直肠癌和癌旁组织表皮生长因子受体的表达及其临床意义
作者：范国利 张仕成 董洪新 许延发
单位：范国利 张仕成 董洪新 (胜利石油管理局肛肠病防治院 东营 257077)；许延发 (西安医科大学第一临床医学院普外科 西安 710061)
关键词：
中国肿瘤生物治疗杂志000318
1 材料与方法
1.1 标本
选取西安医科大学一附院1992年1月至1993年12月间53例直肠癌根治手术标本作为研究对象，所有病例术前均未做过任何化疗或放疗。其中男性27例，女性26例，年龄最大76岁，最小18岁，平均50.8岁。在53例癌组织蜡块中，有45例含有癌旁组织(距癌组织小于2㎝的粘膜组织)。15例正常直肠粘膜作为正常对照，53例中有40例获完整随访资料，随访率为75.5%。
, 百拇医药
1.2 主要试剂与方法
兔抗人EGFR多克隆抗体(SANTA CRUZ USA)、SP免疫组化试剂盒(ZYMED USA)均购自北京市中山试剂公司。所有蜡块均连续切片，厚约4 μm，常规脱蜡酒精至水，经微波炉抗原修复处理后，用SP免疫组化法进行检测，EGFR抗体稀释度为1∶50。以已知EGFR染色阳性的直肠癌组织切片作为阳性对照，以PBS代替第一抗体作为阴性对照。
1.3 结果判断
参照Tanaka的方法判断结果[1]。EGFR阳性为在细胞膜或胞浆中有棕黄色颗粒，光镜下观察EGFR染色切片5个具有代表性的高倍视野，分别计数200个细胞，共计1 000个细胞，按阳性细胞所占比例分为4级，无阳性细胞为阴性(-)，小于30%为弱阳性(+)，30%～70%为阳性(
)，70%～100%为强阳性(
)。
, 百拇医药
1.4 统计学处理
采用t检验、χ2检验及等级相关分析，P<0.05被认为有统计学意义。
2 结果与讨论
EGFR在癌组织、癌旁组织及正常粘膜中的表达与分布。EGFR阳性产物位于细胞膜细胞浆，以胞膜为主，呈棕黄色颗粒样，散在或弥漫状分布。在15例正常直肠粘膜中均阴性，在癌组织中的表达强度明显高于癌旁组织(P<0.05)(见表1)。
EGFR在癌组织中的表达与各临床病理参数的关系(见表2)。
EGFR的表达与生存期的关系，从所检病例的统计数据看，癌组织EGFR呈阴性和弱阳性表达者(共16例)，患者的生存期平均为52.94±26.9个月，而EGFR呈阳性和强阳性表达者(共24例)的平均生存期为36.29±23.97个月，二者有显著差异(t检验，P<0.05)。
, http://www.100md.com
表1 EGFR在直肠癌组织与癌旁组织中的表达 组织类别
EGFR表达强度
合计
-
+
++
+++
癌组织
15
7
8
23
53
, 百拇医药
癌旁组织
22
9
7
7
45
Spearman 检验 P<0.05表2 EGFR在直肠癌中的表达与各临床病理参数的关系 临床参数
例数
阳性数
阳性率(%)
性别
男
, http://www.100md.com
27
18
66.7
女
26
20
76.9
年龄
<50岁
25
18
72.0
≥50岁
, http://www.100md.com 28
20
71.4
肿瘤大体类型
肿块型
16
12
75.0
溃疡型
35
25
71.4
浸润型
, 百拇医药 2
1
50.0
组织学分型
管状腺癌
47
34
72.3
粘液腺癌与
未分化癌
6
4
66.7
, 百拇医药 组织学分级
Ⅰ+Ⅱ级
39
28
71.8
Ⅲ+Ⅳ级
14
10
71.4
Dukes分期
A+B期
30
17
, http://www.100md.com
56.7△
C+D期
23
21
91.3
△ P<0.05
EGFR基因又称c-erB-1或Her-1基因,为原癌基因之一，定位于人第7号染色体的短臂，其mRNA长约6.8～10 kb,其蛋白产物为EGFR,是一种具有酪氨酸激酶的跨膜糖蛋白受体,与其相应配体表皮生长因子(EGF)、转化生长因子α(TGFα)结合后,激活酪氨酸激酶导致受体本身及细胞内的酪氨酸残基磷酸化,引起细胞铁过度分裂、增殖及恶变。研究表明，食管癌、乳腺癌、膀胱癌和消化道等多种肿瘤细胞可过度表达EGFR，并促进上述癌细胞的生长[2]。本实验中EGFR在正常粘膜中均无表达，而在癌组织与癌旁组织中均高表达，癌组织中表达越强，其分期越晚，生存期也越短。此结果提示高表达的EGFR与直肠癌的发生发展均有关。首先，在多种致癌因子的作用下，正常直肠粘膜向恶性转化，也伴随有EGFR基因活性的增高，EGFR表达亦增高，促进恶性转化的进展，使癌细胞的过度分裂、增殖和向周围组织浸润。同时，肿瘤细胞本身分泌的EGF，TGFα等生长因子，又可以通过自分泌与旁分泌途径，作用于癌组织与癌旁组织，刺激EGFR过度表达，从而形成恶性循环。本实验未发现EGFR的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大体类型及组织学分型与分级有显著相关性。但与Dukes分期有关，EGFR在Dukes C，D期的表达率明显高于A，B期(P<0.05)，这与steele等人的研究结果一致[3]。说明EGFR的高表达有促进直肠癌浸润转移的作用。EGFR的表达与肿瘤病人的预后关系早已受到重视，Hickey等用免疫组化技术证实，EGFR阴性表达的食管癌的生存率明显高于阳性表达者[4]。我们对有完整随访资料的40例直肠癌病人分析发现，EGFR表达阴性、弱阳性者的生存期及生存率明显高于阳性、强阳性表达者(P<0.05)。提示EGFR的表达强度与直肠癌的预后有关，可作为判断直肠癌预后的一项指标。
, 百拇医药
参 考 文 献
1，Tanaka S, Imanishi K, Yoshiara M, et al. Immunoreactive transforming growth factor alpha is commonly present in colorectal neoplasia. Am J Pathol, 1991, 139(1): 123
2，樊代明， 陈元方， 尤 涵. 胃肠肽类激素对消化系统肿瘤生物学行为的调控作用. 中华消化杂志， 1996， 16(4)： 230
3，Steele RJC, Kelly P, Elul B, et al. Epidermal growth factor receptor expression in colorectal cancer. Br J Surg, 1990, 77(2)： 1352
4，Hickey K, Grehan D, Keid IM, et al. Expression of epidermal growth factor receptor and proliferating cell nuclear antigen predicts response of esophogeal sequamous cell carinoma to chemoradiotherapy. Cancer, 1994, 74(6)： 1693
(2000-03-20收稿； 2000-06-27修回), http://www.100md.com
单位：范国利 张仕成 董洪新 (胜利石油管理局肛肠病防治院 东营 257077)；许延发 (西安医科大学第一临床医学院普外科 西安 710061)
关键词：
中国肿瘤生物治疗杂志000318
1 材料与方法
1.1 标本
选取西安医科大学一附院1992年1月至1993年12月间53例直肠癌根治手术标本作为研究对象，所有病例术前均未做过任何化疗或放疗。其中男性27例，女性26例，年龄最大76岁，最小18岁，平均50.8岁。在53例癌组织蜡块中，有45例含有癌旁组织(距癌组织小于2㎝的粘膜组织)。15例正常直肠粘膜作为正常对照，53例中有40例获完整随访资料，随访率为75.5%。
, 百拇医药
1.2 主要试剂与方法
兔抗人EGFR多克隆抗体(SANTA CRUZ USA)、SP免疫组化试剂盒(ZYMED USA)均购自北京市中山试剂公司。所有蜡块均连续切片，厚约4 μm，常规脱蜡酒精至水，经微波炉抗原修复处理后，用SP免疫组化法进行检测，EGFR抗体稀释度为1∶50。以已知EGFR染色阳性的直肠癌组织切片作为阳性对照，以PBS代替第一抗体作为阴性对照。
1.3 结果判断
参照Tanaka的方法判断结果[1]。EGFR阳性为在细胞膜或胞浆中有棕黄色颗粒，光镜下观察EGFR染色切片5个具有代表性的高倍视野，分别计数200个细胞，共计1 000个细胞，按阳性细胞所占比例分为4级，无阳性细胞为阴性(-)，小于30%为弱阳性(+)，30%～70%为阳性(
)，70%～100%为强阳性()。, 百拇医药
1.4 统计学处理
采用t检验、χ2检验及等级相关分析，P<0.05被认为有统计学意义。
2 结果与讨论
EGFR在癌组织、癌旁组织及正常粘膜中的表达与分布。EGFR阳性产物位于细胞膜细胞浆，以胞膜为主，呈棕黄色颗粒样，散在或弥漫状分布。在15例正常直肠粘膜中均阴性，在癌组织中的表达强度明显高于癌旁组织(P<0.05)(见表1)。
EGFR在癌组织中的表达与各临床病理参数的关系(见表2)。
EGFR的表达与生存期的关系，从所检病例的统计数据看，癌组织EGFR呈阴性和弱阳性表达者(共16例)，患者的生存期平均为52.94±26.9个月，而EGFR呈阳性和强阳性表达者(共24例)的平均生存期为36.29±23.97个月，二者有显著差异(t检验，P<0.05)。
, http://www.100md.com
表1 EGFR在直肠癌组织与癌旁组织中的表达 组织类别
EGFR表达强度
合计
-
+
++
+++
癌组织
15
7
8
23
53
, 百拇医药
癌旁组织
22
9
7
7
45
Spearman 检验 P<0.05表2 EGFR在直肠癌中的表达与各临床病理参数的关系 临床参数
例数
阳性数
阳性率(%)
性别
男
, http://www.100md.com
27
18
66.7
女
26
20
76.9
年龄
<50岁
25
18
72.0
≥50岁
, http://www.100md.com 28
20
71.4
肿瘤大体类型
肿块型
16
12
75.0
溃疡型
35
25
71.4
浸润型
, 百拇医药 2
1
50.0
组织学分型
管状腺癌
47
34
72.3
粘液腺癌与
未分化癌
6
4
66.7
, 百拇医药 组织学分级
Ⅰ+Ⅱ级
39
28
71.8
Ⅲ+Ⅳ级
14
10
71.4
Dukes分期
A+B期
30
17
, http://www.100md.com
56.7△
C+D期
23
21
91.3
△ P<0.05
EGFR基因又称c-erB-1或Her-1基因,为原癌基因之一，定位于人第7号染色体的短臂，其mRNA长约6.8～10 kb,其蛋白产物为EGFR,是一种具有酪氨酸激酶的跨膜糖蛋白受体,与其相应配体表皮生长因子(EGF)、转化生长因子α(TGFα)结合后,激活酪氨酸激酶导致受体本身及细胞内的酪氨酸残基磷酸化,引起细胞铁过度分裂、增殖及恶变。研究表明，食管癌、乳腺癌、膀胱癌和消化道等多种肿瘤细胞可过度表达EGFR，并促进上述癌细胞的生长[2]。本实验中EGFR在正常粘膜中均无表达，而在癌组织与癌旁组织中均高表达，癌组织中表达越强，其分期越晚，生存期也越短。此结果提示高表达的EGFR与直肠癌的发生发展均有关。首先，在多种致癌因子的作用下，正常直肠粘膜向恶性转化，也伴随有EGFR基因活性的增高，EGFR表达亦增高，促进恶性转化的进展，使癌细胞的过度分裂、增殖和向周围组织浸润。同时，肿瘤细胞本身分泌的EGF，TGFα等生长因子，又可以通过自分泌与旁分泌途径，作用于癌组织与癌旁组织，刺激EGFR过度表达，从而形成恶性循环。本实验未发现EGFR的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大体类型及组织学分型与分级有显著相关性。但与Dukes分期有关，EGFR在Dukes C，D期的表达率明显高于A，B期(P<0.05)，这与steele等人的研究结果一致[3]。说明EGFR的高表达有促进直肠癌浸润转移的作用。EGFR的表达与肿瘤病人的预后关系早已受到重视，Hickey等用免疫组化技术证实，EGFR阴性表达的食管癌的生存率明显高于阳性表达者[4]。我们对有完整随访资料的40例直肠癌病人分析发现，EGFR表达阴性、弱阳性者的生存期及生存率明显高于阳性、强阳性表达者(P<0.05)。提示EGFR的表达强度与直肠癌的预后有关，可作为判断直肠癌预后的一项指标。
, 百拇医药
参 考 文 献
1，Tanaka S, Imanishi K, Yoshiara M, et al. Immunoreactive transforming growth factor alpha is commonly present in colorectal neoplasia. Am J Pathol, 1991, 139(1): 123
2，樊代明， 陈元方， 尤 涵. 胃肠肽类激素对消化系统肿瘤生物学行为的调控作用. 中华消化杂志， 1996， 16(4)： 230
3，Steele RJC, Kelly P, Elul B, et al. Epidermal growth factor receptor expression in colorectal cancer. Br J Surg, 1990, 77(2)： 1352
4，Hickey K, Grehan D, Keid IM, et al. Expression of epidermal growth factor receptor and proliferating cell nuclear antigen predicts response of esophogeal sequamous cell carinoma to chemoradiotherapy. Cancer, 1994, 74(6)： 1693
(2000-03-20收稿； 2000-06-27修回), http://www.100md.com