胰腺癌微卫星不稳定性及其临床病理特点的研究
作者：何立智 谢敏 赵会安
单位：何立智(330006 南昌，江西医学院肝胆外科研究所)；谢敏(330006 南昌，江西医学院肝胆外科研究所)；赵会安(江西省公安厅刑事科学技术研究所)
关键词：
中华医学杂志000415 胰腺肿瘤的发生目前认为与癌基因K-ras的激活以及抑癌基因DPC4、P16、P53，FHIT的失活有关。而微卫星不稳定性(MSI)可能代表了肿瘤发生的另一种机制。我们用5条染色体上的6个微卫星位点对41例胰腺癌标本进行MSI的检测和分析,现将结果报道如下。
一、对象与方法
1.对象：41例胰腺癌标本全部来自江西医学院第一、二附属医院1994～1998年存档的石蜡标本，再经两位病理医师复检证实。标本包括胰腺癌组织及正常胰腺组织。
, 百拇医药
2.DNA提取及聚合酶链式反应(PCR)：用显微切割技术分离切取癌组织及正常组织，按常规提取石蜡标本DNA。6对微卫星位点分别为TP53PCR15.1、D18S474、D18S69、D9S1604、D1S484。微卫星引物序列源于文献[1]及因特网(http://www.gdb.org)，引物购自上海Sagon公司。PCR反应及电泳参见文献[1]。
3.结果判定：若肿瘤组织与正常组织相比出现等位基因条带移位或增多判为MSI。出现MSI的标本均重复扩增以证实。
4.统计学处理：用SAS软件(6.04版)对结果进行统计学处理。性别、部位、病理分级及临床分期比较用Fisher确切概率计算法。其余，年龄比较用方差分析，大小比较用H检验(Kruskal and Wallis法)。
二、结果
1.胰腺癌与MSI：41例胰腺癌6个微卫星位点的检测结果见表1。30例(73%)至少有1个位点出现MSI，≥2个位点有MSI者15例(37%)，其中10例有2个位点MSI(24%)，4例有3个位点MSI(10%)，4个位点，6个位点MSI各1例(各2%)。
, 百拇医药
2.MSI与胰腺癌临床病理关系：根据出现MSI的位点数，把胰腺癌分成3组。比较3组之间临床病理的差异(表2)。临床分期采用国际抗癌联盟(UICC)1987年TNM分期[2]。3组间临床分期差异有显著意义(P=0.023 4)。临床Ⅰ、Ⅱ期10例肿瘤中均有MSI，30例Ⅲ、Ⅳ期肿瘤患者的组织中检出MSI 20例(65%)，P=0.026 8。3组肿瘤大小差异也有显著意义(P=0.047)。其余年龄、性别、部位、病理分级3组之间差异均无显著意义。
三、讨论
本实验中，至少1个位点存在MSI的胰腺癌占73%(30/41)，与Brentnall等[3]的75%相近，而Goggins等[4]的报道只有4%，Seymour等[5]在检测26个胰腺癌标本中却无1例出现MSI。上述这种差异可能与位点选取有关，由于微卫星位点在基因组DNA中位置及其本身结构特点，使某些位点在特定的肿瘤中更容易发生MSI[1]，因此，当检测位点数目较少时，位点的选择对决定肿瘤是否存在MSI有着重要影响。而遗传背景，不同实验室的条件及实验者对MSI的判断也可能有一定的影响。
, 百拇医药
通过对比MSI胰腺癌(≥1个位点MSI)与微卫星稳定性(MSS)胰腺癌的临床分期，我们发现在临床早期(Ⅰ、Ⅱ期)胰腺癌的MSI发生率明显高于晚期(Ⅲ、Ⅳ期)(P=0.026 8)。Brentnall等[3]在对慢性胰腺炎，胰腺癌K-ras基因突变与MSI关系的研究中发现，MSI的肿瘤多有K-ras基因突变，所有K-ras突变的肿瘤均可检出MSI，而一般认为K-ras基因突变是发生在胰腺癌产生的早期。由此我们认为MSI可能是胰腺癌发生的早期事件，但因本实验中Ⅰ、Ⅱ期病例数较少，有必要今后进一步扩大标本量加以证实。
表1 胰腺癌癌组织各位点微卫星不稳定发生情况 位点
信息数
微卫星
不稳定性
微卫星不稳定
, 百拇医药
发生率(%)
D1S484
36
5
14
BAT-26
39
13
33
D9S1604
37
5
14
, 百拇医药
TP53PCR15.1
39
15
38
D18S474
37
9
24
D18S69
39
6
15
合计
, 百拇医药
227
53
23
表2 胰腺癌组织中微卫星不稳定与临床病理的关系 组别
例数
部位
肿瘤大小
(cm)
分级
分期
头部
体尾部
全胰
, 百拇医药
高
中
低
未分化
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
微卫星稳定
11
7
3
1
9±4
, 百拇医药
2
1
7
1
0
0
5
6
微卫星不稳定(1个位点)
15
9
6
0
6±5
, 百拇医药
4
6
5
0
0
4
4
7
微卫星不稳定≥2个位点
15
11
4
0
6±5
, http://www.100md.com
2
5
7
1
1
5
0
9
P值
0.632
0.047
0.444
0.023 3
, 百拇医药 Goggins在其所检到所有3例MSI胰腺癌中，发现这3例肿瘤分化程度较差且无K-ras基因突变，因而认为无K-ras基因突变及分化差胰腺癌与MSI密切相关[4]。而我们在实验中没有发现MSI与胰腺癌的细胞分化程度有明显关系。由于胰腺癌大多数是高分化导管腺癌，K-ras基因突变在胰腺癌中又广泛存在[3]，在胰腺癌中MSI发生率也较高(73%)，因此我们认为MSI不大可能主要局限于分化程度较差及无 K-ras基因突变胰腺癌中。关于胰腺癌MSI、K-ras基因及细胞分化程度三者之间的关系还需进一步研究。 参考文献
1，Dietmaier W, Wallinger S, Bocker T, et al. Diagnostic microsatellite instability definition and correlation with mismatch repair protein expression. Cancer Res, 1997,57:4749-4756.
, 百拇医药
2，Hermanek P, Sobin LH, TNM classification of malignant tumors. 4th ed. Geneva: UICC. 1987.65.
3，Brentnall TA, Chen R, Lee JG, et al. Microsatellite instability and K-ras mutations associated with pancreatic adenocarcinoma and pancreatitis. Cancer Res, 1995,55:4264-4267.
4，Goggins M, Offerhaus GJ, Hilgers W, et al. Pancreatic adenocarcinomas with DNA replication errors (RER+) are associated with wild-type K-ras and characteristic histopathology poor differentiation, a syncytial growth pattern,and pushing borders suggest RER+. Am J Pathol, 1998,152:1501-1507.
5，Seymour AB, Hruban RH, Redston M, et al. Allelotype of pancreatic adenocarcinoma. Cancer Res, 1994,54:2761-2764.
(收稿日期：1999-10-08), 百拇医药
单位：何立智(330006 南昌，江西医学院肝胆外科研究所)；谢敏(330006 南昌，江西医学院肝胆外科研究所)；赵会安(江西省公安厅刑事科学技术研究所)
关键词：
中华医学杂志000415 胰腺肿瘤的发生目前认为与癌基因K-ras的激活以及抑癌基因DPC4、P16、P53，FHIT的失活有关。而微卫星不稳定性(MSI)可能代表了肿瘤发生的另一种机制。我们用5条染色体上的6个微卫星位点对41例胰腺癌标本进行MSI的检测和分析,现将结果报道如下。
一、对象与方法
1.对象：41例胰腺癌标本全部来自江西医学院第一、二附属医院1994～1998年存档的石蜡标本，再经两位病理医师复检证实。标本包括胰腺癌组织及正常胰腺组织。
, 百拇医药
2.DNA提取及聚合酶链式反应(PCR)：用显微切割技术分离切取癌组织及正常组织，按常规提取石蜡标本DNA。6对微卫星位点分别为TP53PCR15.1、D18S474、D18S69、D9S1604、D1S484。微卫星引物序列源于文献[1]及因特网(http://www.gdb.org)，引物购自上海Sagon公司。PCR反应及电泳参见文献[1]。
3.结果判定：若肿瘤组织与正常组织相比出现等位基因条带移位或增多判为MSI。出现MSI的标本均重复扩增以证实。
4.统计学处理：用SAS软件(6.04版)对结果进行统计学处理。性别、部位、病理分级及临床分期比较用Fisher确切概率计算法。其余，年龄比较用方差分析，大小比较用H检验(Kruskal and Wallis法)。
二、结果
1.胰腺癌与MSI：41例胰腺癌6个微卫星位点的检测结果见表1。30例(73%)至少有1个位点出现MSI，≥2个位点有MSI者15例(37%)，其中10例有2个位点MSI(24%)，4例有3个位点MSI(10%)，4个位点，6个位点MSI各1例(各2%)。
, 百拇医药
2.MSI与胰腺癌临床病理关系：根据出现MSI的位点数，把胰腺癌分成3组。比较3组之间临床病理的差异(表2)。临床分期采用国际抗癌联盟(UICC)1987年TNM分期[2]。3组间临床分期差异有显著意义(P=0.023 4)。临床Ⅰ、Ⅱ期10例肿瘤中均有MSI，30例Ⅲ、Ⅳ期肿瘤患者的组织中检出MSI 20例(65%)，P=0.026 8。3组肿瘤大小差异也有显著意义(P=0.047)。其余年龄、性别、部位、病理分级3组之间差异均无显著意义。
三、讨论
本实验中，至少1个位点存在MSI的胰腺癌占73%(30/41)，与Brentnall等[3]的75%相近，而Goggins等[4]的报道只有4%，Seymour等[5]在检测26个胰腺癌标本中却无1例出现MSI。上述这种差异可能与位点选取有关，由于微卫星位点在基因组DNA中位置及其本身结构特点，使某些位点在特定的肿瘤中更容易发生MSI[1]，因此，当检测位点数目较少时，位点的选择对决定肿瘤是否存在MSI有着重要影响。而遗传背景，不同实验室的条件及实验者对MSI的判断也可能有一定的影响。
, 百拇医药
通过对比MSI胰腺癌(≥1个位点MSI)与微卫星稳定性(MSS)胰腺癌的临床分期，我们发现在临床早期(Ⅰ、Ⅱ期)胰腺癌的MSI发生率明显高于晚期(Ⅲ、Ⅳ期)(P=0.026 8)。Brentnall等[3]在对慢性胰腺炎，胰腺癌K-ras基因突变与MSI关系的研究中发现，MSI的肿瘤多有K-ras基因突变，所有K-ras突变的肿瘤均可检出MSI，而一般认为K-ras基因突变是发生在胰腺癌产生的早期。由此我们认为MSI可能是胰腺癌发生的早期事件，但因本实验中Ⅰ、Ⅱ期病例数较少，有必要今后进一步扩大标本量加以证实。
表1 胰腺癌癌组织各位点微卫星不稳定发生情况 位点
信息数
微卫星
不稳定性
微卫星不稳定
, 百拇医药
发生率(%)
D1S484
36
5
14
BAT-26
39
13
33
D9S1604
37
5
14
, 百拇医药
TP53PCR15.1
39
15
38
D18S474
37
9
24
D18S69
39
6
15
合计
, 百拇医药
227
53
23
表2 胰腺癌组织中微卫星不稳定与临床病理的关系 组别
例数
部位
肿瘤大小
(cm)
分级
分期
头部
体尾部
全胰
, 百拇医药
高
中
低
未分化
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
微卫星稳定
11
7
3
1
9±4
, 百拇医药
2
1
7
1
0
0
5
6
微卫星不稳定(1个位点)
15
9
6
0
6±5
, 百拇医药
4
6
5
0
0
4
4
7
微卫星不稳定≥2个位点
15
11
4
0
6±5
, http://www.100md.com
2
5
7
1
1
5
0
9
P值
0.632
0.047
0.444
0.023 3
, 百拇医药 Goggins在其所检到所有3例MSI胰腺癌中，发现这3例肿瘤分化程度较差且无K-ras基因突变，因而认为无K-ras基因突变及分化差胰腺癌与MSI密切相关[4]。而我们在实验中没有发现MSI与胰腺癌的细胞分化程度有明显关系。由于胰腺癌大多数是高分化导管腺癌，K-ras基因突变在胰腺癌中又广泛存在[3]，在胰腺癌中MSI发生率也较高(73%)，因此我们认为MSI不大可能主要局限于分化程度较差及无 K-ras基因突变胰腺癌中。关于胰腺癌MSI、K-ras基因及细胞分化程度三者之间的关系还需进一步研究。 参考文献
1，Dietmaier W, Wallinger S, Bocker T, et al. Diagnostic microsatellite instability definition and correlation with mismatch repair protein expression. Cancer Res, 1997,57:4749-4756.
, 百拇医药
2，Hermanek P, Sobin LH, TNM classification of malignant tumors. 4th ed. Geneva: UICC. 1987.65.
3，Brentnall TA, Chen R, Lee JG, et al. Microsatellite instability and K-ras mutations associated with pancreatic adenocarcinoma and pancreatitis. Cancer Res, 1995,55:4264-4267.
4，Goggins M, Offerhaus GJ, Hilgers W, et al. Pancreatic adenocarcinomas with DNA replication errors (RER+) are associated with wild-type K-ras and characteristic histopathology poor differentiation, a syncytial growth pattern,and pushing borders suggest RER+. Am J Pathol, 1998,152:1501-1507.
5，Seymour AB, Hruban RH, Redston M, et al. Allelotype of pancreatic adenocarcinoma. Cancer Res, 1994,54:2761-2764.
(收稿日期：1999-10-08), 百拇医药