合欢皮多糖对S180荷瘤小鼠的抑瘤及免疫调节作用的研究
作者：韩莉 崔景荣 李敏 叶颖 刘倩 吴军
单位：韩莉(三峡大学医学院免疫学教研室 宜昌 443003)；崔景荣 李敏 叶颖 刘倩 吴军(北京大学医学部国家天然及仿生药物研究重点实验室)
关键词：合欢皮多糖；S180荷瘤小鼠；抑瘤率；免疫细胞增殖
实用医学进修杂志000306
摘 要 目的：合欢皮为豆科植物合欢(Albizia Julibrissin Durazz)的干燥茎皮，传统医学多用于解郁安神，活血消肿，本次实验主要研究其多糖成分抗肿瘤、免疫调节的现代药理学机制。方法：以S180荷瘤小鼠为模型。研究合欢皮多糖抑瘤及免疫调节作用。结果：5mg/kg的合欢皮多糖抑瘤率为33.5%，与环磷酰胺合并用药的抑瘤率为78.2%，明显高于对照组，T细胞转化试验高于对照组，P1<0.01，P2<0.05。结论：合欢皮多糖具有抑瘤和免疫调节作用，机制有待进一步研究。
, http://www.100md.com
Research on Tumor Inhibition and Immune Regulate
of Albizia Amylose in Mouse Model of S180
Han Li Cui Jinrong Li Min
(Department of Immunology,Sanxia University Medical College,Yichang 443003)
Abstract Objective:Alizia is chinese trddition medicine taken on dividen gloomy and soothe nerves, exactly blood and detumescent, studied the moderm pharmacology machanism of Albizia amylose to tumor, to immune regulate.Methods:The experiments on the sarcoma S180 tumor mice with the different dosage of ALbizia amylose or cooperated with cyclophosphamidecy(CY) inhibited S180 tumor growth in mouse and T lymphocyte transformation. Results:The results showed the inhibition rates 33.5%,78.2%. with 5mg/kg Albizia amylose,cooperated with CY;T lymphocyte transformation tset hyper-control group.P1<0.01，P2<0.05. Conclusion:Albizia amylose have the effcciency of inhibition tumor and immune regulation, especially cooperated with CY.
, 百拇医药
Key Words Albizia amylose; sarcoma S180; inhibition rumor rate; lymphocyte transformation
合欢皮为豆科植物合欢(Albizia Julibrissin Durazz)的干燥茎皮，中国药典记载合欢皮具有解郁安神，活血消肿的功能，现代药理学表明有抗生育、抗肿瘤作用[1～2]，但国内外的相关报道，特别是合欢皮多糖药理作用的报道尚不多见，因此，以S180荷瘤鼠为模型，对合欢皮多糖以及合欢皮多糖与环磷酰胺联合用药的抑瘤、免疫调节作用进行了初步探讨。
1 材料与方法
1.1 动物及分组
昆明鼠，雌雄各半，6～8周龄，体重16～22g，由北京医科大学实验动物部提供。将小鼠随机分为5组，每组12只，其中4组于右侧腋部皮下注射1×107 /ml S180荷瘤细胞0.2ml ，3个剂量的合欢皮多糖及环磷酰胺(20mg/kg环磷酰胺，5mg/kg合欢皮多糖，20mg/kg环磷酰胺+5mg/kg合欢皮多糖)于第2～9天分别腹腔注射，其中环磷酰胺隔2天注射一次，荷瘤对照组于第2～9天腹腔注射无菌的生理盐水0.2ml，4组小鼠于第10天取瘤块称重，并测定脾、胸腺指数、脾细胞增殖能力及腹腔巨噬细胞吞噬能力，另一组为正常对照。
, 百拇医药
1.2 瘤细胞株
购自北京市肿瘤研究所，本室小鼠腹腔传代保存。
1.3 药品及试剂
合欢皮多糖由北京医科大学药学院植化室分离提取白色粉末。ConA、LPS、 MTT购自Sigma公司，RPMI1640为GIBCO产品，环磷酰胺(CY)上海第十二制药厂产品，异丙醇为北京化学试剂厂生产。
1.4 脾淋巴细胞增殖反应
比色法：具体步骤见参考文献[2]，其中ConA、LPS的终浓度分别为2μg/ml，30μg/ml，脾细胞浓度为5×106/ml，每处理3复孔。
1.5 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率测定
, 百拇医药
参照张忆雄等方法[3]。
1.6 脾指数、胸腺指数的测定
即每10g小鼠体重中脾、胸腺体重。
2 结果
2.1 合欢皮多糖对S180荷瘤鼠的抑瘤作用
表1可见合欢皮多糖能明显抑制肿瘤生长，特别是与环磷酰胺联合使用时，能提高其抑瘤率，同时合欢皮多糖能提高荷瘤鼠的胸腺指数。
表1 合欢皮多糖、合欢皮多糖与CY联合使用对肿瘤生长的影响(
±s) 组 别
动物只数
, 百拇医药
瘤重(g)
抑瘤率(%)
脾指数(g/10g)
胸腺指数(g/10g)
正常鼠对照
生理盐水对照
环磷酰胺
合欢皮多糖
合欢皮多糖+CY
12
12
12
12
, 百拇医药
12
-
1.907±0.480
0.641±0.167
1.309±0.502
0.428±0.230
67.4
33.5**
78.2
0.139±0.016
0.115±0.029
0.094±0.039
, http://www.100md.com
0.125±0.037
0.082±0.033
0.091±0.017
0.016±0.005
0.018±0.003
0.038±0.002
0.016±0.003
注：**与盐水对照组比较P1<0.01；*与环磷酰胺组比较P2<0.052.2 合欢皮多糖对S180荷瘤鼠免疫功能的调节作用
表2可见合欢皮多糖能促进T细胞转化，能减少环磷酰胺的抑制作用。
, http://www.100md.com
表2 合欢皮多糖、合欢皮多糖与CY联合使用对免疫细胞的影响(±s) 组 别
动物只数
T细胞转化试验
(OD值)
B细胞转化试验
(OD值)
吞噬指数
正常鼠对照
生理盐水对照
环磷酰胺
合欢皮多糖
, 百拇医药
合欢皮多糖+CY
12
12
12
12
12
0.672±0.104
0.408±0.144
0.296±0.069
0.535±0.100**
0.367±0.080*
0.526±0.113
, http://www.100md.com
0.396±0.079
0.249±0.082
0.400±0.096
0.258±0.077
51.76±8.66
40.33±8.04
31.00±6.12
41.47±8.11
29.98±7.31
注：**与盐水对照组比较P1<0.01；*与环磷酰胺组比较P2<0.053 讨论
, 百拇医药
现代免疫学研究发现机体抗肿瘤机制与神经、内分泌系统密切相关， 而合欢皮作为传统中药具有解郁安神、活血消肿的功能，提示该药具有抗肿瘤活性。机体抗肿瘤的主要机制是细胞免疫，环磷酰胺作为临床常用抗肿瘤药，由于其免疫抑制作用，特别是抑制T细胞免疫功能，限制其使用。 我们的研究表明合欢皮多糖不仅对S180荷瘤有明显抑制作用，同时对T细胞转化有明显促进作用，对环磷酰胺的抑瘤作用有协同效应，并能减轻环磷酰胺的免疫抑制。这一结果为合欢皮提取物的开发应用提供了实验依据。
参考文献
1，Moon CK, Park KS, Lee SH,et al,Antitumor activities of severae phytopolysaccharides Arch[J].Phermacol Res,1985;8(1)42
2，韩莉，崔景荣，李敏，等.合欢皮皂甙对S180实体瘤小鼠抑瘤作用的研究[J].中华现代医学杂志。1999；12(13)：23
3，张忆雄，孙万邦，王燕妮，等.TF口服对小鼠吞噬功能及淋巴细胞增殖反应的影响[J].中国免疫学杂志，1997；13：24
(2000-04-27 收稿), 百拇医药
单位：韩莉(三峡大学医学院免疫学教研室 宜昌 443003)；崔景荣 李敏 叶颖 刘倩 吴军(北京大学医学部国家天然及仿生药物研究重点实验室)
关键词：合欢皮多糖；S180荷瘤小鼠；抑瘤率；免疫细胞增殖
实用医学进修杂志000306
摘 要 目的：合欢皮为豆科植物合欢(Albizia Julibrissin Durazz)的干燥茎皮，传统医学多用于解郁安神，活血消肿，本次实验主要研究其多糖成分抗肿瘤、免疫调节的现代药理学机制。方法：以S180荷瘤小鼠为模型。研究合欢皮多糖抑瘤及免疫调节作用。结果：5mg/kg的合欢皮多糖抑瘤率为33.5%，与环磷酰胺合并用药的抑瘤率为78.2%，明显高于对照组，T细胞转化试验高于对照组，P1<0.01，P2<0.05。结论：合欢皮多糖具有抑瘤和免疫调节作用，机制有待进一步研究。
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Research on Tumor Inhibition and Immune Regulate
of Albizia Amylose in Mouse Model of S180
Han Li Cui Jinrong Li Min
(Department of Immunology,Sanxia University Medical College,Yichang 443003)
Abstract Objective:Alizia is chinese trddition medicine taken on dividen gloomy and soothe nerves, exactly blood and detumescent, studied the moderm pharmacology machanism of Albizia amylose to tumor, to immune regulate.Methods:The experiments on the sarcoma S180 tumor mice with the different dosage of ALbizia amylose or cooperated with cyclophosphamidecy(CY) inhibited S180 tumor growth in mouse and T lymphocyte transformation. Results:The results showed the inhibition rates 33.5%,78.2%. with 5mg/kg Albizia amylose,cooperated with CY;T lymphocyte transformation tset hyper-control group.P1<0.01，P2<0.05. Conclusion:Albizia amylose have the effcciency of inhibition tumor and immune regulation, especially cooperated with CY.
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Key Words Albizia amylose; sarcoma S180; inhibition rumor rate; lymphocyte transformation
合欢皮为豆科植物合欢(Albizia Julibrissin Durazz)的干燥茎皮，中国药典记载合欢皮具有解郁安神，活血消肿的功能，现代药理学表明有抗生育、抗肿瘤作用[1～2]，但国内外的相关报道，特别是合欢皮多糖药理作用的报道尚不多见，因此，以S180荷瘤鼠为模型，对合欢皮多糖以及合欢皮多糖与环磷酰胺联合用药的抑瘤、免疫调节作用进行了初步探讨。
1 材料与方法
1.1 动物及分组
昆明鼠，雌雄各半，6～8周龄，体重16～22g，由北京医科大学实验动物部提供。将小鼠随机分为5组，每组12只，其中4组于右侧腋部皮下注射1×107 /ml S180荷瘤细胞0.2ml ，3个剂量的合欢皮多糖及环磷酰胺(20mg/kg环磷酰胺，5mg/kg合欢皮多糖，20mg/kg环磷酰胺+5mg/kg合欢皮多糖)于第2～9天分别腹腔注射，其中环磷酰胺隔2天注射一次，荷瘤对照组于第2～9天腹腔注射无菌的生理盐水0.2ml，4组小鼠于第10天取瘤块称重，并测定脾、胸腺指数、脾细胞增殖能力及腹腔巨噬细胞吞噬能力，另一组为正常对照。
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1.2 瘤细胞株
购自北京市肿瘤研究所，本室小鼠腹腔传代保存。
1.3 药品及试剂
合欢皮多糖由北京医科大学药学院植化室分离提取白色粉末。ConA、LPS、 MTT购自Sigma公司，RPMI1640为GIBCO产品，环磷酰胺(CY)上海第十二制药厂产品，异丙醇为北京化学试剂厂生产。
1.4 脾淋巴细胞增殖反应
比色法：具体步骤见参考文献[2]，其中ConA、LPS的终浓度分别为2μg/ml，30μg/ml，脾细胞浓度为5×106/ml，每处理3复孔。
1.5 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率测定
, 百拇医药
参照张忆雄等方法[3]。
1.6 脾指数、胸腺指数的测定
即每10g小鼠体重中脾、胸腺体重。
2 结果
2.1 合欢皮多糖对S180荷瘤鼠的抑瘤作用
表1可见合欢皮多糖能明显抑制肿瘤生长，特别是与环磷酰胺联合使用时，能提高其抑瘤率，同时合欢皮多糖能提高荷瘤鼠的胸腺指数。
表1 合欢皮多糖、合欢皮多糖与CY联合使用对肿瘤生长的影响(
±s) 组 别动物只数
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瘤重(g)
抑瘤率(%)
脾指数(g/10g)
胸腺指数(g/10g)
正常鼠对照
生理盐水对照
环磷酰胺
合欢皮多糖
合欢皮多糖+CY
12
12
12
12
, 百拇医药
12
-
1.907±0.480
0.641±0.167
1.309±0.502
0.428±0.230
67.4
33.5**
78.2
0.139±0.016
0.115±0.029
0.094±0.039
, http://www.100md.com
0.125±0.037
0.082±0.033
0.091±0.017
0.016±0.005
0.018±0.003
0.038±0.002
0.016±0.003
注：**与盐水对照组比较P1<0.01；*与环磷酰胺组比较P2<0.052.2 合欢皮多糖对S180荷瘤鼠免疫功能的调节作用
表2可见合欢皮多糖能促进T细胞转化，能减少环磷酰胺的抑制作用。
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表2 合欢皮多糖、合欢皮多糖与CY联合使用对免疫细胞的影响(
±s) 组 别动物只数
T细胞转化试验
(OD值)
B细胞转化试验
(OD值)
吞噬指数
正常鼠对照
生理盐水对照
环磷酰胺
合欢皮多糖
, 百拇医药
合欢皮多糖+CY
12
12
12
12
12
0.672±0.104
0.408±0.144
0.296±0.069
0.535±0.100**
0.367±0.080*
0.526±0.113
, http://www.100md.com
0.396±0.079
0.249±0.082
0.400±0.096
0.258±0.077
51.76±8.66
40.33±8.04
31.00±6.12
41.47±8.11
29.98±7.31
注：**与盐水对照组比较P1<0.01；*与环磷酰胺组比较P2<0.053 讨论
, 百拇医药
现代免疫学研究发现机体抗肿瘤机制与神经、内分泌系统密切相关， 而合欢皮作为传统中药具有解郁安神、活血消肿的功能，提示该药具有抗肿瘤活性。机体抗肿瘤的主要机制是细胞免疫，环磷酰胺作为临床常用抗肿瘤药，由于其免疫抑制作用，特别是抑制T细胞免疫功能，限制其使用。 我们的研究表明合欢皮多糖不仅对S180荷瘤有明显抑制作用，同时对T细胞转化有明显促进作用，对环磷酰胺的抑瘤作用有协同效应，并能减轻环磷酰胺的免疫抑制。这一结果为合欢皮提取物的开发应用提供了实验依据。
参考文献
1，Moon CK, Park KS, Lee SH,et al,Antitumor activities of severae phytopolysaccharides Arch[J].Phermacol Res,1985;8(1)42
2，韩莉，崔景荣，李敏，等.合欢皮皂甙对S180实体瘤小鼠抑瘤作用的研究[J].中华现代医学杂志。1999；12(13)：23
3，张忆雄，孙万邦，王燕妮，等.TF口服对小鼠吞噬功能及淋巴细胞增殖反应的影响[J].中国免疫学杂志，1997；13：24
(2000-04-27 收稿), 百拇医药