雌激素受体在大鼠和兔血管的分布
作者：胡玉珍 张庆红 张万会 陈亚琼 赵玉峰 高瞻
单位：胡玉珍(第四军医大学：基础部生理学教研室)；张庆红(第四军医大学：基础部生理学教研室)；张万会(第四军医大学：基础部生理学教研室)；陈亚琼(西京医院妇产科， 陕西 西安 710032)；赵玉峰(第四军医大学：基础部生理学教研室)；高瞻(第四军医大学：基础部生理学教研室)
关键词：血管；受体,雌激素；免疫组织化学；大鼠；兔
心脏杂志000406摘要：目的： 观察ER两个亚型α和β在大鼠和兔血管的表达。方法：应用种属特异性抗体(兔抗大鼠ER α和羊抗大鼠ER β抗体)进行免疫组织化学染色。结果：ERα和ERβ免疫反应阳性物质位于细胞核内，阳性细胞主要分布于血管内膜、外膜及肌层。结论：在大鼠和兔血管分布有ERα和ERβ免疫反应阳性细胞，提示两者在介导雌激素的作用中有重要功能。
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中图分类号：Q578 文献标识码：A 文章编号：1005-3271(2000)04-0265-02
Distribution of estrogen receptor in the vascular of rat and rabbit
HU Yu-zhen ZHANG Qing-hong ZHANG Wan-hui ZHAO Yu-feng Gao Zhan
(Department of Physiology)
CHEN Ya-qiong
(Department of Obstetric & Gynecology, Xijing Hospital， Fourth Military Medical University, Xi'an Shaanxi 710032， China)
, 百拇医药
Abstract: AIM: To study the distribution of estrogen receptor α and β in the blood vessel of rats and rabbits. METHODS: The immuno-histochemical technique was used. RESULTS: ER α-immunoreactive(ir) and ER β-ir production was shown in the nucleus. ER α-ir cells are seen in the intima, media and tunica adventitia of blood vessel. ER β-ir are dispersed in the intima and tunica adventitia of rabbit and rat. CONCLUSIONS: The two subtypes of estrogen receptor are distributed in the blood vessel of rats and rabbits. It suggests that they play impontant role in mediating the effect of estrogen in the blood vessel.
, 百拇医药
Key words: vascular; receptors,estrogen; immunohistochemistry; rat; rabbit
雌激素受体(ER)有两种，即ER α和ER β。近年，观察到雌激素受体在心血管系统中也有分布, 雌激素与ER结合，发挥其对心血管系统的保护作用[1,2] ，并且雌激素的这种作用日益受到人们的关注。它们在血管中的分布、性别差异及雌激素水平对其表达的影响报道较少。本实验运用免疫组化的方法研究了ER在血管中的分布，为阐明雌激素对血管的作用及机制提供实验根据。
1 材料与方法
1.1 抗体与试剂 兔抗大鼠ER α和羊抗大鼠ER β抗体(Santa Cruz 公司)。生物素化的鼠抗兔或鼠抗羊(Sigma公司)，ABC复合物(Sigma公司)，葡萄糖氧化酶(Worthington 公司)。ABC试剂盒和DAB均购自Sigma公司。
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1.2 实验动物 选用正常成年SD大鼠，雌雄不拘，体重200±10 g，正常健康家兔2.0～2.5 kg，雌雄不拘。由第四军医大学实验动物中心提供。
1.3 标本制备 大鼠用戊巴比妥钠腹腔麻醉(30 mg/kg)，家兔用3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉。动物麻醉后，开胸取其主动脉，用生理盐水20 ml冲洗血管中血液，将血管标本固定于Bouin's液中4～6 h，常规石腊包埋，血管切片,厚5 μm,行免疫组化染色。
1.4 免疫组织化学染色 染色步骤：石蜡切片常规脱蜡至水，0.01 mol/L PBS(pH7.4)洗3次，每次5 min，入含10 ml/L H2O2甲醇PBS中15 min，以消除组织的内源性过氧化物酶。PBS冲洗3次,各5 min。加入20 ml/L正常羊血清，室温孵育30 min。PBS洗3次,各5 min，加兔抗大鼠ER α多克隆抗体(1∶1000)或羊抗大鼠ERβ抗体(1∶1000)，孵育切片(室温20℃，24 h)。PBS冲洗后，加入生物素化的鼠抗兔或鼠抗羊二抗(1：500)，室温孵育2 h ，经PBS冲洗，加入AB复合物(1：500)，室温孵育2 h ，PBS水洗后, 用葡萄糖氧化酶-硫酸镍铵法呈色。常规脱水、透明、中性树胶封片。Olympus显微镜下进行观察并摄影。
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对照试验：阴性对照片不加一抗,或用正常羊或兔血清代替一抗孵育切片，其余步骤同上,Olympus显微镜下观察,结果为阴性。
2 结果
在正常大鼠血管可见到ER免疫反应阳性，ER α和ER β免疫反应阳性物质位于细胞核内呈黑蓝色(见图1)，ER α阳性细胞主要分布于血管内膜、外膜及肌层。ER β阳性细胞主要分布于血管内膜和外膜, ER α和ER β的表达和分布未见明显的性别差异，阴性对照未见有阳性产物着色。
3 讨论
大量的实验证明，雌激素对血管壁有直接作用，提示血管内皮细胞介导该作用，雌激素可以刺激内皮细胞生成前列腺素(PG)和一氧化氮(NO)[3]，由雌激素受体介导。ER属于配体激活的转录因子受体超家族，雌激素受体在血管舒张和细胞增殖中都有作用[4]。
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雌激素受体的数目和小鼠大动脉中内皮细胞的NO的基础释放有显著的相关性。血管ER受体的降低，可能是心血管疾病的一个危险因子[5]。有报道，在生殖系统的血管内膜存在ER α，他们的数量受雌激素水平调控。
本实验通过对大鼠和兔血管中的ER α和ER β免疫反应阳性细胞分布的研究，提示两者在介导雌激素的作用中有重要功能。
图 1 雌激素受体在大鼠(A,B)和兔大动脉(C,D)中的分布
A: ER α, B: ER β, C: ER α, D: ER β
ER β的作用之一是调控ER α的转录活性[1]，异源二聚体的形成在血管对17-β雌二醇的反应中有很大的影响，是选择作用的基础。实验证明ER α和ER β在大鼠和兔的血管中都有表达，但其分布不同。这两个亚型在血管中的相对表达水平决定了血管对雌激素拮抗剂或协同剂的不同反应。
, 百拇医药
参考文献：
[1] Karas RH, Patterson BL, Mendelsohn ME. Human vascular smooth muscle cells contain functional estrogen receptor[J]. Circulation, 1994, 89(5): 1943.
[2] Grohe C, Kahlert K, Van EM, et al. Effects of moediprilat on oestrogen-stimulated cardiac fibroblast growth[J]. Br J Pharmacol, 1997,121(7):1350.
[3] Mikkola T,Viinikka L,Ylikorkala O. Estrogen and postmenopausal estrogen/progestin therapy: effect on endothelium-dependent prostacyclin, nitric oxide and endothelin-1 production[J]. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol,1998,79(1): 75.
, 百拇医药
[4] Perrot J,Applanat M. Estrogen receptors in the cardiovascular system[J]. Steroids,1996, 61(4): 215.
[5] Rubanyi GM,Freay AD, Kauser K et al. Vascular estrogen receptors and endothelium-derived nitric oxide production in the mouse aorta. Gender difference and effect of estrogen receptor gene disruption[J]. J Clin Invest, 1997, 99(10): 2429.
(收稿 2000-05-09), 百拇医药
单位：胡玉珍(第四军医大学：基础部生理学教研室)；张庆红(第四军医大学：基础部生理学教研室)；张万会(第四军医大学：基础部生理学教研室)；陈亚琼(西京医院妇产科， 陕西 西安 710032)；赵玉峰(第四军医大学：基础部生理学教研室)；高瞻(第四军医大学：基础部生理学教研室)
关键词：血管；受体,雌激素；免疫组织化学；大鼠；兔
心脏杂志000406摘要：目的： 观察ER两个亚型α和β在大鼠和兔血管的表达。方法：应用种属特异性抗体(兔抗大鼠ER α和羊抗大鼠ER β抗体)进行免疫组织化学染色。结果：ERα和ERβ免疫反应阳性物质位于细胞核内，阳性细胞主要分布于血管内膜、外膜及肌层。结论：在大鼠和兔血管分布有ERα和ERβ免疫反应阳性细胞，提示两者在介导雌激素的作用中有重要功能。
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中图分类号：Q578 文献标识码：A 文章编号：1005-3271(2000)04-0265-02
Distribution of estrogen receptor in the vascular of rat and rabbit
HU Yu-zhen ZHANG Qing-hong ZHANG Wan-hui ZHAO Yu-feng Gao Zhan
(Department of Physiology)
CHEN Ya-qiong
(Department of Obstetric & Gynecology, Xijing Hospital， Fourth Military Medical University, Xi'an Shaanxi 710032， China)
, 百拇医药
Abstract: AIM: To study the distribution of estrogen receptor α and β in the blood vessel of rats and rabbits. METHODS: The immuno-histochemical technique was used. RESULTS: ER α-immunoreactive(ir) and ER β-ir production was shown in the nucleus. ER α-ir cells are seen in the intima, media and tunica adventitia of blood vessel. ER β-ir are dispersed in the intima and tunica adventitia of rabbit and rat. CONCLUSIONS: The two subtypes of estrogen receptor are distributed in the blood vessel of rats and rabbits. It suggests that they play impontant role in mediating the effect of estrogen in the blood vessel.
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Key words: vascular; receptors,estrogen; immunohistochemistry; rat; rabbit
雌激素受体(ER)有两种，即ER α和ER β。近年，观察到雌激素受体在心血管系统中也有分布, 雌激素与ER结合，发挥其对心血管系统的保护作用[1,2] ，并且雌激素的这种作用日益受到人们的关注。它们在血管中的分布、性别差异及雌激素水平对其表达的影响报道较少。本实验运用免疫组化的方法研究了ER在血管中的分布，为阐明雌激素对血管的作用及机制提供实验根据。
1 材料与方法
1.1 抗体与试剂 兔抗大鼠ER α和羊抗大鼠ER β抗体(Santa Cruz 公司)。生物素化的鼠抗兔或鼠抗羊(Sigma公司)，ABC复合物(Sigma公司)，葡萄糖氧化酶(Worthington 公司)。ABC试剂盒和DAB均购自Sigma公司。
, 百拇医药
1.2 实验动物 选用正常成年SD大鼠，雌雄不拘，体重200±10 g，正常健康家兔2.0～2.5 kg，雌雄不拘。由第四军医大学实验动物中心提供。
1.3 标本制备 大鼠用戊巴比妥钠腹腔麻醉(30 mg/kg)，家兔用3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉。动物麻醉后，开胸取其主动脉，用生理盐水20 ml冲洗血管中血液，将血管标本固定于Bouin's液中4～6 h，常规石腊包埋，血管切片,厚5 μm,行免疫组化染色。
1.4 免疫组织化学染色 染色步骤：石蜡切片常规脱蜡至水，0.01 mol/L PBS(pH7.4)洗3次，每次5 min，入含10 ml/L H2O2甲醇PBS中15 min，以消除组织的内源性过氧化物酶。PBS冲洗3次,各5 min。加入20 ml/L正常羊血清，室温孵育30 min。PBS洗3次,各5 min，加兔抗大鼠ER α多克隆抗体(1∶1000)或羊抗大鼠ERβ抗体(1∶1000)，孵育切片(室温20℃，24 h)。PBS冲洗后，加入生物素化的鼠抗兔或鼠抗羊二抗(1：500)，室温孵育2 h ，经PBS冲洗，加入AB复合物(1：500)，室温孵育2 h ，PBS水洗后, 用葡萄糖氧化酶-硫酸镍铵法呈色。常规脱水、透明、中性树胶封片。Olympus显微镜下进行观察并摄影。
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对照试验：阴性对照片不加一抗,或用正常羊或兔血清代替一抗孵育切片，其余步骤同上,Olympus显微镜下观察,结果为阴性。
2 结果
在正常大鼠血管可见到ER免疫反应阳性，ER α和ER β免疫反应阳性物质位于细胞核内呈黑蓝色(见图1)，ER α阳性细胞主要分布于血管内膜、外膜及肌层。ER β阳性细胞主要分布于血管内膜和外膜, ER α和ER β的表达和分布未见明显的性别差异，阴性对照未见有阳性产物着色。
3 讨论
大量的实验证明，雌激素对血管壁有直接作用，提示血管内皮细胞介导该作用，雌激素可以刺激内皮细胞生成前列腺素(PG)和一氧化氮(NO)[3]，由雌激素受体介导。ER属于配体激活的转录因子受体超家族，雌激素受体在血管舒张和细胞增殖中都有作用[4]。
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雌激素受体的数目和小鼠大动脉中内皮细胞的NO的基础释放有显著的相关性。血管ER受体的降低，可能是心血管疾病的一个危险因子[5]。有报道，在生殖系统的血管内膜存在ER α，他们的数量受雌激素水平调控。
本实验通过对大鼠和兔血管中的ER α和ER β免疫反应阳性细胞分布的研究，提示两者在介导雌激素的作用中有重要功能。
图 1 雌激素受体在大鼠(A,B)和兔大动脉(C,D)中的分布
A: ER α, B: ER β, C: ER α, D: ER β
ER β的作用之一是调控ER α的转录活性[1]，异源二聚体的形成在血管对17-β雌二醇的反应中有很大的影响，是选择作用的基础。实验证明ER α和ER β在大鼠和兔的血管中都有表达，但其分布不同。这两个亚型在血管中的相对表达水平决定了血管对雌激素拮抗剂或协同剂的不同反应。
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参考文献：
[1] Karas RH, Patterson BL, Mendelsohn ME. Human vascular smooth muscle cells contain functional estrogen receptor[J]. Circulation, 1994, 89(5): 1943.
[2] Grohe C, Kahlert K, Van EM, et al. Effects of moediprilat on oestrogen-stimulated cardiac fibroblast growth[J]. Br J Pharmacol, 1997,121(7):1350.
[3] Mikkola T,Viinikka L,Ylikorkala O. Estrogen and postmenopausal estrogen/progestin therapy: effect on endothelium-dependent prostacyclin, nitric oxide and endothelin-1 production[J]. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol,1998,79(1): 75.
, 百拇医药
[4] Perrot J,Applanat M. Estrogen receptors in the cardiovascular system[J]. Steroids,1996, 61(4): 215.
[5] Rubanyi GM,Freay AD, Kauser K et al. Vascular estrogen receptors and endothelium-derived nitric oxide production in the mouse aorta. Gender difference and effect of estrogen receptor gene disruption[J]. J Clin Invest, 1997, 99(10): 2429.
(收稿 2000-05-09), 百拇医药