实验性克汀病大鼠小脑小球突触数目的电镜分析
作者：韩玉泽 陶佳南 陶富山 李晓星
单位：韩玉泽 陶佳南 陶富山(佳木斯大学 基础医学院，黑龙江 佳木斯 154002)；李晓星(佳木斯市中心医院，黑龙江 佳木斯 154001)
关键词：
中国地方病学杂志000439 [中图分类号] R591.1 [文献标识码] D
[文章编号]1000-4955(2000)04-319-01
资料表明，实验性克汀病大鼠大脑的体积及重量较对照组小且轻，小脑重量也低于正常，蒲肯野细胞发育不良，外颗粒层细胞增殖延长、消失迟缓，细胞向内颗粒层移动发生较晚[1]。对小脑皮质的组织学观察，发现分子层特别是小叶Ⅳ、Ⅴ、Ⅵa变薄，有蒲肯野细胞的部分脱落。为进一步研究小脑皮质颗粒细胞层的细胞密度，采用磷钨酸染色对小脑小球的突触分布进行电镜观察，现报告如下。
, 百拇医药
1 材料与方法
采用Wistar大鼠复制成实验性克汀病大鼠模型与同龄正常大鼠对照，于出生后5～6个月处死，将2个组大鼠的小脑从蚓部正中矢状切开,固定于Perfix固定液(日本大阪藤泽药品株式会社提供),石蜡切片,进行组织学观察。同时从小叶Ⅳ、Ⅴ、Ⅵa取组织块用2.5%戊二醛磷酸缓冲液(pH=7.4)固定,再以1%饿酸固定,酒精系列浓度脱水,用1%磷钨酸(E-PTA)无水酒精液对组织块进行突触染色,环氧树脂包埋,超薄切片,用枸缘酸铅、醋酸铀染色，或不染色，采用JEM1200EX透射电镜进行观察。
2 结果
出生后5～6个月龄的实验性克汀病模型大鼠小脑颗粒层细胞数目较少,但细胞密度较正常对照稍高。将小脑小叶Ⅳ、Ⅴ、Ⅵa部分取材制成超薄切片，蒲肯野细胞层直下的颗粒层放大1 200倍，无选择地平行于蒲肯野细胞连续拍照3个以上的视野，每张照片面积2 552 μm2,计算照片上细胞数目的平均值，对照组细胞数目为40.0±5.2,模型动物组细胞数目为58.8±6.1(n=5)。
, 百拇医药
在克汀病大鼠小脑颗粒层细胞间隙，即由各种纤维构成的突触的区域，小脑小球占据的区域变小，小脑小球的突触分布略少。放大10 000倍直接倍率拍照四个以上的小脑小球，照片放大2倍，从照片上计算E-PTA染色阳性的突触数目，每100 μm2中对照组为38.4±10.2,克汀病组为22.2±3.3(n=5)。
3 讨论
克汀病大鼠小脑的主要形态变化为外颗粒层细胞增殖延长，消失迟缓，细胞向内颗粒层移动发生较晚。Haijos研究证明[2]，正常大鼠颗粒层的小脑小球的突触于出生后27 d完全形成，甲状腺机能低下症时大鼠小脑小球形成发生明显迟缓，突触形成不全。免疫组化研究发现克汀病大鼠小脑颗粒层的突触运载蛋白反应性弱，而突触运载蛋白的单克隆抗体因为能够识别突触前小泡(Presynaptic vesicle)的转膜糖蛋白(Transmembrane glycoprotein;分子量38 000)，我们认为免疫组化反应低下是克汀病大鼠小脑颗粒层突触形成及其功能不全的标志。本实验颗粒层小脑小球E-PTA染色阳性突触数目少的结果也支持小脑小球的发育迟缓，突触形成不全。
, 百拇医药
[作者简介]韩玉泽(1953-)，男，副教授。
参考文献
[1] Larrsell O.The comparative anatomy and histology of the cerebellum from onotremes though Apes[J].Aunals Neurology,1980,7(6):557.
[2] Hsijos F.Effect of thyroid deficiency on the synaptic organization of the rat cerebellum corex[J].Brain Res,1973,50:387.
[收稿日期]2000-04-02
[修订日期]2000-05-10, 百拇医药
单位：韩玉泽 陶佳南 陶富山(佳木斯大学 基础医学院，黑龙江 佳木斯 154002)；李晓星(佳木斯市中心医院，黑龙江 佳木斯 154001)
关键词：
中国地方病学杂志000439 [中图分类号] R591.1 [文献标识码] D
[文章编号]1000-4955(2000)04-319-01
资料表明，实验性克汀病大鼠大脑的体积及重量较对照组小且轻，小脑重量也低于正常，蒲肯野细胞发育不良，外颗粒层细胞增殖延长、消失迟缓，细胞向内颗粒层移动发生较晚[1]。对小脑皮质的组织学观察，发现分子层特别是小叶Ⅳ、Ⅴ、Ⅵa变薄，有蒲肯野细胞的部分脱落。为进一步研究小脑皮质颗粒细胞层的细胞密度，采用磷钨酸染色对小脑小球的突触分布进行电镜观察，现报告如下。
, 百拇医药
1 材料与方法
采用Wistar大鼠复制成实验性克汀病大鼠模型与同龄正常大鼠对照，于出生后5～6个月处死，将2个组大鼠的小脑从蚓部正中矢状切开,固定于Perfix固定液(日本大阪藤泽药品株式会社提供),石蜡切片,进行组织学观察。同时从小叶Ⅳ、Ⅴ、Ⅵa取组织块用2.5%戊二醛磷酸缓冲液(pH=7.4)固定,再以1%饿酸固定,酒精系列浓度脱水,用1%磷钨酸(E-PTA)无水酒精液对组织块进行突触染色,环氧树脂包埋,超薄切片,用枸缘酸铅、醋酸铀染色，或不染色，采用JEM1200EX透射电镜进行观察。
2 结果
出生后5～6个月龄的实验性克汀病模型大鼠小脑颗粒层细胞数目较少,但细胞密度较正常对照稍高。将小脑小叶Ⅳ、Ⅴ、Ⅵa部分取材制成超薄切片，蒲肯野细胞层直下的颗粒层放大1 200倍，无选择地平行于蒲肯野细胞连续拍照3个以上的视野，每张照片面积2 552 μm2,计算照片上细胞数目的平均值，对照组细胞数目为40.0±5.2,模型动物组细胞数目为58.8±6.1(n=5)。
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在克汀病大鼠小脑颗粒层细胞间隙，即由各种纤维构成的突触的区域，小脑小球占据的区域变小，小脑小球的突触分布略少。放大10 000倍直接倍率拍照四个以上的小脑小球，照片放大2倍，从照片上计算E-PTA染色阳性的突触数目，每100 μm2中对照组为38.4±10.2,克汀病组为22.2±3.3(n=5)。
3 讨论
克汀病大鼠小脑的主要形态变化为外颗粒层细胞增殖延长，消失迟缓，细胞向内颗粒层移动发生较晚。Haijos研究证明[2]，正常大鼠颗粒层的小脑小球的突触于出生后27 d完全形成，甲状腺机能低下症时大鼠小脑小球形成发生明显迟缓，突触形成不全。免疫组化研究发现克汀病大鼠小脑颗粒层的突触运载蛋白反应性弱，而突触运载蛋白的单克隆抗体因为能够识别突触前小泡(Presynaptic vesicle)的转膜糖蛋白(Transmembrane glycoprotein;分子量38 000)，我们认为免疫组化反应低下是克汀病大鼠小脑颗粒层突触形成及其功能不全的标志。本实验颗粒层小脑小球E-PTA染色阳性突触数目少的结果也支持小脑小球的发育迟缓，突触形成不全。
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[作者简介]韩玉泽(1953-)，男，副教授。
参考文献
[1] Larrsell O.The comparative anatomy and histology of the cerebellum from onotremes though Apes[J].Aunals Neurology,1980,7(6):557.
[2] Hsijos F.Effect of thyroid deficiency on the synaptic organization of the rat cerebellum corex[J].Brain Res,1973,50:387.
[收稿日期]2000-04-02
[修订日期]2000-05-10, 百拇医药