HPLC测定中药中农药灭幼脲残留量的方法研究
作者：田金改 杜庆鹏 高天兵
单位：中国药品生物制品检定所 北京 100050
关键词：中药；灭幼脲；农药残留；HPLC
中草药000310摘 要 建立测定中药材、中成药中农药灭幼脲残留的含量。采用RP-HPLC法，ODS色谱柱。流动相为甲醇-水(75∶25)，检测波长250 nm。结果：加样回收率92.67%～100.21%，0.0315～0.63μg/mL、0.315～6.3 μg/mL时，r=0.9999，线性关系良好。简便、快速，适合中药材、中药制剂中农药灭幼脲残留的监控。
Determination of Residual Diflubenzuron in Chinese Traditional and Herbal Medicine by HPLC
, 百拇医药
Tian Jingai,Du Qingpeng and Gao Tianbing
(National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products Beijing 100050)
Abstract An HPLC method for the determination of residual diflubenzuron in Chinese Traditional and herbal medicine was established.The mobile phase constituted of methanol-water (75∶25),with detection wavelength 250 nm,and flow rate 1 mL/min.The recovery rate was 92.67～100.21%.The standard curve is linear in the range of 0.0315～0.63 μg/mL，r=0.9999.The method is simple,rapid and reliable.It is suitable for the determination of residual diflubenzuron in Chinese traditional and herbal medicines.
, 百拇医药
Key words diflubenzuron residual pesticide Chinese traditional and herbal medicine▲
各国对粮食食品中杀虫剂残留十分关注。因杀虫剂会危害人体健康，必须严格执行限度控制。
灭幼脲是防止小麦、蔬菜等虫害农药，使用较广。为保障用药安全有效，建立中药材各种农药残留量的检测方法非常必要。
1 仪器与试剂
PE-200高效液相色谱仪，PE-LC-295型UV检测器。所用试剂均为分析纯；灭幼脲对照品购自农药检定所。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件：色谱柱：ODS不锈钢柱(250 nm×4.6 nm)，流动相：甲醇-水(75∶25)，流速：1 mL/min，紫外检测器(检测波长250 nm)，进样量：10 μL。
, 百拇医药
2.2 标准曲线的绘制：精密称取灭幼脲农药对照品适量(3.15 mg)，置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，混匀，备用(对照品溶液1∶0.3 mg/mL灭幼脲)。取上述溶液依次稀释至0.03 mg/mL(对照品溶液2)、0.003 mg/mL(对照品溶液3)。
精密吸取对照品溶液(3)0，0.1，0.3，0.5，1.0，2.0 mL(相当于0，0.031 5，0.094 5，0.157，0.315，0.63 μg)，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释配制成标准浓度系列，按测定条件测得峰面积。计算回归方程：Y=55.4+298 8X，r=0.999 9。
精密吸取灭幼脲对照品(2)0，0.1，0.2，0.3，0.5，1.0 mL(相当于3.15，6.3，9.45，15.75，31.5 μg)，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释配制成标准浓度系列。进样10 μL，按测定条件，测其峰面积，计算回归方程Y=13.7+296 0X，r=0.999 9。
, 百拇医药
2.3 供试品溶液的制备及测量：样品(药材除去杂质，丸剂掰碎)粉碎过5号筛，精密称取1 g置100 mL三角瓶中，加入石油醚(60 ℃～90 ℃)-醋酸乙酯(7∶3)混合液30 mL，超声10 min取下，静置片刻，滤过，滤液备用；依上述方法重复提取两次，每次加入30 mL混合液，合并滤液，于旋转蒸发仪上真空浓缩至近干。用甲醇溶解残渣，并转移至5 mL容量瓶中，稀释至刻度，混匀备用。取供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，测其峰面积，并计算含量。见图1。
A-黄芪药材 B-药材加灭幼脲 C-灭幼脲
图1 样品HPLC图
2.4 加样回收试验：分别精密称取党参、黄芪、三七、白芍、西洋参药材和两个成药(八宝丹、新癀片)样品各5份。分别加入1.575，3.15，15.75 μg三种浓度的灭幼脲，依样品测定2.3项操作，并计算回收率，结果见表1。
, 百拇医药
表1 回收率试验结果 添加量(μg)
(n=5)
样品名称
1.575
3.15
15.75
实测值
(μg)
回收率
(%)
RSD
(%)
实测值
, 百拇医药
(μg)
回收率
(%)
RSD
(%)
实测值
(μg)
回收率
(%)
RSD
(%)
西洋参
1.558
, 百拇医药
98.94
1.85
2.967
94.19
2.97
15.62
99.15
0.18
三七
1.574
99.92
0.87
3.099
, 百拇医药
98.37
6.61
14.595
92.67
3.47
黄芪
1.515
96.19
2.14
2.943
96.03
0.96
15.63
, 百拇医药
99.21
0.76
白芍
1.578
100.21
1.97
3.147
99.9
0.039
15.41
97.82
2.75
党参
, http://www.100md.com
1.438
91.27
3.08
3.115
98.88
2.70
14.48
91.9
5.84
八宝丹
1.507
95.68
4.22
, 百拇医药
3.147
99.9
1.08
新癀片
1.555
98.75
1.55
3.136
99.58
1.57
15.50
98.43
0.43
, http://www.100md.com
2.5 精密度检查：取同一样品溶液反复进样5次(每次10 μL)进样测定峰面积。测定结果为100 142，100 993，100 722，100 917，100 903。平均峰面积为100 935，RSD为0.15%。
2.6 方法重现性试验：取同一份样品(八宝丹、党参)，按样品测定方法分别制备5份样品溶液，分别测定。结果RSD为1.08%，2.70%。
3 结果与讨论
3.1 测定样品农药残留量，原则上应首选气相色谱(热稳定不好的化合物除外)，其方法有灵敏度高、选择强等优点。同时商品仪器配制有EEC、NPD……等选择性检测器。但考虑到本化合物的mp值在190 ℃～200 ℃，具热稳定性好、气化温度高的特点，本文选用液相色谱法，最终选定本文色谱条件。
3.2 粮食常规的有机类农药测定样品制备，需提取，净化过弗罗里硅土柱、Al2O3…等，操作繁琐费时，耗用大量有机溶剂。我们试验采用经典提取、净化方法与本文提取方法进行选择比较。结果本文提取法取样量小、使用溶剂少，快速、简便，可达到试验要求，见图1。同时对提取溶媒进行了考察，依据灭幼脲农药物理化学性质及特点，首先选用了石油醚-丙酮(7∶3)，提取样品。由于丙酮亲水性强，故提出样品中其他成分较多，干扰测定。故选用石油醚-醋酸乙酯(7∶3)效果较好。本方法基本可满足本文所述五味药材及两种成药中灭幼脲的测定。
, 百拇医药
3.3 从实验的结果看，5个药材和2个成药中未检出灭幼脲，说明药材目前还没有被此种农药污染。同时计算方法的最小检出量为0.031 5 ng，最低检出浓度为0.015 75 mg/kg。说明本方法有较低检出限，满足农药残留检测要求。
3.4 由于灭幼脲是预防小麦蔬菜等植物病虫害的杀虫剂，广泛施用于大田间，化合物稳定性好，耐雨水冲刷，田间降解速度慢，残效期15～20 d。对于北方主产小麦地区栽培的人参等根茎类药材，会在植物的生长过程中从土壤或雨水、灌溉水中吸收并富集本农药。鉴于目前新药研制开发品种常用新鲜药材或冷冻原料提取有效部位，本农药易溶于丙酮、甲醇、乙醇等溶剂，为保障用药安全，故建立本方法用于农药残留量检测。■
本课题为国家中医药管理局科学基金课题(95B142)
田金改，副主任药师，1976年7月毕业于西北大学。主要从事进口传统药和天然药品制剂质量标准制(修)订工作。曾完成有关中药中重金属及农药残留量检测方法与限量标准研究等科研课题，其中两项获1993年度北京市科技进步二等奖，95年度国家中医药局基础研究二等奖。现承担国家重点科技项目“九.五”攻关课题：(1)儿茶质量标准研究，(2)华北片23种中药材重金属、农药残留量检测方法与限量标准研究(协作)；国家自然基金课题等多项研究课题。已发表有关科研论文40余篇。
, 百拇医药
参考文献
1，樊德方.农药残留分析与检测.上海：上海科技出版社，1984：7
2，李本昌.农药残留实用检测方法手册(1).北京：中国农业科技出版社，1995：3
3，陈建民，王晓光，薛 健.药物分析杂志，1995，15(4)：32
4，高天兵，张曙明，田金改.分析测试学报，1999，(2)：6
5，Wom H B,Wang M K.J Chromatogr A,1996,754(1/2):43
(收稿日期：1999-01-09), http://www.100md.com
单位：中国药品生物制品检定所 北京 100050
关键词：中药；灭幼脲；农药残留；HPLC
中草药000310摘 要 建立测定中药材、中成药中农药灭幼脲残留的含量。采用RP-HPLC法，ODS色谱柱。流动相为甲醇-水(75∶25)，检测波长250 nm。结果：加样回收率92.67%～100.21%，0.0315～0.63μg/mL、0.315～6.3 μg/mL时，r=0.9999，线性关系良好。简便、快速，适合中药材、中药制剂中农药灭幼脲残留的监控。
Determination of Residual Diflubenzuron in Chinese Traditional and Herbal Medicine by HPLC
, 百拇医药
Tian Jingai,Du Qingpeng and Gao Tianbing
(National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products Beijing 100050)
Abstract An HPLC method for the determination of residual diflubenzuron in Chinese Traditional and herbal medicine was established.The mobile phase constituted of methanol-water (75∶25),with detection wavelength 250 nm,and flow rate 1 mL/min.The recovery rate was 92.67～100.21%.The standard curve is linear in the range of 0.0315～0.63 μg/mL，r=0.9999.The method is simple,rapid and reliable.It is suitable for the determination of residual diflubenzuron in Chinese traditional and herbal medicines.
, 百拇医药
Key words diflubenzuron residual pesticide Chinese traditional and herbal medicine▲
各国对粮食食品中杀虫剂残留十分关注。因杀虫剂会危害人体健康，必须严格执行限度控制。
灭幼脲是防止小麦、蔬菜等虫害农药，使用较广。为保障用药安全有效，建立中药材各种农药残留量的检测方法非常必要。
1 仪器与试剂
PE-200高效液相色谱仪，PE-LC-295型UV检测器。所用试剂均为分析纯；灭幼脲对照品购自农药检定所。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件：色谱柱：ODS不锈钢柱(250 nm×4.6 nm)，流动相：甲醇-水(75∶25)，流速：1 mL/min，紫外检测器(检测波长250 nm)，进样量：10 μL。
, 百拇医药
2.2 标准曲线的绘制：精密称取灭幼脲农药对照品适量(3.15 mg)，置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，混匀，备用(对照品溶液1∶0.3 mg/mL灭幼脲)。取上述溶液依次稀释至0.03 mg/mL(对照品溶液2)、0.003 mg/mL(对照品溶液3)。
精密吸取对照品溶液(3)0，0.1，0.3，0.5，1.0，2.0 mL(相当于0，0.031 5，0.094 5，0.157，0.315，0.63 μg)，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释配制成标准浓度系列，按测定条件测得峰面积。计算回归方程：Y=55.4+298 8X，r=0.999 9。
精密吸取灭幼脲对照品(2)0，0.1，0.2，0.3，0.5，1.0 mL(相当于3.15，6.3，9.45，15.75，31.5 μg)，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释配制成标准浓度系列。进样10 μL，按测定条件，测其峰面积，计算回归方程Y=13.7+296 0X，r=0.999 9。
, 百拇医药
2.3 供试品溶液的制备及测量：样品(药材除去杂质，丸剂掰碎)粉碎过5号筛，精密称取1 g置100 mL三角瓶中，加入石油醚(60 ℃～90 ℃)-醋酸乙酯(7∶3)混合液30 mL，超声10 min取下，静置片刻，滤过，滤液备用；依上述方法重复提取两次，每次加入30 mL混合液，合并滤液，于旋转蒸发仪上真空浓缩至近干。用甲醇溶解残渣，并转移至5 mL容量瓶中，稀释至刻度，混匀备用。取供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，测其峰面积，并计算含量。见图1。
A-黄芪药材 B-药材加灭幼脲 C-灭幼脲
图1 样品HPLC图
2.4 加样回收试验：分别精密称取党参、黄芪、三七、白芍、西洋参药材和两个成药(八宝丹、新癀片)样品各5份。分别加入1.575，3.15，15.75 μg三种浓度的灭幼脲，依样品测定2.3项操作，并计算回收率，结果见表1。
, 百拇医药
表1 回收率试验结果 添加量(μg)
(n=5)
样品名称
1.575
3.15
15.75
实测值
(μg)
回收率
(%)
RSD
(%)
实测值
, 百拇医药
(μg)
回收率
(%)
RSD
(%)
实测值
(μg)
回收率
(%)
RSD
(%)
西洋参
1.558
, 百拇医药
98.94
1.85
2.967
94.19
2.97
15.62
99.15
0.18
三七
1.574
99.92
0.87
3.099
, 百拇医药
98.37
6.61
14.595
92.67
3.47
黄芪
1.515
96.19
2.14
2.943
96.03
0.96
15.63
, 百拇医药
99.21
0.76
白芍
1.578
100.21
1.97
3.147
99.9
0.039
15.41
97.82
2.75
党参
, http://www.100md.com
1.438
91.27
3.08
3.115
98.88
2.70
14.48
91.9
5.84
八宝丹
1.507
95.68
4.22
, 百拇医药
3.147
99.9
1.08
新癀片
1.555
98.75
1.55
3.136
99.58
1.57
15.50
98.43
0.43
, http://www.100md.com
2.5 精密度检查：取同一样品溶液反复进样5次(每次10 μL)进样测定峰面积。测定结果为100 142，100 993，100 722，100 917，100 903。平均峰面积为100 935，RSD为0.15%。
2.6 方法重现性试验：取同一份样品(八宝丹、党参)，按样品测定方法分别制备5份样品溶液，分别测定。结果RSD为1.08%，2.70%。
3 结果与讨论
3.1 测定样品农药残留量，原则上应首选气相色谱(热稳定不好的化合物除外)，其方法有灵敏度高、选择强等优点。同时商品仪器配制有EEC、NPD……等选择性检测器。但考虑到本化合物的mp值在190 ℃～200 ℃，具热稳定性好、气化温度高的特点，本文选用液相色谱法，最终选定本文色谱条件。
3.2 粮食常规的有机类农药测定样品制备，需提取，净化过弗罗里硅土柱、Al2O3…等，操作繁琐费时，耗用大量有机溶剂。我们试验采用经典提取、净化方法与本文提取方法进行选择比较。结果本文提取法取样量小、使用溶剂少，快速、简便，可达到试验要求，见图1。同时对提取溶媒进行了考察，依据灭幼脲农药物理化学性质及特点，首先选用了石油醚-丙酮(7∶3)，提取样品。由于丙酮亲水性强，故提出样品中其他成分较多，干扰测定。故选用石油醚-醋酸乙酯(7∶3)效果较好。本方法基本可满足本文所述五味药材及两种成药中灭幼脲的测定。
, 百拇医药
3.3 从实验的结果看，5个药材和2个成药中未检出灭幼脲，说明药材目前还没有被此种农药污染。同时计算方法的最小检出量为0.031 5 ng，最低检出浓度为0.015 75 mg/kg。说明本方法有较低检出限，满足农药残留检测要求。
3.4 由于灭幼脲是预防小麦蔬菜等植物病虫害的杀虫剂，广泛施用于大田间，化合物稳定性好，耐雨水冲刷，田间降解速度慢，残效期15～20 d。对于北方主产小麦地区栽培的人参等根茎类药材，会在植物的生长过程中从土壤或雨水、灌溉水中吸收并富集本农药。鉴于目前新药研制开发品种常用新鲜药材或冷冻原料提取有效部位，本农药易溶于丙酮、甲醇、乙醇等溶剂，为保障用药安全，故建立本方法用于农药残留量检测。■
本课题为国家中医药管理局科学基金课题(95B142)
田金改，副主任药师，1976年7月毕业于西北大学。主要从事进口传统药和天然药品制剂质量标准制(修)订工作。曾完成有关中药中重金属及农药残留量检测方法与限量标准研究等科研课题，其中两项获1993年度北京市科技进步二等奖，95年度国家中医药局基础研究二等奖。现承担国家重点科技项目“九.五”攻关课题：(1)儿茶质量标准研究，(2)华北片23种中药材重金属、农药残留量检测方法与限量标准研究(协作)；国家自然基金课题等多项研究课题。已发表有关科研论文40余篇。
, 百拇医药
参考文献
1，樊德方.农药残留分析与检测.上海：上海科技出版社，1984：7
2，李本昌.农药残留实用检测方法手册(1).北京：中国农业科技出版社，1995：3
3，陈建民，王晓光，薛 健.药物分析杂志，1995，15(4)：32
4，高天兵，张曙明，田金改.分析测试学报，1999，(2)：6
5，Wom H B,Wang M K.J Chromatogr A,1996,754(1/2):43
(收稿日期：1999-01-09), http://www.100md.com