台湾细叶油柑体内外抗乙肝病毒作用研究
作者：黄正昌 邓学龙 朱宇同 张美义 刘妮 郭兴伯
单位：广州中医药大学热带医学研究所，广州 510405
关键词：@台湾细叶油柑/药理学；@叶下珠/药理学；肝炎病毒，乙型，鸭/药物作用；@2215细胞/药物作用；疾病模型，动物；鸭
广州中医药大学学报000323摘要：为研究叶下珠属植物台湾细叶油柑体内外抗乙肝病毒的作用，应用 2115 细胞株及雏鸭乙型肝炎模型，对台湾细叶油柑水提取物和醇提取物进行了体内外抗乙肝活性实验。结果：台湾细叶油柑水提取物和醇提取物对 HBsAg 分泌均有一定抑制作用，但其醇提物对 HBeAg 的分泌无抑制作用。在体内抗鸭乙肝病毒实验中，台湾细叶油柑水提物 10 g.kg-1.d-1 和 5 g.kg-1.d-1 剂量组于给药 5 d、给药 10 d 和停药 3 d 时有显著体内抑制 DHBV-DNA 作用，而其醇提物则无抑制 DHBV-DNA作用。提示台湾细叶油柑水提取物有抗乙肝病毒作用。
, 百拇医药
中图分类号：R512.6+2 文献标识码：A
文章编号：1007-3213(2000)03-0260-04
Anti-HBV Effect of Phyllanthus Simplex Extracts
in Vivo and in Vitro
HUANG Zhengchang，DENG Xuelong，ZHU Yutong,ZHANG Meiyi，LIU Ni，LI Fengxian
(Tropical Medicine Institute, Guangzhou University of TCM, Guangzhou 510405, China)
, 百拇医药 Abstract: Anti-HBV effect of water extract and alcohol extract of Phyllanthus simplex Retz. from Taiwan was investigated in vivo and in vitro by means of 2215 cell strain and duckling infected with DHBV. The results showed that the water extract and alcohol extract had a certain inhibitory effect on HBsAg, and the alcohol extract showed no inhibitory effect on HBeAg. In vivo, the water extract at the dosage of 10g.kg-1.d-1 and 5g.kg-1.d-1 had an obvious inhibitory effect on DHBV-DNA on the fifth and the tenth day during treatment and the third day after treatment, while the alcohol extract showed no above effect. It is indicated that the water extract of Phyllanthus simplex Retz. exerts an anti-HBV effect.
, http://www.100md.com
Key words: @ PHYLLANTHUS SIMPLEX RETZ. FROM TAIWAN/pharmacology;
@PHYLLANTHUS AMARUS/pharmacology; HEPATITIS B VIRUS, DUCK/drug eff.;
@2215 CELL LINE/ drug eff.; DISEASE MODELS, ANIMAL; DUCKS
1988年 Thyagarajan 报告苦味叶下珠(Phyllanthus amarus)治疗乙肝病毒携带者，可使 59%的患者的HBsAg转阴，引起了国内外很大的关注[1]。之后，国内外纷纷加以实验研究[2～6]或临床验证[7～10]。目前普通叶下珠(Phyllanthus urinaria)在我国已广泛应用于治疗慢性乙型肝炎，临床上用其干燥全草，具有清热利湿、退黄之功效。台湾细叶油柑(Phyllanthus Simplex Retz.)为叶下珠属植物，在南台湾地区资源丰富，其抗嗜肝病毒的实验研究尚未见报道。我们应用2215细胞株和鸭乙肝模型对台湾细叶油柑3种提取物进行了抗HBV活性体内外实验研究，并对其抗病毒作用的有效部位作了初步的探讨。
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1 材料
1.1 药物
台湾细叶油柑采自台湾台东县太麻里农村，台湾细叶油柑水提物、台湾细叶油柑醇提物由广州中医药大学热带医学研究所制剂室提供，无环鸟苷(ACV)购自湖北医药工业研究所。
1.2 2215细胞
引自北京302医院病毒室，用DMEM培养液(GBICO公司产品)，培养液添加10%小牛血清，100kU/L青霉素，100kU/L链霉素，G418(GBICO公司产品)100mg/L，0.03%谷氨酰氨，用0.238% Hepes调pH至6.8。
1.3 动物
雄性1日龄广州麻鸭，体重40～50g，购自广州辛村孵化场，批号98-3-16及98-10-16。
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1.4 材料
鸭乙型肝炎病毒DHBV-DNA强阳性血清，采自上海麻鸭，-70℃保存；NC膜购自Amersham公司；DHBV质粒系医科院医药生物技术所赠送；缺口翻译药盒购自promega公司；a-32p-dCTP，购自北京亚辉公司；Sephadex G-50，购自Pharmacia公司；96孔杂交点样器，美国Bio_rad公司产品；盖革氏计数器，美国S.E.International公司产品。
2 方法和结果
2.1 HBsAg、HBeAg的检测半数毒性浓度测定用MTT法，HBsAg、HBeAg采用华美公司ELISA测定盒检测。用0.06%胰蛋白酶将2215细胞分散成单个细胞悬液，按3×104/孔分种于96孔板，3～4d后换用含药培养液，每个浓度加4孔。药物与细胞作用4d后，再加10%DMEM(含G418)，0.1mL/孔。第8天吸上清采用ELISA测定HBsAg、HBeAg。余下细胞加入400mg/L MTT0.1mL/孔(Sigma公司产品)，37℃5%CO2孵育4h，可见黄黑色甲瓒颗粒。弃去MTT液，加入100%DMSO 0.1mL/孔，待甲瓒颗粒完全溶解(约10min)后，用紫外分光光度计570nm波长测定吸光度D值，空白对照加4孔100%DMSO，0.1mL/孔。按ITI=ρTC50/ρIC50计算出治疗指数(TI)来评价药物临床应用前景(结果见表1)。TC50指50%毒性浓度，是实验孔存活细胞率(p存活)为对照孔50%时的药物浓度，p存活=(D实验孔/D对照孔).100%。IC50指50%抑制浓度，是HBsAg或HBeAg抑制率(p抑制)为50%时的药物浓度，p抑制=[(p/N对照孔-p/N实验孔)/(p/N对照孔-2.1)].100%。ITI>2为有效低毒，1TI<2为低效有毒，TTI<1为毒性作用。
, 百拇医药
表1结果显示，台湾细叶油柑水提物对HBsAg和HBeAg的分泌有抑制作用；台湾细叶油柑醇提物对HBsAg分泌有明显的抑制作用，但对HBeAg的分泌无抑制作用。
2.2 体内鸭乙型肝炎模型药物治疗试验
取1日龄广州麻鸭，经腿胫静脉注射上海麻鸭DHBV_DNA阳性血清，每只0.2 mL。在感染后13d取血，分离血清，-70℃保存待检。DHBV感染雏鸭13d后随机分组进行药物治疗试验，每组7～10只不等。给药组分台湾细叶油柑水提物10g.kg-1.d-1、5g.kg-1.d-1和醇提物10g.kg-1.d-1各1个剂量组，均口服，2次/d，10d为一疗程。另设病毒对照组(DHBV)，以生理盐水代替药物，阳性药用无环鸟苷(ACV)口服，给药10mg.kg-1.d-1，2次/d，10d为1疗程。在感染后第13天(即给药前)、给药5d、给药10d和停药3d，自鸭腿胫静脉取血，分离血清，-70℃保存待检。
, 百拇医药
取上述鸭血清，每批同时点膜，按缺口翻译试剂盒说明书方法，用32P标记DHBV-DNA探针，并作鸭血清斑点杂交，放射自显影膜片斑点，在酶标检测仪上测定D值(滤光片波长为490nm)，计算血清DHBV-DNA密度。结果见表2。
表2显示，第1批筛选试验中台湾细叶油柑水提物10g.kg-1.d-1剂量组于给药10d和停药3d时能显著降低DHBV感染鸭血清DHBV-DNA水平。第2批筛选试验中台湾细叶油柑水提物10g.kg-1.d-1剂量组于给药5d、10d和停药3d时能显著降低DHBV感染鸭血清DHBV-DNA水平，而ACV在给药期间有显著抑制鸭乙肝病毒作用，停药3d后出现反跳。
以平均抑制率来表示台湾细叶油柑两种制剂对DHBV-DNA的抑制作用，按p抑制=(D药前-D给药nd).D药前-1.100%计算其抑制率，取其平均抑制率(p平均抑制)来表示。结果见表3。
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表3显示，第1批筛选试验中台湾细叶柑水提物10g.kg-1.d-1剂量组给药10d时有显著体内抑制鸭乙肝病毒作用，停药3d后抑制DHBV作用持续增强。
第2批试验结果显示台湾细叶油柑水提物5g.kg-1.d-1、10g.kg-1.d-1剂量组于给药期间体内抑制鸭乙肝病毒作用持续增强，停药3d后抑制DHBV作用稍有下降，而台湾细叶油柑醇提物10g.kg-1.d-1剂量组则无抑制鸭乙肝病毒作用，ACV在给药期间有显著抑制鸭乙肝病毒作用，停药3d后抑制DHBV作用显著下降。 表1 台湾细叶油柑2种提取物对HBsAg和HBeAg的抑制效果及其细胞毒性 组 别
ρTC50/(g.L-1)
, 百拇医药
HBsAg)
ρIC50/(g.L-1)
In
HBeAg
ρIC50/(g.L-1)
In
台湾细叶油柑水提物
>50
20.77
>2.41
, 百拇医药
23.03
>2.17
台湾细叶油柑醇提物
30.73
0.12
256.08
50
0.61
表2 台湾细叶油柑在鸭体内对DHBV-DNA的抑制作用(
±s) 实验批次
组 别
w/(g.kg-1)
, 百拇医药
N/只
D(490nm)
药前
用药5d
用药10d
停药3d
1
病毒对照组
/
7
1.12±0.34
0.88±0.40
0.84±0.56
, http://www.100md.com
0.80±0.49
台湾细叶油柑水提物
10
10
1.52±0.13
1.35±0.27
0.66±0.46**
0.27±0.35**
ACV
0.1
7
0.95±0.24
, 百拇医药
0.26±0.13**△△
0.08±0.07**△△
0.63±0.19△
2
病毒对照组
/
8
1.48±0.28
0.98±0.39
1.39±0.35
1.46±0.34
, http://www.100md.com
台湾细叶油柑水提物
10
8
1.50±0.37
0.65±0.38**
0.67±0.48**△△
0.97±0.52*△
台湾细叶油柑水提物
5
8
1.68±0.58
, http://www.100md.com
0.93±0.69*
0.79±0.74*
0.92±0.78*△
台湾细叶油柑醇提物
10
7
1.33±0.44
1.17±0.45
0.99±0.62
1.40±0.42
ACV
, http://www.100md.com
0.1
7
1.56±0.48
0.13±0.07**△△
0.05±0.02**△△
1.84±0.31
.与自身给药前比P<0.05，..P<0.01；△与同批对照组比较P<0.05，△△P<0.01表3 台湾细叶油柑在鸭体内对DHBV-DNA的抑制率 实验
批次
组 别
w/(g.kg-1)
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N/只
p平均抑制/%
药前
用药5d
用药10d
停药3d
1
病毒对照组
/
7
0
24.77
26.47
, 百拇医药
17.21
台湾细叶油柑水提物
10
10
0
18.37
56.93
81.95**
ACV
0.1
7
0
72.78*
, 百拇医药
90.76**
28.73
2
病毒对照组
/
8
0
34.83
5.55
1.64
台湾细叶油柑水提物
10
8
, 百拇医药
0
58.12*
54.89**
31.04
台湾细叶油柑水提物
5
8
0
49.40
57.73**
49.83**
台湾细叶油柑醇提物
, http://www.100md.com
10
7
0
10.44
27.25
-9.44
ACV
0.1
7
0
91.61**
96.25**
-61.25
, 百拇医药
.与同批对照组比较P<0.05，..P<0.01
3 讨论
自苦味叶下珠被发现具有抗乙肝病毒作用以来，澳美等国均曾对我国叶下珠属植物进行了抗乙肝病毒筛选的调查[4，5]，发现品种之间抗乙肝病毒作用大有差异。叶下珠属植物在全世界约有6百多个品种，我国有6亚属、7组、33种、4变种[11]，叶下珠属植物可为草本、灌木或乔木，广泛分布于热带、亚热带与温带。其中普通叶下珠(P.urinaria)及余甘子(P.emblica)在《生草药性备要》及《纲目拾遗》等书中被认为能“平肝清热，利水解毒”。细叶油柑(Phyllanthus Simplex——此品种经广州华南农业大学叶下珠属分类专家李秉滔教授鉴定)在南台湾地区有着丰富资源，其抗嗜肝病毒的实验研究过去尚未见报道。该品种与普通叶下珠及苦味叶下珠有很大区别。开花时，花朵在叶上，朔果成熟时始移至叶下，且有0.3～0.6cm果柄，故颇易分辨。
, 百拇医药
我们的初步实验结果显示：在细胞水平上台湾细叶油柑水提物、醇提物对HBsAg的分泌均呈抑制作用，醇提物对HBeAg分泌无抑制作用；在体内抗鸭乙肝病毒实验中，台湾细叶油柑水提物10g.kg-1.d-1和5g.kg-1.d-1剂量组于给药5d、给药10d和停药3d时有显著体内抑制DHBV-DNA作用，而其醇提物的作用较差，提示其有效成份可能为一种水溶性物质。充分利用台湾细叶油柑资源并进行深入研究，将为抗乙肝病毒药物的开发提供新的来源。
(致谢：广州中医药大学热带医学研究所的李凤仙、王新华、符林春、李国桥老师为本研究提供了大力的帮助，特此致谢!)
作者简介：黄正昌(1948-)，男，第四届台湾传统医学会理事长，广州中医药大学96级硕士研究生
参考文献：
, http://www.100md.com
[1] Thyagavajan S P，Subramen S， Blumberg B S，et al.Effect of Phyllanthus amarus on chronic carriers of hepatitis B virus[J].The Lancet,1988,1:764
[2] Niu Jianzhang,Wang Yanyan,Qiao Ming,et al.Effect of Phyllanthus amarus on duck hepatitis B virus replication in vivo[J].J Med Virol,1990,32:212
[3] 刘庄，傅希贤，张乃健，等.中草药叶下珠不同品种和制剂体外抗乙型肝炎病毒的实验研究[J].中华实验和临床病毒学杂志，1993，11(3)：282
[4] Shead A,Vickery K,Pajkos A,et al.Effects of phyllanthus plant extracts on duck hepatitis B virus in vitro and in vivo[J].Antiviral Res, 1992,18:127
, 百拇医药
[5] Blumberg B S,Millmsn 1,Vateswaran PS,et al.hepatitis B virus and primary hepatocellular carcinoma:treatment of HBV carriers with Phyllanthu amarus[J].Vaccine,1990,8:S86
[6] 张美义，向万明，王耀华，等.云南珠子草调查及其抗病毒作用[J].中国中药杂志，1992，17(5):259
[7] 彭小昌，刘小莉，刘化药.草药叶下珠对 HBsAg 慢性携带者疗效的初步观察[J].中华实验和临床病毒学杂志，1993，7(3):306
[8] Leelarasamee A,Trakulsomboon S,Maunwongyath P,et al.Failure of Phyllanthus amarus to eradicate hepatitis B surface antigen from symptomless carriers [J].The Lancet, 1990,335(8705):1600
[9] 张金龙，何文南，叶平，等.苦味叶下珠治疗慢性 HBV 感染临床观察[J].中国中西医结合肝病杂志，1992，2(1):8
[10] 诸福明，张嘉祺，张教秩，等.福建叶下珠对乙肝病毒标志作用的临床观察[J].中西医结合肝病杂志，1992，2(2)：10
[11] 李秉滔.中国叶下珠属植物的修订[J].植物分类学报，1987，25(5)：371
收稿日期：2000-02-28, 百拇医药
单位：广州中医药大学热带医学研究所，广州 510405
关键词：@台湾细叶油柑/药理学；@叶下珠/药理学；肝炎病毒，乙型，鸭/药物作用；@2215细胞/药物作用；疾病模型，动物；鸭
广州中医药大学学报000323摘要：为研究叶下珠属植物台湾细叶油柑体内外抗乙肝病毒的作用，应用 2115 细胞株及雏鸭乙型肝炎模型，对台湾细叶油柑水提取物和醇提取物进行了体内外抗乙肝活性实验。结果：台湾细叶油柑水提取物和醇提取物对 HBsAg 分泌均有一定抑制作用，但其醇提物对 HBeAg 的分泌无抑制作用。在体内抗鸭乙肝病毒实验中，台湾细叶油柑水提物 10 g.kg-1.d-1 和 5 g.kg-1.d-1 剂量组于给药 5 d、给药 10 d 和停药 3 d 时有显著体内抑制 DHBV-DNA 作用，而其醇提物则无抑制 DHBV-DNA作用。提示台湾细叶油柑水提取物有抗乙肝病毒作用。
, 百拇医药
中图分类号：R512.6+2 文献标识码：A
文章编号：1007-3213(2000)03-0260-04
Anti-HBV Effect of Phyllanthus Simplex Extracts
in Vivo and in Vitro
HUANG Zhengchang，DENG Xuelong，ZHU Yutong,ZHANG Meiyi，LIU Ni，LI Fengxian
(Tropical Medicine Institute, Guangzhou University of TCM, Guangzhou 510405, China)
, 百拇医药 Abstract: Anti-HBV effect of water extract and alcohol extract of Phyllanthus simplex Retz. from Taiwan was investigated in vivo and in vitro by means of 2215 cell strain and duckling infected with DHBV. The results showed that the water extract and alcohol extract had a certain inhibitory effect on HBsAg, and the alcohol extract showed no inhibitory effect on HBeAg. In vivo, the water extract at the dosage of 10g.kg-1.d-1 and 5g.kg-1.d-1 had an obvious inhibitory effect on DHBV-DNA on the fifth and the tenth day during treatment and the third day after treatment, while the alcohol extract showed no above effect. It is indicated that the water extract of Phyllanthus simplex Retz. exerts an anti-HBV effect.
, http://www.100md.com
Key words: @ PHYLLANTHUS SIMPLEX RETZ. FROM TAIWAN/pharmacology;
@PHYLLANTHUS AMARUS/pharmacology; HEPATITIS B VIRUS, DUCK/drug eff.;
@2215 CELL LINE/ drug eff.; DISEASE MODELS, ANIMAL; DUCKS
1988年 Thyagarajan 报告苦味叶下珠(Phyllanthus amarus)治疗乙肝病毒携带者，可使 59%的患者的HBsAg转阴，引起了国内外很大的关注[1]。之后，国内外纷纷加以实验研究[2～6]或临床验证[7～10]。目前普通叶下珠(Phyllanthus urinaria)在我国已广泛应用于治疗慢性乙型肝炎，临床上用其干燥全草，具有清热利湿、退黄之功效。台湾细叶油柑(Phyllanthus Simplex Retz.)为叶下珠属植物，在南台湾地区资源丰富，其抗嗜肝病毒的实验研究尚未见报道。我们应用2215细胞株和鸭乙肝模型对台湾细叶油柑3种提取物进行了抗HBV活性体内外实验研究，并对其抗病毒作用的有效部位作了初步的探讨。
, http://www.100md.com
1 材料
1.1 药物
台湾细叶油柑采自台湾台东县太麻里农村，台湾细叶油柑水提物、台湾细叶油柑醇提物由广州中医药大学热带医学研究所制剂室提供，无环鸟苷(ACV)购自湖北医药工业研究所。
1.2 2215细胞
引自北京302医院病毒室，用DMEM培养液(GBICO公司产品)，培养液添加10%小牛血清，100kU/L青霉素，100kU/L链霉素，G418(GBICO公司产品)100mg/L，0.03%谷氨酰氨，用0.238% Hepes调pH至6.8。
1.3 动物
雄性1日龄广州麻鸭，体重40～50g，购自广州辛村孵化场，批号98-3-16及98-10-16。
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1.4 材料
鸭乙型肝炎病毒DHBV-DNA强阳性血清，采自上海麻鸭，-70℃保存；NC膜购自Amersham公司；DHBV质粒系医科院医药生物技术所赠送；缺口翻译药盒购自promega公司；a-32p-dCTP，购自北京亚辉公司；Sephadex G-50，购自Pharmacia公司；96孔杂交点样器，美国Bio_rad公司产品；盖革氏计数器，美国S.E.International公司产品。
2 方法和结果
2.1 HBsAg、HBeAg的检测半数毒性浓度测定用MTT法，HBsAg、HBeAg采用华美公司ELISA测定盒检测。用0.06%胰蛋白酶将2215细胞分散成单个细胞悬液，按3×104/孔分种于96孔板，3～4d后换用含药培养液，每个浓度加4孔。药物与细胞作用4d后，再加10%DMEM(含G418)，0.1mL/孔。第8天吸上清采用ELISA测定HBsAg、HBeAg。余下细胞加入400mg/L MTT0.1mL/孔(Sigma公司产品)，37℃5%CO2孵育4h，可见黄黑色甲瓒颗粒。弃去MTT液，加入100%DMSO 0.1mL/孔，待甲瓒颗粒完全溶解(约10min)后，用紫外分光光度计570nm波长测定吸光度D值，空白对照加4孔100%DMSO，0.1mL/孔。按ITI=ρTC50/ρIC50计算出治疗指数(TI)来评价药物临床应用前景(结果见表1)。TC50指50%毒性浓度，是实验孔存活细胞率(p存活)为对照孔50%时的药物浓度，p存活=(D实验孔/D对照孔).100%。IC50指50%抑制浓度，是HBsAg或HBeAg抑制率(p抑制)为50%时的药物浓度，p抑制=[(p/N对照孔-p/N实验孔)/(p/N对照孔-2.1)].100%。ITI>2为有效低毒，1
, 百拇医药
表1结果显示，台湾细叶油柑水提物对HBsAg和HBeAg的分泌有抑制作用；台湾细叶油柑醇提物对HBsAg分泌有明显的抑制作用，但对HBeAg的分泌无抑制作用。
2.2 体内鸭乙型肝炎模型药物治疗试验
取1日龄广州麻鸭，经腿胫静脉注射上海麻鸭DHBV_DNA阳性血清，每只0.2 mL。在感染后13d取血，分离血清，-70℃保存待检。DHBV感染雏鸭13d后随机分组进行药物治疗试验，每组7～10只不等。给药组分台湾细叶油柑水提物10g.kg-1.d-1、5g.kg-1.d-1和醇提物10g.kg-1.d-1各1个剂量组，均口服，2次/d，10d为一疗程。另设病毒对照组(DHBV)，以生理盐水代替药物，阳性药用无环鸟苷(ACV)口服，给药10mg.kg-1.d-1，2次/d，10d为1疗程。在感染后第13天(即给药前)、给药5d、给药10d和停药3d，自鸭腿胫静脉取血，分离血清，-70℃保存待检。
, 百拇医药
取上述鸭血清，每批同时点膜，按缺口翻译试剂盒说明书方法，用32P标记DHBV-DNA探针，并作鸭血清斑点杂交，放射自显影膜片斑点，在酶标检测仪上测定D值(滤光片波长为490nm)，计算血清DHBV-DNA密度。结果见表2。
表2显示，第1批筛选试验中台湾细叶油柑水提物10g.kg-1.d-1剂量组于给药10d和停药3d时能显著降低DHBV感染鸭血清DHBV-DNA水平。第2批筛选试验中台湾细叶油柑水提物10g.kg-1.d-1剂量组于给药5d、10d和停药3d时能显著降低DHBV感染鸭血清DHBV-DNA水平，而ACV在给药期间有显著抑制鸭乙肝病毒作用，停药3d后出现反跳。
以平均抑制率来表示台湾细叶油柑两种制剂对DHBV-DNA的抑制作用，按p抑制=(D药前-D给药nd).D药前-1.100%计算其抑制率，取其平均抑制率(p平均抑制)来表示。结果见表3。
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表3显示，第1批筛选试验中台湾细叶柑水提物10g.kg-1.d-1剂量组给药10d时有显著体内抑制鸭乙肝病毒作用，停药3d后抑制DHBV作用持续增强。
第2批试验结果显示台湾细叶油柑水提物5g.kg-1.d-1、10g.kg-1.d-1剂量组于给药期间体内抑制鸭乙肝病毒作用持续增强，停药3d后抑制DHBV作用稍有下降，而台湾细叶油柑醇提物10g.kg-1.d-1剂量组则无抑制鸭乙肝病毒作用，ACV在给药期间有显著抑制鸭乙肝病毒作用，停药3d后抑制DHBV作用显著下降。 表1 台湾细叶油柑2种提取物对HBsAg和HBeAg的抑制效果及其细胞毒性 组 别
ρTC50/(g.L-1)
, 百拇医药
HBsAg)
ρIC50/(g.L-1)
In
HBeAg
ρIC50/(g.L-1)
In
台湾细叶油柑水提物
>50
20.77
>2.41
, 百拇医药
23.03
>2.17
台湾细叶油柑醇提物
30.73
0.12
256.08
50
0.61
表2 台湾细叶油柑在鸭体内对DHBV-DNA的抑制作用(
±s) 实验批次组 别
w/(g.kg-1)
, 百拇医药
N/只
D(490nm)
药前
用药5d
用药10d
停药3d
1
病毒对照组
/
7
1.12±0.34
0.88±0.40
0.84±0.56
, http://www.100md.com
0.80±0.49
台湾细叶油柑水提物
10
10
1.52±0.13
1.35±0.27
0.66±0.46**
0.27±0.35**
ACV
0.1
7
0.95±0.24
, 百拇医药
0.26±0.13**△△
0.08±0.07**△△
0.63±0.19△
2
病毒对照组
/
8
1.48±0.28
0.98±0.39
1.39±0.35
1.46±0.34
, http://www.100md.com
台湾细叶油柑水提物
10
8
1.50±0.37
0.65±0.38**
0.67±0.48**△△
0.97±0.52*△
台湾细叶油柑水提物
5
8
1.68±0.58
, http://www.100md.com
0.93±0.69*
0.79±0.74*
0.92±0.78*△
台湾细叶油柑醇提物
10
7
1.33±0.44
1.17±0.45
0.99±0.62
1.40±0.42
ACV
, http://www.100md.com
0.1
7
1.56±0.48
0.13±0.07**△△
0.05±0.02**△△
1.84±0.31
.与自身给药前比P<0.05，..P<0.01；△与同批对照组比较P<0.05，△△P<0.01表3 台湾细叶油柑在鸭体内对DHBV-DNA的抑制率 实验
批次
组 别
w/(g.kg-1)
, http://www.100md.com
N/只
p平均抑制/%
药前
用药5d
用药10d
停药3d
1
病毒对照组
/
7
0
24.77
26.47
, 百拇医药
17.21
台湾细叶油柑水提物
10
10
0
18.37
56.93
81.95**
ACV
0.1
7
0
72.78*
, 百拇医药
90.76**
28.73
2
病毒对照组
/
8
0
34.83
5.55
1.64
台湾细叶油柑水提物
10
8
, 百拇医药
0
58.12*
54.89**
31.04
台湾细叶油柑水提物
5
8
0
49.40
57.73**
49.83**
台湾细叶油柑醇提物
, http://www.100md.com
10
7
0
10.44
27.25
-9.44
ACV
0.1
7
0
91.61**
96.25**
-61.25
, 百拇医药
.与同批对照组比较P<0.05，..P<0.01
3 讨论
自苦味叶下珠被发现具有抗乙肝病毒作用以来，澳美等国均曾对我国叶下珠属植物进行了抗乙肝病毒筛选的调查[4，5]，发现品种之间抗乙肝病毒作用大有差异。叶下珠属植物在全世界约有6百多个品种，我国有6亚属、7组、33种、4变种[11]，叶下珠属植物可为草本、灌木或乔木，广泛分布于热带、亚热带与温带。其中普通叶下珠(P.urinaria)及余甘子(P.emblica)在《生草药性备要》及《纲目拾遗》等书中被认为能“平肝清热，利水解毒”。细叶油柑(Phyllanthus Simplex——此品种经广州华南农业大学叶下珠属分类专家李秉滔教授鉴定)在南台湾地区有着丰富资源，其抗嗜肝病毒的实验研究过去尚未见报道。该品种与普通叶下珠及苦味叶下珠有很大区别。开花时，花朵在叶上，朔果成熟时始移至叶下，且有0.3～0.6cm果柄，故颇易分辨。
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我们的初步实验结果显示：在细胞水平上台湾细叶油柑水提物、醇提物对HBsAg的分泌均呈抑制作用，醇提物对HBeAg分泌无抑制作用；在体内抗鸭乙肝病毒实验中，台湾细叶油柑水提物10g.kg-1.d-1和5g.kg-1.d-1剂量组于给药5d、给药10d和停药3d时有显著体内抑制DHBV-DNA作用，而其醇提物的作用较差，提示其有效成份可能为一种水溶性物质。充分利用台湾细叶油柑资源并进行深入研究，将为抗乙肝病毒药物的开发提供新的来源。
(致谢：广州中医药大学热带医学研究所的李凤仙、王新华、符林春、李国桥老师为本研究提供了大力的帮助，特此致谢!)
作者简介：黄正昌(1948-)，男，第四届台湾传统医学会理事长，广州中医药大学96级硕士研究生
参考文献：
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[11] 李秉滔.中国叶下珠属植物的修订[J].植物分类学报，1987，25(5)：371
收稿日期：2000-02-28, 百拇医药