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编号:10252131
四君子颗粒抗脾虚动物胃肠细胞损伤的研究
http://www.100md.com 《成都中医药大学学报》 2000年第3期
     作者:曹小玉 杨智梅 彭成

    单位:曹小玉 彭成(成都中医药大学 ,四川 成都 610075);杨智梅(华西医科大学电镜室)

    关键词:四君子颗粒;脾气虚证;动物模型;胃肠细胞

    成都中医药大学学报000317 摘 要: 选用食醋“脾虚”动物模型,研究四君子颗粒对胃肠上皮细胞的影响。结果表明四君子颗粒能改善脾虚症状,纠正胃肠病损,消除细胞变性、坏死脱落的病理变化,恢复细胞、亚细胞、细胞连接的形态,增加细胞表面微绒毛、细胞质颗粒和细胞器的数量。提示四君子颗粒具有胃肠细胞保护、抗脾虚动物胃肠细胞损伤的作用。

    中图分类号: R285.6;R256.3 文献标识码:A 文章编号:1004-0668(2000)03-0032-02

    The Function of Resistance Gastro-intestinal Cellular Damage of
, http://www.100md.com
    “Si- Jun-Zi” Granula to Splenic Asthenia Animal Model

    CAO Xiao-yu YANG Zhi-mei PENG Cheng

    Chengdu University of TCM(Chengdu,610075,China)

    ABSTRACT:The splenic asthenia animal model was made by the method of feeding vinegar to study the influence of “Si-Jun-Zi” granula to gastro-intestinal epithelial cell. The results showed that “Si-Jun-Zi” granula could improve the symptoms of splenic asthenia, correct gastro-intestinal cellular damage eliminate cell degeneration and recover the shape of cell junction, increase the quantity of cell surface microvillus, cytoplasm drops. It was suggested that “Si-Jun-Zi” granula had the function of gastro-intestinal cellular protection and resistance gastro-intestinal cellular damage to splenic asthenia animal model.
, 百拇医药
    KEY WORDS:“Si-Jun-Zi” granula; splenic asthenia; animal model; gastro-intestinal cellular damage granula; splenic asthenia; animal model; gastro-intestinal cellular damage

    脾气虚证主要表现为消化系统的功能障碍[1],胃肠损伤是脾虚的基本表现[2],胃肠细胞的损伤是脾气虚证的前提条件。四君子颗粒是由治疗脾气虚证的基本方剂四君子汤经现代制备工艺研制而成。四君子汤具明显地抗脾虚动物胃肠细胞损伤的作用[3],而四君子颗粒是否仍保持其药效作用,为此我们对其进行了研究。

    1 材料与方法

    1.1 药品
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    ①受试药物:四君子颗粒,由成都中医药大学药学院提供,批号:980712,1g颗粒含原生药3.4 g。用蒸馏水配制成1 g原生药/1 mL的药液备用。②阳性对照药:正大养胃冲剂,由正大青春宝药业有限公司生产,生产批文:浙卫药准字(1993)0376-1号,批号:970930,用蒸馏水配制成0.5 g/mL药液备用。

    1.2 动物

    SD大鼠,雌雄各半,体重165~210 g,由成都中医药大学实验动物研究中心提供,动物合格证号:川实动管质(97)第8号。检疫后备用。

    1.3 实验方法

    取SD大鼠70只,随机分成空白对照组(n=10)、脾虚模型组(n=10)、自然恢复组(n=10)、四君子颗粒小剂量组(n=10)、四君子颗粒中剂量组(n=10)、四君子颗粒大剂量组(n=10)、正大养胃冲剂组(n=10)。食醋法造模[4]10 d,第11~15 d,除空白对照组、脾虚模型组、自然恢复组灌胃生理盐水3.4 mL/kg外,四君子颗粒小剂量组灌胃四君子颗粒药液1.7 mL/kg,四君子颗粒中剂量组灌胃四君子颗粒药液3.4 mL/kg,四君子颗粒大剂量组灌胃四君子颗粒药液6.8 mL/kg,正大养胃冲剂组灌胃正大养胃药液13.6 mL/kg。造模前、造模后、治疗后分别测定体重、24 h摄食量及自发活动,并观察腹形、大便性状。第16d处死动物,常规剖检后,取胃,空肠组织各一块,立即投入10%的甲醛液内固定,石蜡包埋,切片,HE染色,光学显微镜下观察;大鼠在乙醚麻醉下,活体取胃、空肠一段,3%戊二醛、1%多聚甲醛混合液固定,常规电镜制片, H-600型透射电镜观察。
, 百拇医药
    2 实验结果

    2.1 四君子颗粒对脾虚大鼠症状的影响

    动物造模第3 d,出现竖毛、拱背、活动减少;继之倦卧、活动明显减少,摄食下降,体重减轻,腹胀明显,便小干或便溏,肛周污秽,消瘦,被毛失泽。经四君子颗粒治疗后,以上脾虚症状消失。结果详见表1、表2。表1 四君子颗粒对脾虚大鼠体重、摄食量、自发的影响(±s) 组 别

    体重(g)

    24h摄食量(g)

    自发活动(次/5min)

    造模前

    造模后
, 百拇医药
    治疗后

    造模前

    造模后

    治疗后

    造模前

    造模后

    治疗后

    空白

    对照

    173.6±23.24

    188.55±17.05

    191.40±11.96

    19.9±0.14
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    20.9±0.88

    19.3±1.64

    720.6±181.76

    779.7±211.73

    762.9±198.42

    脾虚

    模型

    177.8±20.25

    168.4±24.35*

    21.2±2.45

    13.7±2.48**
, 百拇医药
    815.4±67.96

    589.5±170.47*

    自然

    恢复

    179.1±31.95

    164.35±31.59*

    163.7±29.80*

    21.9±3.76

    16.1±2.34**

    15.4±1.07**
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    785.8±71.21

    552.9±253.16*

    525.3±190.29*

    小剂量

    180.4±41.81

    160.7±44.82*

    172.5±43.77

    20.3±2.44 1

    5.41±1.40**

    21.0±3.45△△
, 百拇医药
    736.6±207.97

    520.2±183.13*

    604.9±254.05

    中剂量

    177.2±34.13

    164.0±52.32*

    183.8±36.73

    20.8±4.27

    16.3±1.70**

    20.9±0.69△△
, 百拇医药
    810.9±249.32

    610.9±94.43*

    748.1±182.95

    大剂量

    177.9±26.40

    165.5±25.56*

    172.3±24.98

    20.1±1.25

    16.8±2.17**

    22.98±1.53△△
, 百拇医药
    780.2±95.61

    524.0±115.81*

    566.2±240.49

    养胃

    冲剂

    177.3±39.25

    164.75±41.77*

    182.1±42.88

    19.3±3.70

    15.8±2.08**

    20.3±2.45△△
, http://www.100md.com
    794.9±87.33

    565.4±216.08*

    700.3±153.67

    与空白对照组比较:*P<0.05,**P<0.01;与自然恢复组比较:△P<0.05,△△P<0.01表2 四君子颗粒对脾虚大鼠大便性状的影响 组 别

    动物数

    (只)

    剂量

    (g/kg)

    造模后

    治疗后
, 百拇医药
    便常

    便小干

    便溏

    便常

    便小干

    便溏

    空白对照

    10

    等容积NS

    10

    0

    10

    10

, 百拇医药     0

    0

    脾虚模型

    10

    等容积NS

    0

    1

    9*

    自然恢复

    10

    等容积NS

    0

    2

, 百拇医药     8*

    6

    3

    1

    小剂量

    10

    1.7

    0

    1

    9*

    10

    0

    0
, 百拇医药
    中剂量

    10

    3.4

    0

    2

    8*

    10

    0

    0

    大剂量

    10

    6.8

    0

, 百拇医药     1

    9*

    10

    0

    0

    养胃冲剂

    10

    6.8

    0

    2

    8*

    9

    1
, 百拇医药
    0

    与空白组比较:*P<0.05。

    2.2 四君子颗粒对脾虚大鼠胃肠组织形态的影响

    剖检观察:脾虚模型组大鼠胃、十二指肠、空肠充血、水肿,胃肠胀气,肠壁变薄;经四君子颗粒治疗后,胃肠病损纠正;自然恢复组胃肠病变仍明显。

    组织病理学观察:脾虚模型组大鼠胃、空肠粘膜破损、脱落,粘膜下充血、水肿,炎性细胞浸润;经四君子颗粒治疗后,胃肠组织病理形态恢复正常;自然恢复组病变仍明显。

    2.3 四君子颗粒对脾虚大鼠胃肠细胞形态的影响

    脾虚模型组大鼠胃、空肠粘膜上皮细胞肿胀,胞核模糊不清,部分上皮细胞坏死、脱落。经四君子颗粒治疗后,胃肠上皮细胞恢复正常。正大养胃冲剂组胃肠上皮细胞基本恢复正常。自然恢复组胃上皮细胞病损仍严重,肠上皮细胞病损有所恢复。详见表3、表4。
, 百拇医药
    表3 四君子颗粒对脾虚大鼠胃粘膜上皮细胞的影响 组 别

    动物数

    (只)

    剂 量

    (g/kg)

    细胞变性

    细胞坏死脱落

    -

    +

    

    

    -

    +
, 百拇医药
    空白对照

    7

    等容积NS

    7

    0

    0

    0

    7

    0

    0

    0

    脾虚模型

    9

    等容积NS
, http://www.100md.com
    0

    2

    4

    3*

    0

    2

    6

    1*

    自然恢复

    7

    等容积NS

    0

    4
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    3

    0*

    0

    4

    2

    1*

    小 剂 量

    8

    1.7

    8

    0

    0

    0
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    6

    2

    0

    0

    中 剂 量

    7

    3.4

    7

    0

    0

    0

    6

    1
, 百拇医药
    0

    0

    大 剂 量

    9

    6.8

    9

    0

    0

    0

    9

    0

    0

    0
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    养胃冲剂

    7

    6.8

    7

    0

    0

    0

    5

    2

    0

    0

    与空白对照组比较:*P<0.05;与自然恢复组比较:△P<0.05表4 四君子颗粒对脾虚大鼠空肠粘膜上皮细胞的影响 组 别
, 百拇医药
    动物数

    (只)

    剂 量

    (g/kg)

    细胞变性

    细胞坏死脱落

    -

    +

    

    

    -

    +
, 百拇医药
    空白对照

    7

    等容积NS

    6

    1

    0

    0

    6

    1

    0

    0

    脾虚模型

    7

    等容积NS
, 百拇医药
    0

    2

    3

    2*

    0

    2

    3

    2*

    自然恢复

    8

    等容积NS

    1

    2
, 百拇医药
    3

    2

    1

    3

    4

    0

    小 剂 量

    8

    1.7

    8

    0

    0

    0

    8
, 百拇医药
    0

    0

    0

    中 剂 量

    8

    3.4

    8

    0

    0

    0

    8

    0

    0
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    0

    大 剂 量

    8

    6.8

    8

    0

    0

    0

    8

    0

    0

    0

    养胃冲剂
, 百拇医药
    8

    6.8

    7

    1

    0

    0

    6

    2

    0

    0

    与空白对照组比较:*P<0.05;与自然恢复组比较:△P<0.05; 与脾虚模型组比较:▲P<0.05

    2.4 四君子颗粒对脾虚大鼠胃肠细胞、亚细胞形态的影响
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    脾虚模型组大鼠胃粘膜上皮细胞表面微绒毛变短、变细、脱落、数量减少,近腔面粘液细胞膜破坏,细胞内容物移出,粘液颗粒减少,主细胞内酶原颗粒减少,线粒体肿胀,线粒体嵴变短、减少或消失,粗面内质网肿胀,细胞连接复合体破坏;空肠吸收上皮细胞表面微绒毛明显脱落、减少、排列紊乱,表面糖衣减少,细胞破坏,连接复合体消失,细胞内线粒体肿大,粗面内质网减少。经四君子颗粒治疗后,胃肠亚细胞病变得以纠正,胃粘膜细胞表面微绒毛、粘液颗粒、酶原颗粒、线粒体、高尔基复合体、粗面内质网增加;空肠吸收上皮细胞表面微绒毛丰富,排列整齐,糖衣丰富,细胞线粒体、高尔基复合体、粗面内质网增加。与自然恢复组比较有明显差异,较正大养胃冲剂组为优。

    3 讨论

    3.1 胃肠上皮细胞损害是脾气虚证的病理基础

    脾虚证动物模型无不出现消化系统的病理损害,脾虚证患者均以消化系统的病变为主。因而,卫生部制定发布的《中药新药治疗脾虚证的临床研究指导原则》中脾虚的主症为(1)胃纳减少或食欲差;(2)大便不正常;(3)食后腹胀,或午后腹胀。王建华教授在总结20年脾胃研究状况时指出“脾虚时主要表现为消化系统的功能障碍”[1]。笔者认为:胃肠的病理损伤是脾虚的基本表现,无论脾虚的始发因素是什么,或为消化系统的疾病引起,或为植物神经系统功能紊乱引起,或为免疫功能低下引起,等等,但只要辨证为“脾虚证”,就必然出现胃肠损害的症状表现和病理变化,这就是异病同证、异病同治的关键所在。本实验结果进一步证明,胃肠上皮细胞表面微绒毛、细胞膜、连接复合体的破坏,细胞内颗粒、线粒体、内质网等细胞器的损害,是脾气虚证的细胞学基础,换而言之,胃肠上皮细胞的损害是脾气虚证的病理基础。
, 百拇医药
    3.2 四君子颗粒对脾虚动物的胃肠细胞保护作用

    胃肠细胞保护(Cytoprotection)是美国生理学家Jacobson根据Robert的发现提出的新概念,指某些物质具有防止或明显减轻有害物质对消化道上皮细胞损伤和坏死作用的能力[5]。本实验结果表明,食醋所致脾虚动物胃肠上皮细胞的损害是脾虚的病理基础。四君子颗粒能消除脾虚症状及胃肠组织形态的病理变化,明显增加动物摄食量、自发活动,对抗胃肠上皮细胞变性、脱落,增加胃肠上皮细胞表面微绒毛、细胞内颗粒,线粒体内质网的数量,恢复细胞膜、细胞连接的亚细胞结构,纠正食醋所致脾虚大鼠胃肠上皮细胞的损害,提示四君子颗粒具有胃肠细胞保护、抗脾虚动物胃肠上皮细胞损伤的作用,其作用机制有待进一步研究。

    基金项目:国家新药研究基金:96-901-05-192; 四川省重点科技项目:98-140 ;四川省学术技术带头人培养基金:4989920
, 百拇医药
    作者简介:曹小玉,女,1965年4月生;副研究馆员;研究方向:疾病动物模型与中药复方药理中医药情报。

    参考文献

    1,王建华.脾胃研究二十年[C].广州中医药大学脾胃研究所二十年,1995.1

    2,彭成,罗亮.过食酸味所致脾虚机理的实验研究[J].山东中医学院学报,1989,13(6):13

    3,彭成,雷载权.四君子汤抗脾虚动物胃肠细胞损伤的研究[J].中药药理与临床,1995,11(6):7

    4,彭成,罗光宇,欧青春等.脾虚动物造模及山药粥对其影响的实验研究[J].成都中医学院学报,1990,13(3):38

    5,Robert A.Current history of cytoprotection[J].Prostaglandians.1981,21(supple):89

    (收稿日期:2000-06-12), http://www.100md.com