肺炎宁颗粒剂质量标准及稳定性研究
作者：张学农 孙殿甲 李岩
单位：
张学农(新疆医科大学，新疆 乌鲁木齐 830054)；孙殿甲(新疆医科大学，新疆 乌鲁木齐 830054)；李岩(新疆医科大学，新疆 乌鲁木齐 830054)
关键词：肺炎宁颗粒剂；黄酮；比色法
时珍国医国药000315 提要 报道了肺炎宁颗粒剂的质量标准研究。对处方中金银花，大青叶和板蓝根进行了薄层鉴别，以黄酮为指标，比色法进行定量分析，同时考察了3批样品恒温下放置了3个月的稳定性。
中图分类号：R286 文献标识码：A 文章编号：1008-0805(2000)03-0209-01
Quality Standards and Stability of Feiyanning Granules
, 百拇医药
ZHANG Xue-nong, SUN Dian-jia, LI Yan
(Xinjiang Medical University,
rumqi 830054, China)
Abstracts The aim of this paper was to study the quality standards of Feiyanning granules. The honeysuckle, woad and isatis were determined with TLC analysis. With the flavone as the standard, the chromas were also been determined with chromophotometer. At the same time, we researched the stability about three batches of the drugs.
, 百拇医药
Key words Feiyanning granules; Flavone; Chromophotometer
肺炎宁颗粒剂是由金银花、板蓝根、大青叶等9味药材制成的纯中药制剂，具有清热解毒、宣肺化痰、止咳定喘和息风止痉之功效[1，2]。临床用于治疗上呼吸道感染、支气管炎和肺炎已取得了显著疗效。为确保产品质量，本文进行肺炎宁颗粒剂的定性、定量和稳定性试验研究。
1 仪器及材料
754型可见-紫外分光光度计(上海分析仪器厂)；肺炎宁颗粒剂(自制，批号：971126，980120，980125)；绿原酸、靛蓝和靛玉红(均为中国药品生物制品检定所提供)；硅胶 G(青岛海洋化工厂)；其余试剂均为分析纯。
2 制备工艺[3]
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取处方量药材，加入8倍量水，煎煮3次，2.5 h/次，合并煎煮液，过滤，浓缩成1∶1溶液，加乙醇调至含醇量60%，并调节 pH 为8，冷藏，过滤，滤液回收乙醇至稠膏状，按1∶4加入糖粉，制软材，过12目筛制粒，颗粒于60℃以下干燥，整粒分装。
3 薄层层析鉴别
3.1 金银花：取肺炎宁颗粒剂2 g，加甲醇10 ml 提取，过滤，甲醇置水浴浓缩至1 ml 作供试品溶液；取绿原酸对照品溶液，加乙醇制成每1 ml含1 mg 的溶液作为对照品溶液；取金银花药材粉末0.2 g，加乙醇5 ml，浸泡12 h，过滤，滤液作阳性对照溶液；另取除去金银花外的其余处方量药材粉末，加甲醇浸泡12 h，过滤，滤液作空白对照液。吸取供试品溶液10 μl，各对照品溶液 5 μl，照薄层层析法[4]，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶 H 板上，以醋酸乙酯∶甲酸∶水(7∶2.5∶2.5)的上层溶液为展开剂，展开，展距约为13 cm。取出晾干，在紫外灯(365 nm)下检视，供试品溶液与绿原酸对照品溶液和金银花药材对照液在相应的位置上，显相同的黄绿色荧光斑点，而空白对照液无此对应斑点。结果见层析图1。
, 百拇医药
图1 金银花鉴别层析图
A.绿原酸对照品
B.金银花药材对照液
C.供试品溶液(批号：971126)
D.空白对照液 1、2、3.黄绿色荧光
3.2 大青叶、板蓝根：取本品20 g，加氯仿30 ml 回流1.5 h，过滤，滤液浓缩至0.5 ml 作为对照品溶液；分别取大青叶药材粉末0.5 g 和板蓝根粉末0.5 g，各加入氯仿20 ml 回流提取1 h，滤液浓缩至1 ml 作为对照品溶液；另取除去大青叶、板蓝根外的其余处方量药材粉末，照制备方法制成1∶1流浸膏，加乙醇调含醇量至60%，静置过滤，取滤液20 ml 浓缩至干，残渣用40 ml氯仿回流1.5 h，滤液浓缩至1 ml 作为空白对照溶液。照薄层层析法试验，分别吸取供试品溶液，药材对照品溶液和空白对照液各10 μl 吸取靛蓝靛玉红混合对照液5 μl，分别点于同一硅胶 G 板上，以苯∶氯仿∶丙酮(5∶4∶1)为展开剂，展开，供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上，分别显相同的蓝色斑点和浅红色斑点，阴性对照无此斑点，见层析图2。
, 百拇医药
图2 大青叶、板蓝根鉴别层析图
A.靛蓝、靛玉红对照品溶液
B.大青叶药材对照液
C.板蓝根药材对照品溶液
D.供试品溶液(批号：971126)
E.空白对照液
1.浅紫红色 2.蓝色4 含量测定
4.1 标准曲线制备：精密称取芦丁对照品50 mg，置100 ml 量瓶中，加甲醇溶解后稀释至刻度。精密吸取0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0和1.2 ml 置10 ml 量瓶中，加5%亚硝酸钠1.0 ml，放置6 min，加10%硝酸铝1.0 ml，放置6 min，加1 mol/L 氢氧化钠5 ml，混匀，加水至刻度，放置15 min，以第1份溶液作空白对照，于510 ml 处测定吸收度。以浓度对吸收度回归得标准曲线方程为： C=0.098 3 A-7.898 1×10-4， γ=0.999 3。
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4.2 样品测定：取本品约50 g，研成细粉，精密称取8 g，加水200 ml 溶解，精吸20 ml 溶液置分液漏斗中，用水饱和醋酸乙酯脱脂3次，15 ml/次。水层用水饱和正丁醇萃取3次，20 ml/次，合并正丁醇液，减压浓缩至干，残渣用甲醇定容至50 ml，精吸甲醇液5 ml 置25 ml 量瓶中，依照标准曲线“加10%硝酸铝1.0 ml，…”起同法操作，测定吸收度，计算含量。
4.3 加样回收率测定：精密称取已知浓度的样品20 g，加水500 ml 溶解。吸取15份，每份20 ml，平均分成3组，分别加入浓度1 mg/ml 的芦丁对照溶液1，2.5，5 ml，照样品含量测定项下方法处理测定，计算回收率。结果，平均回收率为99.51%，RSD=2.07%( n=5)。
5 含量限度
取3批样品，依照“含量测定”方法操作，测定结果见表1。
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表1 3批样品黄酮含量测定值(
±s，mg/g) 批号
含量测定值
平均含量
1
2
3
4
5
971126
A
0.250
0.261
, http://www.100md.com
0.248
0.246
0.252
C
7.437
7.777
7.376
7.315
7.499
7.481±0.180
980120
A
0.275
, http://www.100md.com
0.265
0.260
0.265
0.260
C
8.210
7.899
7.745
7.899
7.745
7.900±0.190
980125
A
, 百拇医药
0.266
0.270
0.246
0.247
0.258
C
7.929
8.705 2
7.314
7.345
7.683
7.665±0.330
由于3批样品中黄酮含量均在7.0 mg/g 以上，故规定每1 g 样品含黄酮量不得低于5.0 mg/g。
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5 稳定性考察[5]
取本品适量分别置于 RH 75%，(40±1)℃的条件下放置3个月，进行成分鉴别和含量测定。放置前后含量结果见表2。
表2 3批样品放置前后含量 t 检验 批号
放置时间
t/d
含量测定值/mg.g-1
t
1
2
3
, 百拇医药
4
5
971126
0
7.737
7.749
7.361
7.361
7.499
3
7.376
7.438
7.314
, 百拇医药
6.976
7.315
1.73*
980120
0
8.206
7.899
7.745
7.899
7.749
3
7.899
7.745
, 百拇医药
7.438
7.683
7.837
1.53*
980125
0
7.929
8.052
7.314
7.283
7.286
3
7.315
, http://www.100md.com
7.653
7.130
6.946
6.977
1.71*
*P>0.05
薄层层析鉴别放置前后其成分斑点未发生变化。
6 讨论
试验确定了组方中药物主成分金银花、板蓝根和大青叶的薄层层析定量方法。为验证试验的可靠性，同时作了阴性成分的对照。同时，以黄酮化合物为指标进行了含量测定。由恒温恒湿稳定性考察可知，放置前后样品主成分斑点未发生变化，且含量未见明显下降( P>0.05)。表明制备工艺可靠，制剂性质稳定。
, 百拇医药
作者简介：张学农(1962-)，男(汉族)，河南省西平县人，现任新疆医科大学药剂学教研室副教授，硕士研究生导师，在职博士生，研究方向“复方制剂”和“药物靶向制剂”.
参考文献：
[1]王浴生.中药药理与临床[M].北京：人民卫生出版社，1983
[2]江苏医学院.中药大辞典[M].上海：科学技术出版社，1993
[3]张学农，孙殿甲，李 岩，等.正交试验法筛选肺炎冲剂的生产工艺[J].中成药，1995，17(3)∶4
[4]中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典(1995年版Ⅰ部)[M].广州：广东科技出版社，1995∶附录ⅥB
[5]中华人民共和国卫生部药政局.新药审批办法(中药部分)[S].1992
收稿日期：1999-08-30
修订日期：1999-11-18, 百拇医药
单位：
张学农(新疆医科大学，新疆 乌鲁木齐 830054)；孙殿甲(新疆医科大学，新疆 乌鲁木齐 830054)；李岩(新疆医科大学，新疆 乌鲁木齐 830054)
关键词：肺炎宁颗粒剂；黄酮；比色法
时珍国医国药000315 提要 报道了肺炎宁颗粒剂的质量标准研究。对处方中金银花，大青叶和板蓝根进行了薄层鉴别，以黄酮为指标，比色法进行定量分析，同时考察了3批样品恒温下放置了3个月的稳定性。
中图分类号：R286 文献标识码：A 文章编号：1008-0805(2000)03-0209-01
Quality Standards and Stability of Feiyanning Granules
, 百拇医药
ZHANG Xue-nong, SUN Dian-jia, LI Yan
(Xinjiang Medical University,
rumqi 830054, China)Abstracts The aim of this paper was to study the quality standards of Feiyanning granules. The honeysuckle, woad and isatis were determined with TLC analysis. With the flavone as the standard, the chromas were also been determined with chromophotometer. At the same time, we researched the stability about three batches of the drugs.
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Key words Feiyanning granules; Flavone; Chromophotometer
肺炎宁颗粒剂是由金银花、板蓝根、大青叶等9味药材制成的纯中药制剂，具有清热解毒、宣肺化痰、止咳定喘和息风止痉之功效[1，2]。临床用于治疗上呼吸道感染、支气管炎和肺炎已取得了显著疗效。为确保产品质量，本文进行肺炎宁颗粒剂的定性、定量和稳定性试验研究。
1 仪器及材料
754型可见-紫外分光光度计(上海分析仪器厂)；肺炎宁颗粒剂(自制，批号：971126，980120，980125)；绿原酸、靛蓝和靛玉红(均为中国药品生物制品检定所提供)；硅胶 G(青岛海洋化工厂)；其余试剂均为分析纯。
2 制备工艺[3]
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取处方量药材，加入8倍量水，煎煮3次，2.5 h/次，合并煎煮液，过滤，浓缩成1∶1溶液，加乙醇调至含醇量60%，并调节 pH 为8，冷藏，过滤，滤液回收乙醇至稠膏状，按1∶4加入糖粉，制软材，过12目筛制粒，颗粒于60℃以下干燥，整粒分装。
3 薄层层析鉴别
3.1 金银花：取肺炎宁颗粒剂2 g，加甲醇10 ml 提取，过滤，甲醇置水浴浓缩至1 ml 作供试品溶液；取绿原酸对照品溶液，加乙醇制成每1 ml含1 mg 的溶液作为对照品溶液；取金银花药材粉末0.2 g，加乙醇5 ml，浸泡12 h，过滤，滤液作阳性对照溶液；另取除去金银花外的其余处方量药材粉末，加甲醇浸泡12 h，过滤，滤液作空白对照液。吸取供试品溶液10 μl，各对照品溶液 5 μl，照薄层层析法[4]，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶 H 板上，以醋酸乙酯∶甲酸∶水(7∶2.5∶2.5)的上层溶液为展开剂，展开，展距约为13 cm。取出晾干，在紫外灯(365 nm)下检视，供试品溶液与绿原酸对照品溶液和金银花药材对照液在相应的位置上，显相同的黄绿色荧光斑点，而空白对照液无此对应斑点。结果见层析图1。
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图1 金银花鉴别层析图
A.绿原酸对照品
B.金银花药材对照液
C.供试品溶液(批号：971126)
D.空白对照液 1、2、3.黄绿色荧光
3.2 大青叶、板蓝根：取本品20 g，加氯仿30 ml 回流1.5 h，过滤，滤液浓缩至0.5 ml 作为对照品溶液；分别取大青叶药材粉末0.5 g 和板蓝根粉末0.5 g，各加入氯仿20 ml 回流提取1 h，滤液浓缩至1 ml 作为对照品溶液；另取除去大青叶、板蓝根外的其余处方量药材粉末，照制备方法制成1∶1流浸膏，加乙醇调含醇量至60%，静置过滤，取滤液20 ml 浓缩至干，残渣用40 ml氯仿回流1.5 h，滤液浓缩至1 ml 作为空白对照溶液。照薄层层析法试验，分别吸取供试品溶液，药材对照品溶液和空白对照液各10 μl 吸取靛蓝靛玉红混合对照液5 μl，分别点于同一硅胶 G 板上，以苯∶氯仿∶丙酮(5∶4∶1)为展开剂，展开，供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上，分别显相同的蓝色斑点和浅红色斑点，阴性对照无此斑点，见层析图2。
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图2 大青叶、板蓝根鉴别层析图
A.靛蓝、靛玉红对照品溶液
B.大青叶药材对照液
C.板蓝根药材对照品溶液
D.供试品溶液(批号：971126)
E.空白对照液
1.浅紫红色 2.蓝色4 含量测定
4.1 标准曲线制备：精密称取芦丁对照品50 mg，置100 ml 量瓶中，加甲醇溶解后稀释至刻度。精密吸取0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0和1.2 ml 置10 ml 量瓶中，加5%亚硝酸钠1.0 ml，放置6 min，加10%硝酸铝1.0 ml，放置6 min，加1 mol/L 氢氧化钠5 ml，混匀，加水至刻度，放置15 min，以第1份溶液作空白对照，于510 ml 处测定吸收度。以浓度对吸收度回归得标准曲线方程为： C=0.098 3 A-7.898 1×10-4， γ=0.999 3。
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4.2 样品测定：取本品约50 g，研成细粉，精密称取8 g，加水200 ml 溶解，精吸20 ml 溶液置分液漏斗中，用水饱和醋酸乙酯脱脂3次，15 ml/次。水层用水饱和正丁醇萃取3次，20 ml/次，合并正丁醇液，减压浓缩至干，残渣用甲醇定容至50 ml，精吸甲醇液5 ml 置25 ml 量瓶中，依照标准曲线“加10%硝酸铝1.0 ml，…”起同法操作，测定吸收度，计算含量。
4.3 加样回收率测定：精密称取已知浓度的样品20 g，加水500 ml 溶解。吸取15份，每份20 ml，平均分成3组，分别加入浓度1 mg/ml 的芦丁对照溶液1，2.5，5 ml，照样品含量测定项下方法处理测定，计算回收率。结果，平均回收率为99.51%，RSD=2.07%( n=5)。
5 含量限度
取3批样品，依照“含量测定”方法操作，测定结果见表1。
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表1 3批样品黄酮含量测定值(
±s，mg/g) 批号含量测定值
平均含量
1
2
3
4
5
971126
A
0.250
0.261
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0.248
0.246
0.252
C
7.437
7.777
7.376
7.315
7.499
7.481±0.180
980120
A
0.275
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0.265
0.260
0.265
0.260
C
8.210
7.899
7.745
7.899
7.745
7.900±0.190
980125
A
, 百拇医药
0.266
0.270
0.246
0.247
0.258
C
7.929
8.705 2
7.314
7.345
7.683
7.665±0.330
由于3批样品中黄酮含量均在7.0 mg/g 以上，故规定每1 g 样品含黄酮量不得低于5.0 mg/g。
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5 稳定性考察[5]
取本品适量分别置于 RH 75%，(40±1)℃的条件下放置3个月，进行成分鉴别和含量测定。放置前后含量结果见表2。
表2 3批样品放置前后含量 t 检验 批号
放置时间
t/d
含量测定值/mg.g-1
t
1
2
3
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4
5
971126
0
7.737
7.749
7.361
7.361
7.499
3
7.376
7.438
7.314
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6.976
7.315
1.73*
980120
0
8.206
7.899
7.745
7.899
7.749
3
7.899
7.745
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7.438
7.683
7.837
1.53*
980125
0
7.929
8.052
7.314
7.283
7.286
3
7.315
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7.653
7.130
6.946
6.977
1.71*
*P>0.05
薄层层析鉴别放置前后其成分斑点未发生变化。
6 讨论
试验确定了组方中药物主成分金银花、板蓝根和大青叶的薄层层析定量方法。为验证试验的可靠性，同时作了阴性成分的对照。同时，以黄酮化合物为指标进行了含量测定。由恒温恒湿稳定性考察可知，放置前后样品主成分斑点未发生变化，且含量未见明显下降( P>0.05)。表明制备工艺可靠，制剂性质稳定。
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作者简介：张学农(1962-)，男(汉族)，河南省西平县人，现任新疆医科大学药剂学教研室副教授，硕士研究生导师，在职博士生，研究方向“复方制剂”和“药物靶向制剂”.
参考文献：
[1]王浴生.中药药理与临床[M].北京：人民卫生出版社，1983
[2]江苏医学院.中药大辞典[M].上海：科学技术出版社，1993
[3]张学农，孙殿甲，李 岩，等.正交试验法筛选肺炎冲剂的生产工艺[J].中成药，1995，17(3)∶4
[4]中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典(1995年版Ⅰ部)[M].广州：广东科技出版社，1995∶附录ⅥB
[5]中华人民共和国卫生部药政局.新药审批办法(中药部分)[S].1992
收稿日期：1999-08-30
修订日期：1999-11-18, 百拇医药