银杏叶提取物对血小板粘附及血栓形成的影响
作者：明亮 张艳 张三军 江琴
单位：安徽医科大学药理教研室，合肥 230032
关键词：银杏叶提取物血小板粘附血栓
中国临床药理学与治疗学000309
目的 观察银杏叶提取物(GbE)对血小板粘附及血栓形成的影响。方法 血小板粘附性采用旋转玻球法；体内血栓形成采用动-静脉旁路血栓形成法；体外血栓形成采用Chandler法；采用剪尾法观察小鼠尾动脉出血时间。结果 GbE明显降低家兔血小板粘附率；减轻家兔动-静脉旁路形成血栓的重量；缩短大鼠体外形成血栓的长度，并减轻其干重；延长小鼠尾动脉出血时间。结论 GbE有一定的抗血小板粘附及血栓形成的作用。
中图分类号 R973.2
, http://www.100md.com
Effects of extracts of ginkgo biloba leaves on platelet adhesion and thrombosis
MING Liang ZHANG Yan ZHANG San-Jun JIANG Qin
(Department of Pharmacology, Anhui Medical University, Hefei 230032)
Aim To observe the effect of extracts of ginkgo biloba leaves(GbE) on platelet adhesion and thrombosis. Methods The platelet adhesion was assayed by rotating glass-globe method. The thrombogenesis method in artery-vein bypass was applied to observe thrombosis in vivo. The Chandler method was applied to induce thrombosis in vitro.The tail bleeding time was recorded by shearing tail method.Results GbE significantly decreased platelet adherence rate in rabbits, decreased the weight of thrombus produced in artery-vein bypass in rabbits, shortened the length and reduced dry weight of thrombus of rats in vitro,prolonged the tail bleeding time in mice.Conclusion GbE inhibits the platelet adhesion and thrombosis.
, 百拇医药
Key words extracts of ginkgo biloba leaves ( GbE) ; platelet adhesion; thrombus
银杏叶提取物(extractsofginkgobilobaleaves,GbE)的主要活性成分为黄酮类和萜内酯类，临床上用于治疗心脑血管等疾病[1]。研究结果显示[1、2]，GbE的有效成分之一银杏内酯可拮抗血小板活化因子(PAF)引起的血小板聚集，血管内皮损伤及微血栓形成。本实验观察GbE对血小板粘附及血栓形成的影响。
1实验材料
11药物银杏叶提取物(GbE)，安徽金寨神栗食品有限公司赠送(总黄酮甙33.84%，总萜内酯11.18%)；乙酰水杨酸(acetylsalicylicacid,ASA)，蚌埠医药研究所实验药厂提供。
, 百拇医药
1.2动物家兔，体重2.0～2.5kg；SD大鼠，体重200～240g；昆明种小鼠18～20g。以上动物均♀♂各半，由安徽医科大学实验动物中心提供(皖医实动准字第01号)。
所有动物均ig给药。GbE每天给药1次，连续21d；ASA每天给药1次，连续3d。最后1次给药后lh正式实验。
1.3统计学处理各组数据以
±s表示，组间比较采用t检验。
2方法和结果
2.1GbE对家兔血小板粘附率的影响参照文献[3]用旋转玻球法进行测试。将抗凝血加入球形瓶内，置于TXL-B型体外血栓形成及血小板粘附两
用仪的转动装置上，旋转15min。粘附前后分别作血小板计数，每例标本计数2次，取其平均值按下列公式计算血小板粘附率：
, 百拇医药
结果见表1。与对照组比较，3种剂量的GbE均可使血小板粘附率明显降低，而ASA30mg.kg-1对血小板粘附率无明显影响。
表1GbE对家兔血小板粘附率和动静脉旁路血栓的影响(±s) 组别
血小板粘附率/%(n=5)
血栓重量/mg(n=6)
对照组
35.5±6.9
47.3±10.1
ASA/30mg.kg-1
, 百拇医药
33.6±5.2
27.7±9.3**
GbE/15mg.kg-1
22.3±8.8*
34.8±7.8*
GbE/30mg.kg-1
20.7±7.7*
29.2±6.3**
GbE/60mg.kg-1
19.2±7.2**
25.5±5.4**
, 百拇医药
与对照组比较*P<0.05,**P<0.01
表2GbE对大鼠体外血栓形成的影响(±s，n=8) 组别
血栓长度/mm
血栓干重/mg
对照组
11.4±3.6
20.1±5.8
ASA/40mg.kg-1
5.2±1.7**
11.2±4.8**
, 百拇医药
GbE/20mg.kg-1
8.1±2.2*
16.6±4.6
GbE/40mg.kg-1
6.8±3.0*
14.4±3.2*
GbE/60mg.kg-1
5.9±2.6**
10.1±3.3**
与对照组比较*P<0.05,**P<0.01表3GbE对小鼠尾动脉出血时间的影响(±s，n=10) 组别
, 百拇医药
尾动脉出血时间/min
对照组
3.8±1.1ASA/50
mg.kg-1
8.0±2.9**
GbE/25mg.kg-1
4.2±1.2
GbE/50mg.kg-1
6.4±3.1*
GbE/100mg.kg-1
, 百拇医药 6.0±2.3*
与对照组比较*P<0.05,**P<0.01
2.2GbE对家兔动静脉旁路血栓形成的影响参照文献[3]用戊巴比妥钠30mg.kg-1静脉麻醉家兔，将其仰卧固定于兔板上，气管内插管以便清除气管内分泌物，并分离右颈总动脉及左颈外静脉。取内径为2mm，长16cm的硅化聚乙烯管，内置一根长8cm的4号手术线，管内充满肝素生理盐水(5×104U.L-1)。将聚乙烯管的一端插入右颈总动脉，另一段插入左颈外静脉，开放血流，15min后中断血流，取出丝线称重，总重量减去丝线原重量即为血栓湿重。
结果见表1。与对照组比较，3种剂量的GbE和ASA均可使血栓重量明显减轻。
2.3GbE对大鼠体外血栓形成的影响参照Chandler氏体外血栓形成法[3]，大鼠以戊巴比妥钠30mg.kg-1ip麻醉，从腹主动脉取血1.8ml，置于硅胶血栓管中，套紧血栓管装入TXL-B型体外血栓形成及血小板粘附两用仪，旋转15min后倾出血栓，量其长度，并将其烘干后称血栓干重。
, 百拇医药
结果见表2。与对照组比较，GbE和ASA均可明显缩短大鼠体外血栓长度，并减轻其干重。
2.4GbE对小鼠尾动脉出血时间的影响按文献[4]依次将小鼠置于固定器中，使其尾部垂直，在距尾尖1.5mm处剪断，记录出血时间。结果见表3，与对照组比较，GbE和ASA均可使小鼠尾动脉出血时间延长。
3讨论
血小板的粘附性是指血小板粘附于异物、伤口或粗糙表面的特性，旋转玻球法是利用球形瓶内的粗糙面，使血小板与之充分接触，触发其形变而粘附其上。颈总动脉-颈外静脉旁路法为体内血栓形成法，动脉血流中的血小板接触丝线粗糙面时粘附于线上，血小板聚集物环绕线的表面形成血小板血栓。体外血栓形成法是在旋转的圆环内模拟体内血液流动状态，形成与动脉血栓有相似结构的人工血栓。另外，一般认为采用剪尾法观察小鼠尾动脉出血时间是一种简易的抗血栓药物观察方法。实验结果显示，预防性给药，GbE有明显降低血小板粘附率的作用，而ASA30mg.kg-1则无此作用，这与文献报道的结果类似[5]。GbE减轻动-静脉旁路形成血栓的重量，缩短体外形成血栓的长度，并减轻其干重，另外延长小鼠尾动脉出血时间，从而提示GbE有一定的抗血小板粘附及血栓形成的作用，而降低血小板的粘附性是GbE抗血栓和延长小鼠动脉出血时间的机制之一。本实验室的工作曾观察GbE对老龄前期小鼠血液流变学的影响，结果表明GbE可降低小鼠的红细胞压积、纤维蛋白原、全血粘度，缩小红细胞聚集系数和血栓形成系数[6]。血栓形成受多种因素影响，如血管内皮损伤，血小板粘附聚集和凝血活性增高，血液粘度增加，血流缓慢等，以上实验结果为GbE用于临床防治心脑血栓形成提供了一定的动物实验依据，其作用机理有待进一步探讨。
, 百拇医药
本研究为安徽省教委资助项目(№:96JL0076)，部分资金来源于安徽省科委资助项目(№：95-医-20)
明亮，女，53岁，硕士生导师，教授。
参考文献
1，郑明棋，龚旭龄.银杏黄酮和内酯的药理与临床.中国药房，1997；8(2)：85
2，Smith PF, Maclennan K, Darlington CL.The neuro- protective properties of the Ginkgo biloba leaf : a re-view of the possible relationship to platelet-activating factor(PAF). J Ethnopharmacol,1996； 50(3)： 131
, 百拇医药 3，陈奇，主编.中药药理研究方法学.北京：人民卫生出 版社，1993：510
4，Wang JP,Hsu MF, Hsu TP， et al. Antihemostatic and antithrombotic effects of capsaicin in comparison with aspirin and indomethacin. Thrombosis Res， 1985；37： 669
5，季勇，陶亮，齐志敏，等.赖氨匹林对血小板聚集粘附和血栓形成的影响.中国药理学通报，1995；11(4)：326
6，周兰兰，明亮，左从文，等.银杏叶提取物对老龄前期小鼠血液流变学的影响.安徽医科大学学报，1998；33(6)：418
2000-03-17收稿，2000-04-18修回, 百拇医药
单位：安徽医科大学药理教研室，合肥 230032
关键词：银杏叶提取物血小板粘附血栓
中国临床药理学与治疗学000309
目的 观察银杏叶提取物(GbE)对血小板粘附及血栓形成的影响。方法 血小板粘附性采用旋转玻球法；体内血栓形成采用动-静脉旁路血栓形成法；体外血栓形成采用Chandler法；采用剪尾法观察小鼠尾动脉出血时间。结果 GbE明显降低家兔血小板粘附率；减轻家兔动-静脉旁路形成血栓的重量；缩短大鼠体外形成血栓的长度，并减轻其干重；延长小鼠尾动脉出血时间。结论 GbE有一定的抗血小板粘附及血栓形成的作用。
中图分类号 R973.2
, http://www.100md.com
Effects of extracts of ginkgo biloba leaves on platelet adhesion and thrombosis
MING Liang ZHANG Yan ZHANG San-Jun JIANG Qin
(Department of Pharmacology, Anhui Medical University, Hefei 230032)
Aim To observe the effect of extracts of ginkgo biloba leaves(GbE) on platelet adhesion and thrombosis. Methods The platelet adhesion was assayed by rotating glass-globe method. The thrombogenesis method in artery-vein bypass was applied to observe thrombosis in vivo. The Chandler method was applied to induce thrombosis in vitro.The tail bleeding time was recorded by shearing tail method.Results GbE significantly decreased platelet adherence rate in rabbits, decreased the weight of thrombus produced in artery-vein bypass in rabbits, shortened the length and reduced dry weight of thrombus of rats in vitro,prolonged the tail bleeding time in mice.Conclusion GbE inhibits the platelet adhesion and thrombosis.
, 百拇医药
Key words extracts of ginkgo biloba leaves ( GbE) ; platelet adhesion; thrombus
银杏叶提取物(extractsofginkgobilobaleaves,GbE)的主要活性成分为黄酮类和萜内酯类，临床上用于治疗心脑血管等疾病[1]。研究结果显示[1、2]，GbE的有效成分之一银杏内酯可拮抗血小板活化因子(PAF)引起的血小板聚集，血管内皮损伤及微血栓形成。本实验观察GbE对血小板粘附及血栓形成的影响。
1实验材料
11药物银杏叶提取物(GbE)，安徽金寨神栗食品有限公司赠送(总黄酮甙33.84%，总萜内酯11.18%)；乙酰水杨酸(acetylsalicylicacid,ASA)，蚌埠医药研究所实验药厂提供。
, 百拇医药
1.2动物家兔，体重2.0～2.5kg；SD大鼠，体重200～240g；昆明种小鼠18～20g。以上动物均♀♂各半，由安徽医科大学实验动物中心提供(皖医实动准字第01号)。
所有动物均ig给药。GbE每天给药1次，连续21d；ASA每天给药1次，连续3d。最后1次给药后lh正式实验。
1.3统计学处理各组数据以
±s表示，组间比较采用t检验。2方法和结果
2.1GbE对家兔血小板粘附率的影响参照文献[3]用旋转玻球法进行测试。将抗凝血加入球形瓶内，置于TXL-B型体外血栓形成及血小板粘附两
用仪的转动装置上，旋转15min。粘附前后分别作血小板计数，每例标本计数2次，取其平均值按下列公式计算血小板粘附率：
, 百拇医药
结果见表1。与对照组比较，3种剂量的GbE均可使血小板粘附率明显降低，而ASA30mg.kg-1对血小板粘附率无明显影响。
表1GbE对家兔血小板粘附率和动静脉旁路血栓的影响(
±s) 组别血小板粘附率/%(n=5)
血栓重量/mg(n=6)
对照组
35.5±6.9
47.3±10.1
ASA/30mg.kg-1
, 百拇医药
33.6±5.2
27.7±9.3**
GbE/15mg.kg-1
22.3±8.8*
34.8±7.8*
GbE/30mg.kg-1
20.7±7.7*
29.2±6.3**
GbE/60mg.kg-1
19.2±7.2**
25.5±5.4**
, 百拇医药
与对照组比较*P<0.05,**P<0.01
表2GbE对大鼠体外血栓形成的影响(
±s，n=8) 组别血栓长度/mm
血栓干重/mg
对照组
11.4±3.6
20.1±5.8
ASA/40mg.kg-1
5.2±1.7**
11.2±4.8**
, 百拇医药
GbE/20mg.kg-1
8.1±2.2*
16.6±4.6
GbE/40mg.kg-1
6.8±3.0*
14.4±3.2*
GbE/60mg.kg-1
5.9±2.6**
10.1±3.3**
与对照组比较*P<0.05,**P<0.01表3GbE对小鼠尾动脉出血时间的影响(
±s，n=10) 组别, 百拇医药
尾动脉出血时间/min
对照组
3.8±1.1ASA/50
mg.kg-1
8.0±2.9**
GbE/25mg.kg-1
4.2±1.2
GbE/50mg.kg-1
6.4±3.1*
GbE/100mg.kg-1
, 百拇医药 6.0±2.3*
与对照组比较*P<0.05,**P<0.01
2.2GbE对家兔动静脉旁路血栓形成的影响参照文献[3]用戊巴比妥钠30mg.kg-1静脉麻醉家兔，将其仰卧固定于兔板上，气管内插管以便清除气管内分泌物，并分离右颈总动脉及左颈外静脉。取内径为2mm，长16cm的硅化聚乙烯管，内置一根长8cm的4号手术线，管内充满肝素生理盐水(5×104U.L-1)。将聚乙烯管的一端插入右颈总动脉，另一段插入左颈外静脉，开放血流，15min后中断血流，取出丝线称重，总重量减去丝线原重量即为血栓湿重。
结果见表1。与对照组比较，3种剂量的GbE和ASA均可使血栓重量明显减轻。
2.3GbE对大鼠体外血栓形成的影响参照Chandler氏体外血栓形成法[3]，大鼠以戊巴比妥钠30mg.kg-1ip麻醉，从腹主动脉取血1.8ml，置于硅胶血栓管中，套紧血栓管装入TXL-B型体外血栓形成及血小板粘附两用仪，旋转15min后倾出血栓，量其长度，并将其烘干后称血栓干重。
, 百拇医药
结果见表2。与对照组比较，GbE和ASA均可明显缩短大鼠体外血栓长度，并减轻其干重。
2.4GbE对小鼠尾动脉出血时间的影响按文献[4]依次将小鼠置于固定器中，使其尾部垂直，在距尾尖1.5mm处剪断，记录出血时间。结果见表3，与对照组比较，GbE和ASA均可使小鼠尾动脉出血时间延长。
3讨论
血小板的粘附性是指血小板粘附于异物、伤口或粗糙表面的特性，旋转玻球法是利用球形瓶内的粗糙面，使血小板与之充分接触，触发其形变而粘附其上。颈总动脉-颈外静脉旁路法为体内血栓形成法，动脉血流中的血小板接触丝线粗糙面时粘附于线上，血小板聚集物环绕线的表面形成血小板血栓。体外血栓形成法是在旋转的圆环内模拟体内血液流动状态，形成与动脉血栓有相似结构的人工血栓。另外，一般认为采用剪尾法观察小鼠尾动脉出血时间是一种简易的抗血栓药物观察方法。实验结果显示，预防性给药，GbE有明显降低血小板粘附率的作用，而ASA30mg.kg-1则无此作用，这与文献报道的结果类似[5]。GbE减轻动-静脉旁路形成血栓的重量，缩短体外形成血栓的长度，并减轻其干重，另外延长小鼠尾动脉出血时间，从而提示GbE有一定的抗血小板粘附及血栓形成的作用，而降低血小板的粘附性是GbE抗血栓和延长小鼠动脉出血时间的机制之一。本实验室的工作曾观察GbE对老龄前期小鼠血液流变学的影响，结果表明GbE可降低小鼠的红细胞压积、纤维蛋白原、全血粘度，缩小红细胞聚集系数和血栓形成系数[6]。血栓形成受多种因素影响，如血管内皮损伤，血小板粘附聚集和凝血活性增高，血液粘度增加，血流缓慢等，以上实验结果为GbE用于临床防治心脑血栓形成提供了一定的动物实验依据，其作用机理有待进一步探讨。
, 百拇医药
本研究为安徽省教委资助项目(№:96JL0076)，部分资金来源于安徽省科委资助项目(№：95-医-20)
明亮，女，53岁，硕士生导师，教授。
参考文献
1，郑明棋，龚旭龄.银杏黄酮和内酯的药理与临床.中国药房，1997；8(2)：85
2，Smith PF, Maclennan K, Darlington CL.The neuro- protective properties of the Ginkgo biloba leaf : a re-view of the possible relationship to platelet-activating factor(PAF). J Ethnopharmacol,1996； 50(3)： 131
, 百拇医药 3，陈奇，主编.中药药理研究方法学.北京：人民卫生出 版社，1993：510
4，Wang JP,Hsu MF, Hsu TP， et al. Antihemostatic and antithrombotic effects of capsaicin in comparison with aspirin and indomethacin. Thrombosis Res， 1985；37： 669
5，季勇，陶亮，齐志敏，等.赖氨匹林对血小板聚集粘附和血栓形成的影响.中国药理学通报，1995；11(4)：326
6，周兰兰，明亮，左从文，等.银杏叶提取物对老龄前期小鼠血液流变学的影响.安徽医科大学学报，1998；33(6)：418
2000-03-17收稿，2000-04-18修回, 百拇医药