芎组(小)
8
0.28
626.9±138.5
药1组(大)
8
0.4
, http://www.100md.com
303.5±114.5
药1组(小)
4
0.28
488.0±282.8
药2组(大)
6
0.4
478.4±79.8
药2组(小)
6
0.28
, http://www.100md.com
856±160.1
注：各组在灌胃期间，由于操作失误均有1-2只死亡。
表2显示，用药各组与对照组比较亦有非常显著性差异，它们的差异分别为P<0.001，<0.05，<0.02，<0.05，<0.005，<0.001，其结果一致率与NO相比略有差别，但与对照组比均有显著差异。
4 讨 论
随着近年来对中医学和中药的不断认识和提高，人们越来越重视中药的药理作用，特别是中药的免疫调节和扶正抗肿瘤作用，丹参、党参、川芎、白术等有补中益气，健脾和胃，活血化瘀等作用，作为肿瘤术后化疗辅助用药广泛用于临床[1～3]。NO作为一种介质或细胞调节剂在许多生理和病理状态下，起至关重要作用。NO的前体是L-精氨酸，它是人体必需的八种氨基酸之一，生理状态下，人类动静脉内皮细胞能产生NO，可使局部血流增加，血管舒张，在高血压休克和动脉硬化上起作用[4]，此外人体中性粒细胞、巨噬细胞可产生NO，它可介导抗肿瘤细胞作用和参与一系列免疫调节作用[5]。已有证据表明，NO在调节胃粘膜血流、粘膜的保护、肝脏的血流改变和肝细胞功能的调节及解毒等方面起重要作用[6]，故在胃肠道抗肿瘤方面NO有明显作用。
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IL-2是一种糖蛋白，是活化的T细胞产生的活性物质，它能诱导体内T细胞的增殖反应，提高机体的抗肿瘤和免疫功能[7]，中药可以诱导T淋巴细胞活化使机体IL-2含量增加，并提高淋巴细胞对IL-2的反应性，陈敏仙[8]等认为IL-2的增加，可促进机体免疫力，特别在肿瘤病人化疗、放疗后，可以增加外周血淋巴细胞与肿瘤细胞内浸润的淋巴细胞特异的杀伤能力，抑制肿瘤组织的增生，达到抗肿瘤和提高免疫的功能。我们用扶正中药1、2号及川芎注射液喂养小鼠，希望通过中医学理论达到扶助正气、驱除病邪、运用中药刺激机体免疫细胞产生NO和IL-2，达到提高机体免疫力和抗肿瘤的辅助治疗目的。经实验研究，扶正1号、2号及川芎等组均有不同程度促进NO，IL-2产生的作用，推测在促进机体免疫调节和抗肿瘤方面有积极作用。
参考文献
1，黄兆明，龙浩.中药加化疗治疗晚期非小细胞肺癌疗效分析.中国中西医结合杂志，1997，17(1)：26～28
, 百拇医药
2，陈少贤，王良兴，邢玲珍，等.川芎嗪对晚期肿瘤患者血小板功能的影响.中国中西医结合杂志，1997，17(9)：531～533
3，王虹峥.浅谈中医药免疫研究.中国中西医杂志，1997，17(9)：564～565
4，Csabas Janeam Chtistoph T et al. Nitro Oxidemediated hypareactiuty to noradrenaine pecedes the induction of nitric Qxide synthase in endotoxin shoch. Br J pharmacd，1993，108：786～792
5，钟慈声，孙安阳，主编.一氧化氮的生物医学.第1版.上海：上海医科大学出版社，1997.89～97，342～344
6，Mark Es，SIun Szenki JH .Rale of nitrie oxide in gastmintestinal and hepatic function and disoise.Gastrocaferotogy，1992，103：1928～1949
7，林飞卿,余传霖，何球藻，主编.医学基础免疫学.第1版.上海：上海医科大学出版社，1992.206～207
8，陈敏仙，黄秀青，陈风，等.恶性肿瘤患者外周单个核细胞白细胞介素2受体的表达及对IL-2的增殖反应.中华肿瘤杂志，1990，12(4)：281～283
收稿日期：1999-11-20, 百拇医药
单位：冯永生 杜根安(浙江省建工医院 杭州 310014)；吴南屏 姚杭平 毛连根(浙江大学湖滨校区)
关键词：扶正中药；白细胞介素-2；一氧化氮；免疫调节
浙江中西医结合杂志000308 摘要 目的：研究中药扶正方对小鼠免疫调节的作用。方法：将小鼠分成不同组别，采用扶正方1号、2号、川芎组，不同剂量喂养20天后取血，用硝酸还原法测一氧化氮(NO)，用ILISA法测定白细胞介素2(IL-2)。结果：各中药组NO、IL-2值明显高于对照组，两者差异显著，P<0.001。结论：提示扶正中药对小鼠的免疫调节具有积极作用，为临床肿瘤病人术后、化疗后的中药扶正提供理论依据。
我们运用扶正中药对小鼠进行一氧化氮(NO)和白细胞介素2(IL-2) 测定，以了解中药对小鼠免疫调节作用的影响，现报道如下。
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1 材 料
1.1 药物 扶正Ⅰ号方主要由丹参、党参、生白术、泽泻等组成，扶正Ⅱ号方由桃仁、白术、泽泻等组成，川芎注射液由无锡第七制药厂生产。生理盐水作为对照组用药。中药经组方、浸泡、煎煮、蒸馏、浓缩制成，每ml含生药：1号方2.9g/ml，2号方2.6g/ml。
1.2 动物 昆明小鼠70只，由浙江大学动物房提供，雄性每只重22～25g，随机分为7组，每组10只。
2 方 法
2.1 70只小鼠随机分为7组，每组10只。对照组用生理盐水灌胃，川芎组、扶正1号、扶正2号均分大剂量和小剂量组。大剂量组每天1次，每次0.4ml，小剂量组每天1次，每次0.28ml，喂养20天为1疗程。经腹股沟消毒取血，进行一氧化氮和白细胞介素2(NO和IL-2)测定。
, 百拇医药 2.2 一氧化氮测定试剂盒(深圳晶美生物工程有限公司提供)，NO试剂利用NO化学性质活泼，在体内很快转变为NO3-NO2-原理，将NO转化为NO2-，NO2-进一步转化为NO3-，本法用硝酸还原酶特异性地将NO3-还原为NO2-，通过显色深浅测定其浓度的高低(波长550nm)，NOμmol测定管A/标准管A×100。
白细胞介素2酶联免疫ELISA法(上海森雄科技实业公司进口分装)，利用双抗体——生物素酶标法测定(波长492nm)，样品OD值在相应的IL-2标准曲线上查到相应IL-2浓度。
2.3 统计学处理，以均数±标准差表示，并以t检验作各组间差异性与相关性分析。
, http://www.100md.com
3 结 果
实验结果见表1，2。
表1 用药20天后小鼠NO含量变化 分组
数量/只
用药/ml
NO指数
生理盐水组
9
0.4
99.0±38.8
川芎组(大)
9
, 百拇医药
0.4
163.8±55.5△△
川芎组(小)
8
0.28
148.9±57.5△△
药1组(大)
9
0.4
166.2±70.6△△
药1组(小)
, 百拇医药
7
0.28
191.3±108.8△△
药2组(大)
10
0.4
198.6±79.1△△
药2组(小)
7
0.28
182.6±47.0△△
, http://www.100md.com
与生理盐水组比较：△P<0.05; △△P<0.001
表1结果显示，川芎组、扶正1号、扶正2号组经中药20天给药后其NO水平与对照组(生理盐水组)相比均有非常显著性差异(P<0.001)，而且同一药物大剂量组和小剂量组之间除扶正1号有差异外(P<0.05)，其余均无显著性差异。
表2 用药20天后小鼠IL-2含量变化 分组
n/只
药量/ml
IL-2
生理盐水组
8
0.4
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139.4±24.0
川芎组(大)
8
0.4
665.0±552.4
川芎组(小)
8
0.28
626.9±138.5
药1组(大)
8
0.4
, http://www.100md.com
303.5±114.5
药1组(小)
4
0.28
488.0±282.8
药2组(大)
6
0.4
478.4±79.8
药2组(小)
6
0.28
, http://www.100md.com
856±160.1
注：各组在灌胃期间，由于操作失误均有1-2只死亡。
表2显示，用药各组与对照组比较亦有非常显著性差异，它们的差异分别为P<0.001，<0.05，<0.02，<0.05，<0.005，<0.001，其结果一致率与NO相比略有差别，但与对照组比均有显著差异。
4 讨 论
随着近年来对中医学和中药的不断认识和提高，人们越来越重视中药的药理作用，特别是中药的免疫调节和扶正抗肿瘤作用，丹参、党参、川芎、白术等有补中益气，健脾和胃，活血化瘀等作用，作为肿瘤术后化疗辅助用药广泛用于临床[1～3]。NO作为一种介质或细胞调节剂在许多生理和病理状态下，起至关重要作用。NO的前体是L-精氨酸，它是人体必需的八种氨基酸之一，生理状态下，人类动静脉内皮细胞能产生NO，可使局部血流增加，血管舒张，在高血压休克和动脉硬化上起作用[4]，此外人体中性粒细胞、巨噬细胞可产生NO，它可介导抗肿瘤细胞作用和参与一系列免疫调节作用[5]。已有证据表明，NO在调节胃粘膜血流、粘膜的保护、肝脏的血流改变和肝细胞功能的调节及解毒等方面起重要作用[6]，故在胃肠道抗肿瘤方面NO有明显作用。
, http://www.100md.com
IL-2是一种糖蛋白，是活化的T细胞产生的活性物质，它能诱导体内T细胞的增殖反应，提高机体的抗肿瘤和免疫功能[7]，中药可以诱导T淋巴细胞活化使机体IL-2含量增加，并提高淋巴细胞对IL-2的反应性，陈敏仙[8]等认为IL-2的增加，可促进机体免疫力，特别在肿瘤病人化疗、放疗后，可以增加外周血淋巴细胞与肿瘤细胞内浸润的淋巴细胞特异的杀伤能力，抑制肿瘤组织的增生，达到抗肿瘤和提高免疫的功能。我们用扶正中药1、2号及川芎注射液喂养小鼠，希望通过中医学理论达到扶助正气、驱除病邪、运用中药刺激机体免疫细胞产生NO和IL-2，达到提高机体免疫力和抗肿瘤的辅助治疗目的。经实验研究，扶正1号、2号及川芎等组均有不同程度促进NO，IL-2产生的作用，推测在促进机体免疫调节和抗肿瘤方面有积极作用。
参考文献
1，黄兆明，龙浩.中药加化疗治疗晚期非小细胞肺癌疗效分析.中国中西医结合杂志，1997，17(1)：26～28
, 百拇医药
2，陈少贤，王良兴，邢玲珍，等.川芎嗪对晚期肿瘤患者血小板功能的影响.中国中西医结合杂志，1997，17(9)：531～533
3，王虹峥.浅谈中医药免疫研究.中国中西医杂志，1997，17(9)：564～565
4，Csabas Janeam Chtistoph T et al. Nitro Oxidemediated hypareactiuty to noradrenaine pecedes the induction of nitric Qxide synthase in endotoxin shoch. Br J pharmacd，1993，108：786～792
5，钟慈声，孙安阳，主编.一氧化氮的生物医学.第1版.上海：上海医科大学出版社，1997.89～97，342～344
6，Mark Es，SIun Szenki JH .Rale of nitrie oxide in gastmintestinal and hepatic function and disoise.Gastrocaferotogy，1992，103：1928～1949
7，林飞卿,余传霖，何球藻，主编.医学基础免疫学.第1版.上海：上海医科大学出版社，1992.206～207
8，陈敏仙，黄秀青，陈风，等.恶性肿瘤患者外周单个核细胞白细胞介素2受体的表达及对IL-2的增殖反应.中华肿瘤杂志，1990，12(4)：281～283
收稿日期：1999-11-20, 百拇医药