均匀法优选赤芍提取最佳工艺
作者：刘惠茹 张晋文
单位：刘惠茹(成都市第一人民医院，四川成都 61000)；张晋文(成都市第二人民医院，四川成都 61000)
关键词：
川北医学院学报000438 中图分类号：R282.4 文献标识码 ：E
文章编号：1005-3697(2000)04-0049-02
采用均匀设计法，以赤芍中主要药理作用成分芍药甙的含量为考 察指标，对影响水提效果的主要因素如加水量、煎煮时间、煎煮次数进行实验探索，通过计 算机处理实验数据，优选赤芍水提最佳工艺为：加13倍水量，煎煮3次，每次2.5 h。为制 定赤芍合理的提取工艺提供理论依据，有一定的实用价值，现报告如下：
赤芍为毛茛科植物芍药Paeonia Lactiflora Pall的干燥根，水溶性有效成分芍药甙为药理 作用主要成分。李淑芝等人[1]的研究证实了赤芍与群药合煎比单煎中芍药甙含量低，提示芍药应单独用水提取。为进一步深化赤芍水提最佳工艺的研究，采用均匀 设计法，以芍药甙含量为考察指标，对主要影响因素进行考察，优选出赤芍水提最佳工艺。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 材料：芍药甙对照品购于四川省药品检验所，赤芍购于成都市中药材公司，经 鉴定为毛茛科植物芍药Paeonia Lactiflora Pall的干燥根。
1.2 工艺条件选择：选择影响提取效果的三个主要因素：加水量(X1)、煎煮时间(X 2)、煎煮次数(X3)进行考察。各因素选择七个水平，取值范围见表1。
1.3 含量测定方法
1.3.1 对照品溶液的制备：精密称取80℃干燥至恒重的芍药甙对照品5 mg，置2 ml 容量 瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得(每1 μL 对照品溶液中含芍药甙2.5μg)。
表1 影响因素水平 因素
, 百拇医药
1
2
3
4
5
6
7
X1(倍数)
6.00
7.00
8.00
9.00
10.00
, http://www.100md.com
11.00
12.00
X2(h)
0.50
0.75
1.00
1.25
1.50
1.75
2.00
X3(次数)
1.00
, http://www.100md.com
1.00
2.00
2.00
2.00[ 〗3.00
3.00
1.3.2 标准曲线的制备：准确吸取对照品溶液10 μL、30 μL、50 μL、70 μL、90 μL，按照中国药典薄层色谱法分别点于硅胶G F254薄层板上便成条状，以氯仿- 甲醇(5：1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(254nm)下检视，分别刮取芍药甙条斑 ，同时刮取同一薄层板上与芍药甙条斑等面积的硅胶G F254，作为空白。分别置于10 ml 离 心管中，加入无水乙醇10 ml，充分振摇3 min,静置10 min，离心，取各上清液，照中国药 典中分光光度法在230 nm 的波长处测定吸收度，以吸收度为纵座标，浓度为横座标，绘制 标准曲线。
, http://www.100md.com
1.3.3 含量测定方法：取本品1 ml 置具塞锥形瓶中，准确加入无水乙醇10 ml，密塞， 置4 0℃恒温水浴中温浸4 h，滤过，照薄层色谱法试验，准确吸取滤液50 μL 点于硅胶G F254 薄层板上便成条状。另取对照品溶液10 μL，点于供试品条斑一侧，作为对照。以氯仿-甲 醇(5：1)为展开剂，展开，晾干，置紫外灯(254nm)下检视，将与对照品斑点相应位置上的 供试品条斑刮入10 ml 离心管中，同时刮取同一薄层板上与供试品条斑等面积的空白硅胶G F254，置另一10 ml 离心管中，作为空白，分别准确加入无水乙醇10 ml，充分振摇3 min，静置10 min，离心，吸取上清液，在230 nm 的波长处测定吸收度，从标准曲线上 读供试品溶液中芍药甙的重量(μg)，计算，即得。
2 结果
按均匀设计表及使用表安排实验，分别取赤芍100 g，按实验设计表各参数进行煎煮 提取，浓缩至100 ml，使1 ml 溶液相当于原生药材1 g，测定芍药甙含量，实验过程中保持 除因素外的其它实验条件一致，每个实验重复三次，取平均值，实验结果见表2。
, 百拇医药
表2 实验设计表及结果 反应条件(因素)
指标(芍药甙含 量(μg)
相对 误差
(%)
X1
(倍数)
X 2
(h)
X3
(次数)
实测值
(y)
, 百拇医药
计算值
(ye)
y-ye
6.00
0.75
2.00
0.0170
0.0200
0.00 50
29.32
7.00
1.25
, http://www.100md.com
3.00
0.0339
0.0305
0.0034
9.89
8.00
1.75
1.00
0.0260
0.0244
0 .0016
6.27
9.00
, 百拇医药
0.50
2.00
0.0324
0.0300
0 .0024
7.55
10.00
1.00
1.00
0.0273
0.0287
0.0014
5.08
, 百拇医药
11.00
1.50
2.00
0.0393
0.0372
0.0021
5.22
12.00
2.00
3.00
0.0427
0.0458
0.0031
, 百拇医药
7.28
将实验数据用计算机进行多元回归计算，得回归方程y=-0.0059+0.0028X1+ 0.0017X2+0.0049X3，r=0.9304,F0=6.4390>F0.10=5.3900。回归方程成立(其中X1—加水量，X2—煎煮时间，X3—煎煮次数)按回 归方程进行最佳工艺的优化，并进行验证实验，结果见表3。表3 最佳工艺优化预测值 编号
X1(倍数)
X2(h)
X3(次数)
优化预测值(μg)
, http://www.100md.com
实测值(μ g)
1
11.00
1.75
3.00
0.04259
2
13.00
2.50
3.00
0.04946
0.04570
3 讨 论
, http://www.100md.com
3.1 通过回归方程进行影响因素大小的分析，从回归方程系数得到影响因大小的顺序应为X3(煎煮次数)>X1(加水量)>X2(煎煮时间)，结果与实际经验较 为一致。
3.2 按回归方程进行最佳提取工艺的优化，从符号分析，三个因素均应取较大值，从表3 优化预测结果得出优化预报值，y=0.04946,按优化条件进行验证实验，得y=0.04570，结果 与预测值相近，较七次实验得率均高，从而得出赤芍水提最佳优化条件为：加13倍量水，煎 煮3次，每次2.5 h 芍药甙提取含量最高。
3.3 本实验采用均匀设计法，与正交法相比具有实验次数少，节省经费及时间，实验效率 高，结果可靠等优点，并可利用回归方程进行最佳工艺的优化，得到较为理想的实验结果， 不愧为实验设计最佳方法之一。本实验为赤芍科学的提取工艺提供了理论依据，可作为单味 免煎颗粒剂提取工艺设计参考，有一定的实用价值。
(文中芍药甙的含量测定委托华西医科大学生药教研室完成。在本文的撰写过程中得到了华西医科大学生药教研室王蜀教授、成都市第一人民医院唐家福主任药师的指 导和帮助，在此表示衷心的感谢!)
参考文献：
[1] 李淑芝，等.不同煎煮条件对芍药甙煎出量的影响[J].中成 药杂志，1999，21(3)：115～116.
(收稿日期：2000-06-28), http://www.100md.com
单位：刘惠茹(成都市第一人民医院，四川成都 61000)；张晋文(成都市第二人民医院，四川成都 61000)
关键词：
川北医学院学报000438 中图分类号：R282.4 文献标识码 ：E
文章编号：1005-3697(2000)04-0049-02
采用均匀设计法，以赤芍中主要药理作用成分芍药甙的含量为考 察指标，对影响水提效果的主要因素如加水量、煎煮时间、煎煮次数进行实验探索，通过计 算机处理实验数据，优选赤芍水提最佳工艺为：加13倍水量，煎煮3次，每次2.5 h。为制 定赤芍合理的提取工艺提供理论依据，有一定的实用价值，现报告如下：
赤芍为毛茛科植物芍药Paeonia Lactiflora Pall的干燥根，水溶性有效成分芍药甙为药理 作用主要成分。李淑芝等人[1]的研究证实了赤芍与群药合煎比单煎中芍药甙含量低，提示芍药应单独用水提取。为进一步深化赤芍水提最佳工艺的研究，采用均匀 设计法，以芍药甙含量为考察指标，对主要影响因素进行考察，优选出赤芍水提最佳工艺。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 材料：芍药甙对照品购于四川省药品检验所，赤芍购于成都市中药材公司，经 鉴定为毛茛科植物芍药Paeonia Lactiflora Pall的干燥根。
1.2 工艺条件选择：选择影响提取效果的三个主要因素：加水量(X1)、煎煮时间(X 2)、煎煮次数(X3)进行考察。各因素选择七个水平，取值范围见表1。
1.3 含量测定方法
1.3.1 对照品溶液的制备：精密称取80℃干燥至恒重的芍药甙对照品5 mg，置2 ml 容量 瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得(每1 μL 对照品溶液中含芍药甙2.5μg)。
表1 影响因素水平 因素
, 百拇医药
1
2
3
4
5
6
7
X1(倍数)
6.00
7.00
8.00
9.00
10.00
, http://www.100md.com
11.00
12.00
X2(h)
0.50
0.75
1.00
1.25
1.50
1.75
2.00
X3(次数)
1.00
, http://www.100md.com
1.00
2.00
2.00
2.00[ 〗3.00
3.00
1.3.2 标准曲线的制备：准确吸取对照品溶液10 μL、30 μL、50 μL、70 μL、90 μL，按照中国药典薄层色谱法分别点于硅胶G F254薄层板上便成条状，以氯仿- 甲醇(5：1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(254nm)下检视，分别刮取芍药甙条斑 ，同时刮取同一薄层板上与芍药甙条斑等面积的硅胶G F254，作为空白。分别置于10 ml 离 心管中，加入无水乙醇10 ml，充分振摇3 min,静置10 min，离心，取各上清液，照中国药 典中分光光度法在230 nm 的波长处测定吸收度，以吸收度为纵座标，浓度为横座标，绘制 标准曲线。
, http://www.100md.com
1.3.3 含量测定方法：取本品1 ml 置具塞锥形瓶中，准确加入无水乙醇10 ml，密塞， 置4 0℃恒温水浴中温浸4 h，滤过，照薄层色谱法试验，准确吸取滤液50 μL 点于硅胶G F254 薄层板上便成条状。另取对照品溶液10 μL，点于供试品条斑一侧，作为对照。以氯仿-甲 醇(5：1)为展开剂，展开，晾干，置紫外灯(254nm)下检视，将与对照品斑点相应位置上的 供试品条斑刮入10 ml 离心管中，同时刮取同一薄层板上与供试品条斑等面积的空白硅胶G F254，置另一10 ml 离心管中，作为空白，分别准确加入无水乙醇10 ml，充分振摇3 min，静置10 min，离心，吸取上清液，在230 nm 的波长处测定吸收度，从标准曲线上 读供试品溶液中芍药甙的重量(μg)，计算，即得。
2 结果
按均匀设计表及使用表安排实验，分别取赤芍100 g，按实验设计表各参数进行煎煮 提取，浓缩至100 ml，使1 ml 溶液相当于原生药材1 g，测定芍药甙含量，实验过程中保持 除因素外的其它实验条件一致，每个实验重复三次，取平均值，实验结果见表2。
, 百拇医药
表2 实验设计表及结果 反应条件(因素)
指标(芍药甙含 量(μg)
相对 误差
(%)
X1
(倍数)
X 2
(h)
X3
(次数)
实测值
(y)
, 百拇医药
计算值
(ye)
y-ye
6.00
0.75
2.00
0.0170
0.0200
0.00 50
29.32
7.00
1.25
, http://www.100md.com
3.00
0.0339
0.0305
0.0034
9.89
8.00
1.75
1.00
0.0260
0.0244
0 .0016
6.27
9.00
, 百拇医药
0.50
2.00
0.0324
0.0300
0 .0024
7.55
10.00
1.00
1.00
0.0273
0.0287
0.0014
5.08
, 百拇医药
11.00
1.50
2.00
0.0393
0.0372
0.0021
5.22
12.00
2.00
3.00
0.0427
0.0458
0.0031
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7.28
将实验数据用计算机进行多元回归计算，得回归方程y=-0.0059+0.0028X1+ 0.0017X2+0.0049X3，r=0.9304,F0=6.4390>F0.10=5.3900。回归方程成立(其中X1—加水量，X2—煎煮时间，X3—煎煮次数)按回 归方程进行最佳工艺的优化，并进行验证实验，结果见表3。表3 最佳工艺优化预测值 编号
X1(倍数)
X2(h)
X3(次数)
优化预测值(μg)
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实测值(μ g)
1
11.00
1.75
3.00
0.04259
2
13.00
2.50
3.00
0.04946
0.04570
3 讨 论
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3.1 通过回归方程进行影响因素大小的分析，从回归方程系数得到影响因大小的顺序应为X3(煎煮次数)>X1(加水量)>X2(煎煮时间)，结果与实际经验较 为一致。
3.2 按回归方程进行最佳提取工艺的优化，从符号分析，三个因素均应取较大值，从表3 优化预测结果得出优化预报值，y=0.04946,按优化条件进行验证实验，得y=0.04570，结果 与预测值相近，较七次实验得率均高，从而得出赤芍水提最佳优化条件为：加13倍量水，煎 煮3次，每次2.5 h 芍药甙提取含量最高。
3.3 本实验采用均匀设计法，与正交法相比具有实验次数少，节省经费及时间，实验效率 高，结果可靠等优点，并可利用回归方程进行最佳工艺的优化，得到较为理想的实验结果， 不愧为实验设计最佳方法之一。本实验为赤芍科学的提取工艺提供了理论依据，可作为单味 免煎颗粒剂提取工艺设计参考，有一定的实用价值。
(文中芍药甙的含量测定委托华西医科大学生药教研室完成。在本文的撰写过程中得到了华西医科大学生药教研室王蜀教授、成都市第一人民医院唐家福主任药师的指 导和帮助，在此表示衷心的感谢!)
参考文献：
[1] 李淑芝，等.不同煎煮条件对芍药甙煎出量的影响[J].中成 药杂志，1999，21(3)：115～116.
(收稿日期：2000-06-28), http://www.100md.com