强力宁对家兔肾缺血再灌注损伤的保护作用
作者：孙淑清 陈国忠 孙秀英 王立国 闫宏亮 王风华
单位：(中国人民解放军第465医院血透中心132013)
关键词：肾脏；再灌注损伤；氧自由基；甘草次酸；兔
广东医学000308
【摘要】 目的 探讨强力宁对家兔肾缺血再灌注损伤保护作用。方法 16只家兔肾动脉钳夹60 min后开放制成的缺血性急性肾衰模型并随机分成两组，A组：为对照组，于缺血前10 min及再灌注时分别静注生理盐水7 ml和13 ml；B组：为治疗组，于缺血前10 min及再灌注时分别静注含强力宁生理盐水7 ml和13 ml(强力宁按20 mg/kg用生理盐水稀释至20 ml)。结果 B组再灌注60 min时血清丙二醛(MDA)及再灌注24 h时血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)均明显低于A组。结论 强力宁可能通过抗自由基及脂质过氧化作用，对缺血再灌注损伤的兔肾脏具有明显的保护作用。
, 百拇医药
Effects of glycyrrhisin on renal ischemia/reperfusion injury of rabbit
Sun Shuqing, Chen Guozhong, Sun Xiuying, et al.
(Department of Urology, Affiliated Hospital, Jilin Military Medical College, the Fouth Military Medical University, PLA of China, Jilin 132013)
【Abstract】 Objective To investigate the effect of glycyrrhisin on renal ischemia/reperfusion injury in rabbits.Methods Sixteen rabbits model of ischemic acute renal failure (IARF), established by clamping the renal arteries for 60 minutes before reperfusion of blood, were divided into two groups. In group A (n=8), 7 ml and 13 ml saline solution were administered intravenously before ischemia and at reperfusion respectively. In group B (n=8), 7 ml and 13 ml glycyrrhisin saline solution were administered intravenously before ischemia and at reperfusion respectively. Results Serum of MDA level at 60 minutes after reperfusion and serum Scr and BUN level at 24 hours after reperfusion in group B were significantly lower than those of group A. Conclusion Glycyrrhisin exertes obvious protective effects on renal injury induced by ischemia/reperfuion.
, 百拇医药
【Key words】 Kidney Reperfusion injury Free radicals Glycyrrhisin Rabbit
氧自由基及其引发的脂质过氧化在缺血性组织再灌注损伤中起重要作用[1]，强力宁具有抗炎、抗缺氧和清除氧自由基等作用，对脑和心肌缺血再灌注损伤有明显的保护作用，对肾脏缺血再灌注损伤有否保护作用的报道甚少。本文观察强力宁对家兔缺血再灌注肾损伤的影响，并对其机理进行初步探讨。
1 材料与方法
1.1 动物模型及分组 家兔16只，雌雄不分，体重1.6～2.4 kg,15 g/L的戊巴比妥钠(30 mg/kg)耳缘静脉注射麻醉。切除右肾后，用无损伤血管夹阻断左肾动脉60 min后开放再灌注，制成兔缺血再灌注损伤模型并随机分两组，A组：为对照组(n=8)，于缺血前10 min及再灌注时分别静脉注射生理盐水7 ml和13 ml；B组：为强力宁治疗组(n=8)，于缺血前10 min和再灌注时静脉注射含强力宁的生理盐水7 ml和13 ml(强力宁按20 mg/kg，用生理盐水稀释至20 ml，强力宁由江苏天晴制药总厂生产)。
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1.2 观察指标及测定方法 分别于缺血前及再灌注60 min后取静脉血2 ml，测定血清MDA，再灌注24 h取静脉血检测Scr,BUN，实验结束时切取肾组织，立即用FAA液固定，石蜡包埋切片，HE染色。
1.3 统计学处理 计量资料以
±s表示，采用t检验。
2 结果
2.1 血清MDA，Scr及BUN的变化 缺血前两组间的血清MDA，Scr和BUN均无明显差异，再灌注后60 min MDA\,再灌注后24 h Scr，BUN两组虽均明显升高(P<0.01)，但再灌注后强力宁治疗组的MDA，Scr和BUN明显低于对照组(P<0.01)，见表1。
2.2 病理 按照下列标准评定肾脏再灌注后24 h评分情况：肾小管上皮细胞空泡、滴状变性为10分，变性并伴有管型者为20分，出现灶状坏死并伴有管型者为30分，出现多灶状坏死为40分[2]。对照组肾小管损伤较重，平均为35分，强力宁治疗组肾小管损伤明显减轻，平均为20分，差异有非常显著性(P<0.01)。
, 百拇医药
表1 缺血前及再灌注后血清MDA,Scr及BUN的变化
MDA(nmol/ml)
Scr(μmol/L)
BUN(mmol/L)
A组
B组
A组
B组
A组
B组
缺血前
0.88±0.19
, 百拇医药
0.90±0.23
96.24±17.25
92.56±22.12
2.84±0.56
2.95±0.64
再灌注60 min
3.24±0.64
1.98±0.44*△
再灌注24 h
298.64±76.82
236.32±96.23*△
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9.12±1.05
6.23±1.24*△
与缺血前组间比较 *P<0.01,与该项目A组比较 △P<0.013 讨论
肾脏的急性缺血/再灌注损伤，主要表现为肾小管和间质损伤以及肾功能的减退，氧自由基及脂质过氧化作用是这一损伤过程的重要介导因素，有实验证明缺血后急性肾功能衰竭时，氧自由基大量产生主要来源于黄嘌呤氧化酶途径，肾缺血后ATP降解生成大量的次黄嘌呤，再灌注后由于恢复供氧，次黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶催化下生成黄嘌呤而产生大量的氧自由基和羟自由基，这些氧自由基主要通过膜的脂质过氧化对肾组织造成损害，即对生物膜中的多价不饱和脂肪酸进行降解，而损伤细胞膜和线粒体膜的结构和功能，造成各种细胞功能障碍[3]，导致肾功能损害。有研究表明缺血期间组织自身抗氧化能力降低，从而使组织细胞对活性氧(reactive oxygen metabo kites, ROM)更为敏感[4]。脂质过氧化可产生MDA、酮基、羧基、氢过氧基等脂质过氧化物，即MDA是过氧化脂质的降解产物，通过测定血清中MDA含量，在一定程度上能够反映氧自由基的代谢及脂质过氧化对机体的损伤程度。
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强力宁即甘草酸静脉注射液，是由甘草酸单胺、L-半胱氨酸和甘氨酸配制而成的，主要成分为甘草甜素，其结构与肾上腺皮质激素类似，具有抗炎、抗凝、抗过敏、抗病毒、抑制抗原抗体反应、抗纤维化等多种药理作用。强力宁即甘草酸在体内主要水解为甘草次酸，后者通过糖皮质类固醇受体发挥作用，有明显抑制氧化酶活性，具有明显抗缺氧及抗自由基及其脂质过氧化作用[5]。有实验证明强力宁通过抗自由基及其脂质过氧化作用，明显减轻脑缺血再灌注损伤[6]。本文结果显示，缺血再灌注后强力宁治疗组MDA含量、Scr和BUN均明显低于对照组，肾小管上皮细胞变性、肾小管刷状缘脱落和间质炎症细胞浸润等病理损伤也较对照组明显减轻，说明强力宁能显著减轻肾缺血再灌注引起的脂质过氧化损伤，对急性缺血再灌注肾损伤兔的肾功能有明显的保护作用。
参考文献
[1]Hearse DJ, Balli R. Reperfusion induced injury: manifestations, mechanisims and clinic relevance. Cardiovasc Res, 1992, 26101
, http://www.100md.com
[2]徐幼筠，杜学海，苏 刚，等.大鼠肾缺血再灌注对抗氧化能力变化及活性氧清除剂的影响.肾脏病与透析肾移植杂志，1994， 3：96
[3]刘俊杰，赵 俊，主编.现代麻醉学.第2版.北京：人民卫生出版社，1997.25～264
[4]徐幼筠，杜学海，苏 刚，等. 大鼠肾缺血再灌注自身抗氧化能力的变化及活性氧清除剂的影响.中华肾脏杂志，1996， 12(2)：107
[5]葛明珠，张志林，潘兴武，等.18β-甘草次酸抗缺氧机理的初步探讨.中国药理学通报，1991， 2：297
[6]麻兴利，徐启明，谭秀娟，等.强力宁对犬循环停止后缺血性脑损伤的影响.中华麻醉学杂志，1994(16)：403
(收稿日期：1999-10-28), 百拇医药
单位：(中国人民解放军第465医院血透中心132013)
关键词：肾脏；再灌注损伤；氧自由基；甘草次酸；兔
广东医学000308
【摘要】 目的 探讨强力宁对家兔肾缺血再灌注损伤保护作用。方法 16只家兔肾动脉钳夹60 min后开放制成的缺血性急性肾衰模型并随机分成两组，A组：为对照组，于缺血前10 min及再灌注时分别静注生理盐水7 ml和13 ml；B组：为治疗组，于缺血前10 min及再灌注时分别静注含强力宁生理盐水7 ml和13 ml(强力宁按20 mg/kg用生理盐水稀释至20 ml)。结果 B组再灌注60 min时血清丙二醛(MDA)及再灌注24 h时血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)均明显低于A组。结论 强力宁可能通过抗自由基及脂质过氧化作用，对缺血再灌注损伤的兔肾脏具有明显的保护作用。
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Effects of glycyrrhisin on renal ischemia/reperfusion injury of rabbit
Sun Shuqing, Chen Guozhong, Sun Xiuying, et al.
(Department of Urology, Affiliated Hospital, Jilin Military Medical College, the Fouth Military Medical University, PLA of China, Jilin 132013)
【Abstract】 Objective To investigate the effect of glycyrrhisin on renal ischemia/reperfusion injury in rabbits.Methods Sixteen rabbits model of ischemic acute renal failure (IARF), established by clamping the renal arteries for 60 minutes before reperfusion of blood, were divided into two groups. In group A (n=8), 7 ml and 13 ml saline solution were administered intravenously before ischemia and at reperfusion respectively. In group B (n=8), 7 ml and 13 ml glycyrrhisin saline solution were administered intravenously before ischemia and at reperfusion respectively. Results Serum of MDA level at 60 minutes after reperfusion and serum Scr and BUN level at 24 hours after reperfusion in group B were significantly lower than those of group A. Conclusion Glycyrrhisin exertes obvious protective effects on renal injury induced by ischemia/reperfuion.
, 百拇医药
【Key words】 Kidney Reperfusion injury Free radicals Glycyrrhisin Rabbit
氧自由基及其引发的脂质过氧化在缺血性组织再灌注损伤中起重要作用[1]，强力宁具有抗炎、抗缺氧和清除氧自由基等作用，对脑和心肌缺血再灌注损伤有明显的保护作用，对肾脏缺血再灌注损伤有否保护作用的报道甚少。本文观察强力宁对家兔缺血再灌注肾损伤的影响，并对其机理进行初步探讨。
1 材料与方法
1.1 动物模型及分组 家兔16只，雌雄不分，体重1.6～2.4 kg,15 g/L的戊巴比妥钠(30 mg/kg)耳缘静脉注射麻醉。切除右肾后，用无损伤血管夹阻断左肾动脉60 min后开放再灌注，制成兔缺血再灌注损伤模型并随机分两组，A组：为对照组(n=8)，于缺血前10 min及再灌注时分别静脉注射生理盐水7 ml和13 ml；B组：为强力宁治疗组(n=8)，于缺血前10 min和再灌注时静脉注射含强力宁的生理盐水7 ml和13 ml(强力宁按20 mg/kg，用生理盐水稀释至20 ml，强力宁由江苏天晴制药总厂生产)。
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1.2 观察指标及测定方法 分别于缺血前及再灌注60 min后取静脉血2 ml，测定血清MDA，再灌注24 h取静脉血检测Scr,BUN，实验结束时切取肾组织，立即用FAA液固定，石蜡包埋切片，HE染色。
1.3 统计学处理 计量资料以
±s表示，采用t检验。2 结果
2.1 血清MDA，Scr及BUN的变化 缺血前两组间的血清MDA，Scr和BUN均无明显差异，再灌注后60 min MDA\,再灌注后24 h Scr，BUN两组虽均明显升高(P<0.01)，但再灌注后强力宁治疗组的MDA，Scr和BUN明显低于对照组(P<0.01)，见表1。
2.2 病理 按照下列标准评定肾脏再灌注后24 h评分情况：肾小管上皮细胞空泡、滴状变性为10分，变性并伴有管型者为20分，出现灶状坏死并伴有管型者为30分，出现多灶状坏死为40分[2]。对照组肾小管损伤较重，平均为35分，强力宁治疗组肾小管损伤明显减轻，平均为20分，差异有非常显著性(P<0.01)。
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表1 缺血前及再灌注后血清MDA,Scr及BUN的变化
MDA(nmol/ml)
Scr(μmol/L)
BUN(mmol/L)
A组
B组
A组
B组
A组
B组
缺血前
0.88±0.19
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0.90±0.23
96.24±17.25
92.56±22.12
2.84±0.56
2.95±0.64
再灌注60 min
3.24±0.64
1.98±0.44*△
再灌注24 h
298.64±76.82
236.32±96.23*△
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9.12±1.05
6.23±1.24*△
与缺血前组间比较 *P<0.01,与该项目A组比较 △P<0.013 讨论
肾脏的急性缺血/再灌注损伤，主要表现为肾小管和间质损伤以及肾功能的减退，氧自由基及脂质过氧化作用是这一损伤过程的重要介导因素，有实验证明缺血后急性肾功能衰竭时，氧自由基大量产生主要来源于黄嘌呤氧化酶途径，肾缺血后ATP降解生成大量的次黄嘌呤，再灌注后由于恢复供氧，次黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶催化下生成黄嘌呤而产生大量的氧自由基和羟自由基，这些氧自由基主要通过膜的脂质过氧化对肾组织造成损害，即对生物膜中的多价不饱和脂肪酸进行降解，而损伤细胞膜和线粒体膜的结构和功能，造成各种细胞功能障碍[3]，导致肾功能损害。有研究表明缺血期间组织自身抗氧化能力降低，从而使组织细胞对活性氧(reactive oxygen metabo kites, ROM)更为敏感[4]。脂质过氧化可产生MDA、酮基、羧基、氢过氧基等脂质过氧化物，即MDA是过氧化脂质的降解产物，通过测定血清中MDA含量，在一定程度上能够反映氧自由基的代谢及脂质过氧化对机体的损伤程度。
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强力宁即甘草酸静脉注射液，是由甘草酸单胺、L-半胱氨酸和甘氨酸配制而成的，主要成分为甘草甜素，其结构与肾上腺皮质激素类似，具有抗炎、抗凝、抗过敏、抗病毒、抑制抗原抗体反应、抗纤维化等多种药理作用。强力宁即甘草酸在体内主要水解为甘草次酸，后者通过糖皮质类固醇受体发挥作用，有明显抑制氧化酶活性，具有明显抗缺氧及抗自由基及其脂质过氧化作用[5]。有实验证明强力宁通过抗自由基及其脂质过氧化作用，明显减轻脑缺血再灌注损伤[6]。本文结果显示，缺血再灌注后强力宁治疗组MDA含量、Scr和BUN均明显低于对照组，肾小管上皮细胞变性、肾小管刷状缘脱落和间质炎症细胞浸润等病理损伤也较对照组明显减轻，说明强力宁能显著减轻肾缺血再灌注引起的脂质过氧化损伤，对急性缺血再灌注肾损伤兔的肾功能有明显的保护作用。
参考文献
[1]Hearse DJ, Balli R. Reperfusion induced injury: manifestations, mechanisims and clinic relevance. Cardiovasc Res, 1992, 26101
, http://www.100md.com
[2]徐幼筠，杜学海，苏 刚，等.大鼠肾缺血再灌注对抗氧化能力变化及活性氧清除剂的影响.肾脏病与透析肾移植杂志，1994， 3：96
[3]刘俊杰，赵 俊，主编.现代麻醉学.第2版.北京：人民卫生出版社，1997.25～264
[4]徐幼筠，杜学海，苏 刚，等. 大鼠肾缺血再灌注自身抗氧化能力的变化及活性氧清除剂的影响.中华肾脏杂志，1996， 12(2)：107
[5]葛明珠，张志林，潘兴武，等.18β-甘草次酸抗缺氧机理的初步探讨.中国药理学通报，1991， 2：297
[6]麻兴利，徐启明，谭秀娟，等.强力宁对犬循环停止后缺血性脑损伤的影响.中华麻醉学杂志，1994(16)：403
(收稿日期：1999-10-28), 百拇医药