中性粘多糖对脑缺血再灌注沙土鼠红细胞β－内啡肽和免疫粘附功能的影响中药安菌凝胶对狐狸阴道加德纳菌病的实验研究
作者：丁素菊 郑惠民 侯晓军 郭峰 王成海
单位：丁素菊(200433 上海市，第二军医大学长海医院神经内科)；郑惠民(200433 上海市，第二军医大学长海医院神经内科)；侯晓军(200433 上海市，第二军医大学长海医院神经内科)；郭峰(长海医院免疫生化室)；王成海(第二军医大学神经生物教研室)
关键词：中性粘多糖；β-内啡肽；免疫粘附功能
中国微循环000309
【摘要】 目的 观察中性粘多糖(neutral mucopolysaccharide NM)对缺血再灌注沙土鼠红细胞β-内啡肽(β-endorphin β-EP)和免疫粘附功能(red cell immune adherence, RCIA)的影响，进一步探讨NM对防治缺血再灌注脑组织损伤的机理 。 方法 采用蒙古种沙土鼠缺血再灌注模型分别测定红细胞β-EP(RBC-β-EP)以及RCIA，观察两者相互关系。结果 提前喂服NM在沙土鼠缺血再灌注时RBC-β-EP含量明显降低，RCIA能力增强；随RBC-β-EP含量下降，RCIA功能有所加强。结论 NM在沙土鼠脑缺血再灌注时具有阻断RBC-β-EP的过度产生有助于改善红细胞免疫功能的作用 。
, 百拇医药
The Study on the Effect of NM Upon RBC-β-EP and RCIA During Cerebral Ischemia-repe-rfusion in Gerbil
Ding Suju,Zhen Huimin,Hou Xiaojun,et al.
(Department of Neurology, Changhai Hospital, The Second Military Medical University, Shanghai, 200433)
【Abstract】 Objective. To investigate the effect of NM upon RBC-β-EP anf RCIA during cerebral ischemia_reperfusion in gerbil and to probe into the protective effect of NM upon brain damage following cerebral ischemia and reperfusion.Methods RCIA and RBC-β-EP were both measured in models of cerebral ischmia and reperfusion of Mongolian gerbil. Results RBC-β-EP decreases markedly while RCIA strengthens during cerebral ischemia and reperfusion in gerbil pretreated with NM. Conclusions RBC-β-EP promoted the function of RCIA, excessive amounts of RBC-β-EP inhibited the function of RCIA. This suggests that NM can block RBC-β-EP production. It contributes to improve the function of RCIA in cerebral ischemia reperfusion.
, 百拇医药
【Key words】 Neutral mucopolysaccharide β-endorphin Immune adherence
β-内啡肽(β-EP)与缺血性脑细胞损伤有密切关系[1]。在应激状况下β-EP起着免疫调节作用。已知红细胞膜上有β-EP受体，胞内有β-EP。一定浓度β-EP对红细胞免疫粘附功能具有调控作用[2]。有资料证实中性粘多糖(neutral mucopolysaccharide NM)对沙土鼠缺血脑区β-EP的含量有影响[3]。本文旨在观察NM对脑缺血再灌注沙土鼠RBC-β-EP和RCIA功能的影响。
材料和方法
1 实验对象与分组 蒙古种沙土鼠(Mongolian gerbil简称沙鼠)51只，雌雄不拘，体重66.01±8.3g。随机将实验沙鼠分为5组：假手术对照组(对照组)11只；单纯脑缺血60min组(缺血组)11只；脑缺血60min后再灌注30min组(再灌注组)11只；NM组9只；淀粉组(治疗对照组)9只。
, 百拇医药
2 实验方法
2.1 脑缺血模型的制作 用3%戊巴比妥钠(35mg/kg)腹腔注射使沙鼠麻醉，固定在小手术板上，取颈正中切口，分离暴露双侧颈总动脉，用银制GS-30血管夹夹闭双侧颈总动脉，阻断血流60min，造成沙鼠完全性脑缺血。缺血组断头将鼠体倒置于抗凝漏斗中央，使血流入抗凝试管内，同时轻轻地摇晃试管防止血凝。再灌注组去除血管夹，恢复血流30min后断头按上述方法取血。正常对照组除不阻断颈总动脉，余步骤与缺血组相同。NM组术前20d每日服NM40mg/kg。淀粉组以同样剂量连服淀粉20d，其余实验步骤与再灌注组。
2.2 红细胞混悬液和抽提液的制备[4] 取抗凝全血0.1ml加生理盐水0.6ml置入预先备有小牛血清0.2ml的塑料试管中，再加DMSO(Dimethylsufoxid)0.1ml配制成DMSO及小牛血清作为冷冻保护剂的细胞混悬液置于液氮中待测RCIA。剩余的抗凝全血用生理盐水洗 涤3次，每次1500r/min离心10min，得压积红细胞。再取双蒸水与压积红细胞以4：1比例稀释，摇匀，充分溶血，加入95%乙醇/氯仿(5：3v/v)0.4ml，置旋涡混匀器抽提1min，再以3000r/min离心3min，取上清液置-60℃低温箱待测RBC-β-EP。
, 百拇医药
3 RCIA功能及RBC-β-EP含量测定 从液氮中取出标本迅速置于41℃温水浴箱内，1min内完成复温。标本复温后依次用5%、 25%、0.9%的氯化钠溶液以1500r/min离心5min，洗涤3次。分别测定红细胞
C3 b受体花环率(RBC-C3 bRR)和红细胞免疫复合物花环率(RBC-ICR)[5]。RBC-β-EP含量采用放射免疫分析法检测。
结 果
1 RBC-β-EP、RCIA测定结果 RBC-β-EP单纯缺血组含量轻度增高(P<0.05)，再灌注组明显增高(P<0.01)。RBC-C3 bRR单纯缺血组轻度下降，但相差不明显(P>0.05)。再灌注组明显下降(P<0.001)。RBC-ICR单纯缺血组明显增高(P<0.01)，但再灌注组增高更明显(P<0.001)。见表1。
, 百拇医药 表1 脑缺血再灌注时NM对沙土鼠红细胞RCIA、β-EP测定结果(
±s)
组别
n
RBC-C3BRR(%)
RBC-ICR(%)
RBC-β-EP(pg/gHb)
对照组
11
28.45±3.75
17.82±3.74
, 百拇医药
479.24±45.15
缺血组
11
25.41±4.93
22.36±4.94**
486.71±45.27*
再灌组
11
20.80±5.13***
29.64±3.47***
501.47±43.07**
, 百拇医药
NM组
9
26.03±3.64△▲
23.46±3.74△△
472.36±39.10△△▲
淀粉组
9
21.44±4.06
30.07±4.01
498.26±42.37
与对照组比较：* P<0.05 ** P<0.1 *** P<0.001
, 百拇医药
与再灌组比较：△ P<0.05 △△P<0.01
与淀粉组比较：▲ P<0.05
2 NM对 RBC-β-EP、RCIA功能的影响 NM组RBC-C3bRR与对照组及缺血组比较相差不明显(P>0.05)，比再灌注组及淀粉组明显升高(P<0.05)；NM组RBC-ICR虽末下降到对照组及缺血组水平，但比再灌注组下降明显(P<0.01)。淀粉组RBC-C3bRR均未恢复到对照组水平，RBC-ICR也未下降。NM组RBC-β-EP与对照组及缺血组比较虽有所下降，但不明显(P>0.05)，比再灌注组下降明显(P<0.01)，比淀粉组也有所下降(P<0.05)，淀粉组 RBC-β-EP下降不明显。提示NM可使沙土鼠再灌注时RBC免疫粘附功能有所恢复，并降低 RBC-β-EP含量。
讨 论
β-EP是人体产生的一种短链神经肽，在体内对免疫系统具有重要的调节作用。红细胞有多种免疫功能，其中最重要的是RCIA功能。红细胞表面存在免疫粘附受体-补体C3b(补体受体I complement receptor type I, CRI)它是RCIA功能的主要物质，能吸附抗原-抗体形成的免疫复合物和旁路激活粘附补体的抗原使之清除。红细胞膜上也有β-EP受体，胞内有β-EP[6]，不同浓度β-EP对红细胞免疫有一定影响。我们以往的实验证实[7]，单纯缺血虽然可造成RBC-β-EP含量轻度升高，但一定浓度的RBC-β-EP可促成红细胞免疫功能增强，所以在单纯缺血时RCIA功能下降并不明显，而血流再灌注时RBC-β-EP含量明显增高，RCIA功能受到明显抑制。NM系从猪十二指肠粘膜中提取、分离、纯化和精制后所得的生化制品，含有氨基已糖、唾液酸和中性糖等单体成分。本研究表明NM能在沙鼠再灌注时明显抑制RBC-β-EP产生，从而使RCIA功能不受影响。其作用机制可能是NM作用在红细胞膜上β-EP受体，使β-EP含量减少，减轻C3b受体构型改变保护RCIA功能，但有待进一步证实。因此，NM在缺血再灌注时能阻断β-EP的过度产生有助于改善红细胞免疫粘附功能的作用。
, 百拇医药
上海市自然科学资金资助项目
参考文献
1，Fried RL, Nowak TS. Opioid peptide levels in gerbil brain after transient ischemic lasting depletion of hippocampal dynorphin. Stroke. 1987,18(4):765
2，黄盛东，郭峰.β内啡肽对红细胞免疫粘附的促进作用.中国免疫学杂志.1991，7(supply):10
3，管阳太，郑惠民，史荫锦.中性粘多糖对沙土鼠缺血脑区β-内啡肽和强啡肽A1～13的影响.第二军医大学学报.1994，15(2)：151
4，李川晟，郭峰，雷从民.红细胞经深低温冷冻后免疫功能的变化.中国实验与临床免疫杂志.1991，3(4)：16
, 百拇医药
5，郭峰，虞紫茜，赵中年.红细胞免疫功能的初步研究.中华医学杂志.1982，62(12)：715
6，Abood LG, Atkinson GH, Macneil M. Stereospecific opiate binding in human erythrocyte membrances and changes in heroid addicts. J Neurosci Res.1976,2:427
7，丁素菊，郑惠民，侯晓军.沙土鼠缺血再灌注时红细胞β-内啡肽对红细胞免疫粘附功能调控的研究.中风与神经疾病杂志.1998，15(4)：201
(收稿：1999-02-05)
中国微生态学杂志 2000年第4期第12卷 论著
中药安菌凝胶对狐狸阴道加德纳菌病的实验研究
作者：侯朝晖 杨景云 任力 阎新华 侯智韬
单位：侯朝晖 任力(空军总医院 妇产科，北京100036)；杨景云(佳木斯大学医学院)；阎新华(中国农科院特产研究所)；侯智韬(吉林市药品检验所)
关键词：狐狸加德纳菌病；细菌性阴道病；阴道菌群；中药；治疗., http://www.100md.com
单位：丁素菊(200433 上海市，第二军医大学长海医院神经内科)；郑惠民(200433 上海市，第二军医大学长海医院神经内科)；侯晓军(200433 上海市，第二军医大学长海医院神经内科)；郭峰(长海医院免疫生化室)；王成海(第二军医大学神经生物教研室)
关键词：中性粘多糖；β-内啡肽；免疫粘附功能
中国微循环000309
【摘要】 目的 观察中性粘多糖(neutral mucopolysaccharide NM)对缺血再灌注沙土鼠红细胞β-内啡肽(β-endorphin β-EP)和免疫粘附功能(red cell immune adherence, RCIA)的影响，进一步探讨NM对防治缺血再灌注脑组织损伤的机理 。 方法 采用蒙古种沙土鼠缺血再灌注模型分别测定红细胞β-EP(RBC-β-EP)以及RCIA，观察两者相互关系。结果 提前喂服NM在沙土鼠缺血再灌注时RBC-β-EP含量明显降低，RCIA能力增强；随RBC-β-EP含量下降，RCIA功能有所加强。结论 NM在沙土鼠脑缺血再灌注时具有阻断RBC-β-EP的过度产生有助于改善红细胞免疫功能的作用 。
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The Study on the Effect of NM Upon RBC-β-EP and RCIA During Cerebral Ischemia-repe-rfusion in Gerbil
Ding Suju,Zhen Huimin,Hou Xiaojun,et al.
(Department of Neurology, Changhai Hospital, The Second Military Medical University, Shanghai, 200433)
【Abstract】 Objective. To investigate the effect of NM upon RBC-β-EP anf RCIA during cerebral ischemia_reperfusion in gerbil and to probe into the protective effect of NM upon brain damage following cerebral ischemia and reperfusion.Methods RCIA and RBC-β-EP were both measured in models of cerebral ischmia and reperfusion of Mongolian gerbil. Results RBC-β-EP decreases markedly while RCIA strengthens during cerebral ischemia and reperfusion in gerbil pretreated with NM. Conclusions RBC-β-EP promoted the function of RCIA, excessive amounts of RBC-β-EP inhibited the function of RCIA. This suggests that NM can block RBC-β-EP production. It contributes to improve the function of RCIA in cerebral ischemia reperfusion.
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【Key words】 Neutral mucopolysaccharide β-endorphin Immune adherence
β-内啡肽(β-EP)与缺血性脑细胞损伤有密切关系[1]。在应激状况下β-EP起着免疫调节作用。已知红细胞膜上有β-EP受体，胞内有β-EP。一定浓度β-EP对红细胞免疫粘附功能具有调控作用[2]。有资料证实中性粘多糖(neutral mucopolysaccharide NM)对沙土鼠缺血脑区β-EP的含量有影响[3]。本文旨在观察NM对脑缺血再灌注沙土鼠RBC-β-EP和RCIA功能的影响。
材料和方法
1 实验对象与分组 蒙古种沙土鼠(Mongolian gerbil简称沙鼠)51只，雌雄不拘，体重66.01±8.3g。随机将实验沙鼠分为5组：假手术对照组(对照组)11只；单纯脑缺血60min组(缺血组)11只；脑缺血60min后再灌注30min组(再灌注组)11只；NM组9只；淀粉组(治疗对照组)9只。
, 百拇医药
2 实验方法
2.1 脑缺血模型的制作 用3%戊巴比妥钠(35mg/kg)腹腔注射使沙鼠麻醉，固定在小手术板上，取颈正中切口，分离暴露双侧颈总动脉，用银制GS-30血管夹夹闭双侧颈总动脉，阻断血流60min，造成沙鼠完全性脑缺血。缺血组断头将鼠体倒置于抗凝漏斗中央，使血流入抗凝试管内，同时轻轻地摇晃试管防止血凝。再灌注组去除血管夹，恢复血流30min后断头按上述方法取血。正常对照组除不阻断颈总动脉，余步骤与缺血组相同。NM组术前20d每日服NM40mg/kg。淀粉组以同样剂量连服淀粉20d，其余实验步骤与再灌注组。
2.2 红细胞混悬液和抽提液的制备[4] 取抗凝全血0.1ml加生理盐水0.6ml置入预先备有小牛血清0.2ml的塑料试管中，再加DMSO(Dimethylsufoxid)0.1ml配制成DMSO及小牛血清作为冷冻保护剂的细胞混悬液置于液氮中待测RCIA。剩余的抗凝全血用生理盐水洗 涤3次，每次1500r/min离心10min，得压积红细胞。再取双蒸水与压积红细胞以4：1比例稀释，摇匀，充分溶血，加入95%乙醇/氯仿(5：3v/v)0.4ml，置旋涡混匀器抽提1min，再以3000r/min离心3min，取上清液置-60℃低温箱待测RBC-β-EP。
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3 RCIA功能及RBC-β-EP含量测定 从液氮中取出标本迅速置于41℃温水浴箱内，1min内完成复温。标本复温后依次用5%、 25%、0.9%的氯化钠溶液以1500r/min离心5min，洗涤3次。分别测定红细胞
C3 b受体花环率(RBC-C3 bRR)和红细胞免疫复合物花环率(RBC-ICR)[5]。RBC-β-EP含量采用放射免疫分析法检测。
结 果
1 RBC-β-EP、RCIA测定结果 RBC-β-EP单纯缺血组含量轻度增高(P<0.05)，再灌注组明显增高(P<0.01)。RBC-C3 bRR单纯缺血组轻度下降，但相差不明显(P>0.05)。再灌注组明显下降(P<0.001)。RBC-ICR单纯缺血组明显增高(P<0.01)，但再灌注组增高更明显(P<0.001)。见表1。
, 百拇医药 表1 脑缺血再灌注时NM对沙土鼠红细胞RCIA、β-EP测定结果(
±s)组别
n
RBC-C3BRR(%)
RBC-ICR(%)
RBC-β-EP(pg/gHb)
对照组
11
28.45±3.75
17.82±3.74
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479.24±45.15
缺血组
11
25.41±4.93
22.36±4.94**
486.71±45.27*
再灌组
11
20.80±5.13***
29.64±3.47***
501.47±43.07**
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NM组
9
26.03±3.64△▲
23.46±3.74△△
472.36±39.10△△▲
淀粉组
9
21.44±4.06
30.07±4.01
498.26±42.37
与对照组比较：* P<0.05 ** P<0.1 *** P<0.001
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与再灌组比较：△ P<0.05 △△P<0.01
与淀粉组比较：▲ P<0.05
2 NM对 RBC-β-EP、RCIA功能的影响 NM组RBC-C3bRR与对照组及缺血组比较相差不明显(P>0.05)，比再灌注组及淀粉组明显升高(P<0.05)；NM组RBC-ICR虽末下降到对照组及缺血组水平，但比再灌注组下降明显(P<0.01)。淀粉组RBC-C3bRR均未恢复到对照组水平，RBC-ICR也未下降。NM组RBC-β-EP与对照组及缺血组比较虽有所下降，但不明显(P>0.05)，比再灌注组下降明显(P<0.01)，比淀粉组也有所下降(P<0.05)，淀粉组 RBC-β-EP下降不明显。提示NM可使沙土鼠再灌注时RBC免疫粘附功能有所恢复，并降低 RBC-β-EP含量。
讨 论
β-EP是人体产生的一种短链神经肽，在体内对免疫系统具有重要的调节作用。红细胞有多种免疫功能，其中最重要的是RCIA功能。红细胞表面存在免疫粘附受体-补体C3b(补体受体I complement receptor type I, CRI)它是RCIA功能的主要物质，能吸附抗原-抗体形成的免疫复合物和旁路激活粘附补体的抗原使之清除。红细胞膜上也有β-EP受体，胞内有β-EP[6]，不同浓度β-EP对红细胞免疫有一定影响。我们以往的实验证实[7]，单纯缺血虽然可造成RBC-β-EP含量轻度升高，但一定浓度的RBC-β-EP可促成红细胞免疫功能增强，所以在单纯缺血时RCIA功能下降并不明显，而血流再灌注时RBC-β-EP含量明显增高，RCIA功能受到明显抑制。NM系从猪十二指肠粘膜中提取、分离、纯化和精制后所得的生化制品，含有氨基已糖、唾液酸和中性糖等单体成分。本研究表明NM能在沙鼠再灌注时明显抑制RBC-β-EP产生，从而使RCIA功能不受影响。其作用机制可能是NM作用在红细胞膜上β-EP受体，使β-EP含量减少，减轻C3b受体构型改变保护RCIA功能，但有待进一步证实。因此，NM在缺血再灌注时能阻断β-EP的过度产生有助于改善红细胞免疫粘附功能的作用。
, 百拇医药
上海市自然科学资金资助项目
参考文献
1，Fried RL, Nowak TS. Opioid peptide levels in gerbil brain after transient ischemic lasting depletion of hippocampal dynorphin. Stroke. 1987,18(4):765
2，黄盛东，郭峰.β内啡肽对红细胞免疫粘附的促进作用.中国免疫学杂志.1991，7(supply):10
3，管阳太，郑惠民，史荫锦.中性粘多糖对沙土鼠缺血脑区β-内啡肽和强啡肽A1～13的影响.第二军医大学学报.1994，15(2)：151
4，李川晟，郭峰，雷从民.红细胞经深低温冷冻后免疫功能的变化.中国实验与临床免疫杂志.1991，3(4)：16
, 百拇医药
5，郭峰，虞紫茜，赵中年.红细胞免疫功能的初步研究.中华医学杂志.1982，62(12)：715
6，Abood LG, Atkinson GH, Macneil M. Stereospecific opiate binding in human erythrocyte membrances and changes in heroid addicts. J Neurosci Res.1976,2:427
7，丁素菊，郑惠民，侯晓军.沙土鼠缺血再灌注时红细胞β-内啡肽对红细胞免疫粘附功能调控的研究.中风与神经疾病杂志.1998，15(4)：201
(收稿：1999-02-05)
中国微生态学杂志 2000年第4期第12卷 论著
中药安菌凝胶对狐狸阴道加德纳菌病的实验研究
作者：侯朝晖 杨景云 任力 阎新华 侯智韬
单位：侯朝晖 任力(空军总医院 妇产科，北京100036)；杨景云(佳木斯大学医学院)；阎新华(中国农科院特产研究所)；侯智韬(吉林市药品检验所)
关键词：狐狸加德纳菌病；细菌性阴道病；阴道菌群；中药；治疗., http://www.100md.com