淋巴细胞对系统性红斑狼疮患者粒巨噬细胞集落形成单位抑制活性的研究
作者：李娟 尹培达 罗绍凯 彭爱华
单位：李娟(510080 广州，中山医科大学附属第一医院血液科)；罗绍凯(510080 广州，中山医科大学附属第一医院血液科)；彭爱华(510080 广州，中山医科大学附属第一医院血液科)；尹培达(510080 广州，中山医科大学附属第一医院风湿科)
关键词：红斑狼疮，系统性；淋巴细胞；粒巨噬细胞集落形成单位
中华风湿病学杂志000405 【摘 要】 目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者B、T淋巴细胞对SLE及正常人骨髓粒巨噬细胞集落形成单位(GM-CFU)的影响。方法 分别用SLE患者及正常人B、T及B+T淋巴细胞加入半固体甲基纤维素培养体系中，观察它们分别对16例SLE患者及12名正常人GM-CFU产率的影响。结果 加入SLE患者B、T淋巴细胞后，分别可见75.0%和37.5%的SLE患者GM-CFU形成减少，产率为(109±71)个/105细胞和(137±34)个/105细胞，与未加淋巴细胞组比较差异均有显著性(P<0.01，P<0.05)，同时加入SLE患者B和T淋巴细胞时87.5%的SLE患者GM-CFU产率减少，为(98±31)个/105细胞，与分别加入SLE患者B或T淋巴细胞组比较均有明显差异(P<0.05，P<0.01)；SLE患者B及B+T淋巴细胞分别对58.4%、66.7%的正常人骨髓GM-CFU形成有抑制作用，产率为(203±67)、(199±92)个/105细胞，明显低于未加淋巴细胞组(P均<0.01)，而正常人淋巴细胞对SLE患者GM-CFU的产率与未加淋巴细胞组比较差异无显著性(P均>0.01)。结论 SLE患者B淋巴细胞无论对大部分SLE患者或大部分正常人骨髓GM-CFU的形成有抑制作用，SLE患者的B+T淋巴细胞对SLE患者和正常人骨髓GM-CFU的抑制有协同作用，SLE患者的B淋巴细胞的异常可能是SLE粒细胞减少的主要原因，而其造血干/祖细胞的异常可能也是粒细胞减少的原因之一。
, 百拇医药
Lymphocyte depression to systemic lupus erythematosus patient′s granulocyte-macrophage colony forming unit
LI Juan,YIN Peida,LUO Shaokai,et al.
Department of Hematology,First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University of Medical Science,Guangzhou 510080,China
【Abstract】 Objective To research the influence of B-lymphocytes,T-lymphocytes on systemic lupus erythematosus (SLE) patient′s and control′s granulocyte-macrophage colony forming unit (GM-CFU).Methods GM-CFU of 16 active SLE patients and 12 controls was cultured and observed in vitro in semisolid methylcellulose with B-lymphocytes and T-lymphocytes respectively and together.Result Decreasing of GM-CFU appeared in 75.0% or 37.5% of SLE patients after SLE B-lymphocytes or T-lymphocytes added to culture system.The products were (109±71) colonies/105 cells and (137±34) colonies/105 cells respectively,differed from nonlymphocyte SLE patient′s ones (P<0.01，P<0.05).The product which was (98±31) colonies/105 cells in 87.5% of patients in culture system adding with B-and T-lymphocytes was lower than B- or T-lymphocytes groups (P<0.05，P<0.01).Reduction of GM-CFU appeared in 58.4% and 66.7% of controls with B-lymphocyte and B-lymphocyte + T-lymphocyte in SLE,respectively.The puoducts were (203±67) colonies/105 cells and (199±92) colonies/105 cells which were all lower than nonlymphocyte one (P<0.01).The products of SLE patients cultured with controls lymphocyte had not different from nonlymphocyte ones (P>0.01).Conclusion SLE patient′s B-lymphocyte may restrain GM-CFU of not only most control′s but also most SLE patient′s.B- and T-lymphocyte in SLE have the effect of cooperation with restraining the products of GM-CFU of SLE patients or controls.Abnormality of B-lymphocyte in SLE plays a main role in leukopenia.Abnormality of hematopoietic stem cell may be also one cause of leukopenia.
, 百拇医药
【Key words】 Lupus erythematosus,systemic; Lymphocytes; Granulocyte-macrophage colony forming unit
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)的临床表现复杂，70%的SLE患者可伴有血液系统的损害，表现为贫血和/或白细胞减少和/或血小板减少，白细胞减少的原因以往一直被认为是SLE患者血浆中存在自身抗体所致。本研究分别用SLE病人及正常人B、T淋巴细胞加入粒巨噬细胞集落形成单位(granulocyte-macrophage colony forming unit，GM-CFU)半固体甲基纤维素中，观察淋巴细胞对SLE患者骨髓GM-CFU形成的影响，通过集落生长情况探讨SLE患者淋巴细胞对粒巨噬系造血功能的抑制活性作用及其SLE患者白细胞减少原因。
1 资料与方法
, 百拇医药
1.1 病例来源：选择16例处于活动期的SLE患者，所有病例诊断符合1982年美国SLE诊断标准，其活动性采用Bombardie等[1]提出的标准。其中男性3例，女性13例，平均年龄18～49.5岁，中位年龄33.5岁，16例SLE患者外周血象：红细胞(310～380)×1012/L，血红蛋白79～98 g/L，白细胞(3.0～3.5)×109/L，淋巴细胞绝对值(0.5～1.0)×109/L，血小板(700～990)×109/L。
1.2 标本采集：所有病例均取髂前上棘或髂后上棘，抽出骨髓10 ml，用Ficoll液离心，取出粒系祖细胞，RPMI-1640洗3次，调整细胞数为2×106/ml。正常12名对照标本取自异基因骨髓移植供体的骨髓细胞，RPMI-1640洗3次，调整细胞数如上。
1.3 外周血淋巴细胞的提取：按常规方法进行。B淋巴细胞的提取：取上述SLE患者及正常对照的肝素抗凝外周血10 ml，经过淋巴细胞分离液分离出淋巴细胞，加1.5 ml冷的培养液于尼龙棉柱中，收集液经离心去上清液，计数并制成细胞浓度为2×105/ml的B淋巴细胞悬液。T淋巴细胞的提取：经上述制备的单个核细胞，加10%的小牛血清，置培养皿中孵育30 min，收获贴壁细胞，与处理过的绵羊红细胞混合，1 h后用淋巴细胞分离液分层，沉淀部分用RPMI-1640洗5次后，制备成2×105/ml的T淋巴细胞悬液。
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1.4 粒系祖细胞集落培养及鉴定：骨髓GM-CFU培养按常规的方法进行，GM-CFU培养体系主要包括终浓度为30%的胎牛血清(FCS)，10%的GM-CSF，0.9%的甲基纤维素，粒系祖细胞浓度为2×105/ml。此外，含少许谷胺酰胺、2-巯基乙醇、双抗(青霉素和链霉素)。实验组加入2×104/ml的B或T或B、T各半的细胞。培养条件：37 ℃，5% CO2，100%湿度，培养7 d后计数，细胞数≥40个为一集落，3～39个为一丛落，集落或从落单位为个/105细胞。GM-CFU的形态学观察及组织化学分析：用自制的毛细吸管吸出集落细胞于经粘胶处理过的载玻片上，干燥后甲醇固定30 min，瑞氏染色，油镜下可见集落由中性中幼粒细胞、中性杆状核细胞、中性分叶核细胞及少数单核巨噬细胞组成，过氧化酶(POX)染色98%的细胞呈阳性反应。
1.5 抑制率计算及统计学处理：抑制率＝(对照组-实验组)/对照组×100%，均数之间比较用t检验，两率之间比较用χ2检验。
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2 结 果
2.1 SLE患者与正常人骨髓GM-CFU生长情况比较
SLE患者骨髓GM-CFU集落数(182±50)个/105细胞、丛落数(231±92)个/105细胞，正常对照骨髓GM-CFU集落数为(256±80)个/105细胞、丛落数为(106±42)个/105细胞，SLE患者与正常骨髓集落、丛落分别比较差异均有显著性(P<0.001，P<0.01)。
2.2 SLE患者、正常人淋巴细胞分别对SLE患者和正常人骨髓GM-CFU形成的影响
2.2.1 SLE淋巴细胞对SLE患者骨髓GM-CFU形成的影响：在培养体系中，加入2×104/ml的SLE患者的B淋巴细胞后，12例(12/16，占75.0%)SLE患者的GM-CFU形成明显减少，产率为(109±71)个/105细胞，与未加淋巴细胞组比较P<0.01，抑制率为39.8%，另4例GM-CFU的产率为(189±19)个/105细胞，与未加淋巴细胞组SLE骨髓GM-CFU集落比较，差异无显著性(P>0.05)，但低于正常人骨髓GM-CFU集落的产率(P<0.001)。单独加入SLE患者的T淋巴细胞时，仅有6例(6/16，占37.5%)，SLE患者的GM-CFU产率下降，为(137±34)个/105细胞，与加B淋巴细胞组及未加淋巴细胞的SLE患者的GM-CFU差异均有显著性(P<0.05，P<0.01)，抑制率为24.7%，余10例CFU-GM的产率不减少，为(190±46)个/105细胞。如果同时加入SLE患者的B、T淋巴细胞14例(14/16，占87.5%)SLE患者的GM-CFU产率减少，为(98±31)个/105细胞，与分别加入B或T淋巴细胞组均有明显差异(P<0.05，P<0.01)，抑制率为46.0%，余2例GM-CFU产率为(180±39)个/105细胞，与未加淋巴细胞组SLE骨髓GM-CFU集落比较差异无显著性(P>0.05)，但低于正常人骨髓GM-CFU的集落产率(P<0.001)。
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2.2.2 SLE患者淋巴细胞对正常人骨髓GM-CFU形成的影响：在正常人GM-CFU培养体系中，加入2×104/ml的SLE患者的B淋巴细胞，7例(7/12，占58.4%)正常人骨髓的GM-CFU形成减少，产率为(203±67)个/105细胞，与未加淋巴细胞组比较P<0.01，抑制率为20.7%，与SLE的B淋巴细胞对SLE患者骨髓GM-CFU抑制率比较差异有显著性，P<0.05；单独加入SLE患者的T淋巴细胞时，仅有1名(1/12，占8.3%)正常人骨髓的CFU-GM产率下降，为219.5，与未加淋巴细胞的正常人骨髓的GM-CFU差异有显著性(P<0.05)，余11例GM-CFU的产率不减少，为 (241±66)个/105细胞，与未加淋巴细胞组差异无显著性(P>0.05)。如果同时加入SLE患者的B、T淋巴细胞，8例(8/12，占66.7%)正常人骨髓的GM-CFU产率减少，为(199±92)个/105细胞，抑制率为22.3%，与未加淋巴细胞组比较P<0.01。
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2.2.3 正常人淋巴细胞对SLE患者骨髓GM-CFU形成的影响：用正常人2×104/ml的B、T及B+T淋巴细胞分别加入SLE患者骨髓GM-CFU培养体系中，16例SLE患者骨髓GM-CFU产率分别为(187±59)、(179±30)、(184±48)个/105细胞，与未加淋巴细胞组比较P均>0.01。
3 讨 论
文献[2]报道，正常人的淋巴细胞对造血活动的影响是双方面的，一方面通过分泌白细胞介素和GM-CSF对造血活动起刺激作用，另一方面可产生干扰素γ(interferon-γ，INF-γ)或其他INF样因子，也可以通过与造血靶细胞之间的直接接触而抑制造血活动。SLE患者白细胞减少多为粒细胞减少，虽然可以伴有淋巴细胞绝对值的减少，但B淋巴细胞的功能检测反而显示增强[3]，本实验在培养体系中，加入SLE患者的B淋巴细胞后，75.0% SLE患者的GM-CFU产率为(109±71)个/105细胞(抑制率为39.8%)，明显低于未加B淋巴细胞组，加入SLE患者的T淋巴细胞时，37.5% SLE患者的GM-CFU产率减少(抑制率为24.7%)，如果同时加入SLE患者的B、T淋巴细胞，87.5% SLE患者的GM-CFU产率减少(抑制率为46.0%)，从用SLE 患者淋巴细胞影响正常人骨髓GM-CFU形成实验中可以看出，SLE患者B、T、B+T淋巴细胞分别可以对58.4%、8.3%和66.7%的正常人骨髓GM-CFU的产率有抑制作用，但正常人B、T及B+T淋巴细胞对SLE患者骨髓GM-CFU形成未见抑制作用，说明SLE患者的B淋巴细胞在体外无论对大部分正常人或大部分SLE患者骨髓的GM-CFU的形成均有抑制作用，SLE患者的B淋巴细胞功能异常很可能在SLE患者粒细胞减少中起主要作用，SLE患者的T淋巴细胞对GM-CFU的形成有轻度抑制作用，而SLE患者的B与T淋巴细胞对GM-CFU的抑制有协同作用。本研究中16例SLE患者的淋巴细胞的绝对值虽减少，但对自身的GM-CFU的抑制作用仍较明显，说明活动期SLE患者的淋巴细胞对造血的抑制作用占优势。SLE患者的B淋巴细胞对造血细胞的抑制作用可能是通过自身抗体的产生来实现的，但SLE患者的T淋巴细胞对造血的抑制作用较为复杂，有人认为[4]T淋巴细胞对造血的调控是通过释放细胞因子起作用的，或是单核细胞、巨噬细胞活动过度，通过某些因子刺激辅助T细胞，辅助性T细胞功能过强，引起免疫功能障碍。B、T淋巴细胞在抑制SLE骨髓GM-CFU活动中的协同作用进一步说明在SLE的发病机制中，B、T淋巴细胞均可被异常激活，共同参与SLE的免疫调节紊乱，B淋巴细胞在SLE的发病机制中的作用可能是在T淋巴细胞激活的的基础上进行的，由于两者的相互渗透和促进，使SLE的发病机制变得复杂。
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本研究中我们还注意到，在比较SLE与正常人骨髓GM-CFU形成生长情况中，SLE患者骨髓GM-CFU的产率明显低于正常人，而在SLE患者淋巴细胞影响SLE患者骨髓GM-CFU形成的B淋巴细胞组或B+T淋巴细胞组中，仍有4例或2例SLE患者的GM-CFU的产率减少(相对于正常人)，不受淋巴细胞的抑制作用影响，还有SLE患者的淋巴细胞对SLE患者的GM-CFU的形成抑制作用明显大于对正常人骨髓GM-CFU的抑制作用，说明SLE患者粒细胞减少的原因不能全部用淋巴细胞的抑制作用来解释，由此可以推测SLE患者的造血干/祖细胞可能存在异常。SLE患者的GM-CFU集落形成减少，但丛落数不减少，证实了SLE患者的造血干/祖细胞在细胞的增生、分化功能方面有障碍，造血干/祖细胞功能的异常可能是参与SLE患者细胞减少的原因。
基金项目：广东省科委重点攻关基金资助项目 (9827820)
参 考 文 献
, 百拇医药 1.Bombardier C,Gladman DD,Urowitz MB,et al.Derivation of the SLEDAI,a disease activity index for lupus patients the committee on prognosis studies in SLE. Arthritis Rheum,1992,35:630-640.
2.Metcalf D.The molecular biology and functions of the granulocyte-macrophage colony-stimulating factors.Blood,1987,67:257-263.
3.王立人，毕爱华，梁智辉，等.SLE患者免疫调节功能的探讨.中华皮肤科杂志，1990，23：239-241.
4.Janadi M,Raziuddin S.B cell hyperactivity is a funcion of T cell derivde cytokines in systemic lupus erythematosus.J Rheumatol,1993,20:1885-1891.
(收稿日期：2000-01-14), http://www.100md.com
单位：李娟(510080 广州，中山医科大学附属第一医院血液科)；罗绍凯(510080 广州，中山医科大学附属第一医院血液科)；彭爱华(510080 广州，中山医科大学附属第一医院血液科)；尹培达(510080 广州，中山医科大学附属第一医院风湿科)
关键词：红斑狼疮，系统性；淋巴细胞；粒巨噬细胞集落形成单位
中华风湿病学杂志000405 【摘 要】 目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者B、T淋巴细胞对SLE及正常人骨髓粒巨噬细胞集落形成单位(GM-CFU)的影响。方法 分别用SLE患者及正常人B、T及B+T淋巴细胞加入半固体甲基纤维素培养体系中，观察它们分别对16例SLE患者及12名正常人GM-CFU产率的影响。结果 加入SLE患者B、T淋巴细胞后，分别可见75.0%和37.5%的SLE患者GM-CFU形成减少，产率为(109±71)个/105细胞和(137±34)个/105细胞，与未加淋巴细胞组比较差异均有显著性(P<0.01，P<0.05)，同时加入SLE患者B和T淋巴细胞时87.5%的SLE患者GM-CFU产率减少，为(98±31)个/105细胞，与分别加入SLE患者B或T淋巴细胞组比较均有明显差异(P<0.05，P<0.01)；SLE患者B及B+T淋巴细胞分别对58.4%、66.7%的正常人骨髓GM-CFU形成有抑制作用，产率为(203±67)、(199±92)个/105细胞，明显低于未加淋巴细胞组(P均<0.01)，而正常人淋巴细胞对SLE患者GM-CFU的产率与未加淋巴细胞组比较差异无显著性(P均>0.01)。结论 SLE患者B淋巴细胞无论对大部分SLE患者或大部分正常人骨髓GM-CFU的形成有抑制作用，SLE患者的B+T淋巴细胞对SLE患者和正常人骨髓GM-CFU的抑制有协同作用，SLE患者的B淋巴细胞的异常可能是SLE粒细胞减少的主要原因，而其造血干/祖细胞的异常可能也是粒细胞减少的原因之一。
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Lymphocyte depression to systemic lupus erythematosus patient′s granulocyte-macrophage colony forming unit
LI Juan,YIN Peida,LUO Shaokai,et al.
Department of Hematology,First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University of Medical Science,Guangzhou 510080,China
【Abstract】 Objective To research the influence of B-lymphocytes,T-lymphocytes on systemic lupus erythematosus (SLE) patient′s and control′s granulocyte-macrophage colony forming unit (GM-CFU).Methods GM-CFU of 16 active SLE patients and 12 controls was cultured and observed in vitro in semisolid methylcellulose with B-lymphocytes and T-lymphocytes respectively and together.Result Decreasing of GM-CFU appeared in 75.0% or 37.5% of SLE patients after SLE B-lymphocytes or T-lymphocytes added to culture system.The products were (109±71) colonies/105 cells and (137±34) colonies/105 cells respectively,differed from nonlymphocyte SLE patient′s ones (P<0.01，P<0.05).The product which was (98±31) colonies/105 cells in 87.5% of patients in culture system adding with B-and T-lymphocytes was lower than B- or T-lymphocytes groups (P<0.05，P<0.01).Reduction of GM-CFU appeared in 58.4% and 66.7% of controls with B-lymphocyte and B-lymphocyte + T-lymphocyte in SLE,respectively.The puoducts were (203±67) colonies/105 cells and (199±92) colonies/105 cells which were all lower than nonlymphocyte one (P<0.01).The products of SLE patients cultured with controls lymphocyte had not different from nonlymphocyte ones (P>0.01).Conclusion SLE patient′s B-lymphocyte may restrain GM-CFU of not only most control′s but also most SLE patient′s.B- and T-lymphocyte in SLE have the effect of cooperation with restraining the products of GM-CFU of SLE patients or controls.Abnormality of B-lymphocyte in SLE plays a main role in leukopenia.Abnormality of hematopoietic stem cell may be also one cause of leukopenia.
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【Key words】 Lupus erythematosus,systemic; Lymphocytes; Granulocyte-macrophage colony forming unit
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)的临床表现复杂，70%的SLE患者可伴有血液系统的损害，表现为贫血和/或白细胞减少和/或血小板减少，白细胞减少的原因以往一直被认为是SLE患者血浆中存在自身抗体所致。本研究分别用SLE病人及正常人B、T淋巴细胞加入粒巨噬细胞集落形成单位(granulocyte-macrophage colony forming unit，GM-CFU)半固体甲基纤维素中，观察淋巴细胞对SLE患者骨髓GM-CFU形成的影响，通过集落生长情况探讨SLE患者淋巴细胞对粒巨噬系造血功能的抑制活性作用及其SLE患者白细胞减少原因。
1 资料与方法
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1.1 病例来源：选择16例处于活动期的SLE患者，所有病例诊断符合1982年美国SLE诊断标准，其活动性采用Bombardie等[1]提出的标准。其中男性3例，女性13例，平均年龄18～49.5岁，中位年龄33.5岁，16例SLE患者外周血象：红细胞(310～380)×1012/L，血红蛋白79～98 g/L，白细胞(3.0～3.5)×109/L，淋巴细胞绝对值(0.5～1.0)×109/L，血小板(700～990)×109/L。
1.2 标本采集：所有病例均取髂前上棘或髂后上棘，抽出骨髓10 ml，用Ficoll液离心，取出粒系祖细胞，RPMI-1640洗3次，调整细胞数为2×106/ml。正常12名对照标本取自异基因骨髓移植供体的骨髓细胞，RPMI-1640洗3次，调整细胞数如上。
1.3 外周血淋巴细胞的提取：按常规方法进行。B淋巴细胞的提取：取上述SLE患者及正常对照的肝素抗凝外周血10 ml，经过淋巴细胞分离液分离出淋巴细胞，加1.5 ml冷的培养液于尼龙棉柱中，收集液经离心去上清液，计数并制成细胞浓度为2×105/ml的B淋巴细胞悬液。T淋巴细胞的提取：经上述制备的单个核细胞，加10%的小牛血清，置培养皿中孵育30 min，收获贴壁细胞，与处理过的绵羊红细胞混合，1 h后用淋巴细胞分离液分层，沉淀部分用RPMI-1640洗5次后，制备成2×105/ml的T淋巴细胞悬液。
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1.4 粒系祖细胞集落培养及鉴定：骨髓GM-CFU培养按常规的方法进行，GM-CFU培养体系主要包括终浓度为30%的胎牛血清(FCS)，10%的GM-CSF，0.9%的甲基纤维素，粒系祖细胞浓度为2×105/ml。此外，含少许谷胺酰胺、2-巯基乙醇、双抗(青霉素和链霉素)。实验组加入2×104/ml的B或T或B、T各半的细胞。培养条件：37 ℃，5% CO2，100%湿度，培养7 d后计数，细胞数≥40个为一集落，3～39个为一丛落，集落或从落单位为个/105细胞。GM-CFU的形态学观察及组织化学分析：用自制的毛细吸管吸出集落细胞于经粘胶处理过的载玻片上，干燥后甲醇固定30 min，瑞氏染色，油镜下可见集落由中性中幼粒细胞、中性杆状核细胞、中性分叶核细胞及少数单核巨噬细胞组成，过氧化酶(POX)染色98%的细胞呈阳性反应。
1.5 抑制率计算及统计学处理：抑制率＝(对照组-实验组)/对照组×100%，均数之间比较用t检验，两率之间比较用χ2检验。
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2 结 果
2.1 SLE患者与正常人骨髓GM-CFU生长情况比较
SLE患者骨髓GM-CFU集落数(182±50)个/105细胞、丛落数(231±92)个/105细胞，正常对照骨髓GM-CFU集落数为(256±80)个/105细胞、丛落数为(106±42)个/105细胞，SLE患者与正常骨髓集落、丛落分别比较差异均有显著性(P<0.001，P<0.01)。
2.2 SLE患者、正常人淋巴细胞分别对SLE患者和正常人骨髓GM-CFU形成的影响
2.2.1 SLE淋巴细胞对SLE患者骨髓GM-CFU形成的影响：在培养体系中，加入2×104/ml的SLE患者的B淋巴细胞后，12例(12/16，占75.0%)SLE患者的GM-CFU形成明显减少，产率为(109±71)个/105细胞，与未加淋巴细胞组比较P<0.01，抑制率为39.8%，另4例GM-CFU的产率为(189±19)个/105细胞，与未加淋巴细胞组SLE骨髓GM-CFU集落比较，差异无显著性(P>0.05)，但低于正常人骨髓GM-CFU集落的产率(P<0.001)。单独加入SLE患者的T淋巴细胞时，仅有6例(6/16，占37.5%)，SLE患者的GM-CFU产率下降，为(137±34)个/105细胞，与加B淋巴细胞组及未加淋巴细胞的SLE患者的GM-CFU差异均有显著性(P<0.05，P<0.01)，抑制率为24.7%，余10例CFU-GM的产率不减少，为(190±46)个/105细胞。如果同时加入SLE患者的B、T淋巴细胞14例(14/16，占87.5%)SLE患者的GM-CFU产率减少，为(98±31)个/105细胞，与分别加入B或T淋巴细胞组均有明显差异(P<0.05，P<0.01)，抑制率为46.0%，余2例GM-CFU产率为(180±39)个/105细胞，与未加淋巴细胞组SLE骨髓GM-CFU集落比较差异无显著性(P>0.05)，但低于正常人骨髓GM-CFU的集落产率(P<0.001)。
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2.2.2 SLE患者淋巴细胞对正常人骨髓GM-CFU形成的影响：在正常人GM-CFU培养体系中，加入2×104/ml的SLE患者的B淋巴细胞，7例(7/12，占58.4%)正常人骨髓的GM-CFU形成减少，产率为(203±67)个/105细胞，与未加淋巴细胞组比较P<0.01，抑制率为20.7%，与SLE的B淋巴细胞对SLE患者骨髓GM-CFU抑制率比较差异有显著性，P<0.05；单独加入SLE患者的T淋巴细胞时，仅有1名(1/12，占8.3%)正常人骨髓的CFU-GM产率下降，为219.5，与未加淋巴细胞的正常人骨髓的GM-CFU差异有显著性(P<0.05)，余11例GM-CFU的产率不减少，为 (241±66)个/105细胞，与未加淋巴细胞组差异无显著性(P>0.05)。如果同时加入SLE患者的B、T淋巴细胞，8例(8/12，占66.7%)正常人骨髓的GM-CFU产率减少，为(199±92)个/105细胞，抑制率为22.3%，与未加淋巴细胞组比较P<0.01。
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2.2.3 正常人淋巴细胞对SLE患者骨髓GM-CFU形成的影响：用正常人2×104/ml的B、T及B+T淋巴细胞分别加入SLE患者骨髓GM-CFU培养体系中，16例SLE患者骨髓GM-CFU产率分别为(187±59)、(179±30)、(184±48)个/105细胞，与未加淋巴细胞组比较P均>0.01。
3 讨 论
文献[2]报道，正常人的淋巴细胞对造血活动的影响是双方面的，一方面通过分泌白细胞介素和GM-CSF对造血活动起刺激作用，另一方面可产生干扰素γ(interferon-γ，INF-γ)或其他INF样因子，也可以通过与造血靶细胞之间的直接接触而抑制造血活动。SLE患者白细胞减少多为粒细胞减少，虽然可以伴有淋巴细胞绝对值的减少，但B淋巴细胞的功能检测反而显示增强[3]，本实验在培养体系中，加入SLE患者的B淋巴细胞后，75.0% SLE患者的GM-CFU产率为(109±71)个/105细胞(抑制率为39.8%)，明显低于未加B淋巴细胞组，加入SLE患者的T淋巴细胞时，37.5% SLE患者的GM-CFU产率减少(抑制率为24.7%)，如果同时加入SLE患者的B、T淋巴细胞，87.5% SLE患者的GM-CFU产率减少(抑制率为46.0%)，从用SLE 患者淋巴细胞影响正常人骨髓GM-CFU形成实验中可以看出，SLE患者B、T、B+T淋巴细胞分别可以对58.4%、8.3%和66.7%的正常人骨髓GM-CFU的产率有抑制作用，但正常人B、T及B+T淋巴细胞对SLE患者骨髓GM-CFU形成未见抑制作用，说明SLE患者的B淋巴细胞在体外无论对大部分正常人或大部分SLE患者骨髓的GM-CFU的形成均有抑制作用，SLE患者的B淋巴细胞功能异常很可能在SLE患者粒细胞减少中起主要作用，SLE患者的T淋巴细胞对GM-CFU的形成有轻度抑制作用，而SLE患者的B与T淋巴细胞对GM-CFU的抑制有协同作用。本研究中16例SLE患者的淋巴细胞的绝对值虽减少，但对自身的GM-CFU的抑制作用仍较明显，说明活动期SLE患者的淋巴细胞对造血的抑制作用占优势。SLE患者的B淋巴细胞对造血细胞的抑制作用可能是通过自身抗体的产生来实现的，但SLE患者的T淋巴细胞对造血的抑制作用较为复杂，有人认为[4]T淋巴细胞对造血的调控是通过释放细胞因子起作用的，或是单核细胞、巨噬细胞活动过度，通过某些因子刺激辅助T细胞，辅助性T细胞功能过强，引起免疫功能障碍。B、T淋巴细胞在抑制SLE骨髓GM-CFU活动中的协同作用进一步说明在SLE的发病机制中，B、T淋巴细胞均可被异常激活，共同参与SLE的免疫调节紊乱，B淋巴细胞在SLE的发病机制中的作用可能是在T淋巴细胞激活的的基础上进行的，由于两者的相互渗透和促进，使SLE的发病机制变得复杂。
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本研究中我们还注意到，在比较SLE与正常人骨髓GM-CFU形成生长情况中，SLE患者骨髓GM-CFU的产率明显低于正常人，而在SLE患者淋巴细胞影响SLE患者骨髓GM-CFU形成的B淋巴细胞组或B+T淋巴细胞组中，仍有4例或2例SLE患者的GM-CFU的产率减少(相对于正常人)，不受淋巴细胞的抑制作用影响，还有SLE患者的淋巴细胞对SLE患者的GM-CFU的形成抑制作用明显大于对正常人骨髓GM-CFU的抑制作用，说明SLE患者粒细胞减少的原因不能全部用淋巴细胞的抑制作用来解释，由此可以推测SLE患者的造血干/祖细胞可能存在异常。SLE患者的GM-CFU集落形成减少，但丛落数不减少，证实了SLE患者的造血干/祖细胞在细胞的增生、分化功能方面有障碍，造血干/祖细胞功能的异常可能是参与SLE患者细胞减少的原因。
基金项目：广东省科委重点攻关基金资助项目 (9827820)
参 考 文 献
, 百拇医药 1.Bombardier C,Gladman DD,Urowitz MB,et al.Derivation of the SLEDAI,a disease activity index for lupus patients the committee on prognosis studies in SLE. Arthritis Rheum,1992,35:630-640.
2.Metcalf D.The molecular biology and functions of the granulocyte-macrophage colony-stimulating factors.Blood,1987,67:257-263.
3.王立人，毕爱华，梁智辉，等.SLE患者免疫调节功能的探讨.中华皮肤科杂志，1990，23：239-241.
4.Janadi M,Raziuddin S.B cell hyperactivity is a funcion of T cell derivde cytokines in systemic lupus erythematosus.J Rheumatol,1993,20:1885-1891.
(收稿日期：2000-01-14), http://www.100md.com