国产盐酸曲普利啶抗组胺作用研究
作者：俞励平 许华 文洁 梁筱宁
单位：俞励平(中山医科大学药物开发中心 广州 510080)；许华(暨南大学医药生物技术研究开发中心 广州 510632)；文洁(中山医科大学药物开发中心 广州 510080)；梁筱宁(珠海联邦制药有限公司 珠海 519000)
关键词：盐酸曲普利啶；抗组胺作用；H1-受体抑制剂
广东药学000405 摘要 目的：研究国产盐酸曲普利啶的抗组按作用。方法：以皮肤血管通透性试验、组胺致过敏性休克试验及离体豚鼠气管条试验进行观察。结果：盐酸曲普利啶对组胺所致大鼠血管通透性增加有显著的抑制作用；对组胺所致豚鼠过敏性休克，可显著降低其反应程度、延长休克反应的潜伏期，并降低死亡率；其浓度为10-6～10-5mol/L时，能明显拮抗组胺所致离体豚鼠气管条的收缩反应，使其量效曲线平行右移，计算其pA2值为6.99。结论：国产盐酸曲普利啶具有高效的抗组胺作用。
, 百拇医药
盐酸曲普利啶是烷基胺类H1-受体抑制剂，具镇静、抗毒蕈碱作用，临床用于预防和治疗麻疹、过敏性鼻炎及皮肤粘膜变态反应[1、2]。本实验以国外盐酸曲普利啶为对照，对国内研制的盐酸曲普利啶进行抗组胺作用研究。
1 材料
1.1 药物与试剂 盐酸曲普利啶(珠海联邦制药有限公司产品，批号980501)；法国产盐酸曲普利啶(批号7V0968BJ)；准确称取上述药物适量以蒸馏水配制成储备液备用，实验时用蒸馏水稀释成所需浓度溶液。组胺(上海丽珠东风生物技术有限公司产品，批号 9812200)，实验当天以生理盐水配成所需浓度溶液。伊文思蓝(分析纯，Farco Chemical，批号 FC9897Y07)配成1%生理盐水溶液备用。
1.2 动物 SD大白鼠，体重150～190g，雌雄各半，合格证号 98A001；豚鼠，体重220～280g，雌雄兼用，合格证号 98A012。均购于中山医科大学实验动物中心。
, 百拇医药
1.3 仪器 721型分光光度计(上海第三分析仪器厂)
2 方法
2.1 大鼠皮肤血管通透性实验[3] 取大鼠50只随机均分为5组：盐酸曲普利啶组(设高、中、低三个剂量组，剂量分别为4.0mg/kg、2.0mg/kg及1.0mg/kg)、生理盐水组、法国产盐酸曲普利啶组(剂量为2.0mg/kg)。分别灌胃给药40min后，乙醚麻醉大鼠，背部去毛并皮内注射1mg/ml组胺生理盐水溶液0.05ml/只，同时舌下静脉注射1%伊文思蓝生理盐水溶液3ml/kg。30min后处死动物，将各动物背部蓝染皮肤剪碎，分别置于定量丙酮生理盐水溶液(1∶1)中浸泡，24h后，离心取上清液，于640nm测定吸光度。
2.2 组胺所致豚鼠过敏性休克实验[3] 取50只豚鼠随机分为5组：盐酸曲普利啶组(设高、中、低三个剂量组，剂量分别为41.0μg/kg、16.0μg/kg及7.0μg/kg)、生理盐水组、法国产盐酸曲普利啶组(剂量为16.0μg/kg)。分别灌胃给药40min后，由前肢静脉注射组胺溶液0.75mg/kg(注射时间约3sec)，同时开动秒表，记录豚鼠痉挛倒下的时间为潜伏期，并记录反应程度及死亡率，不出现痉挛的潜伏期按5min计。反应程度分级为：0级：反应不明显或仅有呼吸加快、急促；1级：出现跌倒，或短时间的痉挛(不超过30秒)；2级：持续长时间的痉挛，但未死亡；3级：动物痉挛死亡。对试验结果进行统计处理：等级资料用参比差值法检验分析；死亡率用简化直接机率法检验分析；休克潜伏期用t检验。
, 百拇医药
2.3 组胺所致豚鼠离体气管条收缩实验 按文献[4]方法，用木棒击豚鼠头部致死，分离周围组织，取出气管，置于盛有克氏液的平皿中，在气管内以玻棒作支撑，按螺旋形将气管剪成条状，宽度约3mm，置于浴槽中，气管一端固定于浴槽的通气钩上，另一端固定于生理纪录仪的换能器上，浴槽内盛有10ml的克氏液，通以95%O2和5%CO2的混合气体，保持37℃恒温，营养液每隔15min更换一次。离体气管条静止负荷2g，固定平衡1h后，加入按等比级数递增的组织胺溶液，浴槽累积浓度为10-8～10-3.5mol/L。描记组织胺的积累浓度曲线。收缩达最大效应后用克氏液冲洗，使其收缩恢复至加药前的水平。稳定30min后，加入一定浓度的盐酸曲普利啶溶液0.1ml，5min后，同上测定组织胺的积累浓度曲线。以加入受试药前的最大浓度组胺收缩峰值为100%，计算不同浓度组胺的收缩百分比，用Schild法计算盐酸曲普利啶的拮抗指数pA2值。按上述同样方法测试法国产盐酸曲普利啶溶液对组胺所致豚鼠离体气管条收缩量效曲线的影响，并用Schild法计算其pA2值作为阳性对照。
, 百拇医药
3 结果与讨论
3.1 盐酸曲普利啶对组胺所致大鼠皮肤血管通透性增加的影响
盐酸曲普利啶组高、中剂量组平均吸光度分别为0.063、0.083，与生理盐水组吸光度0.14相比均有显著性差异(P<0.01)，表明盐酸曲普利啶能显著抑制组胺所致大鼠皮肤血管通透性增加，各剂量组间具有明显量效关系。盐酸曲普利啶中剂量组(2.0mg/kg)平均吸光度0.083与同剂量法国产盐酸曲普利啶吸光度0.093相比未显示显著性差异(P>0.05)，说明二者作用强度接近。实验结果见表1。
表1 对大鼠组胺所致皮肤血管通透性增加的蓝斑
吸光度的影响(
±s,n=10) 组 别
, 百拇医药 剂量(mg/kg)
吸光度
生理盐水
-
0.144±0.067
盐酸曲普利啶
4.0
0.063±0.033***
盐酸曲普利啶
2.0
0.083±0.023***△
盐酸曲普利啶
, 百拇医药
1.0
0.109±0.028*
法国产盐酸曲普利啶
2.0
0.093±0.028**
*与生理盐水组比较*P>0.05，**P<0.05，***P<0.01
△与阳性对照组比较△P>0.05,△△P<0.05，△△△P<0.01
3.2 盐酸曲普利啶对组胺所致豚鼠过敏性休克的影响
, 百拇医药
盐酸曲普利啶在剂量为16.0～41.0μg/kg时，可明显抑制组胺所致豚鼠休克的反应程度(P<0.05)、延长休克反应的潜伏期(P<0.01)，并降低其死亡率(P<0.05)，其作用呈明显的量效关系。和同等剂量的法国产盐酸曲普利啶相比，二者在抑制其休克反应程度、延长休克潜伏期及降低死亡率方面的作用强度无明显的差异(P>0.05)。结果见表2。
表2 盐酸曲普利啶对组胺所致豚鼠休克的抑制作用(n=10) 组 别
剂量
(μg/kg)
各级反应程度出现的动物数
潜伏期
(±s,sec)
, 百拇医药
死亡率
0
1
2
3
U值
生理盐水
-
0
0
4
6
43.6±8.4
6/10
, 百拇医药
盐酸曲普利啶
41.0
4
3
3
0
3.4***
233.4±80.9***
0/10**
盐酸曲普利啶
16.0
2
, http://www.100md.com
2
5
1
2.02**△
158.3±84.8***△
1/10**△
盐酸曲普利啶
7.0
0
0
8
2
, 百拇医药
1.55*
42.7±42.5**
3/10*
法国产盐酸曲普利啶
16.0
1
3
5
1
2.17**
191.5±83.3***
, http://www.100md.com
1/10**
*与生理盐水组比较*P>0.05，**P<0.05，***P<0.01
△与阳性对照组比较△P>0.05,△△P<0.05，△△△P<0.01
3.3 盐酸曲普利啶对组胺所致豚鼠离体气管条收缩的影响-pA2值测定
实验结果表明盐酸曲普利啶浓度为10-6～10-5mol/L时，能明显拮抗组胺所致的离体豚鼠气管条收缩反应，使组胺量效曲线平行左移，见图1，用Schild法计算，其pA2值为6.99；法国产盐酸曲普利啶见图2，计算其pA2值为6.71。经统计学处理，二者之间无显著性差异。
, 百拇医药
图1 国产盐酸曲普利啶对组胺的竞争性拮抗作用
图2 法国产盐酸曲普利啶对组胺的竞争性拮抗作用
○…○生理盐水；●…●10-6mol/L；□…□10-5mol/L
注：R%：加入受试药物前后各浓度组胺引起的收缩高度相当于峰值的百分率
[D]-μm:各浓度组胺(μmol/L)
4 小结
盐酸曲普利啶在临床上具有起效快，不干扰心脏传导，无嗜睡作用，婴幼儿均可用等优点。国内目前也开始研制和生产该产品。本实验通过大鼠皮肤通透性实验、组胺所致豚鼠过敏性休克实验及离体豚鼠气管条收缩实验对国产盐酸曲普利啶的抗组胺作用进行了研究。结果表明以该药4.0mg/kg、2.0mg/kg灌胃给药能显著抑制组胺所致大鼠皮肤血管通透性增加。盐酸曲普利啶在浓度为16.0～41.0μg/kg时灌胃给药，可明显抑制组胺所致豚鼠休克的反应程度、延长休克反应的潜伏期，并降低其死亡率。当盐酸曲普利啶浓度为10-6～10-5mol/L时，能明显拮抗组胺所致离体豚鼠气管条的收缩反应，使其量效曲线平行右移，计算其pA2值为6.99。本文通过实验研究表明，国产与国外盐酸曲普利啶抗组胺作用强度相近。由于本品作用强，疗效可靠，不良反应少，因此，本品为一理想抗组胺药。
, 百拇医药
参考文献
1.王宏图等.新编临床药物手册.上海医科大学出版社，1999：429
2.厦军，曲福军，张立新，等.盐酸曲普利啶胶囊生物利用度研究.中国药房.1999，10(1)：29～30
3.唐映红，吉兰，魏云.盐酸西替利嗪抗组胺作用的研究.中国药理学通报.1997，13(3)：239
4.徐叔云，等.药理学实验方法.第二版.人民卫生出版社，1994：1171～2
(收稿：2000-02-21；修回：2000-03-08), 百拇医药
单位：俞励平(中山医科大学药物开发中心 广州 510080)；许华(暨南大学医药生物技术研究开发中心 广州 510632)；文洁(中山医科大学药物开发中心 广州 510080)；梁筱宁(珠海联邦制药有限公司 珠海 519000)
关键词：盐酸曲普利啶；抗组胺作用；H1-受体抑制剂
广东药学000405 摘要 目的：研究国产盐酸曲普利啶的抗组按作用。方法：以皮肤血管通透性试验、组胺致过敏性休克试验及离体豚鼠气管条试验进行观察。结果：盐酸曲普利啶对组胺所致大鼠血管通透性增加有显著的抑制作用；对组胺所致豚鼠过敏性休克，可显著降低其反应程度、延长休克反应的潜伏期，并降低死亡率；其浓度为10-6～10-5mol/L时，能明显拮抗组胺所致离体豚鼠气管条的收缩反应，使其量效曲线平行右移，计算其pA2值为6.99。结论：国产盐酸曲普利啶具有高效的抗组胺作用。
, 百拇医药
盐酸曲普利啶是烷基胺类H1-受体抑制剂，具镇静、抗毒蕈碱作用，临床用于预防和治疗麻疹、过敏性鼻炎及皮肤粘膜变态反应[1、2]。本实验以国外盐酸曲普利啶为对照，对国内研制的盐酸曲普利啶进行抗组胺作用研究。
1 材料
1.1 药物与试剂 盐酸曲普利啶(珠海联邦制药有限公司产品，批号980501)；法国产盐酸曲普利啶(批号7V0968BJ)；准确称取上述药物适量以蒸馏水配制成储备液备用，实验时用蒸馏水稀释成所需浓度溶液。组胺(上海丽珠东风生物技术有限公司产品，批号 9812200)，实验当天以生理盐水配成所需浓度溶液。伊文思蓝(分析纯，Farco Chemical，批号 FC9897Y07)配成1%生理盐水溶液备用。
1.2 动物 SD大白鼠，体重150～190g，雌雄各半，合格证号 98A001；豚鼠，体重220～280g，雌雄兼用，合格证号 98A012。均购于中山医科大学实验动物中心。
, 百拇医药
1.3 仪器 721型分光光度计(上海第三分析仪器厂)
2 方法
2.1 大鼠皮肤血管通透性实验[3] 取大鼠50只随机均分为5组：盐酸曲普利啶组(设高、中、低三个剂量组，剂量分别为4.0mg/kg、2.0mg/kg及1.0mg/kg)、生理盐水组、法国产盐酸曲普利啶组(剂量为2.0mg/kg)。分别灌胃给药40min后，乙醚麻醉大鼠，背部去毛并皮内注射1mg/ml组胺生理盐水溶液0.05ml/只，同时舌下静脉注射1%伊文思蓝生理盐水溶液3ml/kg。30min后处死动物，将各动物背部蓝染皮肤剪碎，分别置于定量丙酮生理盐水溶液(1∶1)中浸泡，24h后，离心取上清液，于640nm测定吸光度。
2.2 组胺所致豚鼠过敏性休克实验[3] 取50只豚鼠随机分为5组：盐酸曲普利啶组(设高、中、低三个剂量组，剂量分别为41.0μg/kg、16.0μg/kg及7.0μg/kg)、生理盐水组、法国产盐酸曲普利啶组(剂量为16.0μg/kg)。分别灌胃给药40min后，由前肢静脉注射组胺溶液0.75mg/kg(注射时间约3sec)，同时开动秒表，记录豚鼠痉挛倒下的时间为潜伏期，并记录反应程度及死亡率，不出现痉挛的潜伏期按5min计。反应程度分级为：0级：反应不明显或仅有呼吸加快、急促；1级：出现跌倒，或短时间的痉挛(不超过30秒)；2级：持续长时间的痉挛，但未死亡；3级：动物痉挛死亡。对试验结果进行统计处理：等级资料用参比差值法检验分析；死亡率用简化直接机率法检验分析；休克潜伏期用t检验。
, 百拇医药
2.3 组胺所致豚鼠离体气管条收缩实验 按文献[4]方法，用木棒击豚鼠头部致死，分离周围组织，取出气管，置于盛有克氏液的平皿中，在气管内以玻棒作支撑，按螺旋形将气管剪成条状，宽度约3mm，置于浴槽中，气管一端固定于浴槽的通气钩上，另一端固定于生理纪录仪的换能器上，浴槽内盛有10ml的克氏液，通以95%O2和5%CO2的混合气体，保持37℃恒温，营养液每隔15min更换一次。离体气管条静止负荷2g，固定平衡1h后，加入按等比级数递增的组织胺溶液，浴槽累积浓度为10-8～10-3.5mol/L。描记组织胺的积累浓度曲线。收缩达最大效应后用克氏液冲洗，使其收缩恢复至加药前的水平。稳定30min后，加入一定浓度的盐酸曲普利啶溶液0.1ml，5min后，同上测定组织胺的积累浓度曲线。以加入受试药前的最大浓度组胺收缩峰值为100%，计算不同浓度组胺的收缩百分比，用Schild法计算盐酸曲普利啶的拮抗指数pA2值。按上述同样方法测试法国产盐酸曲普利啶溶液对组胺所致豚鼠离体气管条收缩量效曲线的影响，并用Schild法计算其pA2值作为阳性对照。
, 百拇医药
3 结果与讨论
3.1 盐酸曲普利啶对组胺所致大鼠皮肤血管通透性增加的影响
盐酸曲普利啶组高、中剂量组平均吸光度分别为0.063、0.083，与生理盐水组吸光度0.14相比均有显著性差异(P<0.01)，表明盐酸曲普利啶能显著抑制组胺所致大鼠皮肤血管通透性增加，各剂量组间具有明显量效关系。盐酸曲普利啶中剂量组(2.0mg/kg)平均吸光度0.083与同剂量法国产盐酸曲普利啶吸光度0.093相比未显示显著性差异(P>0.05)，说明二者作用强度接近。实验结果见表1。
表1 对大鼠组胺所致皮肤血管通透性增加的蓝斑
吸光度的影响(
±s,n=10) 组 别, 百拇医药 剂量(mg/kg)
吸光度
生理盐水
-
0.144±0.067
盐酸曲普利啶
4.0
0.063±0.033***
盐酸曲普利啶
2.0
0.083±0.023***△
盐酸曲普利啶
, 百拇医药
1.0
0.109±0.028*
法国产盐酸曲普利啶
2.0
0.093±0.028**
*与生理盐水组比较*P>0.05，**P<0.05，***P<0.01
△与阳性对照组比较△P>0.05,△△P<0.05，△△△P<0.01
3.2 盐酸曲普利啶对组胺所致豚鼠过敏性休克的影响
, 百拇医药
盐酸曲普利啶在剂量为16.0～41.0μg/kg时，可明显抑制组胺所致豚鼠休克的反应程度(P<0.05)、延长休克反应的潜伏期(P<0.01)，并降低其死亡率(P<0.05)，其作用呈明显的量效关系。和同等剂量的法国产盐酸曲普利啶相比，二者在抑制其休克反应程度、延长休克潜伏期及降低死亡率方面的作用强度无明显的差异(P>0.05)。结果见表2。
表2 盐酸曲普利啶对组胺所致豚鼠休克的抑制作用(n=10) 组 别
剂量
(μg/kg)
各级反应程度出现的动物数
潜伏期
(
±s,sec), 百拇医药
死亡率
0
1
2
3
U值
生理盐水
-
0
0
4
6
43.6±8.4
6/10
, 百拇医药
盐酸曲普利啶
41.0
4
3
3
0
3.4***
233.4±80.9***
0/10**
盐酸曲普利啶
16.0
2
, http://www.100md.com
2
5
1
2.02**△
158.3±84.8***△
1/10**△
盐酸曲普利啶
7.0
0
0
8
2
, 百拇医药
1.55*
42.7±42.5**
3/10*
法国产盐酸曲普利啶
16.0
1
3
5
1
2.17**
191.5±83.3***
, http://www.100md.com
1/10**
*与生理盐水组比较*P>0.05，**P<0.05，***P<0.01
△与阳性对照组比较△P>0.05,△△P<0.05，△△△P<0.01
3.3 盐酸曲普利啶对组胺所致豚鼠离体气管条收缩的影响-pA2值测定
实验结果表明盐酸曲普利啶浓度为10-6～10-5mol/L时，能明显拮抗组胺所致的离体豚鼠气管条收缩反应，使组胺量效曲线平行左移，见图1，用Schild法计算，其pA2值为6.99；法国产盐酸曲普利啶见图2，计算其pA2值为6.71。经统计学处理，二者之间无显著性差异。
, 百拇医药
图1 国产盐酸曲普利啶对组胺的竞争性拮抗作用
图2 法国产盐酸曲普利啶对组胺的竞争性拮抗作用
○…○生理盐水；●…●10-6mol/L；□…□10-5mol/L
注：R%：加入受试药物前后各浓度组胺引起的收缩高度相当于峰值的百分率
[D]-μm:各浓度组胺(μmol/L)
4 小结
盐酸曲普利啶在临床上具有起效快，不干扰心脏传导，无嗜睡作用，婴幼儿均可用等优点。国内目前也开始研制和生产该产品。本实验通过大鼠皮肤通透性实验、组胺所致豚鼠过敏性休克实验及离体豚鼠气管条收缩实验对国产盐酸曲普利啶的抗组胺作用进行了研究。结果表明以该药4.0mg/kg、2.0mg/kg灌胃给药能显著抑制组胺所致大鼠皮肤血管通透性增加。盐酸曲普利啶在浓度为16.0～41.0μg/kg时灌胃给药，可明显抑制组胺所致豚鼠休克的反应程度、延长休克反应的潜伏期，并降低其死亡率。当盐酸曲普利啶浓度为10-6～10-5mol/L时，能明显拮抗组胺所致离体豚鼠气管条的收缩反应，使其量效曲线平行右移，计算其pA2值为6.99。本文通过实验研究表明，国产与国外盐酸曲普利啶抗组胺作用强度相近。由于本品作用强，疗效可靠，不良反应少，因此，本品为一理想抗组胺药。
, 百拇医药
参考文献
1.王宏图等.新编临床药物手册.上海医科大学出版社，1999：429
2.厦军，曲福军，张立新，等.盐酸曲普利啶胶囊生物利用度研究.中国药房.1999，10(1)：29～30
3.唐映红，吉兰，魏云.盐酸西替利嗪抗组胺作用的研究.中国药理学通报.1997，13(3)：239
4.徐叔云，等.药理学实验方法.第二版.人民卫生出版社，1994：1171～2
(收稿：2000-02-21；修回：2000-03-08), 百拇医药