国产尼莫地平胶囊和片剂生物等效性评价
作者：张红 傅军 戴群 李艳艳 熊玉卿
单位：江西医学院临床药理研究所，南昌 330006
关键词：尼莫地平高效液相色谱生物等效性
中国临床药理学与治疗学000316
目的 评价尼莫地平胶囊和片剂的生物等效性。方法 18名健康男性志愿者随机交叉口服单剂量100mg国产尼莫地平胶囊或片剂，2wk后进行第2次试验，交叉服用同剂量的对照品或供试品，用高效液相色谱法测定血浆药物浓度。结果 血药浓度-时间曲线拟合表明，该药物符合体内一级吸收的一室开放模型。其Cmax为(56.4±16.9)μg·L-1，t1/2ke为(2.08±0.42)h，tpeak为(1.27±0.52)h，AUC0～9为(197.2±46.5)μg·h·L-1，与对照品的主要药代动力学参数比较，经方差分析和双单侧t检验，无显著性差异(P>0.05)。供试品相对于对照品的生物利用度为(99.3±13.1)%。结论 两制剂体内过程相仿，具有生物等效性。
, http://www.100md.com
中图分类号 R969.1
Bioequivalence of domestic nimodipine capsules and toblets
ZHANG Hong，FU Jun，DAI Qun，LI Yan-Yan，XIONG Yu-Qing
(Institute of Clinical Pharmacology, Jiangxi Medical College, Nanchang, 330006)
Aim The bioequivalence of domestic nimodipine capsules and tablets in healthy volunteers was compared. Methods A single oral dose of capsule or tablet of 100 mg nimodipine was given to 18 healthy volunteers in a randomized crossover study. Plasma levels of the drue were determined with HPLC method. Results The plasma concentration-time curve fitted to the first order absorption, 1- compartment open model. Their main pharmacoknietic parameters were Cmax (56.4± 16.9) μ g·L-1, t1/2(ke)(2.08± 0.42) h, tpeak(1.27± 0.52) h,AUC0～ 9 (197.2 ± 46.5) μ g· h- 1· L-1. These was no statistically significant difference between the two products (P>0.05). The relative bioavailability of tested capsules to reference tablets was (99.3± 13.1)% Conclusion Both formulations are of bioequivalence.
, 百拇医药
Key words nimodipine; HPLC; bioequivalence
尼莫地平(nimodipine，NM)系二氢吡啶类钙拮抗剂，通过阻断钙离子向膜内的流动使血管舒张，因其对脑血管具有良好的选择性，且无明显的药物不良反应，现已成为治疗缺血性脑血管疾病比较理想的药物[1]。本试验旨在对尼莫地平胶囊(供试品)与尼莫地平片(对照品)在健康人体内生物等效性进行评价。
1材料与方法
1.1仪器和试药ShimadzuLC-10AT高效液相色谱仪，SPD-0A紫外检测器(日本岛津)，LXJ-Ⅱ型离心机(上海安亭科学仪器厂)。尼莫地平胶囊(福建建东药业有限公司)，尼莫地平片剂(丽珠集团丽珠制药厂)，内标物：尼群地平(nitrendipine，NT)，中国药品生物制品检验所。
1.2色谱条件色谱柱：十八烷基键合硅胶柱(kromasil，C18，5μm)4.6mm×150mm(L×ID)，瑞典EkaChemicial公司。柱温25℃，流动相：CH3OH∶H2O=73∶27(V/V)，流速：0.9ml·min-1，检测波长：386nm。
, 百拇医药
1.3血浆预处理方法取血浆1.5ml，加入内标(尼群地平，浓度为7.5μg.L-1)10μl，使其浓度为0.05μg.L-1，混匀，然后加入3.5ml乙酸乙酯，漩涡振荡2min,3000r.min-1离心10min,取上清液65℃水浴通空气挥干，残渣用100μl甲醇溶解，取20μl进样。
1.4人体试验设计方法[2]18名健康男性志愿者，年龄18～22岁，体重53～70kg，身高162～174cm，均为江西医学院在校学生。试验前接受体检，其血、尿常规、肝、肾功能、心率、血压、心电图等均为正常。试验前均签署知情同意书。受试者试验前2wk未服用过其它药物，用药前12h及用药后4h内禁食，试验期间忌烟、酒及其它药物。试验期间统一标准饮食。
1.5给药方案及血样采集采用随机交叉试验设计。18名志愿者随机分成两组，每组9名，一组清晨空腹对照药100mg，另一组清晨空腹实验药100mg，200ml温开水送服，服药后不同时间点取前臂静脉血3ml，立即离心取血浆1.5ml进行预处理，测定尼莫地平浓度。血样处理过程中尽量避光。7d后两组志愿者交叉服药重复试验，整个试验过程在医生、护士监护下进行。
, 百拇医药
2结果
2.1方法学评价
2.1.1方法专属性在选定的色谱条件下测得的色谱图见图1。由图1可见，血浆中尼莫地平、尼群地平保留时间分别为6′12″、5′36″，峰形良好，分离完全，无杂质峰干扰。
2.1.2线性范围和检测灵敏度配制成含尼莫地平标准品5.0,10.0,20.0,40.0,80.0,160.0μg.L-1的系列血样，其中内标浓度为0.05μg.L-1，按血样预处理方法处理后进样。将标准曲线测定项下测得的As/Ai对浓度Ck/Ci进行直线回归，得标准曲线回归方程，Y=(1.320×100)X+(-0.070)，r=0.9998(n=6)，最低检测浓度2.5μg.L-1。
, http://www.100md.com
图1.1流动相色谱图1.2空白血样色谱图1.3标准血样色谱图1.4受试者血样色谱图
图1尼莫地平色谱图(1号尼群地平，2号尼莫地平)
2.1.3萃取回收率的测定空白血浆加入尼莫地平标准液使成10,40.0,80.0μg.L-1浓度的样品(内标浓度为0.05μg.L-1，按上述方法预处理后进样，另配制相应浓度的尼莫地平流动相溶液，不经萃取直接进相同量的样作为标准，两组峰面积进行比较，计算尼莫地平的萃取回收率为(77.9±4.68)%。
2.1.4方法回收率及精密度测定配制10.0,40.0,80.0μg.L-1的标准血浆样本，按血样预处理方法操作测定，日内重复测定5次，且各浓度连续测定3d，计算其方法回收率为(99.65±1.23)%，日内变异系数为(3.89±2.21)%，日间变异系数为(4.06±2.81)%。见表1。
, http://www.100md.com
表1尼莫地平的方法回收率及日内、日间差异(n=6)
加入量/μg.L-1
回收量/μg.L-1
回收率/%
RSD/%
平均RSD/%
平均回收率/%
日内
10.0
9.96±0.63
99.60
, 百拇医药
6.32
40.0
39.38±1.32
98.45
3.35
3.89±2.21
99.65±1.23
80.0
80.72±1.61
100.90
1.99
日间
, 百拇医药 10.0
9.85±0.71
98.50
7.21
40.0
39.23±1.23
98.08
3.14
4.06±2.81
99.21±1.61
80.0
80.84±1.9
, 百拇医药 101.05
1.83
表2 服用100mg尼莫地平后主要药动学参数对比(
±s,n=18) 药品
Cmax/μg.L-1
tpeak/h
AUC0-9/μg.L-1
t1/2(ke)
F/%
尼莫地平胶囊
, 百拇医药
56.4±16.9
1.27±0.52
197.2±46.5
2.08±0.42
99.3±13.1
尼莫地平片剂
53.7±14.1
1.36±0.50
202.9±54.5
2.17±0.49
表3 统计分析结果
变异来源
, http://www.100md.com
SS
自由度
MS
F
F0.5
AUC0-12
总变异
0.32945
35
-
-
制剂间
0.00195
, 百拇医药
1
0.00195
0.67725
4.494
周期间
0.0003
1
0.0003
0.01058
4.494
个体间
0.28133
17
, 百拇医药
0.01655
5.73825
2.317
误差
0.4614
16
0.00288
-
t1
24.759
>t0.051.746
t2
, 百拇医药
26.417
>t0.051.746
Cmax
总变异
0.38891
35
-
-
制剂间
0.00269
1
0.00269
, http://www.100md.com
1.43053
4.494
周期间
0.01016
1
0.01016
5.41326
4.494
个体间
0.34602
17
0.02035
10.8423
, http://www.100md.com
2.317
误差
0.03004
16
0.00188
-
t1
24.989
>t0.051.746
t2
22.596
>t0.051.746
, 百拇医药
2.2平均药时曲线及药动学参数18名健康受试者单剂口服胶囊和片剂后的平均药时曲线,见图2。
将血药浓度时间数据用3p97药动学程序处理，分别用一房室和二房室模型进行曲线拟合，结果显示用一室开放模型拟合较好，用该软件计算尼莫地平t1/2(ke)，梯形法计算出AUC0～9，三点抛物线拟合法计算出Cmax与tpeak，结果见表2。
这些主要药动学参数经配对t检验，均无显著性差异(P>0.05)，其相对生物利用度为(99.3±13.1)%。两制剂梯形法计算的AUC0～9及实测值的Cmax、tpeak应用Wilcoxon法进行检验后，进行方差分析、双单侧检验的结果见表3，供试制剂与参比制剂上述主要药动学参数在制剂间、周期间均无显著性差异。表明两制剂体内过程相仿，为生物等效性制剂。
图218名健康志愿者口服100mg尼莫地平后的平均药时曲线
, 百拇医药
3讨论
紫外扫描显示尼莫地平在238nm处吸收最好，我们选用3种波长238nm、358nm和386nm进行比较，发现尽管尼莫地平的主吸收峰的UV吸收强度比次吸收峰(358nm)强2倍，但在358nm检测时空白血样的基线噪声比238nm小3倍，而且血样干扰物质明显减少，灵敏度显著提高，但358nm检测下血样尼莫地平前有一杂峰干扰，且此杂峰不受pH值的影响。在波长为386nm时，尼莫地平主吸收峰的UV吸收强度虽比358nm弱1倍，但干扰的杂峰完全消除，尼莫地平与内标尼群地平分离良好，故本试验最终选择了386nm作为检测波长。
本试验所得的血药浓度数据和主要药动学参数与文献报道的基本一致[3,4]，两制剂间显示吸收程度的药动学参数，经统计学分析无显著性差异，表明两制剂具有生物等效性。
张红，女，25岁，助教，主要从事药物动力学研究。
, http://www.100md.com
能玉卿，女，43岁，教授，硕士生导师，研究方向药物动力学。
参考文献
1，沈翠娟，庞克敏，颜小锋,等.尼莫地平固体分散片的溶出度和生物利用度研究.中国药学杂志，1997；32(10)：606
2，中华人民共和国卫生部药政局药物制剂人体生物利用度试验指导原则.新药(西药)临床研究指导原则
3 Guo LQ, Tan HS, Chen G. Pharmacokinetics and relative bioavilability of nimodipine capsules and tablets in 8 Chinese healthy men.Acta pharmacol Sin, 1993; 7: 14(4)
4，施孝金，王宏图，韦阳.国产尼莫地平片和尼莫通片的生物利用度比较.药学学报，1997；32(9)：708
2000-05-04收稿，2000-05-26修回, 百拇医药
单位：江西医学院临床药理研究所，南昌 330006
关键词：尼莫地平高效液相色谱生物等效性
中国临床药理学与治疗学000316
目的 评价尼莫地平胶囊和片剂的生物等效性。方法 18名健康男性志愿者随机交叉口服单剂量100mg国产尼莫地平胶囊或片剂，2wk后进行第2次试验，交叉服用同剂量的对照品或供试品，用高效液相色谱法测定血浆药物浓度。结果 血药浓度-时间曲线拟合表明，该药物符合体内一级吸收的一室开放模型。其Cmax为(56.4±16.9)μg·L-1，t1/2ke为(2.08±0.42)h，tpeak为(1.27±0.52)h，AUC0～9为(197.2±46.5)μg·h·L-1，与对照品的主要药代动力学参数比较，经方差分析和双单侧t检验，无显著性差异(P>0.05)。供试品相对于对照品的生物利用度为(99.3±13.1)%。结论 两制剂体内过程相仿，具有生物等效性。
, http://www.100md.com
中图分类号 R969.1
Bioequivalence of domestic nimodipine capsules and toblets
ZHANG Hong，FU Jun，DAI Qun，LI Yan-Yan，XIONG Yu-Qing
(Institute of Clinical Pharmacology, Jiangxi Medical College, Nanchang, 330006)
Aim The bioequivalence of domestic nimodipine capsules and tablets in healthy volunteers was compared. Methods A single oral dose of capsule or tablet of 100 mg nimodipine was given to 18 healthy volunteers in a randomized crossover study. Plasma levels of the drue were determined with HPLC method. Results The plasma concentration-time curve fitted to the first order absorption, 1- compartment open model. Their main pharmacoknietic parameters were Cmax (56.4± 16.9) μ g·L-1, t1/2(ke)(2.08± 0.42) h, tpeak(1.27± 0.52) h,AUC0～ 9 (197.2 ± 46.5) μ g· h- 1· L-1. These was no statistically significant difference between the two products (P>0.05). The relative bioavailability of tested capsules to reference tablets was (99.3± 13.1)% Conclusion Both formulations are of bioequivalence.
, 百拇医药
Key words nimodipine; HPLC; bioequivalence
尼莫地平(nimodipine，NM)系二氢吡啶类钙拮抗剂，通过阻断钙离子向膜内的流动使血管舒张，因其对脑血管具有良好的选择性，且无明显的药物不良反应，现已成为治疗缺血性脑血管疾病比较理想的药物[1]。本试验旨在对尼莫地平胶囊(供试品)与尼莫地平片(对照品)在健康人体内生物等效性进行评价。
1材料与方法
1.1仪器和试药ShimadzuLC-10AT高效液相色谱仪，SPD-0A紫外检测器(日本岛津)，LXJ-Ⅱ型离心机(上海安亭科学仪器厂)。尼莫地平胶囊(福建建东药业有限公司)，尼莫地平片剂(丽珠集团丽珠制药厂)，内标物：尼群地平(nitrendipine，NT)，中国药品生物制品检验所。
1.2色谱条件色谱柱：十八烷基键合硅胶柱(kromasil，C18，5μm)4.6mm×150mm(L×ID)，瑞典EkaChemicial公司。柱温25℃，流动相：CH3OH∶H2O=73∶27(V/V)，流速：0.9ml·min-1，检测波长：386nm。
, 百拇医药
1.3血浆预处理方法取血浆1.5ml，加入内标(尼群地平，浓度为7.5μg.L-1)10μl，使其浓度为0.05μg.L-1，混匀，然后加入3.5ml乙酸乙酯，漩涡振荡2min,3000r.min-1离心10min,取上清液65℃水浴通空气挥干，残渣用100μl甲醇溶解，取20μl进样。
1.4人体试验设计方法[2]18名健康男性志愿者，年龄18～22岁，体重53～70kg，身高162～174cm，均为江西医学院在校学生。试验前接受体检，其血、尿常规、肝、肾功能、心率、血压、心电图等均为正常。试验前均签署知情同意书。受试者试验前2wk未服用过其它药物，用药前12h及用药后4h内禁食，试验期间忌烟、酒及其它药物。试验期间统一标准饮食。
1.5给药方案及血样采集采用随机交叉试验设计。18名志愿者随机分成两组，每组9名，一组清晨空腹对照药100mg，另一组清晨空腹实验药100mg，200ml温开水送服，服药后不同时间点取前臂静脉血3ml，立即离心取血浆1.5ml进行预处理，测定尼莫地平浓度。血样处理过程中尽量避光。7d后两组志愿者交叉服药重复试验，整个试验过程在医生、护士监护下进行。
, 百拇医药
2结果
2.1方法学评价
2.1.1方法专属性在选定的色谱条件下测得的色谱图见图1。由图1可见，血浆中尼莫地平、尼群地平保留时间分别为6′12″、5′36″，峰形良好，分离完全，无杂质峰干扰。
2.1.2线性范围和检测灵敏度配制成含尼莫地平标准品5.0,10.0,20.0,40.0,80.0,160.0μg.L-1的系列血样，其中内标浓度为0.05μg.L-1，按血样预处理方法处理后进样。将标准曲线测定项下测得的As/Ai对浓度Ck/Ci进行直线回归，得标准曲线回归方程，Y=(1.320×100)X+(-0.070)，r=0.9998(n=6)，最低检测浓度2.5μg.L-1。
, http://www.100md.com
图1.1流动相色谱图1.2空白血样色谱图1.3标准血样色谱图1.4受试者血样色谱图
图1尼莫地平色谱图(1号尼群地平，2号尼莫地平)
2.1.3萃取回收率的测定空白血浆加入尼莫地平标准液使成10,40.0,80.0μg.L-1浓度的样品(内标浓度为0.05μg.L-1，按上述方法预处理后进样，另配制相应浓度的尼莫地平流动相溶液，不经萃取直接进相同量的样作为标准，两组峰面积进行比较，计算尼莫地平的萃取回收率为(77.9±4.68)%。
2.1.4方法回收率及精密度测定配制10.0,40.0,80.0μg.L-1的标准血浆样本，按血样预处理方法操作测定，日内重复测定5次，且各浓度连续测定3d，计算其方法回收率为(99.65±1.23)%，日内变异系数为(3.89±2.21)%，日间变异系数为(4.06±2.81)%。见表1。
, http://www.100md.com
表1尼莫地平的方法回收率及日内、日间差异(n=6)
加入量/μg.L-1
回收量/μg.L-1
回收率/%
RSD/%
平均RSD/%
平均回收率/%
日内
10.0
9.96±0.63
99.60
, 百拇医药
6.32
40.0
39.38±1.32
98.45
3.35
3.89±2.21
99.65±1.23
80.0
80.72±1.61
100.90
1.99
日间
, 百拇医药 10.0
9.85±0.71
98.50
7.21
40.0
39.23±1.23
98.08
3.14
4.06±2.81
99.21±1.61
80.0
80.84±1.9
, 百拇医药 101.05
1.83
表2 服用100mg尼莫地平后主要药动学参数对比(
±s,n=18) 药品Cmax/μg.L-1
tpeak/h
AUC0-9/μg.L-1
t1/2(ke)
F/%
尼莫地平胶囊
, 百拇医药
56.4±16.9
1.27±0.52
197.2±46.5
2.08±0.42
99.3±13.1
尼莫地平片剂
53.7±14.1
1.36±0.50
202.9±54.5
2.17±0.49
表3 统计分析结果
变异来源
, http://www.100md.com
SS
自由度
MS
F
F0.5
AUC0-12
总变异
0.32945
35
-
-
制剂间
0.00195
, 百拇医药
1
0.00195
0.67725
4.494
周期间
0.0003
1
0.0003
0.01058
4.494
个体间
0.28133
17
, 百拇医药
0.01655
5.73825
2.317
误差
0.4614
16
0.00288
-
t1
24.759
>t0.051.746
t2
, 百拇医药
26.417
>t0.051.746
Cmax
总变异
0.38891
35
-
-
制剂间
0.00269
1
0.00269
, http://www.100md.com
1.43053
4.494
周期间
0.01016
1
0.01016
5.41326
4.494
个体间
0.34602
17
0.02035
10.8423
, http://www.100md.com
2.317
误差
0.03004
16
0.00188
-
t1
24.989
>t0.051.746
t2
22.596
>t0.051.746
, 百拇医药
2.2平均药时曲线及药动学参数18名健康受试者单剂口服胶囊和片剂后的平均药时曲线,见图2。
将血药浓度时间数据用3p97药动学程序处理，分别用一房室和二房室模型进行曲线拟合，结果显示用一室开放模型拟合较好，用该软件计算尼莫地平t1/2(ke)，梯形法计算出AUC0～9，三点抛物线拟合法计算出Cmax与tpeak，结果见表2。
这些主要药动学参数经配对t检验，均无显著性差异(P>0.05)，其相对生物利用度为(99.3±13.1)%。两制剂梯形法计算的AUC0～9及实测值的Cmax、tpeak应用Wilcoxon法进行检验后，进行方差分析、双单侧检验的结果见表3，供试制剂与参比制剂上述主要药动学参数在制剂间、周期间均无显著性差异。表明两制剂体内过程相仿，为生物等效性制剂。
图218名健康志愿者口服100mg尼莫地平后的平均药时曲线
, 百拇医药
3讨论
紫外扫描显示尼莫地平在238nm处吸收最好，我们选用3种波长238nm、358nm和386nm进行比较，发现尽管尼莫地平的主吸收峰的UV吸收强度比次吸收峰(358nm)强2倍，但在358nm检测时空白血样的基线噪声比238nm小3倍，而且血样干扰物质明显减少，灵敏度显著提高，但358nm检测下血样尼莫地平前有一杂峰干扰，且此杂峰不受pH值的影响。在波长为386nm时，尼莫地平主吸收峰的UV吸收强度虽比358nm弱1倍，但干扰的杂峰完全消除，尼莫地平与内标尼群地平分离良好，故本试验最终选择了386nm作为检测波长。
本试验所得的血药浓度数据和主要药动学参数与文献报道的基本一致[3,4]，两制剂间显示吸收程度的药动学参数，经统计学分析无显著性差异，表明两制剂具有生物等效性。
张红，女，25岁，助教，主要从事药物动力学研究。
, http://www.100md.com
能玉卿，女，43岁，教授，硕士生导师，研究方向药物动力学。
参考文献
1，沈翠娟，庞克敏，颜小锋,等.尼莫地平固体分散片的溶出度和生物利用度研究.中国药学杂志，1997；32(10)：606
2，中华人民共和国卫生部药政局药物制剂人体生物利用度试验指导原则.新药(西药)临床研究指导原则
3 Guo LQ, Tan HS, Chen G. Pharmacokinetics and relative bioavilability of nimodipine capsules and tablets in 8 Chinese healthy men.Acta pharmacol Sin, 1993; 7: 14(4)
4，施孝金，王宏图，韦阳.国产尼莫地平片和尼莫通片的生物利用度比较.药学学报，1997；32(9)：708
2000-05-04收稿，2000-05-26修回, 百拇医药