胃腺癌组织的低密度脂蛋白受体检测分析
作者：王培林 孔峰 于文滨 邵风芝 卢雪峰 胡晓燕
单位：王培林(山东医科大学第二附属医院普外科，山东济南250033)；孔峰(山东医科大学生化教研室，山东济南250012)；于文滨(山东医科大学第二附属医院普外科，山东济南250033)；邵风芝(山东医科大学生化教研室，山东济南250012)；卢雪峰(山东医科大学附属医院内科，山东济南250012)；胡晓燕(山东医科大学生化教研室，山东济南250012)
关键词：胃肿瘤；腺癌；受体；LDL.
癌症000332
分类号：R735.2；R730.43.文献标识码：D
文章编号：1000-467(2000)03-0287-02▲
1978年Goldstein实验室的Ho等人[1]首先报道3例急性细胞性白血病细胞表面高密度脂蛋白受体(LDLR)活性增高，其后相继发现绒癌、子宫内膜癌和胃癌等[2]癌细胞表面的LDLR活性均有不同程度的增高。本文对胃腺癌组织及其周边正常胃组织进行了LDLR水平测定，并探讨了胃腺癌组织LDLR活性与组织分化程度的相关性。
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1 材料与方法
1.1 标本收集
39例经外科切除的胃腺癌组织及周边正常胃组织(距癌组织约3cm)，各分为2份，1份送病理科镜检，1份立即放入冰瓶，于液氮中速冻1h后，移至-70℃冰箱保存。
1.2 方法
1.2.1 匀浆制备：取冰冻组织，分别用5mlpH7.4Tris-HCl缓冲液洗涤3次，再用滤纸吸去其表面水分，剪碎后称取组织200～300mg，加2ml缓冲液用玻璃匀浆器在冰浴下制成匀浆。
1.2.2 蛋白质定量：采用Lowery法，以牛血清蛋白(BSA)作为标准，分析匀浆中蛋白质的浓度。
1.2.3 125I-LDL制备：收集若干正常人血清，混合后用密度梯度离心法[3]分离纯化LDL(d：1.019～1.063g/ml)，用Iodogen法[4]碘标LDL，125I-LDL比活度为25×107～35×107cpm/mg蛋白。
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1.2.4 LDLR分析：采用Vitols法[5]，稍加改良。进行7种浓度的饱和分析和Scatchard作图，确定饱和浓度后，应用饱和浓度点的放射性配体的终浓度进行单点测定，反应总体积为300μl，用3个复管取其均值进行统计学处理。
2 结果
2.1 胃腺癌组织及其周边正常胃组织LDLR饱和分析与Scatchard作图求得LDLR的解离常数(kd值)分别为3.7×10-9mol/L和2.04×10-9mol/L。LDLR的最大结合容积(Bmax值)分别为2.49×10-3pmol/μg蛋白和0.9×10-4pmol/μg蛋白。从饱和曲线分析所示125I-LDL45μg蛋白基本上达到饱和，故39例标本单点测定时以此浓度进行。
2.2 单点法测定胃腺癌组织及其周边正常胃组织LDLR水平，可见胃腺癌组织的LDLR明显高于周边胃组织(见表1)。
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表1 LDLR水平的比较
组织
LDLR
pmol/mg蛋白
pmol/g组织
周边胃组织
0.915±0.126*
77.26±25.62*
胃腺癌组织
1.693±0.350
92.26±45.09
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*P<0.001
3 讨论
胆固醇是细胞膜的重要组成成分，故癌瘤细胞增殖愈快，需要胆固醇也愈多,胆固醇主要由血浆LDL代谢而来，其次是细胞本身合成。血浆LDL60%～80%是经受体途径代谢，其余20%～40%由非受体途径代谢,因此，增殖快的细胞表面LDLR活性增高。当LDL与其受体结合形成复合物后，经胞吞作用入胞，在溶酶体内降解，释放出胆固醇作为细胞膜的组成成分，也可作为合成胆汁酸、甾体类激素等原料。
胃腺癌细胞及相应正常组织LDLR的kd值和Bmax值基本一致，表明癌变组织LDLR的亲和性与特异性无明显改变，与吕涛等[6]报道基本相符。癌组织LDL代谢率明显高于周边正常组织主要是细胞表面LDLR数目增加，活性增强所致。
Gal等[7]认为肿瘤细胞LDL代谢率与细胞分化状态有关，分化程度越高，LDLR数目则越少，分化程度越低则受体数目越多。本研究中6例低分化腺癌LDLR为197.31pmol/g组织，而33例高分化腺癌LDLR为87.20pmol/g组织，1例胃溃疡误诊为胃癌，其LDLR仅为29.93pmol/g组织。
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LDLR水平增高是胃腺癌组织的共同特点，且其LDLR亲和性与特异性等性质无明显改变，这为LDLR介导的癌瘤靶向治疗提供理论依据[8]。
通讯作者：王培林：Tel：86-531-8966868-85601
参考文献：
[1]Ho YK， Smith RG， Brown MS， et al. Low-density lipoprotein(LDL) receptor activity in human acute myeloyenous leukemia cells [J]. Blood， 1978， 52： 1099～ 1114.
[2]苏琦，罗朝阳，藤华，等.大蒜对NNNG诱发实验性胃癌及其癌前病变过程中血Tch、LDL、HDL的影响[J].中国肿瘤临床，1996，23(2)：130～133.
, 百拇医药
[3]Havel RJ， Eder HA， Bragdon JH. The distribution and chemical composition of ultracentrifugally separated lipoprotein human serum [J]. J Clin Invest，1955，34： 1345～ 1353.
[4]王浩丹，铃木智晴，出村黎子，等.The study on radioiodination of peptide hormones using Iodogen [J]. Journal of Tokyo woman's medical college，1988，58(2)： 267～ 271.
[5]Henriksson P， Eriksson M， Ericsson S， et al. Hypocholesterolaemia and incre ased elimination of low-density lipopro-teins in metastatic cancer of the prostate [J]. Lancet， 1989， 2： 1178～ 1180.
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[6]吕涛，王明运，徐松德，等.人上皮样胃癌细胞株与人正常上皮细胞LDL受体的分析比较[J].山东医科大学学报，1996，34(1)：7～11.
[7]Gal D， Ohashi M， MacDonald PC， et al. Low-density lipoprotein as a potential vehicle for chemotherapeutic agents and radionucleotides in the management of gynecologic neoplasms [J]. Am J Obstet Gynecol， 1981， 139： 877～ 885.
[8]隋波，田克立，于雪艳，等.LDLACM复合物对胃癌细胞株(SGC-901，NKM-45)的细胞毒作用[J].山东医科大学学报，1997，35(3)：184～187.
收稿日期：1999-07-29
修稿日期：1999-10-22, http://www.100md.com
单位：王培林(山东医科大学第二附属医院普外科，山东济南250033)；孔峰(山东医科大学生化教研室，山东济南250012)；于文滨(山东医科大学第二附属医院普外科，山东济南250033)；邵风芝(山东医科大学生化教研室，山东济南250012)；卢雪峰(山东医科大学附属医院内科，山东济南250012)；胡晓燕(山东医科大学生化教研室，山东济南250012)
关键词：胃肿瘤；腺癌；受体；LDL.
癌症000332
分类号：R735.2；R730.43.文献标识码：D
文章编号：1000-467(2000)03-0287-02▲
1978年Goldstein实验室的Ho等人[1]首先报道3例急性细胞性白血病细胞表面高密度脂蛋白受体(LDLR)活性增高，其后相继发现绒癌、子宫内膜癌和胃癌等[2]癌细胞表面的LDLR活性均有不同程度的增高。本文对胃腺癌组织及其周边正常胃组织进行了LDLR水平测定，并探讨了胃腺癌组织LDLR活性与组织分化程度的相关性。
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1 材料与方法
1.1 标本收集
39例经外科切除的胃腺癌组织及周边正常胃组织(距癌组织约3cm)，各分为2份，1份送病理科镜检，1份立即放入冰瓶，于液氮中速冻1h后，移至-70℃冰箱保存。
1.2 方法
1.2.1 匀浆制备：取冰冻组织，分别用5mlpH7.4Tris-HCl缓冲液洗涤3次，再用滤纸吸去其表面水分，剪碎后称取组织200～300mg，加2ml缓冲液用玻璃匀浆器在冰浴下制成匀浆。
1.2.2 蛋白质定量：采用Lowery法，以牛血清蛋白(BSA)作为标准，分析匀浆中蛋白质的浓度。
1.2.3 125I-LDL制备：收集若干正常人血清，混合后用密度梯度离心法[3]分离纯化LDL(d：1.019～1.063g/ml)，用Iodogen法[4]碘标LDL，125I-LDL比活度为25×107～35×107cpm/mg蛋白。
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1.2.4 LDLR分析：采用Vitols法[5]，稍加改良。进行7种浓度的饱和分析和Scatchard作图，确定饱和浓度后，应用饱和浓度点的放射性配体的终浓度进行单点测定，反应总体积为300μl，用3个复管取其均值进行统计学处理。
2 结果
2.1 胃腺癌组织及其周边正常胃组织LDLR饱和分析与Scatchard作图求得LDLR的解离常数(kd值)分别为3.7×10-9mol/L和2.04×10-9mol/L。LDLR的最大结合容积(Bmax值)分别为2.49×10-3pmol/μg蛋白和0.9×10-4pmol/μg蛋白。从饱和曲线分析所示125I-LDL45μg蛋白基本上达到饱和，故39例标本单点测定时以此浓度进行。
2.2 单点法测定胃腺癌组织及其周边正常胃组织LDLR水平，可见胃腺癌组织的LDLR明显高于周边胃组织(见表1)。
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表1 LDLR水平的比较
组织
LDLR
pmol/mg蛋白
pmol/g组织
周边胃组织
0.915±0.126*
77.26±25.62*
胃腺癌组织
1.693±0.350
92.26±45.09
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*P<0.001
3 讨论
胆固醇是细胞膜的重要组成成分，故癌瘤细胞增殖愈快，需要胆固醇也愈多,胆固醇主要由血浆LDL代谢而来，其次是细胞本身合成。血浆LDL60%～80%是经受体途径代谢，其余20%～40%由非受体途径代谢,因此，增殖快的细胞表面LDLR活性增高。当LDL与其受体结合形成复合物后，经胞吞作用入胞，在溶酶体内降解，释放出胆固醇作为细胞膜的组成成分，也可作为合成胆汁酸、甾体类激素等原料。
胃腺癌细胞及相应正常组织LDLR的kd值和Bmax值基本一致，表明癌变组织LDLR的亲和性与特异性无明显改变，与吕涛等[6]报道基本相符。癌组织LDL代谢率明显高于周边正常组织主要是细胞表面LDLR数目增加，活性增强所致。
Gal等[7]认为肿瘤细胞LDL代谢率与细胞分化状态有关，分化程度越高，LDLR数目则越少，分化程度越低则受体数目越多。本研究中6例低分化腺癌LDLR为197.31pmol/g组织，而33例高分化腺癌LDLR为87.20pmol/g组织，1例胃溃疡误诊为胃癌，其LDLR仅为29.93pmol/g组织。
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LDLR水平增高是胃腺癌组织的共同特点，且其LDLR亲和性与特异性等性质无明显改变，这为LDLR介导的癌瘤靶向治疗提供理论依据[8]。
通讯作者：王培林：Tel：86-531-8966868-85601
参考文献：
[1]Ho YK， Smith RG， Brown MS， et al. Low-density lipoprotein(LDL) receptor activity in human acute myeloyenous leukemia cells [J]. Blood， 1978， 52： 1099～ 1114.
[2]苏琦，罗朝阳，藤华，等.大蒜对NNNG诱发实验性胃癌及其癌前病变过程中血Tch、LDL、HDL的影响[J].中国肿瘤临床，1996，23(2)：130～133.
, 百拇医药
[3]Havel RJ， Eder HA， Bragdon JH. The distribution and chemical composition of ultracentrifugally separated lipoprotein human serum [J]. J Clin Invest，1955，34： 1345～ 1353.
[4]王浩丹，铃木智晴，出村黎子，等.The study on radioiodination of peptide hormones using Iodogen [J]. Journal of Tokyo woman's medical college，1988，58(2)： 267～ 271.
[5]Henriksson P， Eriksson M， Ericsson S， et al. Hypocholesterolaemia and incre ased elimination of low-density lipopro-teins in metastatic cancer of the prostate [J]. Lancet， 1989， 2： 1178～ 1180.
, 百拇医药
[6]吕涛，王明运，徐松德，等.人上皮样胃癌细胞株与人正常上皮细胞LDL受体的分析比较[J].山东医科大学学报，1996，34(1)：7～11.
[7]Gal D， Ohashi M， MacDonald PC， et al. Low-density lipoprotein as a potential vehicle for chemotherapeutic agents and radionucleotides in the management of gynecologic neoplasms [J]. Am J Obstet Gynecol， 1981， 139： 877～ 885.
[8]隋波，田克立，于雪艳，等.LDLACM复合物对胃癌细胞株(SGC-901，NKM-45)的细胞毒作用[J].山东医科大学学报，1997，35(3)：184～187.
收稿日期：1999-07-29
修稿日期：1999-10-22, http://www.100md.com