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编号:10243800
牙周治疗前后血清抗体滴度及亲和性的变化
http://www.100md.com 《中华口腔医学杂志》 2000年第3期
     作者:欧阳翔英 曹采方 陈智滨

    单位:欧阳翔英(北京医科大学口腔医学院牙周科 100081);曹采方(北京医科大学口腔医学院牙周科 100081);陈智滨(北京医科大学口腔医学院牙周科 100081)

    关键词:牙周炎;牙龈卟啉菌;血清;抗体滴度;抗体亲和性

    中华口腔医学杂志000308 【摘要】目的 观察牙周治疗前后抗牙龈卟啉菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)抗体滴度及亲和性的变化,探讨其在牙周炎致病机制中的作用。方法 采用ELISA法,检测17例牙周炎患者治疗前及治疗后1个月及6名健康对照者的血清抗Pg381 IgG抗体滴度及亲和性。结果 牙周炎组治疗前抗体滴度高于对照组(P<0.001),抗体滴度与探诊深度有负相关趋势,治疗后滴度显著降低(P<0.01);亲和性与对照组间差异无显著性,治疗后也无显著性改变。结论 抗Pg381抗体在牙周炎致病机制中的作用,可能主要是“以量取胜”的保护作用。
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    Titer and avidity of serum antibody to Porphyromonas gingivalis before and after periodontal therapy

    OUYANG Xiangying,CAO Caifang,CHEN Zhibin

    (Department of Periodontology,School of Stomatology,Beijing Medical University,Beijing 100081,China)

    【Abstract】Objective To observe the changes of titer and avidity of serum antibody to Porphyromonas gingivalis (Pg) before and one month after periodontal therapy,and to observe the correlation of titer and avidity of anti-Pg IgG with clinical indices.Methods ELISA and DEA-ELISA were used to determine the titer and avidity of serum IgG antibody to Pg381 before and one month after periodontal treatment in 17 periodontitis patients and 6 healthy control subjects.Results The titers of anti-Pg IgG antibody were higher in periodontitis patients than in healthy control subjects (P<0.001).All patients were seropositive (titers to Pg were higher than 2-fold above the median for control subjects).IgG antibody avidity to Pg in periodontitis patients were not found to be significantly lower than that in control group.The titers to Pg decreased significantly at one month after periodontal therapy,but antibody avidity didn't change.Serum anti-Pg antibody titers had a tendency of negative correlation with probing depth.The antibody titers were significant higher in periodontitis patients with ≤5 mm mean probing depth than in patients with >5 mm mean probing depth.Conclusions It is suggested that the humoral immune response to Pg381 is protective and this protective effect mainly depends on the titer of antibody.
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    【Key words】Periodontitis;Porphyromonas gingivalis;Serum;Antibody titer;Antibody avidity

    牙周炎是龈下致病微生物与机体宿主反应相互作用的结果。牙龈卟啉菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)是牙周炎的主要致病菌之一[1]。牙周炎患者对Pg的全身及局部体液免疫反应均升高[2-4]。但抗体水平与临床指标的关系结论不一,抗Pg抗体具有保护作用还是破坏作用仍需探讨。抗体亲和性是反映抗体质量的一项指标,近年来在研究患者体液免疫反应时,抗体亲和性开始受到重视[4,5]。牙周炎患者抗Pg抗体的亲和性与临床指标是否相关?牙周治疗后抗体的亲和性是否变化?这些也是有待研究的问题。我们同时观察了牙周治疗前后,血清中抗Pg抗体滴度及抗体亲和性的变化,并分析了抗体滴度及抗体亲和性与临床指标的关系,探讨其在牙周炎致病机制中的作用。
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    材料与方法

    1. 研究对象:受检对象共23人,其中牙周炎患者17例,健康对照6人。受检者均无全身系统性疾病,半年内未做过任何牙周治疗,3个月内未服用抗菌药物。对所有受检者均取静脉血,并进行临床牙周检查,用Ramfjord代表牙(16,21,24,36,41,44)代表该受检者的临床情况,记录菌斑指数(plaque index,PLI)、探诊深度(probing depth,PD)、附着丧失(attachment loss,AL)及出血指数(bleeding index,BI)。牙周炎患者接受牙周基础治疗,包括口腔卫生宣教、全口洁治及根面平整,部分患者服用了螺旋霉素(200 mg,每日4次,连服5 d)。治疗结束后1个月,取静脉血,并重复临床检查。用常规法将静脉血制备成血清,-50℃保存。

    2.抗体滴度的测定:使用Pg381超声裂解抗原,用ELISA法测定血清中的抗Pg IgG滴度。将已知高滴度患者的混合血清作为阳性标准血清,系列稀释后测定其反应,做出标准曲线。待测样本同样系列稀释后进行测定,结果以终点滴度表示,确定终点滴度是以标准曲线最高峰10%的吸光度(A)值为界限,将此时的稀释度定为终点滴度。
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    3.抗体亲和性的测定:在测定抗体滴度水平的同时,同一样本还用含0.035 mol/L二乙胺的稀释液进行系列稀释,在同一96孔板上测定抗Pg反应,同法计算终点滴度。抗体亲和性=(用二乙胺的滴度/不用二乙胺的滴度)×100%。

    4.统计学分析:用SPSS统计软件进行统计学分析,组间比较用M-W U-Wilcoxon秩和检验,治疗前后抗体滴度及亲和性的比较用Wilcoxon Matched-Pairs signed-ranks检验,抗体滴度及亲和性与临床指数的相关分析用Pearson相关分析。

    结果

    1.牙周炎组治疗前血清抗Pg IgG抗体滴度高于对照组(P<0.001),所有患者的抗体水平均为阳性,即高于对照组中位数的2倍;但抗体亲和性与对照组间差异无显著性(表1)。在服用螺旋霉素与未服用的患者之间,抗体滴度及亲和性差异均无显著性(表2)。
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    表1 血清抗Pg IgG抗体滴度及抗体亲和性的比较 抗Pg抗体

    健康对照组

    (n=6)

    牙周炎组(n=17)

    治疗前

    治疗后

    滴度

    424.2

    9 744.4

    6 760.8

    ±177.9

, http://www.100md.com     ±5 052.2**

    ±3 095.5*

    亲和性

    23.5

    22.7

    22.4

    ±9.8

    ±11.0

    ±9.2

    注:*与治疗前相比P<0.01;**与对照组相比P<0.001表2 服用与未服用螺旋霉素患者抗Pg抗体水平比较 牙周炎患者
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    n

    抗Pg IgG滴度

    抗Pg IgG亲和性

    治疗前

    治疗后

    治疗前

    治疗后

    服药组

    7

    9 525.3

    6 993.7

    20.8

    21.7
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    ±6 062.6

    ±4 386.2

    ±7.6

    ±7.4

    未服药组

    10

    9 897.7

    6 597.8

    24.0

    22.9

    ±4 561.9

    ±2 034.0

, http://www.100md.com     ±13.2

    ±10.6

    注:两组相比,P>0.05 2.牙周炎组治疗后1个月血清抗Pg抗体滴度显著降低(P<0.01),抗体亲和性差异无显著性(P>0.05),见表1。服用螺旋霉素与未服用患者的变化一致,治疗后两组之间抗Pg抗体滴度及亲和性的差异仍无显著性,见表2。

    3. 血清抗Pg抗体亲和性与各临床指数间均未见显著相关(P>0.05),但抗体滴度与PD均值有负相关趋势,见表3。牙周炎患者中平均PD≤5 mm的共10例,其平均抗Pg抗体滴度为11 746.9,而PD>5 mm的牙周炎患者共7例,其平均滴度为7 387.9,两组间统计学检验P=0.058。

    表3 牙周炎患者血清抗Pg抗体滴度及

    亲和性与临床指数的相关系数(r值)的比较 项目
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    抗体滴度

    抗体亲和性

    探诊深度

    -0.441 1

    -0.109 8

    附着丧失

    -0.031 2

    0.129 2

    菌斑指数

    0.158 6

    0.361 0

    出血指数

, 百拇医药     0.115 9

    -0.227 5

    讨论

    牙周炎患者血清中抗Pg的IgG滴度显著高于健康对照组,治疗后下降。支持体液免疫反应在牙周炎病因机制中发挥作用的观点[2-4]。抗Pg抗体滴度与PD有负相关趋势,牙周袋浅的患者,其血清抗Pg抗体水平高于深牙周袋患者。Wolff等[6]报道,在深牙周袋中Pg的平均比例高于在中等深度和浅袋中的比例。因此,这种负相关趋势提示了抗体的保护作用,即在感染Pg后,由于机体未能对Pg产生足够高水平的抗体,牙周组织破坏可能加重,牙周袋加深。Gunsolley等[7]曾报道,在重度牙周炎中,抗Pg抗体水平与患者口腔内AL≥5 mm患牙数之百分比负相关,也支持抗体保护作用的观点。

    抗体亲和性是反映抗体质量的一个重要参数,是指抗体结合位点与抗原决定簇之间的相互结合力。高亲和性抗体所介导的生物学作用更强,更有效。二乙胺是一种蛋白变性剂,它能阻止低亲和性抗体与固相上的抗原结合,但不影响高亲和性抗体与抗原的结合。二乙胺-ELISA法能测出高亲和性抗体的相对量,是测定抗体亲和性的一种简单易行的方法[8]
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    抗体的主要作用是与抗原结合形成免疫复合物,激活免疫效应因子的功能,如激活补体、通过调理作用而促进对抗原的吞噬等,从而快速清除抗原。通常认为抗体的量是抗体反应的主要因素,而抗体亲和性是影响其生物学效应的重要因素。Chen等[5]报道,一些快速进展型牙周炎患者抗Pg33277的抗体亲和性低于健康对照组,并与平均PD值显著负相关,他们认为,这些患者在感染过程中产生的低亲和性抗体具有较低的生物学效应,不能达到保护作用。但Lamster 等[4]报道,抗Pg抗体滴度及亲和性与探诊深度正相关。因此,抗Pg抗体亲和性在牙周炎致病机制中的作用还有争议。本研究结果显示,牙周炎患者血清中抗Pg381 IgG抗体亲和性与对照组无明显差异,牙周炎组的抗体亲和性与临床指数之间亦无显著相关。这与Mooney等[9]的结果一致。本结果还显示,牙周治疗后1个月,虽然血清抗Pg抗体滴度显著下降,但亲和性则几乎无变化。说明抗Pg381抗体在牙周炎致病机制中的作用,主要是“以量取胜”的保护作用。

, 百拇医药     抗体亲和性受多种因素的影响。在得到免疫后,抗体亲和性会随时间而增强,这被称为亲和性成熟,在小剂量抗原刺激时亲和性成熟最显著。具有高亲和性免疫球蛋白受体的B细胞产生高亲和性抗体,而低亲和性抗体则由具有低亲和性免疫球蛋白受体的B细胞产生。抗原选择性在亲和性成熟中起重要作用。Takahashi等[10]的研究结果显示,成人牙周炎患者对菌株Pg16-1的抗体滴度显著高于健康对照组,抗体亲和性显著低于对照组,而对菌株Pg33277的抗体滴度及亲和性则与对照组间差异无显著性,抗Pg16-1的抗体亲和性显著低于抗Pg33277的抗体。本研究结果显示,牙周炎患者抗Pg381的抗体滴度高于健康对照组,而亲和性则与对照组无明显差异。这些结果均说明,不同Pg菌株引起的免疫反应不同,抗体亲和性模式不同。可能是菌株Pg381这种细菌抗原的特性决定了在对其产生的抗体反应中,无论是牙周炎患者还是健康对照者,抗体亲和性是稳定的,处于低亲和性水平(低于其他研究中报道的抗Pg33277抗体亲和性[5,10]),而这种低亲和性抗体具有的生物学功能低下,牙周炎患者受到细菌感染时,并未产生抗体亲和性成熟,只是通过抗体滴度的升高来发挥抗体的作用,牙周治疗也并未导致对这种细菌抗原的抗体亲和性成熟。这种“以量取胜”的反应虽然在抑制细菌定植、中和毒素、清除细菌过程中有一定的保护作用,但所起的作用仍较为有限,从而导致牙周炎发生,牙周破坏加重。各种不同的Pg菌株可能通过引起不同的抗体亲和性模式的免疫反应,损害、减轻或者躲避机体的免疫机制,具有不同的致病性,从而不同程度地引起或加重牙周组织的破坏。因此,对不同牙周致病菌尤其是毒性株的抗体水平及亲和性进行检测,具有重要意义。
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    抗体亲和性还受基因调控、IgG亚类等因素的影响。对抗Pg IgG亚类及基因调控等的研究,也将进一步揭示体液免疫反应在牙周炎致病机制中所起的作用。

    参考文献

    1,Haffajee AD,Socransky SS.Microbial etiological agents of destructive periodontal diseases.Periodontol 2000,1994,5:78-111.

    2,欧阳翔英,曹采方.牙周炎患者血清与龈沟液特异抗体水平及治疗前后变化.中华口腔医学杂志,1993,28:312-314.

    3,Gunsolley JC,Tew JG,Gooss C,et al.Serum antibodies to periodontal bacteria.J Periodontol,1990,61:412-419.
, 百拇医药
    4,Lamster IB,Kaluszhner-Shapira I,Herrera-Abreu M,et al.Serum IgG antibody response to Actinobacillus actinomycetemcomitans and Porphyromonas gingivalis:implications for periodontal diagnosis.J Clin Periodontol,1998,25:510-516.

    5,Chen HA,Johnson BD,Sims TJ,et al.Humoral immune responses to Porphyromonas gingivalis before and following therapy in rapidly progressive periodontitis patients.J Periodontol,1991,62:781-791.

    6,Wolff LF,Aeppli DM,Pihlstrom B,et al.Natural distribution of 5 bacteria associated with Periodontal disease.J Clin Periodontol,1993,20:699-706.
, 百拇医药
    7,Gunsolley JC,Barmeister JA,Tew JG,et al.Relationship of serum antibody to attachment level patterns in young adults with juvenile periodontitis or generalized severe periodontitis.J Periodontol,1987,58:314-320.

    8,Devey ME,Bleasdale K,Lee S,et al.Determination of the functional affinity of IgG1 and IgG4 antibodies to tetanus toxoid by isotype-specific solid-phase assays.J Immunol Methods,1988,106:119-125.

    9,Mooney J,Adonogianaki E,Kinane DF.Relative avidity of serum antibodies to putative periodontopathogens in periodontal disease.J Periodontal Res,1993,28(6 Pt 1):444-450.

    10,Takahashi J,Saito A,Nakagawa T,et al.Dynamics of serum immunoglobulin G avidity for Porphyromonas gingivalis in adult periodontitis.J Periodontol,1998,69:367-373.

    (收稿日期:1998-11-19), http://www.100md.com