淫羊藿黄芪口服液的工艺研究
作者：江永南 姚彩霞 黄趣碧
单位：(广州铁路中心医院 广州 510080)
关键词：淫羊藿；黄芪；口服液；工艺研究；均匀设计；澄清技术
广东药学000415 摘要 目的：优化淫羊藿黄芪口服液的制备工艺。方法：以均匀设计法设计提取工艺，以黄酮、多糖及淫羊藿苷的含量为指标进行筛选；并以此作指标，对冷沉法、醇沉法、ZTC1+1Ⅲ型澄清剂法、壳聚糖法的澄清效果进行比较。结果：提取的优化条件为：50%乙醇溶液、9倍于药材的溶剂量、提取二次(4h、2h)；两种澄清剂及冷沉法对多糖、黄酮及淫羊藿苷无明显影响，效果优于醇沉法。结论：均匀设计的结果与实际效果相吻合，为一可行性的研究方法；澄清法优于其他方法，为澄清技术改革提供依据。
中医理论认为肾病源于精气不足，关键是补精气；淫羊藿补精血，黄芪补气，现代临床结果表明[1]：淫羊藿黄芪口服液具有提高血中白蛋白，降低血粘性，对肾病综合征有协同治疗作用。其主成分为淫羊藿苷、总黄酮、黄芪甲苷及两者的多糖；为此，选择合适的提取、澄清方法对确保有效成分的溶出和减少澄清时的损失，确保制剂的质量显得尤为重要。本文以主成分淫羊藿苷、总黄酮、多糖为指标，从提取工艺及澄清剂选用进行工艺优化。
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1 药物、试剂与仪器
淫羊藿(Epimedium brevicornum Maxim.)、黄芪[蒙古黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge. var monholicus(Bge) Hsiao]购于广州市药材公司，经广东药学院生药教研室鉴定；淫羊藿苷对照品(中国药生物制品检定所，批号990427)，葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所，批号 990812)，壳聚糖(珠海前山科技发展实业公司，批号990908)，ZTC1+1Ⅲ澄清剂(天津正天成澄清技术有限公司赠品)，蒽酮(中国医药集团上海化学试剂公司，批号991116)，硫酸、乙醇、氯仿、乙酸乙酯均为分析纯，甲醇为色谱纯。
756MC型紫外-可见分光光度计(上海第三分析仪器厂)，高效液相色谱仪(Waters 810)。
2 方法
, http://www.100md.com 2.1 质量指标的建立
以提取液中所含的主要成分多糖、黄酮和淫羊藿苷为质控指标。
2.1.1 多糖标准曲线的建立[2] 精密称取经恒重的葡萄糖对照品5.0mg，以蒸馏水配成贮备液(100μg/ml)。分别取贮备液0.20、0.30、0.40、0.60、0.80、1.00ml加蒸馏水至2.0ml，加入0.2%的蒽酮硫酸试液4.0ml，摇匀，于波长625nm处测定吸光度。结果得回归方程：C=54.9A+0.790,r=0.9977,线性范围：20～100μg/ml。
2.1.2 黄酮标准曲线的建立 精密称取淫羊藿苷(105℃恒重)10mg,加甲醇溶解，制成对照品溶液(25μg/ml)，精密吸取对照品溶液0.0、1.0、2.0、5.0、7.0、9.0、10.0ml分别置10ml量瓶中，甲醇定容；分别精密吸取2ml，加入1.00ml硝酸铝甲醇(4%)溶液，摇匀，于波长418nm处测定吸光度，同时作空白对照，回归方程为：C=80.0A+1.25,r=0.9991,线性范围2.50～25.0μg/ml。
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2.1.3 淫羊藿苷标准曲线的建立 HPLC法[3]，精密吸取上述对照品溶液0.0、1.0、2.0、5.0、7.0、9.0、10.0ml置10ml量瓶中，甲醇定容，摇匀；0.45μm滤膜滤过，10μl进样；色谱条件：甲醇-水(50∶50)，1.0ml/min，λ=270nm,μBondapak C18，300mm×4.0mm,10μm。得回归方程：C=0.0689+5.05×10-5A,r=0.9988,线性范围2.5～25μg/ml。
2.2 均匀设计优化提取工艺
2.2.1 方案设计及提取 根据药材主成分的性质，影响淫羊藿及黄芪提取效果的主要因素有回流提取时间(A)、提取次数(B)、乙醇的浓度(C)、溶剂量与药材量比(D)；为此以4因素8水平，并选用U9(98)[4]安排实验，以多糖、黄酮、淫羊藿苷的含量变化作指标进行筛选，见表1。
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具体提取方法：分别取淫羊藿、黄芪各20g，切成约0.5cm厚的饮片，按编号加入溶剂进行回流提取，收集提取液，浓缩后滤过，置100ml量瓶中定容，备用。
2.2.2 含量测定
表1 实验安排及结果 编号
因素
指标
A(h)
B(次)
C(乙醇浓度)
D(溶剂倍数)
多糖(mg/g)
黄酮(mg/g)
, 百拇医药
淫羊藿苷(mg/g)
1
0.5(1)
1(2)
50(4)
14(7)
31.24
18.51
0.938
2
1.0(2)
2(4)
90(8)
, http://www.100md.com
12(5)
11.81
25.25
1.328
3
1.5(3)
3(6)
30(3)
10(3)
50.53
22.72
0.721
4
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2.0(4)
4(8)
80(7)
8(1)
14.52
28.53
1.307
5
2.5(5)
1(1)
20(2)
15(8)
52.24
, 百拇医药
19.69
0.756
6
3.0(6)
2(3)
70(6)
13(6)
36.55
26.12
1.312
7
3.5(7)
3(5)
, 百拇医药
0(1)
11(4)
96.04
19.94
0.812
8
4.0(8)
4(7)
60(5)
9(2)
73.50
37.15
1.714
, 百拇医药
2.2.2.1 多糖含量测定 提取液离心5min(3000 r/min)，精密吸取取上清液5ml，加适量85%乙醇沉淀二次，弃掉上清液，沉淀用无水乙醇洗涤二次，移置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。稀释成合适浓度按2.1.1法测定多糖含量。
2.2.2.2 黄酮的含量测定 精密吸取离心后的上清液0.1ml置50ml量瓶中，加甲醇至刻度；按2.1.2法测定黄酮含量。
2.2.2.3 淫羊藿苷的测定 精密吸取离心后的上清液5.0ml置分液漏斗中，用30ml氯仿分3次抽提弃掉，用30ml乙酸乙酯分三次萃取，合并，水浴挥干，复溶于10ml甲醇中；按2.1.3用“0.45μl滤膜滤过，……”进行测定。计算含量。
2.2.3 加样回收试验 经实验测定，葡萄糖、黄酮、淫羊藿苷测定法的回收率分别为100.8%、99.8%、99.4%，RSD分别为2.2、2.0、0.87(n=4)
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2.2.4 验证试验 根据均匀设计实验结果，要多糖、黄酮、淫羊藿苷的溶出较高，优化条件为取等量的淫羊藿、黄芪，加入9倍量50%乙醇，回流提取2次，第1次4h，第2次2h，浓缩至1∶2.5浓缩液，测定指标成分的含量。验证三批，结果见表2。经统计软件SPSS 8.0进行T检验，结果P>0.05，实验值与预测值无显著性差异。表2 优选条件验证结果
多糖
(mg/g)
黄酮
(mg/g)
淫羊藿苷
(mg/g)
第1次
70.98
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37.45
1.701
第2次
67.76
32.36
1.432
第3次
64.92
30.84
1.290
均值
67.89
33.55
, 百拇医药
1.474
SD
3.032
3.462
0.209
预测值
68.88
32.01
1.425
P
0.628
0.522
0.722
, 百拇医药
2.3 不同澄清工艺对比
2.3.1 提取 根据均匀设计实验结果所定提取工艺，取等量的淫羊藿、黄芪，加入9倍量50%乙醇，回流提取2次(4h、2h)，合并滤液，浓缩至1∶2浓缩液，分装5瓶。
2.3.2 澄清剂的配制 1%壳聚糖醋酸溶液：壳聚糖用1%醋酸浸泡溶胀并溶解成1%粘稠浅黄色溶液。
ZTC1+1Ⅲ：A组分配成1%水溶液，B组分用1%醋酸溶解配成1%的醋酸溶液。
2.3.3 澄清工艺
2.3.3.1 壳聚糖法 取滤液100ml置150ml带塞锥形瓶中，加入10ml 1%壳聚糖醋酸溶液，80℃水浴加热30min，放冷，离心滤过，上层为棕褐色的澄清溶液；按2.2.2含量测定法测定多糖、黄酮、淫羊藿苷的含量。
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2.3.3.2 ZTC1+1Ⅲ澄清法 取滤液100ml，置250ml带塞量瓶中，加热至60℃，按5B∶3A的比例，先加入组分B，搅拌，使其均匀分散；再加入组分A，搅拌，然后冷藏24h，离心分离，将溶液调节pH6.0，滤过，得棕黄色的溶液。按2.2.2含量测定法测定多糖、黄酮、淫羊藿苷的含量。
2.3.3.3 醇沉法 取滤液100ml，加入95%乙醇至约80%，静置48h，上清液滤过，滤液回收乙醇，加水至100ml，冷藏24h滤过；按2.2.2含量测定法测定多糖、黄酮、淫羊藿苷的含量。
2.3.3.4 冷沉法 取滤液100ml，冰箱4℃冷藏1周，离心滤过。按2.2.2含量测定法测定多糖、黄酮、淫羊藿苷的含量。
2.3.4 未经处理原液主成分含量测定 取原液适量，按2.2.2含量测定法测定多糖、黄酮、淫羊藿苷含量。
, 百拇医药 3 结果
3.1 均匀设计提取工艺优化结果
各种提取方法的多糖、黄酮、淫羊藿苷的含量见表1：运用SPSS 8.0统计软件进行逐步回归，分别得回归方程：
多糖：Y=63.974+11.574A-0.622C-1.143D F=12.219 R=0.950
黄酮：Y=21.615+2.958A+0.124C-0.849D F=8.53 R=0.930
淫羊藿苷：Y=0.300+0.170A+1.039×10-2C-8.19×10-3D F=12.236 R=0.950
回归方程的结果表明：影响多糖提取的主要因素为提取的时间和含醇量，时间越长，含醇量越低，提取效果越好。而对于黄酮和淫羊藿苷，影响提取的主要因素是时间和含醇量，时间越长，含醇量越高，提取量越大。考虑到三种成分的量，选用50%的乙醇浓度、加入9倍的溶剂量、提取2次(4h、2h)为优化条件。从确证实验结果可知，实验值与计算值无显著性差异。
, 百拇医药
3.2 澄清工艺结果比较
壳聚糖法、ZTC1+1Ⅲ、醇沉法、冷沉法对多糖、黄酮、淫羊藿苷含量的影响，见表3。
表3 不同澄清法对主成分含量的影响 方法
多糖
(mg/g)
黄酮
(mg/g)
淫羊藿苷
(mg/g)
未处理
74.50±1.63
, 百拇医药
37.75±0.755
1.735±0.015
壳聚糖
63.58±1.082
33.91±0.576
1.404±0.0174
ZTC1
66.88±1.348
35.49±0.597
1.478±0.025
醇沉法
6.393±0.262
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15.57±0.396
0.875±0.00578
冷沉法
33.08±0.853
31.19±0.675
1.343±0.0275
经两两统计比较，未处理、壳聚糖法、ZTC1+1Ⅲ法、冷沉法及醇沉法之间均有显著性差异。结果表明，不同澄清法对主成分含量有不同程度的影响；从综合效果来看，ZTC1+1Ⅲ法>壳聚糖法>冷沉法>醇沉法。
4 讨论
4.1 以均匀设计逐步优化法，能有效准确地筛选影响提取效果的主要因素，从回归方程可见，主成分的溶出，主要与时间、乙醇浓度有关，对多糖而言，醇度越高，提取率越低，黄酮、淫羊藿苷反之；而与提取次数无关，但事实上，提取的次数也是反映提取时间的长短对溶出的影响；溶剂量的增大反而提取效果降低，原因可能是过多的溶剂，在浓缩时主成分破坏所致；实验表明均匀设计是适用于多因素的筛选。
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4.2 以壳聚糖、ZTC1+1Ⅲ作澄清剂代替传统的醇沉法，一方面可有效地除去杂质，确保口服液澄清；另一方面，对多糖、黄酮、淫羊藿苷影响较少，而醇沉法影响较大。从效果而言，ZTC1+1Ⅲ法>壳聚糖法>冷沉法>醇沉法。因此，以壳聚糖或ZTC1+1Ⅲ取代醇沉法可减少工序，提高生产效率和有效成分的浓度。
4.3 从表3的结果可见 壳聚糖或ZTC1+1Ⅲ均可引起的主成分含量下降，而醇沉法影响较大，原因可认为沉淀形成的方式和形态不同，引起主成分吸附量不同。因此，为减少这种影响，澄清剂的用量、使用条件的优化需作进一步研究。
姚彩霞 广东药学院96届毕业生
参考文献
1.郭云飞，葛小平，王永钧，等.黄芪仙灵碑汤和水蛭胶丸治疗肾病综合征高凝血症临床观察.中医杂志.1999，40(5)：281
2.储秋平.壳聚糖用于黄芪口服液澄清的工艺探讨.中成药.1998，20(12)：2
3.徐平声，谭桂山，戴志永，等.HPLC法测定复方淫羊藿颗粒剂中淫羊藿苷的含量.湖南医科大学学报.1996，21(4)：367
4.方开泰.均匀设计.数理统计在实验设计的应用.应用数学学报.1980，3(4)：363
(收稿：2000-04-12；修回：2000-05-24), 百拇医药
单位：(广州铁路中心医院 广州 510080)
关键词：淫羊藿；黄芪；口服液；工艺研究；均匀设计；澄清技术
广东药学000415 摘要 目的：优化淫羊藿黄芪口服液的制备工艺。方法：以均匀设计法设计提取工艺，以黄酮、多糖及淫羊藿苷的含量为指标进行筛选；并以此作指标，对冷沉法、醇沉法、ZTC1+1Ⅲ型澄清剂法、壳聚糖法的澄清效果进行比较。结果：提取的优化条件为：50%乙醇溶液、9倍于药材的溶剂量、提取二次(4h、2h)；两种澄清剂及冷沉法对多糖、黄酮及淫羊藿苷无明显影响，效果优于醇沉法。结论：均匀设计的结果与实际效果相吻合，为一可行性的研究方法；澄清法优于其他方法，为澄清技术改革提供依据。
中医理论认为肾病源于精气不足，关键是补精气；淫羊藿补精血，黄芪补气，现代临床结果表明[1]：淫羊藿黄芪口服液具有提高血中白蛋白，降低血粘性，对肾病综合征有协同治疗作用。其主成分为淫羊藿苷、总黄酮、黄芪甲苷及两者的多糖；为此，选择合适的提取、澄清方法对确保有效成分的溶出和减少澄清时的损失，确保制剂的质量显得尤为重要。本文以主成分淫羊藿苷、总黄酮、多糖为指标，从提取工艺及澄清剂选用进行工艺优化。
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1 药物、试剂与仪器
淫羊藿(Epimedium brevicornum Maxim.)、黄芪[蒙古黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge. var monholicus(Bge) Hsiao]购于广州市药材公司，经广东药学院生药教研室鉴定；淫羊藿苷对照品(中国药生物制品检定所，批号990427)，葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所，批号 990812)，壳聚糖(珠海前山科技发展实业公司，批号990908)，ZTC1+1Ⅲ澄清剂(天津正天成澄清技术有限公司赠品)，蒽酮(中国医药集团上海化学试剂公司，批号991116)，硫酸、乙醇、氯仿、乙酸乙酯均为分析纯，甲醇为色谱纯。
756MC型紫外-可见分光光度计(上海第三分析仪器厂)，高效液相色谱仪(Waters 810)。
2 方法
, http://www.100md.com 2.1 质量指标的建立
以提取液中所含的主要成分多糖、黄酮和淫羊藿苷为质控指标。
2.1.1 多糖标准曲线的建立[2] 精密称取经恒重的葡萄糖对照品5.0mg，以蒸馏水配成贮备液(100μg/ml)。分别取贮备液0.20、0.30、0.40、0.60、0.80、1.00ml加蒸馏水至2.0ml，加入0.2%的蒽酮硫酸试液4.0ml，摇匀，于波长625nm处测定吸光度。结果得回归方程：C=54.9A+0.790,r=0.9977,线性范围：20～100μg/ml。
2.1.2 黄酮标准曲线的建立 精密称取淫羊藿苷(105℃恒重)10mg,加甲醇溶解，制成对照品溶液(25μg/ml)，精密吸取对照品溶液0.0、1.0、2.0、5.0、7.0、9.0、10.0ml分别置10ml量瓶中，甲醇定容；分别精密吸取2ml，加入1.00ml硝酸铝甲醇(4%)溶液，摇匀，于波长418nm处测定吸光度，同时作空白对照，回归方程为：C=80.0A+1.25,r=0.9991,线性范围2.50～25.0μg/ml。
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2.1.3 淫羊藿苷标准曲线的建立 HPLC法[3]，精密吸取上述对照品溶液0.0、1.0、2.0、5.0、7.0、9.0、10.0ml置10ml量瓶中，甲醇定容，摇匀；0.45μm滤膜滤过，10μl进样；色谱条件：甲醇-水(50∶50)，1.0ml/min，λ=270nm,μBondapak C18，300mm×4.0mm,10μm。得回归方程：C=0.0689+5.05×10-5A,r=0.9988,线性范围2.5～25μg/ml。
2.2 均匀设计优化提取工艺
2.2.1 方案设计及提取 根据药材主成分的性质，影响淫羊藿及黄芪提取效果的主要因素有回流提取时间(A)、提取次数(B)、乙醇的浓度(C)、溶剂量与药材量比(D)；为此以4因素8水平，并选用U9(98)[4]安排实验，以多糖、黄酮、淫羊藿苷的含量变化作指标进行筛选，见表1。
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具体提取方法：分别取淫羊藿、黄芪各20g，切成约0.5cm厚的饮片，按编号加入溶剂进行回流提取，收集提取液，浓缩后滤过，置100ml量瓶中定容，备用。
2.2.2 含量测定
表1 实验安排及结果 编号
因素
指标
A(h)
B(次)
C(乙醇浓度)
D(溶剂倍数)
多糖(mg/g)
黄酮(mg/g)
, 百拇医药
淫羊藿苷(mg/g)
1
0.5(1)
1(2)
50(4)
14(7)
31.24
18.51
0.938
2
1.0(2)
2(4)
90(8)
, http://www.100md.com
12(5)
11.81
25.25
1.328
3
1.5(3)
3(6)
30(3)
10(3)
50.53
22.72
0.721
4
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2.0(4)
4(8)
80(7)
8(1)
14.52
28.53
1.307
5
2.5(5)
1(1)
20(2)
15(8)
52.24
, 百拇医药
19.69
0.756
6
3.0(6)
2(3)
70(6)
13(6)
36.55
26.12
1.312
7
3.5(7)
3(5)
, 百拇医药
0(1)
11(4)
96.04
19.94
0.812
8
4.0(8)
4(7)
60(5)
9(2)
73.50
37.15
1.714
, 百拇医药
2.2.2.1 多糖含量测定 提取液离心5min(3000 r/min)，精密吸取取上清液5ml，加适量85%乙醇沉淀二次，弃掉上清液，沉淀用无水乙醇洗涤二次，移置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。稀释成合适浓度按2.1.1法测定多糖含量。
2.2.2.2 黄酮的含量测定 精密吸取离心后的上清液0.1ml置50ml量瓶中，加甲醇至刻度；按2.1.2法测定黄酮含量。
2.2.2.3 淫羊藿苷的测定 精密吸取离心后的上清液5.0ml置分液漏斗中，用30ml氯仿分3次抽提弃掉，用30ml乙酸乙酯分三次萃取，合并，水浴挥干，复溶于10ml甲醇中；按2.1.3用“0.45μl滤膜滤过，……”进行测定。计算含量。
2.2.3 加样回收试验 经实验测定，葡萄糖、黄酮、淫羊藿苷测定法的回收率分别为100.8%、99.8%、99.4%，RSD分别为2.2、2.0、0.87(n=4)
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2.2.4 验证试验 根据均匀设计实验结果，要多糖、黄酮、淫羊藿苷的溶出较高，优化条件为取等量的淫羊藿、黄芪，加入9倍量50%乙醇，回流提取2次，第1次4h，第2次2h，浓缩至1∶2.5浓缩液，测定指标成分的含量。验证三批，结果见表2。经统计软件SPSS 8.0进行T检验，结果P>0.05，实验值与预测值无显著性差异。表2 优选条件验证结果
多糖
(mg/g)
黄酮
(mg/g)
淫羊藿苷
(mg/g)
第1次
70.98
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37.45
1.701
第2次
67.76
32.36
1.432
第3次
64.92
30.84
1.290
均值
67.89
33.55
, 百拇医药
1.474
SD
3.032
3.462
0.209
预测值
68.88
32.01
1.425
P
0.628
0.522
0.722
, 百拇医药
2.3 不同澄清工艺对比
2.3.1 提取 根据均匀设计实验结果所定提取工艺，取等量的淫羊藿、黄芪，加入9倍量50%乙醇，回流提取2次(4h、2h)，合并滤液，浓缩至1∶2浓缩液，分装5瓶。
2.3.2 澄清剂的配制 1%壳聚糖醋酸溶液：壳聚糖用1%醋酸浸泡溶胀并溶解成1%粘稠浅黄色溶液。
ZTC1+1Ⅲ：A组分配成1%水溶液，B组分用1%醋酸溶解配成1%的醋酸溶液。
2.3.3 澄清工艺
2.3.3.1 壳聚糖法 取滤液100ml置150ml带塞锥形瓶中，加入10ml 1%壳聚糖醋酸溶液，80℃水浴加热30min，放冷，离心滤过，上层为棕褐色的澄清溶液；按2.2.2含量测定法测定多糖、黄酮、淫羊藿苷的含量。
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2.3.3.2 ZTC1+1Ⅲ澄清法 取滤液100ml，置250ml带塞量瓶中，加热至60℃，按5B∶3A的比例，先加入组分B，搅拌，使其均匀分散；再加入组分A，搅拌，然后冷藏24h，离心分离，将溶液调节pH6.0，滤过，得棕黄色的溶液。按2.2.2含量测定法测定多糖、黄酮、淫羊藿苷的含量。
2.3.3.3 醇沉法 取滤液100ml，加入95%乙醇至约80%，静置48h，上清液滤过，滤液回收乙醇，加水至100ml，冷藏24h滤过；按2.2.2含量测定法测定多糖、黄酮、淫羊藿苷的含量。
2.3.3.4 冷沉法 取滤液100ml，冰箱4℃冷藏1周，离心滤过。按2.2.2含量测定法测定多糖、黄酮、淫羊藿苷的含量。
2.3.4 未经处理原液主成分含量测定 取原液适量，按2.2.2含量测定法测定多糖、黄酮、淫羊藿苷含量。
, 百拇医药 3 结果
3.1 均匀设计提取工艺优化结果
各种提取方法的多糖、黄酮、淫羊藿苷的含量见表1：运用SPSS 8.0统计软件进行逐步回归，分别得回归方程：
多糖：Y=63.974+11.574A-0.622C-1.143D F=12.219 R=0.950
黄酮：Y=21.615+2.958A+0.124C-0.849D F=8.53 R=0.930
淫羊藿苷：Y=0.300+0.170A+1.039×10-2C-8.19×10-3D F=12.236 R=0.950
回归方程的结果表明：影响多糖提取的主要因素为提取的时间和含醇量，时间越长，含醇量越低，提取效果越好。而对于黄酮和淫羊藿苷，影响提取的主要因素是时间和含醇量，时间越长，含醇量越高，提取量越大。考虑到三种成分的量，选用50%的乙醇浓度、加入9倍的溶剂量、提取2次(4h、2h)为优化条件。从确证实验结果可知，实验值与计算值无显著性差异。
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3.2 澄清工艺结果比较
壳聚糖法、ZTC1+1Ⅲ、醇沉法、冷沉法对多糖、黄酮、淫羊藿苷含量的影响，见表3。
表3 不同澄清法对主成分含量的影响 方法
多糖
(mg/g)
黄酮
(mg/g)
淫羊藿苷
(mg/g)
未处理
74.50±1.63
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37.75±0.755
1.735±0.015
壳聚糖
63.58±1.082
33.91±0.576
1.404±0.0174
ZTC1
66.88±1.348
35.49±0.597
1.478±0.025
醇沉法
6.393±0.262
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15.57±0.396
0.875±0.00578
冷沉法
33.08±0.853
31.19±0.675
1.343±0.0275
经两两统计比较，未处理、壳聚糖法、ZTC1+1Ⅲ法、冷沉法及醇沉法之间均有显著性差异。结果表明，不同澄清法对主成分含量有不同程度的影响；从综合效果来看，ZTC1+1Ⅲ法>壳聚糖法>冷沉法>醇沉法。
4 讨论
4.1 以均匀设计逐步优化法，能有效准确地筛选影响提取效果的主要因素，从回归方程可见，主成分的溶出，主要与时间、乙醇浓度有关，对多糖而言，醇度越高，提取率越低，黄酮、淫羊藿苷反之；而与提取次数无关，但事实上，提取的次数也是反映提取时间的长短对溶出的影响；溶剂量的增大反而提取效果降低，原因可能是过多的溶剂，在浓缩时主成分破坏所致；实验表明均匀设计是适用于多因素的筛选。
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4.2 以壳聚糖、ZTC1+1Ⅲ作澄清剂代替传统的醇沉法，一方面可有效地除去杂质，确保口服液澄清；另一方面，对多糖、黄酮、淫羊藿苷影响较少，而醇沉法影响较大。从效果而言，ZTC1+1Ⅲ法>壳聚糖法>冷沉法>醇沉法。因此，以壳聚糖或ZTC1+1Ⅲ取代醇沉法可减少工序，提高生产效率和有效成分的浓度。
4.3 从表3的结果可见 壳聚糖或ZTC1+1Ⅲ均可引起的主成分含量下降，而醇沉法影响较大，原因可认为沉淀形成的方式和形态不同，引起主成分吸附量不同。因此，为减少这种影响，澄清剂的用量、使用条件的优化需作进一步研究。
姚彩霞 广东药学院96届毕业生
参考文献
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2.储秋平.壳聚糖用于黄芪口服液澄清的工艺探讨.中成药.1998，20(12)：2
3.徐平声，谭桂山，戴志永，等.HPLC法测定复方淫羊藿颗粒剂中淫羊藿苷的含量.湖南医科大学学报.1996，21(4)：367
4.方开泰.均匀设计.数理统计在实验设计的应用.应用数学学报.1980，3(4)：363
(收稿：2000-04-12；修回：2000-05-24), 百拇医药