灵芝孢子粉对小鼠实验性突变和移植性肿瘤的影响
作者：杨星昊 方放治
单位：杨星昊(中国药科大学中药系,江苏 南京 210038)；方放治(第一军医大学药理教研室,广东 广州 510510)
关键词：灵芝孢子；突变；肿瘤；嗜多染红细胞；微核；环磷酰胺
第一军医大学学报000318 摘要：目的 观察灵芝孢子粉对小鼠实验性突变和移植性肿瘤的影响。方法 健康昆明品系小鼠以灵芝孢子粉(0.2～5.0 g/kg.b.w.)灌胃，用环磷酰胺腹腔注射诱导产生骨髓嗜多染红细胞微核后，进行微核试验测定微核出现的千分率。S180瘤源小鼠瘤细胞接种于健康小鼠体内，14 d后取出瘤块进行瘤重比较。结果 灵芝孢子粉可明显降低环磷酰胺所致小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率，也能明显抑制S180移植性肿瘤生长。结论 灵芝孢子粉能抑制或对抗细胞染色体的突变，具有一定抗肿瘤作用。
, http://www.100md.com
中图分类号：R273 文献标识码：A 文章编号：1000-2588(2000)03-0245-02
Effect of spores of Ganoderma lucidum on implanted tumor and gene mutation induced by cyclophosphamide in mice
YANG Xing-hao1，FANG Fang-zhi2
(1Institute of Chinese Medicine, Pharmaceutical University of China, Nanjing 210038, China; 2Department of Pharmacology, First Military Medical University, Guangzhou 510515, China)Abstract: Objective To observe the effect of spores of Ganderma lucidum on implanted tumor and gene mutation induced by cyclophosphamide in mice. Methods The powder of spores in the dosage of 0.2 to 5.0 g/kg.b.w. was administered via the oral route in the mice after the intraperitoneal injection of cyclophosphamide to induce the proliferation of myelic micronucleus polychromatic erythrocytes and the detection of micronucleus was performed. Tumor cells from S180 mice were inoculated into the healthy mice, and the weight of tumor was compared 14 d later. Results Spores of Ganderma lucidum could significantly decrease the rate of myelic micronucleus polychromatic erythrocytes induced by cyclophosphamide, and markedly inhibit the growth of implanted tumor of S180. Conclusion Spores of Ganderma lucidum, by inhibiting or resisting the mutation of cell chromosome, have antitumor effect.
, 百拇医药
Key words: spores; Ganderma lucidum; mutation; tumor; myelopathic polychromatic erythrocytes; micronucleus; cyclophosphamide
灵芝是我国传统中药，其子实体及菌丝的药理活性和临床应用已有较详尽的研究，其提取物针剂早已用于治疗进行性肌营养不良和萎缩性肌强直，而且有研究表明灵芝孢子有降血糖[1]、镇静神经系统[2]、提高免疫及抗幅射的作用[3]。尤其是在免疫调节方面，对机体细胞免疫和体液免疫功能都有较强的抑制作用，这也是其用于治疗自身免疫与过敏反应相关疾病的免疫学基础[4]。本实验研究灵芝孢子对抗小鼠染色体突变和对抗S180移植性肿瘤的效应。
1 材料和方法
, http://www.100md.com 1.1 动物
昆明品系小白鼠，平均体质量(20.0±2.5)g，雌雄不拘，由南京铁道医学院动物中心提供。
1.2 材料
灵芝孢子粉
灵芝孢子粉Ganoderma lucidum (Leyss.) Ex Fr.采自安徽六安，由中国药科大学生药室鉴定，经低温物理法破壁，破壁率50% 左右。
1.3 试剂
环磷酰胺从南京市医药公司购买。
1.4 瘤种
S180瘤源小鼠由上海计生所动物中心提供。
, 百拇医药
1.5 方法
1.5.1 小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验 据文献[5]所述，选健康的昆明种小鼠随机分成5组，每组10只。试验组：每日每鼠按高、中、低不同剂量给予灵芝孢子粉灌胃并腹腔注射环磷酰胺100 mg/kg.b.w.。阳性对照组(环磷酰胺组)：每日每鼠腹腔注射环磷酰胺100 mg/kg.b.w.。阴性对照组：每日每鼠给予等量的生理盐水。各组动物连续给药(生理盐水)8 d，停药次日脱颈椎处死动物，取胸骨髓制成单细胞悬液，离心后涂片，甲醛固定，Giemsa染色，在油镜下数每只动物1 000个嗜多染红细胞中的微核数，计算微核出现的千分率。
1.5.2 灵芝孢子粉抗S180移植性肿瘤的效应 将接种14 d的S180瘤源小鼠断颈椎处死，以无菌操作取出肿瘤块，破碎，按1:3的比例用无菌生理盐水稀释，用多层纱布过滤制成肿瘤细胞悬液，接种于所有受试小白鼠均在右侧腋下(0.2 ml/只)。将接种肿瘤后的小鼠随机分成4组，每组10只。试验组：每日每鼠按高、中、低不同剂量给予灵芝孢子粉灌胃，连续灌胃14 d后处死小鼠。先称体质量，后取出瘤块称重，分别计算出试验组和对照组平均瘤重，并计算抑制率。抑制率=(对照组平均瘤重–试验组平均肿瘤重)/对照组平均瘤重。对照组：给予等量的生理盐水，其余操作同试验组。
, http://www.100md.com
2 结果
小鼠骨髓PCE微核试验结果列于表1。灵芝孢子高剂量组的PCE微核率比阳性对照组 (环磷酰胺) 有明显下降(P<0.05)，中剂量组的PCE微核率比阳性对照组也有所降低。环磷酰胺可造成正常细胞染色体畸变(微核率明显增高，P<0.01)。试验结果提示灵芝孢子粉在一定剂量时可降低环磷酰胺所致的骨髓嗜多染红细胞微核率，抑制或对抗细胞染色体的突变。
表1 灵芝孢子对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的影响
Tab.1 The effect of spores of Ganderma lucidum on micronucleus of
myelopathicpolychromatic erythrocytes
Group
, http://www.100md.com
Dosage
(mg/kg.b.w.)
n
M. erythrocytes
Micronucleus
‰
High
Middle
Low
Negative
CYC
5 000
, 百拇医药
1 000
200
100
10
10
10
10
10
10 000
10 000
10 000
10 000
10 000
, 百拇医药
137*
258*
309
16
304**
13.7
25.8
30.9
1.6
30.4
**P<0.01 vs negative control group; *P<0.05 vs positive control group
, 百拇医药 小鼠移植性S180肿瘤试验结果列于表2。灵芝孢子粉给小鼠以高剂量(5 g/kg.b.w.)和中 剂量(1 g/kg.b.w.)灌胃后, 小鼠S180移植性肿瘤的生长受到明显抑制(P<0.05)，抑制率分别为54.8%和46.5%，而低剂量则无抑制作用，这说明灵芝孢子粉对S180移植性肿瘤的生长具有抑制作用，且在一定剂量范围内存在量效关系。
表2 灵芝孢子对S180移植性肿瘤的影响
Tab.2 the effect of spores of Ganderma lucidum on implanted tumor of S180
Group
Dosage
, 百拇医药 (mg/kg.b.w.)
Weight (g)
Tumor weight (g)
Inhibition rate (%)
Control
27.92±5.62
4.03±2.85
Low
200
29.21±3.93
4.54±7.90
, 百拇医药
–7.90
Middle
1 000
30.82±3.94
2.15±1.61*
46.5
High
5 000
28.99±5.74
1.82±2.03*
54.8
*P<0.05 vs control group
, 百拇医药
3 讨论
灵芝作为一种传统中药，现已广泛用于肿瘤、自身免疫性的疾病辅助性治疗。由于灵芝孢子所含成分复杂多样，其成分含量不稳定且提取分离困难，严重影响对其活性作用机制的研究。本研究实验显示灵芝孢子粉能降低环磷酰胺所致的骨髓嗜染红细胞微核率，抑制或对抗细胞染色体的突变，也对S180移植性肿瘤生长有较强抑制作用。本实验结果为将灵芝孢子应用于临床肿瘤治疗提供了有力的理论依据。灵芝孢子抗染色体突变及抗肿瘤机制较为复杂，如果能在其成分分离技术上进一步提高，以更深入研究其机制，则对于灵芝孢子应用具有更重要的意义。
杨星昊(1964-),男,1986年毕业于中国药科大学,助理研究员
参考文献
[1] 章灵华, 肖培根. 灵芝孢子粉提取物对实验性糖尿病的防治作用[J]. 中草药, 1993, 24(5):246～8.
, 百拇医药
[2] 包天桐, 杨甲禄, 王桂芬. 赤芝孢子粉的药理作用[J]. 中药药理与临床, 1988, 4(4):16～7.
[3] 余素清, 吴树勋, 刘京生. 灵芝孢子粉对小鼠免疫功能的影响及抗60Co幅射效应[J]. 中国中药杂志, 1997, 22(10):25～6.
[4] 章灵华, 肖培根. 灵芝孢子粉免疫作用研究[J]. 中国免疫学杂志, 1994, 10(3):169～71.
[5] 徐叔云. 药理学实验方法[M]. 第2版, 北京: 人民卫生出版社, 1994. 214～5.
1999-07-14, 百拇医药
单位：杨星昊(中国药科大学中药系,江苏 南京 210038)；方放治(第一军医大学药理教研室,广东 广州 510510)
关键词：灵芝孢子；突变；肿瘤；嗜多染红细胞；微核；环磷酰胺
第一军医大学学报000318 摘要：目的 观察灵芝孢子粉对小鼠实验性突变和移植性肿瘤的影响。方法 健康昆明品系小鼠以灵芝孢子粉(0.2～5.0 g/kg.b.w.)灌胃，用环磷酰胺腹腔注射诱导产生骨髓嗜多染红细胞微核后，进行微核试验测定微核出现的千分率。S180瘤源小鼠瘤细胞接种于健康小鼠体内，14 d后取出瘤块进行瘤重比较。结果 灵芝孢子粉可明显降低环磷酰胺所致小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率，也能明显抑制S180移植性肿瘤生长。结论 灵芝孢子粉能抑制或对抗细胞染色体的突变，具有一定抗肿瘤作用。
, http://www.100md.com
中图分类号：R273 文献标识码：A 文章编号：1000-2588(2000)03-0245-02
Effect of spores of Ganoderma lucidum on implanted tumor and gene mutation induced by cyclophosphamide in mice
YANG Xing-hao1，FANG Fang-zhi2
(1Institute of Chinese Medicine, Pharmaceutical University of China, Nanjing 210038, China; 2Department of Pharmacology, First Military Medical University, Guangzhou 510515, China)Abstract: Objective To observe the effect of spores of Ganderma lucidum on implanted tumor and gene mutation induced by cyclophosphamide in mice. Methods The powder of spores in the dosage of 0.2 to 5.0 g/kg.b.w. was administered via the oral route in the mice after the intraperitoneal injection of cyclophosphamide to induce the proliferation of myelic micronucleus polychromatic erythrocytes and the detection of micronucleus was performed. Tumor cells from S180 mice were inoculated into the healthy mice, and the weight of tumor was compared 14 d later. Results Spores of Ganderma lucidum could significantly decrease the rate of myelic micronucleus polychromatic erythrocytes induced by cyclophosphamide, and markedly inhibit the growth of implanted tumor of S180. Conclusion Spores of Ganderma lucidum, by inhibiting or resisting the mutation of cell chromosome, have antitumor effect.
, 百拇医药
Key words: spores; Ganderma lucidum; mutation; tumor; myelopathic polychromatic erythrocytes; micronucleus; cyclophosphamide
灵芝是我国传统中药，其子实体及菌丝的药理活性和临床应用已有较详尽的研究，其提取物针剂早已用于治疗进行性肌营养不良和萎缩性肌强直，而且有研究表明灵芝孢子有降血糖[1]、镇静神经系统[2]、提高免疫及抗幅射的作用[3]。尤其是在免疫调节方面，对机体细胞免疫和体液免疫功能都有较强的抑制作用，这也是其用于治疗自身免疫与过敏反应相关疾病的免疫学基础[4]。本实验研究灵芝孢子对抗小鼠染色体突变和对抗S180移植性肿瘤的效应。
1 材料和方法
, http://www.100md.com 1.1 动物
昆明品系小白鼠，平均体质量(20.0±2.5)g，雌雄不拘，由南京铁道医学院动物中心提供。
1.2 材料
灵芝孢子粉
灵芝孢子粉Ganoderma lucidum (Leyss.) Ex Fr.采自安徽六安，由中国药科大学生药室鉴定，经低温物理法破壁，破壁率50% 左右。
1.3 试剂
环磷酰胺从南京市医药公司购买。
1.4 瘤种
S180瘤源小鼠由上海计生所动物中心提供。
, 百拇医药
1.5 方法
1.5.1 小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验 据文献[5]所述，选健康的昆明种小鼠随机分成5组，每组10只。试验组：每日每鼠按高、中、低不同剂量给予灵芝孢子粉灌胃并腹腔注射环磷酰胺100 mg/kg.b.w.。阳性对照组(环磷酰胺组)：每日每鼠腹腔注射环磷酰胺100 mg/kg.b.w.。阴性对照组：每日每鼠给予等量的生理盐水。各组动物连续给药(生理盐水)8 d，停药次日脱颈椎处死动物，取胸骨髓制成单细胞悬液，离心后涂片，甲醛固定，Giemsa染色，在油镜下数每只动物1 000个嗜多染红细胞中的微核数，计算微核出现的千分率。
1.5.2 灵芝孢子粉抗S180移植性肿瘤的效应 将接种14 d的S180瘤源小鼠断颈椎处死，以无菌操作取出肿瘤块，破碎，按1:3的比例用无菌生理盐水稀释，用多层纱布过滤制成肿瘤细胞悬液，接种于所有受试小白鼠均在右侧腋下(0.2 ml/只)。将接种肿瘤后的小鼠随机分成4组，每组10只。试验组：每日每鼠按高、中、低不同剂量给予灵芝孢子粉灌胃，连续灌胃14 d后处死小鼠。先称体质量，后取出瘤块称重，分别计算出试验组和对照组平均瘤重，并计算抑制率。抑制率=(对照组平均瘤重–试验组平均肿瘤重)/对照组平均瘤重。对照组：给予等量的生理盐水，其余操作同试验组。
, http://www.100md.com
2 结果
小鼠骨髓PCE微核试验结果列于表1。灵芝孢子高剂量组的PCE微核率比阳性对照组 (环磷酰胺) 有明显下降(P<0.05)，中剂量组的PCE微核率比阳性对照组也有所降低。环磷酰胺可造成正常细胞染色体畸变(微核率明显增高，P<0.01)。试验结果提示灵芝孢子粉在一定剂量时可降低环磷酰胺所致的骨髓嗜多染红细胞微核率，抑制或对抗细胞染色体的突变。
表1 灵芝孢子对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的影响
Tab.1 The effect of spores of Ganderma lucidum on micronucleus of
myelopathicpolychromatic erythrocytes
Group
, http://www.100md.com
Dosage
(mg/kg.b.w.)
n
M. erythrocytes
Micronucleus
‰
High
Middle
Low
Negative
CYC
5 000
, 百拇医药
1 000
200
100
10
10
10
10
10
10 000
10 000
10 000
10 000
10 000
, 百拇医药
137*
258*
309
16
304**
13.7
25.8
30.9
1.6
30.4
**P<0.01 vs negative control group; *P<0.05 vs positive control group
, 百拇医药 小鼠移植性S180肿瘤试验结果列于表2。灵芝孢子粉给小鼠以高剂量(5 g/kg.b.w.)和中 剂量(1 g/kg.b.w.)灌胃后, 小鼠S180移植性肿瘤的生长受到明显抑制(P<0.05)，抑制率分别为54.8%和46.5%，而低剂量则无抑制作用，这说明灵芝孢子粉对S180移植性肿瘤的生长具有抑制作用，且在一定剂量范围内存在量效关系。
表2 灵芝孢子对S180移植性肿瘤的影响
Tab.2 the effect of spores of Ganderma lucidum on implanted tumor of S180
Group
Dosage
, 百拇医药 (mg/kg.b.w.)
Weight (g)
Tumor weight (g)
Inhibition rate (%)
Control
27.92±5.62
4.03±2.85
Low
200
29.21±3.93
4.54±7.90
, 百拇医药
–7.90
Middle
1 000
30.82±3.94
2.15±1.61*
46.5
High
5 000
28.99±5.74
1.82±2.03*
54.8
*P<0.05 vs control group
, 百拇医药
3 讨论
灵芝作为一种传统中药，现已广泛用于肿瘤、自身免疫性的疾病辅助性治疗。由于灵芝孢子所含成分复杂多样，其成分含量不稳定且提取分离困难，严重影响对其活性作用机制的研究。本研究实验显示灵芝孢子粉能降低环磷酰胺所致的骨髓嗜染红细胞微核率，抑制或对抗细胞染色体的突变，也对S180移植性肿瘤生长有较强抑制作用。本实验结果为将灵芝孢子应用于临床肿瘤治疗提供了有力的理论依据。灵芝孢子抗染色体突变及抗肿瘤机制较为复杂，如果能在其成分分离技术上进一步提高，以更深入研究其机制，则对于灵芝孢子应用具有更重要的意义。
杨星昊(1964-),男,1986年毕业于中国药科大学,助理研究员
参考文献
[1] 章灵华, 肖培根. 灵芝孢子粉提取物对实验性糖尿病的防治作用[J]. 中草药, 1993, 24(5):246～8.
, 百拇医药
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[5] 徐叔云. 药理学实验方法[M]. 第2版, 北京: 人民卫生出版社, 1994. 214～5.
1999-07-14, 百拇医药