缺失型血管紧张素转换酶基因与心肌梗死患者血浆载脂蛋白E水平的关系
作者：李刚 陈运贞 曾昭淳 柳青 黄维嘉 姚珍微 兰雁飞 许炜 凌红 邓国兰
单位：李刚(重庆医科大学附属第一医院心内科 重庆，400016；现在重庆医科大学附属第二医院心内科)；陈运贞 柳青 黄维嘉 姚珍微 兰雁飞 许炜 凌红 邓国兰(重庆医科大学附属第一医院心内科(重庆，400016) 曾昭淳(重庆医科大学基础医学院基础生化教研室)
关键词：载脂蛋白E；血管紧张素转换酶；心肌梗死；基因缺失多态性
临床心血管病杂志000407 摘要 目的：探讨缺失型血管紧张素转换酶(ACE)基因与心肌梗死患者血浆载脂蛋白E(apo E)浓度间的关系。方法：用免疫比浊法测定55例陈旧性心肌梗死(OMI)患者及47例对照者血浆apo E浓度。用PCR法检测ACE基因缺失(D)/插入(I)多态性。结果：OMI患者血浆apo E浓度为(52.1±14.6 ) mg/L，显著高于对照组(41.2±17.2) mg/L(P<0.05)。OMI组ACE DD(51.2±14.7)mg/L、DI(54.7±12.1) mg/L、II(59.0±26.0)mg/L基因型间血浆apo E水平无显著性差异(P>0.05)。ACE DD基因型频率及D等位基因频率与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。结论：缺失型ACE基因可能与OMI患者血浆apo E水平无相关关系。
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Relation between plasma apolipoprotein E and deletion polymorphism of the angiotensin-converting enzyme gene in patients with old myocardial infarction
LI Gang CHEN Yun-zhen LIU Qing HUANG Wei-jia
YAO Zhen-wei LAN Yan-fei XU Wei LING Hong DENG Guo-nan
(1 The First Affiliated Hospital Chongqing University of Medical Sciences ,Chongqing 400016)
ZENG Zhao-chun
, 百拇医药
(Department of Basic Biochemistry,Collage of Basic Medicine,Chongqing
University of Medical Science)
Abstract Objective:To explore the relation between plasma apolipoprotein E (apo E) and deletion polymorphism of the angiotensin-converting, enzyme (ACE) gene in patients with old myocardial infarction (OMI).Method:The plasma apo E level was detected by immunoturbidimetric assay;the deletion (D)/Insertion (I) polymorphism of the ACE gene was determined by polymerase chain reaction (PCR) in 55 patients with OMI and in 47 controls.Result:The plasma apo E level 〔(52.1±14.6) mg/L〕 was higher statistically (P<0.05) in patients with OMI than in controls〔 (41.2±17.2) mg/L〕.There were not significant differences (P>0.05) of plasma apo E level among ACE DD 〔(51.2±14.7) mg/L〕，DI〔(54.7±12.1) mg/L 〕and II〔 (59.0±26.0) mg/L〕 gene types in the OMI group.Conclusion:The relation between plasma apo E and deletion polymorphism of ACE gene was not found in patients with OMI.
, 百拇医药
Key words Apolipoprotein E Angiotensin converting enzyme Myocardial infarction Gene deletion polymorphism
近年来，研究证实载脂蛋白E(apo E)具有抗动脉粥样硬化作用〔1〕，而缺失型血管紧张素转换酶(ACE)基因与心肌梗死(MI)之间存在相关性〔2〕。MI患者血浆apo E水平是否受ACE基因多态性影响尚不清楚。本文探讨缺失型ACE基因与陈旧性MI(OMI)患者血浆apo E水平间的关系。
1 对象与方法
1.1 对象
OMI 55例，男46例，女9例，年龄(61.5±7.8)岁。诊断标准：急性MI病史，典型心电图病理性Q波及ST-T改变。对照组为普外科住院患者47例，男30例，女17例，年龄(54.9±11.5)岁，无冠心病并发症。所有入选对象均无糖尿病、高血压及脑血管病变等并发症。两组间吸烟、体重指数和血压有可比性；血脂比较见表1。
, 百拇医药
表1 OMI组与对照组血脂水平比较 mmol/L,
±s 组别
例数
TC
LDL-C
TG
HDL-C
OMI组
55
4.96±0.77
2.87±0.78
2.03±1.14
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1.20±0.20
对照组
47
4.30±0.96
2.28±0.87
1.63±1.29
1.26±0.36
P值
<0.05
<0.05
<0.05
>0.05
, http://www.100md.com 1.2 方法
停服降脂药1个月，空腹10 h后采血。用免疫比浊法测定血浆apo E浓度(日本7170型全自动生化分析仪自动完全，试剂购自日本第一化学株式会社)。采0.3 ml EDTA抗凝血，用试剂盒(Promega公司)酚-氯仿法提取基因组DNA。按Rigat等〔3〕法进行PCR扩增。引物1：CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT；引物2：GATGTGGCCATCACATTCGTCACAT。94℃变性30 s，58℃复性30 s，72℃延伸1 min，循环30次，产物经8%聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。
1.3 统计学处理
计量资料用t检验，方差分析(F)。计数资料用χ2检验、秩和检验(u)。
2 结果
, 百拇医药 PCR扩增出3种ACE基因型：DD型(缺失纯合型)，II型(插入纯合型)，DI型(杂合型)。ACE基因类型见图1。
图1 ACE基因型
M：分子量标准Φ×174 HinfI(Promega)
两组血浆apo E水平及基因型分布见表2。
表2 OMI组与对照组血浆apo E水平、ACE基因及等位基因频率 频率(例数) 组别
例数
apo E/(mg.L-1)
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ACE基因型
ACE等位基因
DD型
DI型
II型
D
I
OMI组
55
52.1±14.61)
0.80(40)2)
0.15(8)
, http://www.100md.com
0.05(3)
0.872)
0.13
对照组
47
41.2±17.2
0.83(39)
0.13(6)
0.04(2)
0.83
0.17
与对照组比较1)P<0.05，2)P>0.05 OMI组ACE基因型DD、DI、II型血浆apo E水平分别为(51.2±14.7)mg/L、(54.7±12.1)mg/L、(59.0±26.0) mg/L。OMI组ACE基因型DD与DI、II型间血浆apo E水平无显著性差异(P>0.05)。
, 百拇医药
3 讨论
血浆VLDL、LDL的清除依赖于其表面apo E、apo B 100双识别肝细胞表面LDL受体。血浆apo E浓度增加有助于降低血浆胆固醇水平。转基因鼠过度表达apo E实验研究〔1〕及静脉直接输入apo E实验研究〔4〕均已证实apo E具有降低血浆胆固醇及抗动脉粥样硬化形成作用。其机制可能为：增加血浆游离apo E浓度使VLDL、LDL表面apo E浓度相应增加，通过与其受体结合，apo E介导更多VLDL、LDL在肝脏清除，从而降低血浆胆固醇。本文结果显示OMI患者血浆apo E浓度较对照组为高，且具有显著性差异(P<0.05)。证实血浆apo E与冠心病发病存在关联。OMI患者血浆apo E浓度升高可能是对致动脉粥样硬化因素的代偿反应，可能有助于阻止冠心病进一步发展。本文结果还显示OMI患者ACE DD与DI、II基因型间血浆apo E水平无显著性差异(P>0.05)。表明OMI患者血浆apo E水平不受致动脉粥样硬化危险因素缺失型ACE基因〔2〕的影响，缺失型ACE基因与OMI患者血浆apo E水平间无关系，与OMI间亦无相关关系(P>0.05)。
, 百拇医药
参考文献
1，Shimano H,Ohsuga J,Shimada M,et al.Inhibition of diet induced atheroma formation in transgenic mice expressing apolipoprotein E in the arterial wall.J Clin Invest,1995,95:469～476
2，Cambien F,Poirier O,Lecerf L,et al.Deletion polymorphism in the gene for angiotensin-converting enzyme is a potent risk factor for myocardial infarction.Nature,1992,359:641～643
3，Rigat B,Hubert C,Corvol P,et al.PCR detection of the human angiotensin converting enzyme gene (DCPI,dipeptidyl Carboxypeptidase I).Nucleic Acid Res,1992,20:1433～1433
4，Yamada N,Inoue I,Kawamura M,et al.Apolipoprotein E prevents the progression of atherosclerosis in watanable heritable hyperlipidemic rabbits.J Clin Invest,1992,89:706～711
(收稿 1999-05-31), 百拇医药
单位：李刚(重庆医科大学附属第一医院心内科 重庆，400016；现在重庆医科大学附属第二医院心内科)；陈运贞 柳青 黄维嘉 姚珍微 兰雁飞 许炜 凌红 邓国兰(重庆医科大学附属第一医院心内科(重庆，400016) 曾昭淳(重庆医科大学基础医学院基础生化教研室)
关键词：载脂蛋白E；血管紧张素转换酶；心肌梗死；基因缺失多态性
临床心血管病杂志000407 摘要 目的：探讨缺失型血管紧张素转换酶(ACE)基因与心肌梗死患者血浆载脂蛋白E(apo E)浓度间的关系。方法：用免疫比浊法测定55例陈旧性心肌梗死(OMI)患者及47例对照者血浆apo E浓度。用PCR法检测ACE基因缺失(D)/插入(I)多态性。结果：OMI患者血浆apo E浓度为(52.1±14.6 ) mg/L，显著高于对照组(41.2±17.2) mg/L(P<0.05)。OMI组ACE DD(51.2±14.7)mg/L、DI(54.7±12.1) mg/L、II(59.0±26.0)mg/L基因型间血浆apo E水平无显著性差异(P>0.05)。ACE DD基因型频率及D等位基因频率与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。结论：缺失型ACE基因可能与OMI患者血浆apo E水平无相关关系。
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Relation between plasma apolipoprotein E and deletion polymorphism of the angiotensin-converting enzyme gene in patients with old myocardial infarction
LI Gang CHEN Yun-zhen LIU Qing HUANG Wei-jia
YAO Zhen-wei LAN Yan-fei XU Wei LING Hong DENG Guo-nan
(1 The First Affiliated Hospital Chongqing University of Medical Sciences ,Chongqing 400016)
ZENG Zhao-chun
, 百拇医药
(Department of Basic Biochemistry,Collage of Basic Medicine,Chongqing
University of Medical Science)
Abstract Objective:To explore the relation between plasma apolipoprotein E (apo E) and deletion polymorphism of the angiotensin-converting, enzyme (ACE) gene in patients with old myocardial infarction (OMI).Method:The plasma apo E level was detected by immunoturbidimetric assay;the deletion (D)/Insertion (I) polymorphism of the ACE gene was determined by polymerase chain reaction (PCR) in 55 patients with OMI and in 47 controls.Result:The plasma apo E level 〔(52.1±14.6) mg/L〕 was higher statistically (P<0.05) in patients with OMI than in controls〔 (41.2±17.2) mg/L〕.There were not significant differences (P>0.05) of plasma apo E level among ACE DD 〔(51.2±14.7) mg/L〕，DI〔(54.7±12.1) mg/L 〕and II〔 (59.0±26.0) mg/L〕 gene types in the OMI group.Conclusion:The relation between plasma apo E and deletion polymorphism of ACE gene was not found in patients with OMI.
, 百拇医药
Key words Apolipoprotein E Angiotensin converting enzyme Myocardial infarction Gene deletion polymorphism
近年来，研究证实载脂蛋白E(apo E)具有抗动脉粥样硬化作用〔1〕，而缺失型血管紧张素转换酶(ACE)基因与心肌梗死(MI)之间存在相关性〔2〕。MI患者血浆apo E水平是否受ACE基因多态性影响尚不清楚。本文探讨缺失型ACE基因与陈旧性MI(OMI)患者血浆apo E水平间的关系。
1 对象与方法
1.1 对象
OMI 55例，男46例，女9例，年龄(61.5±7.8)岁。诊断标准：急性MI病史，典型心电图病理性Q波及ST-T改变。对照组为普外科住院患者47例，男30例，女17例，年龄(54.9±11.5)岁，无冠心病并发症。所有入选对象均无糖尿病、高血压及脑血管病变等并发症。两组间吸烟、体重指数和血压有可比性；血脂比较见表1。
, 百拇医药
表1 OMI组与对照组血脂水平比较 mmol/L,
±s 组别例数
TC
LDL-C
TG
HDL-C
OMI组
55
4.96±0.77
2.87±0.78
2.03±1.14
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1.20±0.20
对照组
47
4.30±0.96
2.28±0.87
1.63±1.29
1.26±0.36
P值
<0.05
<0.05
<0.05
>0.05
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停服降脂药1个月，空腹10 h后采血。用免疫比浊法测定血浆apo E浓度(日本7170型全自动生化分析仪自动完全，试剂购自日本第一化学株式会社)。采0.3 ml EDTA抗凝血，用试剂盒(Promega公司)酚-氯仿法提取基因组DNA。按Rigat等〔3〕法进行PCR扩增。引物1：CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT；引物2：GATGTGGCCATCACATTCGTCACAT。94℃变性30 s，58℃复性30 s，72℃延伸1 min，循环30次，产物经8%聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。
1.3 统计学处理
计量资料用t检验，方差分析(F)。计数资料用χ2检验、秩和检验(u)。
2 结果
, 百拇医药 PCR扩增出3种ACE基因型：DD型(缺失纯合型)，II型(插入纯合型)，DI型(杂合型)。ACE基因类型见图1。
图1 ACE基因型
M：分子量标准Φ×174 HinfI(Promega)
两组血浆apo E水平及基因型分布见表2。
表2 OMI组与对照组血浆apo E水平、ACE基因及等位基因频率 频率(例数) 组别
例数
apo E/(mg.L-1)
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ACE基因型
ACE等位基因
DD型
DI型
II型
D
I
OMI组
55
52.1±14.61)
0.80(40)2)
0.15(8)
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0.05(3)
0.872)
0.13
对照组
47
41.2±17.2
0.83(39)
0.13(6)
0.04(2)
0.83
0.17
与对照组比较1)P<0.05，2)P>0.05 OMI组ACE基因型DD、DI、II型血浆apo E水平分别为(51.2±14.7)mg/L、(54.7±12.1)mg/L、(59.0±26.0) mg/L。OMI组ACE基因型DD与DI、II型间血浆apo E水平无显著性差异(P>0.05)。
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3 讨论
血浆VLDL、LDL的清除依赖于其表面apo E、apo B 100双识别肝细胞表面LDL受体。血浆apo E浓度增加有助于降低血浆胆固醇水平。转基因鼠过度表达apo E实验研究〔1〕及静脉直接输入apo E实验研究〔4〕均已证实apo E具有降低血浆胆固醇及抗动脉粥样硬化形成作用。其机制可能为：增加血浆游离apo E浓度使VLDL、LDL表面apo E浓度相应增加，通过与其受体结合，apo E介导更多VLDL、LDL在肝脏清除，从而降低血浆胆固醇。本文结果显示OMI患者血浆apo E浓度较对照组为高，且具有显著性差异(P<0.05)。证实血浆apo E与冠心病发病存在关联。OMI患者血浆apo E浓度升高可能是对致动脉粥样硬化因素的代偿反应，可能有助于阻止冠心病进一步发展。本文结果还显示OMI患者ACE DD与DI、II基因型间血浆apo E水平无显著性差异(P>0.05)。表明OMI患者血浆apo E水平不受致动脉粥样硬化危险因素缺失型ACE基因〔2〕的影响，缺失型ACE基因与OMI患者血浆apo E水平间无关系，与OMI间亦无相关关系(P>0.05)。
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参考文献
1，Shimano H,Ohsuga J,Shimada M,et al.Inhibition of diet induced atheroma formation in transgenic mice expressing apolipoprotein E in the arterial wall.J Clin Invest,1995,95:469～476
2，Cambien F,Poirier O,Lecerf L,et al.Deletion polymorphism in the gene for angiotensin-converting enzyme is a potent risk factor for myocardial infarction.Nature,1992,359:641～643
3，Rigat B,Hubert C,Corvol P,et al.PCR detection of the human angiotensin converting enzyme gene (DCPI,dipeptidyl Carboxypeptidase I).Nucleic Acid Res,1992,20:1433～1433
4，Yamada N,Inoue I,Kawamura M,et al.Apolipoprotein E prevents the progression of atherosclerosis in watanable heritable hyperlipidemic rabbits.J Clin Invest,1992,89:706～711
(收稿 1999-05-31), 百拇医药